循环酶法测定同型半胱氨酸试剂盒评价

目的 选取北京九强、上海执诚、宁波瑞源生产的循环酶法同型半胱氨酸（Hcy）试剂盒,对其方法性能及临床实验室应用的要求进行评价.方法 据NCCLS颁布的的EP5-A、EP6-A和EP7-A评价方案对三个循环酶法Hcy测定试剂盒进行回收实验、干扰实验、线性及精密度评价.结果 九强、执诚、瑞源的循环酶法Hcy测定试剂盒高、低浓度的批内CV分别为3.2、2.4、1.2;3.7、3.8、1.8;总CV（％）分别为4.4、3.4、3.1;4.3、5.6、3.3.回收率97％ ～ 105％.相关系数分别为r=0.996、r=0.993、r=0.995.胆红素在500mg/L、抗坏血酸在500 mg/L、甘油三酯在8.88mmol/L内对九强和瑞源的试剂无明显干扰,相对偏差小于4％.胆红素在500 mg/L、抗坏血酸在500mg/L内对执诚的试剂无明显干扰,相对偏差小于4％;甘油三酯对该试剂有明显干扰,甘油三酯在8.88mmol/L时相对偏差为12.2％.结论 三种循环酶法Hcy测定试剂盒的抗干扰、线性范围及精密度等性能可满足临床检验的需要.     

ARKRAYHA-8180全自动糖化血红蛋白分析仪性能评价

目的 对以离子交换高效液相色谱（HPLC）法为原理的ARKRAY HA-8180型全自动糖化血红蛋白分析仪（简称HA-8180）检测全血糖化血红蛋白（HbAlc）的性能进行评价.方法 参考美国临床和实验室标准化协会（CLSI）文件（EP15-A2,EP6-A,EP28-A3C）及相关文献,对HA-8180测定HbAlc的精密度、携带污染、准确度、回收试验、线性范围以及生物参考区间等进行评价,并将实验结果与制造商提供的分析性能或公认的质量指标进行比较.结果 HbAlc低值和高值样本对应的重复性不精密度变异系数（CV）分别为0.76％和0.50％,实验室内不精密度CV分别为0.79％和0.51％;高值样本对低值样本的结果无明显携带污染（携带污染率为1.08％）;相对偏倚在-1.39％～1.29％之间,偏差符合率为100％;平均回收率为101.54％;在4.7％ ～ 15.8％范围内线性良好;生物参考区间验证结果在美国糖尿病控制与并发症试验/英国前瞻性糖尿病研究（DCCT/UKPDS）提供的4.0％ ～6.0％范围内.结论 HA-8180糖化血红蛋白分析仪检测全血HbAlc性能良好,可在临床广泛使用.     

化学发光法检测血清T-βHCG分析灵敏度验证实验的建立与评价

目的对Beckman Couher Access DXI800化学发光免疫分析仪检测血清总人绒毛膜促性腺激素（T-βHCG）的分析灵敏度进行验证与评价。方法参照美国临床实验室标准化协会（CLSI）EP17-A文件,首先对Beckman Coulter AccessDXl800系统进行精密度和准确度验证试验,再将空白样品和低浓度系列样品在该化学发光免疫分析仪上进行检测,记录血清T—βHCG值和相对发光单位（relative light units,RLU）,依据数据的分布规律,采用相应的统计学方法确定血清T—βHCG的检测低限（LLD）、生物检测限（BLD）、功能灵敏度（FS）。结果空白样品T-βHCG测定的RLU值的均值为10 224．18,标准差为400．85。Beckman Coulter Access DX1800系统精密度和准确度符合CLIA’88规定的性能要求。低值系列样品T-βHCG测定结果均值分别为0．015、0．109、0．507、1．060、2．418、4．614IU／L;其RLU的日间CV%值分别为2．76、3．00、6．62、4．31、3．00、2．84。血清T-βHCG检测低限、生物检测限、功能灵敏度分别为0．17IU／L、0．10IU／L、0．5IU／L,结果均优于厂家声明的分析性能。结论该检测系统检测血清T-βHCG的分析灵敏度符合临床要求,验证方案和实验方法简便,实用和可行。     

人绒毛膜促性腺激素游离β亚单位磁分离酶联免疫方法的建立

目的建立一种新的测定人绒毛膜促性腺激素游离β亚单位(hCGβ)磁分离酶联免疫分析法(MEIA)。方法用识别不同表位的两株单克隆抗体(mAb),一株mAb用FITC标记,另一株用碱性磷酸酶(AP)标记;以偶联羊抗FITC抗体的磁珠作为固相,以酚酞单磷酸酯溶液为底物,建立测定hCGβ磁分离酶免疫测定法。结果本MEIA法的灵敏度为0.1IU/L,批内CV小于8.5%,批间CV小于14%,平均稀释回收率为92.5%;与促黄体生成激素(leuteinizinghormone,LH)、促甲状腺激素(thyroidstimulatinghormone,TSH)和促卵泡成熟激素(folliclestimulatinghormone,FSH)均无交叉反应,与完整的hCG(1000IU/L)的交叉反应为1.2%,有效期不低于14个月。结论本方法的性能优于现有的放射免疫(RIA)和ELISA试剂盒,接近进口同类试剂的水平,有助于为市场提供一种高质量而价廉的hCGβ测定试剂盒。     

胶乳免疫比浊法检测CA19-9的性能验证研究

目的 对基于生化分析平台检测CA19-9活性的胶乳免疫比浊试剂盒进行检测性能的验证研究。方法 收集2022年1月至4月期间就诊于中国医学科学院肿瘤医院的肿瘤患者315例及表观健康人43例的血清样本进行性能验证试验。参考CLSI EP15-A方案，用两种水平的质控品验证待测试剂盒的精密度；参考EP6-A方案，评价待测试剂盒的线性范围；验证血清样本的稀释准确性；参考EP7-P方案，用含特定浓度干扰物(胆红素、血红蛋白、乳糜、类风湿因子)的混合血清评价试剂盒的抗干扰能力；使用表观健康人的新鲜血清样本验证待测试剂盒的生物参考区间，使用肿瘤患者的新鲜血清比较待测试剂盒与电化学发光法检测结果的相关性和偏差。结果 精密度验证显示，两种水平质控品的批内CV和批间CV(低浓度：4.08%和4.33%;高浓度：3.01%和3.55%)均小于允许不精密度(批内CV≤6.85%和批间CV≤9.14%)。在21.08～843.21U/mL的检测范围内，检测曲线呈一阶线性分布，理论值与实测值的平均百分偏倚1.57%,线性良好。本试验验证的最大稀释度为1∶64倍稀释，稀释验证样本与原倍血清的相对偏移为9.11%。4...     

大鼠实验性胃溃疡自愈期间胰岛β-EP、5-HT、5-HTR细胞的免疫组织化学研究

目的　探讨大鼠实验性胃溃疡自愈期间 ,胰岛 β-内啡肽 (β- EP)、5 -羟色胺 (5 - HT)、5 -羟色胺受体蛋白(5 - HTR)免疫反应细胞的变化。　方法　免疫组织化学技术。　结果　溃疡术后 4d、10 d胰岛 β- EP、5 - HT、5 - HTR细胞面数密度增高。β- EP、5 - HT细胞于 4d达高峰 ;5 - HTR细胞于 10 d达高峰。邻片示 :部分 β- EP、5 - HT及 5 - HTR阳性物质分别位于 A或 B细胞。　结论　胰岛 β- EP、5 - HT、5 - HTR细胞可能间接或直接参与大鼠实验性胃溃疡修复的调节。     

定量检测抗甲状腺过氧化物酶抗体的吖啶酯化学发光法的建立及初步应用

目的 建立一种用于定量测定血清中抗甲状腺过氧化物酶抗体(Anti-TPO)的吖啶酯为标记物的化学发光免疫分析法并初步进行临床验证.方法 用TPO抗原偶联磁微粒,鼠抗人IgG抗体标记吖啶酯,建立间接法的反应模式.对该方法的线性范围、精密度、检出限、准确度进行测定,并与罗氏的电化学发光试剂进行比对.结果 在5～1 000 IU/mL范围内,线性相关系数r 为0.9999,检出限为0.224 IU/mL,两份样本的精密度(CV)分别为3.1％和4.3％,两份样本的准确度分别为1.1％和3.0％.经检测185例正常健康人,将参考区间定为小于30.32 IU/mL.与罗氏的电化学发光试剂平行测定84份血清样本,两者检测结果的相关系数r为0.975,显著性检验P＜0.01,相关性良好.结论 建立了定量测定血清中Anti-TPO的吖啶酯为标记物的化学发光免疫分析法,满足临床检测要求.     

4种国产和3种进口第4代HIV抗原抗体检测试剂的质量评价

目的 对4种国产和3种进口第4代HIV诊断试剂的质量进行评价.方法 利用HIV抗体阴性样品库和核酸阳性样品库、BBI阳转血清盘样品等,对4种国产和3种进口第4代试剂的敏感性和特异性、检测HIV-1早期感染的能力进行分析.结果 7种第4代试剂的敏感性均为100％ (95％ CI:99.86％～100％),且1份HIV-1感染窗口期样品均检测为阳性,其中1种进口试剂“8+”值较大(1.0892),其余6种试剂的“δ+”值均比较小(0.0836 ～0.3003).对阴性样品,7种试剂均存在不同程度的假阳性(特异性为97.80％ ～ 99.60％,“δ-”值为-1.3803 -0.4778).对BBI阳转血清盘样品,国产试剂的阳转血清相对敏感性系数为-0.500～0,2种进口试剂则为-0.600和-0.700.结论 7种试剂均具有较高的敏感性和特异性,第4代HIV试剂用于血液筛查可发现HIV感染窗口期样本,对减少HIV传播的风险有一定的意义.但进口第4代试剂检测HIV-1早期感染的能力强于国产第4代试剂.     

国产HBV DNA荧光定量PCR试剂检测准确性的初步分析

目的 评价国产HBV DNA荧光定量PCR试剂检测结果的准确性.方法 美国Roche公司COBAS TaqMan HBV Test对标本的HBV DNA定量为标准,评价国产HBV荧光定量PCR试剂(PG)对不同滴度的标本的检测准确性.结果 在病毒载量分别为10~1、10~2、10~3、10~4、10~5、10~6、10~7(IU/mL)范围内的标本中,国产试剂检测结果与Roche定量结果的相关性分别为:-0.08011、-0.05056、0.105642、0.312181、0.908046、0.866175、-0.23295;结果为阴性(低于检测范围)的比例分别为:60%、30%、33.3%、8.3%、0、0、0.对于病毒载量高于10~7(IU/ml)的标本,国产试剂检测结果全部低于美国Roche定量结果,至少低一个数量级.结论 国产HBV荧光定量PCR试剂线性范围较窄,仅对病毒载量在10~5～10~6(IU/ml)范围的标本检测结果准确,对于低病毒载量,尤其是低于10~3(IU/ml)的标本,结果不可靠,假阴性率较高.而对于病毒载量高于10~7(IU/ml)的标本检测结果也欠准确.因此,建议对病毒载量低于10~4(IU/ml)的标本采用美国Roche试剂检测,对于高于10~7(IU/ml)建议稀释标本后重新检测.     

表面健康人群血清附睾蛋白4参考范围调查

目的 初步建立表面健康人群血清附睾蛋白4的参考范围.方法 体格检查与相关实验室检查无异常的表面健康人群共500名(男性200名,未绝经女性150名,绝经后女性150名)入选本研究.采用化学发光法检测入选研究对象血清附睾蛋白4水平并使用统计软件SPSS进行分析.结果 年龄与血清HE4水平在男性呈弱正相关,在女性呈中等程度正相关.血清HE4水平在表面健康男性、未绝经女性和绝经后女性分别为46.2±10.7 pmol/L,45.9 ± 10.3 pmol/L和51.7 ±11.7 pmol/L.结论 血清HE4水平与性别和绝经与否有关,单侧95％参考范围在男性、未绝经女性和绝经后女性分别为＜ 63.7 pmol/L,＜62.8 pmol/L和＜70.9 pmol/L.     

化学发光免疫分析法检测黄体生成素和癌胚抗原的性能评价

目的 评价化学发光免疫分析法检测黄体生成素和癌胚抗原。方法 通过对不同浓度样品黄体生成素（LH）、癌胚抗原（CEA）含量的测定，进行精密度、灵敏度、干扰、回收试验。结果 批内CV均小于5％，批间CV均小于6．5％；LH、CEA回收率分别为97．9％～102．2％、98．9％～102．4％，灵敏度分别达到2．4IU／L、2．6ng／ml；无吸样间的交叉污染。结论 该方法各项指标结果准确，精密度好、灵敏度高、干扰小，具有广泛的应用前景。     

ARCHETECT高敏肌钙蛋白Ⅰ试剂盒性能评价

目的 评价ARCHETECT高敏肌钙蛋白Ⅰ（hs-cTnⅠ）试剂盒性能,以验证其是否符合临床实验室使用要求。方法 参考CLSI的EP15-A2文件和相关文献对ARCHETECT高敏肌钙蛋白Ⅰ试剂盒精密度、正确度进行评价,EP17-A文件和相关文献对空白检测限（LoB）进行评价,EP6-A文件和相关文献对线性范围进行评价,参考NCCLS C28-A2文件,对健康体检者血浆标本分男女验证生物参考区间。结果 实验测得hs-cTnⅠ高值样本（5.702 μg/L）的批内不精密度CV为1.56%,总不精密度CV为1.27%,低值样本（0.003 μg/L）的批内不精密度CV和总的不精密度CV均为0;hs-cTnI的回收率为 97.50%;LoB为0.001 μg/L;在检测范围内,hs-cTnI理论值与测定值的线性方程为Y=1.0006X-0.13136,R2=0.9999;生物参考区间验证结果显示男性100.00%的结果在厂家提供的生物参考区间范围内,女性96.67%的结果在厂家提供的生物参考区间范围内。结论 ARCHETECT高敏肌钙蛋白Ⅰ试剂盒性能通过验证,可为临床提供准确、可靠的hs-cTnⅠ定量检测结果,为临床对心肌损伤的诊断、治疗提供重要信息。     

快速诊断用超敏C反应蛋白检测试剂盒的研制及性能评价

目的 研发一种配套床边快速散射比浊仪使用的全血检测超敏C反应蛋白试剂盒.方法 根据乳胶增强散射比浊法的原理,用溯源至NIBSC标准品的工作校准品制定射频卡,含有表面活性剂的试剂1及含有致敏胶乳的试剂2与样品反应后,根据射频卡的标准曲线换算浓度.结果 本试剂盒线性范围0.05 ～ 30mg/L,灵敏度为0.05 mg/L,批内CV值分别为0.85％和0.42％,日间CV值分别为1.85％和1.65％,对血红蛋白、胆红素、甘油三酯有较强的抗干扰能力.结论 本试剂盒与商品化试剂配套生化仪检测系统比对,结果相关性较好,符合临床快速诊断的要求.     

基于磁性微球AFP时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的 建立基于磁性微球(磁珠)AFP时间分辨荧光免疫分析法.方法 用磁珠偶联标记抗AFP单克隆抗体(301M),Eu3标记抗AFP单克隆抗体(304M),采用双抗体夹心法建立基于磁性微球法的AFP-TRFIA,并对106名我院健康体检人员和住院患者进行该方法血清学检测.结果 其检测灵敏度为0.02 IU/mL,线性范围2.12～ 1210 IU/mL;癌胚抗原(CEA)、CA199、CAl25对AFP-TRFIA均无交叉反应.磁珠偶联301M 4℃保存3个月免疫反应性基本无损,而Eu3+标记304M于-20℃下保存6个月免疫反应性也基本无损;同批试剂连续3个月应用分析结果稳定,样品的平均添加回收率为98.75％,低、中、高质控的批内和CV分别为20.46IU/mL和4.75％,50.58 IU/mL和4.25％,120.51 IU/mL和2.89％.批间和CCV分别为19.54IU/mL和9.55％.46.32 IU/mL和7.38％,125.10 IU /mL和3.69％.血清AFP检测结果与传统时间分辨荧光法检测结果对比,结果高度相关,相关系数为0.976.结论 基于磁性微球建立的AFP时间分辨荧光免疫分析法敏感度、特异性、准确度等均符合临床应用要求,可用于临床血清标本中AFP含量的免疫测定.     

融合蛋白hCGβ-hC3d3增强人免疫活性细胞对hCGβ抗原的免疫原性

目的:探讨分子佐剂hC3d3与hCGβ的融合蛋白hCGβ-hC3d3作用于人外周血单个核细胞(PBMC)对hCGβ抗原的免疫原性的影响.方法:对人PBMC进行细胞分离纯化,分别用1、10、100 nmol/L的hCGβ、hCGβ-hC3d3及PWM等抗原体外作用于B细胞、B T细胞、PBMC和Raji细胞8～12天,用3H-TdR掺入法了解不同抗原刺激后各组细胞增殖情况;用ELISA检测培养上清中总免疫球蛋白(Ig)水平;而ELISPOT可测定各种抗原刺激后Ig分泌细胞数量.结果:用不同浓度hCGβ、hCGβ-hC3d3及PWM作用于B细胞、B T细胞、PBMC、Raji细胞8～12天后,3H-TdR掺入法分析显示:与hCGβ处理组相比,融合蛋白hCGβ-hC3d3能使各组细胞增殖明显升高,且呈浓度依赖性;100 nmol/L hCGβ-hC3d3与前3组细胞共培养上清中总Ig的含量分别为hCGβ刺激组的4倍、10倍和10.85倍,且呈浓度依赖性.ELISPOT结果与培养上清液检测结果类似,经与hCGβ-hC3d3共培养后Ig生成细胞较hCGβ组明显增加.结论:融合蛋白hCGβ-hC3d3明显增强人免疫活性细胞抗hCGβ的免疫原性.     

免疫胶体金法定量检测促甲状腺激素的实验性能测试

目的 免疫胶体金法用于快速检测受试者手指全血的促甲状腺素(TSH),可以定量分析且快速简便.本研究拟对免疫胶体金法定量检测TSH的精密度性能及检测仪器间是否存在差异进行实验研究.方法 设计7个不同浓度的促甲状腺激素(TSH)质控品和人血清样本,每天对各样本重复测定4次,持续5天,计算重复性(批内CV)和中间精密度(CV).选用33份不同浓度的TSH血清标本,分别用检测仪器1和检测仪器2进行判读分析,比较两者结果的相关性.结果 质控品和病人血清TSH浓度为1.20、2.51、3.46、5.02、7.63、10.03、11.08 μIU/mL,对应的批内CV分别为30.00％、17.84％、16.50％、15.00％、13.92％、10.62％、9.62％,中间精密度CV分别为29.23％、20.19％、18.15％、16.60％、15.34％、10.42％、8.76％.二台检测仪器检测TSH值相关性r为0.968,无统计学差异.结论 免疫胶体金法定量检测TSH在低浓度TSH水平的精密度变异较大,但在中高浓度TSH尤其＞10μIU/mL情况下,检测精密性能良好.不同检测仪器间检测结果也无明显差异.     

抗hCG-β单克隆抗体的产生及初步鉴定

本文报道用hCG免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞NS-1融合,获得6株分泌抗hCG单克隆抗体的杂交瘤细胞。其中,2B5和2D8二株细胞的分泌抗体,对hCG-β亚基呈强阳性反应。其培养液抗体的ELISA效价为10~(-2)～10~(-4);注入同系小鼠腹腔诱生的腹水抗体效价达10~(-5)～10~(-7)。2B5抗体为IgA,2D8抗体属IgG_1。它们对hCG-β的亲和常数(K_a)分别为0.8×10~9升/克分子和1.8×10~9升/克分子.在以~(125)I-hCG-β作为标记物的检测系统中,2B5抗体在50％抑制时同hLH的交叉反应为5.7％,而2D8抗体为3.1％.     

人心肌肌钙蛋白Ⅰ酶促化学发光免疫分析方法的建立

目的 建立检测人心肌肌钙蛋白Ⅰ的酶促化学发光免疫分析方法.方法 采用两株抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ的单克隆抗体,一株包被聚苯乙烯化学发光板,一株标记辣根过氧化物酶,采用辣根过氧化物酶/鲁米诺/过硼酸钠体系,建立了测定人血清心肌肌钙蛋白Ⅰ的酶促化学发光免疫分析方法,并进行了方法学鉴定.用该法测定80例正常人血清,确定正常参考值范围;测定临床病理样品27例,与Beckman全自动化学发光试剂测定值进行相关性分析.结果 本方法测定范围0.3 ～ 100μg/L,分析灵敏度0.16μg/L;37℃反应时间30min;回收率76.8％ ～ 111.1％;高浓度cTnI血清样品经系列倍比稀释后测定,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数0.999;批内、批间变异系数分别为3.90％～6.71％,7.66％～10.34％;与心肌肌钙蛋白T(cTnT)、肌钙蛋白C(TnC)、骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ(sKTnI)、骨骼肌肌钙蛋白T(sKTnT)、人心肌脂肪酸结合蛋白(h-FABP)、人心肌肌酸激酶(CK-MB)、人心肌肌红蛋白、C-反应蛋白(CRP)均无交叉;确定临床正常参考值小于0.304μg/L;与Beckman全自动化学发光试剂比较,两者测定值线性相关系数为0.925.结论 该方法反应时间短、特异性强、重复性好,具有应用及推广价值.     

HE4、CA125及ROMA在卵巢肿瘤良恶性鉴别的临床应用价值

目的 评估HE4、CA125和ROMA对卵巢癌的术前鉴别诊断价值.方法 电化学发光法检测卵巢癌组(54例)和良性卵巢肿瘤组(103例)女性血清HE4和CA125浓度,根据患者绝经与否计算ROMA值.应用统计分析,对比绝经前后HF4、CA125和ROMA三项血清学指标的诊断性能.结果 卵巢癌组较良性卵巢肿瘤块组患者血清HE4、CA125和ROMA值显著增高,差异有统计学意义(P ＜0.005).所有患者HE4、CA125和ROMA的AUC分别是:0.962、0.899和0.963.三项血清学指标对绝经后妇女较绝经前妇女具有更高的灵敏度(分别为:HE4 91.4％ vs 84.2％,CA125 97.1％ vs 84.0％和ROMA 91.4％ vs 84.6％),血清HE4、CA125及ROMA绝经前后特异性分别为:92.9％ vs 93.6％,87.5％ vs 83.0％,94.6％ vs 95.7％.结论 HE4、ROMA在区分卵巢癌和良性卵巢肿瘤表现出较好的诊断性能.HE4和ROMA在鉴别女性卵巢癌和良性卵巢肿瘤特异性较高,CA125在绝经后卵巢癌患者有高灵敏度.     

分子佐剂C3d3与hCGβ基因融合增强hCGβ基因疫苗体液免疫应答

目的：提高hCGβ在真核细胞中的表达效率，观察分子佐剂C3d3增强hCGβ基因疫苗的体液免疫应答。方法：构建带有增强目的基因表达效率的狗胰岛素前原信号肽(DPPISS)的高效真核表达质粒pCMV4-hCGβ-C3d3、pCMV4-hCGβ和pCMV4-C3d3。分别用pCMV4-DPPLSS-hCGβ-C3d3、pcMV4-DPPLSS-hCGβ和pcMV4-DPPISS-hCGβ联合pcMV4-DPPISS-C3d3免疫BALB／c小鼠，各组免疫剂量分别为5、10、50、100、500μmol，间隔3周相同剂量加强免疫1次。间接ELISA法分析免疫小鼠外周血抗hCGβ抗体动态变化以及IgG亚型。结果：含有DPPISS的pCMV4-hCGβ-C3d3较无DPPISS的pCMV4-hCGβ-C3d3在COS-7细胞中的表达效率明显提高。50μmol是BALB／c小鼠hCGβ基因免疫的最佳免疫剂量。C3d3使得BALB／c小鼠hCGβ的免疫原性增强了400倍。hCGβ-C3d3免疫组IgG1／IgG2a比值明显高于hCGβ免疫组和hCGβ与C3d3联合免疫组。结论：分子佐剂C3d3与hCGβ基因融合能够显著增强hCGβ基因避孕疫苗的体液免疫应答及抗体类型转换。