肝癌术后应用白介素12及白介素2诱导的自体肿瘤浸润淋巴细胞的临床观察

目的 观察肝癌患者术后单用白细胞介素2(IL-2)培养和IL-12+IL-2培养的自体肝癌肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)输注后,其特异性杀伤力、增殖能力、细胞因子的改变以及细胞免疫功能和临床症状的变化.方法 将手术切除的原发性肝癌组织进行体外分离,分别用含IL-2的培养液和含IL-12+IL-2的培养液培养,诱导TIL的生长.培养10-14 d测定细胞杀伤率、细胞因子和增殖能力,待细胞扩增达108-9/ml时进行输注,随访观察临床疗效.结果 ①输注IL-12+IL-2组TIL对自体肝癌细胞的细胞杀伤率、细胞扩增能力、细胞因子IFN-γ和TNF-α水平均比IL-2组明显增高;②输注IL-12+IL-2诱导的TIL组与IL-2诱导的TIL组输注后CD3+、CIM+、CD8+均升高,以CD3+、CD8+升高为主.与输注前比较,差异均有统计学意义;IL-12+IL-2组与IL-2组间比较,前者CD3+、CD8+、CD 56+上明显高于后者,差异均有统计学意义.③输注后两组患者的临床症状均比输注前改善明显,但两组间比较无明显差异.④接受TIL自体输注治疗的患者,其1年、3年、5年生存率均有所提高,IL-12+IL-2组与IL-2组与同期非TIL治疗组相比较(P＜0.05).结论 白介素12诱导肝癌TIL可明显增强TIL细胞的特异性细胞毒作用且增殖能力明显增强.肝癌患者术后输注IL-12+IL-2诱导的自体肝癌肿瘤浸润淋巴细胞比输注IL-2诱导的肝癌肿瘤浸润淋巴细胞能更有效地提高肝癌患者机体免疫机能,延长1年生存期,减少复发.     

白细胞介素-18与白细胞介素-12协同增强肿瘤浸润淋巴细胞对胃癌细胞的杀伤作用

目的:研究白细胞介素-18(IL-18)与白细胞介素-12(IL-12)对肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)杀伤功能的影响.方法:IL-18与IL-12共同刺激的TIL与人的胃癌细胞系SGC-7901共孵育后接种于BALB/c SCID小鼠皮下,测定小鼠肿瘤的生长大小并观察荷瘤小鼠的生存时间,酶联免疫吸附试验(ELISA方法)检测小鼠血清中Th1型细胞因子TNF-α、IFN-γ及Th2型细胞因子IL-10、IL-4的表达水平,同时体外测定NK细胞及CD8+T细胞的肿瘤杀伤活性.结果:IL-18与IL-12共同作用于TIL后,与对照组相比,SGC-7910细胞的荷瘤小鼠皮下肿瘤生长明显减慢,小鼠生存率明显延长;同时,两种细胞因子联合处理组荷瘤小鼠血清中细胞因子TNF-α、IFN-γ的水平明显增高,而IL-10与IL-4水平明显降低;体外LDH杀伤实验证实IL-18联合IL-12处理组NK细胞及CD8+T细胞杀伤活性明显提高.结论:IL-18与IL-12协同刺激能增强TIL对胃癌胞的杀伤功能.     

快速制备自体肿瘤浸润淋巴细胞联合白细胞介素2胸腔输注治疗癌性胸腔积液

目的：研究体外快速制备的自体肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）联合白细胞介素2（IL-2）疗法对癌性胸腔积液的治疗作用.方法：对2003年8月至2004年11月间确诊的22例癌性胸腔积液患者,采用该作者实验室建立的胸腔积液TIL体外快速制备技术制备TIL,胸腔输注,后续胸腔内灌注IL-2,每天100万单位,连续4d为1治疗周期,观察其疗效和不良反应.结果：采用该疗法治疗1个周期,22例患者中8例完全缓解（36.4%）,11例部分缓解（50.0%）,3例无效（13.6%）,总有效率达86.4%.有效的病例随访中均未见治疗侧胸腔积液复发或增加;除极少数患者治疗中出现低热和胸痛外,未见有其他不良反应发生.结论：自体TIL联合IL-2治疗癌性胸腔积液,具有良好的临床应用价值.     

逆转录病毒介导白细胞介素12及白细胞介素2基因联合治疗大鼠肝癌

目的 :研究携带小鼠白细胞介素 12 (m IL- 12 )和人白细胞介素 2 (h IL- 2 )基因的逆转录病毒包装细胞株对大鼠肝癌进行联合基因治疗的可行性和疗效。 方法 :构建携带 m IL- 12基因、h IL- 2基因及 m IL- 12 +h IL- 2基因的逆转录病毒包装细胞PA317- GCIL12 EXPN、PA317- GCXEIL2 PN和 PA317- GCIL12 EIL2 PN,分别与肝癌细胞 CBRH3以 1∶ 1混合接种于大鼠腹腔。观察其生存时间。 结果 :生理盐水对照组、空载体对照组 (PA317- GCXEXPN)和 h IL - 2治疗组的平均生存时间分别为(8.5± 1.2 ) d、(8.3± 0 .9) d和 (16 .7± 1.7) d;m IL - 12治疗组和 m IL - 12 +h IL - 2治疗组均长期存活。逆转录病毒包装细胞与CBRH3的比例为 1∶ 10 0混合时 ,m IL - 12 +h IL - 2治疗组仍能长期存活 ,而 m IL - 12治疗组平均生存时间为 (15 .7± 1.8) d。腹腔接种 CBRH3后 1、3、5、7d,采用 m IL- 12 +h IL- 2治疗后 35 d生存率分别为 10 0 %、10 0 %、30 %、15 %。 结论 :携带 m IL- 12和 h IL - 2基因的逆转录包装细胞株可明显抑制肝癌细胞的生长 ,早期治疗优于晚期治疗 ,联合基因治疗比单基因治疗更有效     

苦参碱对肝癌患者肿瘤浸润淋巴细胞的影响

目的:研究不同浓度苦参碱对肝癌患者肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)增殖、体外杀瘤活性的影响.方法:将苦参碱分为0.1,0.2,0.4,0.6,0.8 g/L 5个浓度组,分别加入含有IL-2的DMEM培养基,体外诱导扩增TIL,通过MTT法检测TIL增殖、体外杀瘤活性,采用流式细胞术测定T淋巴细胞亚群,研究苦参碱体外对肿瘤免疫功能的影响.结果:苦参碱低浓度组(终浓度分别为0.1,0.2 g/L)对TIL作用不明显, 高浓度组(终浓度为0.8 g/L)能抑制TIL增殖和体外杀瘤活性(P＜0.01),中浓度组(终浓度分别为0.4, 0.6 g/L)能促进TIL增殖和体外杀瘤活性(P＜0.01),CD8 数量有所增加,CD4 /CD8 比值有所下降(P＜0.01).结论:合理利用苦参碱可增强患者肿瘤免疫能力.     

白细胞介素12与肿瘤免疫

如何诱导并加强肿瘤特异性的细胞免疫功能，已成为当今的热门课题。白细胞介素１２（ＩＬ－１２）的问世，展示了肿瘤免疫治疗的前景。ＩＬ－１２可介导辅助Ｔ细胞（Ｔｈ１）的分化，干扰素γ（ＩＦＮ－γ）的产生及特异性和非特异性的细胞杀伤活性。在多种动物实验模型中，已证实ＩＬ－１２有抗肿瘤作用，同时ＩＬ－１２的临床应用已在世界范围内展开。本文就近年来关于ＩＬ－１２与肿瘤免疫的基础研究及临床初步治疗试验做一综述。１　ＩＬ－１２及ＩＬ－１２受体的分子生物学特性ＩＬ－１２主要由单核细胞及巨噬细胞产生，Ｂ细胞、肥大细…     

白介素─2活化的肾癌肿瘤浸润淋巴细胞抗肿瘤活性的实验研究

作者对１２例肾癌组织标本肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）的抗瘤活性进行了研究。结果显示，自１２例肾癌标本中１０例成功地分离到ＴＩＬ，经４周培养平均扩增８５．９２倍，表型分析以Ｔ淋巴细胞为主，随培养时间延长Ｔ４比率逐渐减少，Ｔ８比率逐渐增加，培养后ＴＩＬ抗瘤活性显著增强但对自体肿瘤细胞特异杀伤问题需进一步研究，初步结果表明ＴＩＬ治疗肾癌具有可行性。     

白细胞介素12在肝癌基因治疗中的应用

白细胞介素12(IL-12)是具有强大抗肿瘤作用的细胞因子之一,其重组蛋白可以明显延缓肿瘤的生长,但半衰期短和毒副作用大的缺点限制了其应用。以IL-12为基础的基因治疗,不仅可以延长IL-12蛋白在体内的表达时间,提高疗效,而且可以降低其毒副作用,在肝癌的治疗中发挥重要作用。     

脾内转染白细胞介素12与白细胞介素2融合基因治疗肝癌的实验研究

目的　观察脾内直接注射携带白细胞介素 12与白细胞介素 2融合基因的逆转录病毒包装细胞株对肝癌细胞的生长抑制作用。方法　构建携带小鼠白细胞介素 12 (mIL 12 )和人白细胞介素 2 (hIL 2 )融合基因的逆转录病毒载体GCIL12EIL2PN ,转染包装细胞PA317,于不同时间对接种肝癌大鼠模型进行脾内注射 (1× 10 7细胞 /只 )治疗 ,观察对肝癌细胞的生长抑制作用及其对大鼠的免疫功能变化、毒性反应。结果　IL 12 IL 2融合基因治疗组中 ,肝癌细胞株CBRH3接种大鼠肝脏后第 1、3、5、7天进行治疗的大鼠平均生存时间分别为 5 3 3d± 3 7d、4 9 3d± 4 2d、31 0d± 2 1d及 2 4 3d±1 4d ,IL 2基因治疗组分别为 2 5 0d± 2 5d、2 3 5d± 2 0d、18 3d± 2 4d及 12 0d± 1 8d(P <0 0 0 1) ,IL 12基因治疗组分别为 39 0d± 4 8d、32 0d± 3 9d、2 3 0d± 2 5d及 19 4d± 2 1d(P <0 0 0 1)。第 1天和第 3天治疗组长期存活率 (≥ 6 0d)为 30 % ,治疗后 2个月血清mIL 12及hIL 2仍维持在较高水平。治疗后肝癌组织中浸润的淋巴细胞明显增多。结论　脾内直接注射携带mIL 12和hIL 2融合基因的逆转录包装细胞株可明显抑制肝癌细胞的生长 ,早期治疗优于晚期治疗。     

抗肿瘤药物对肿瘤浸润淋巴细胞的影响

为了了解中药物对肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）的毒性作用我们选择了一些常用的抗肿瘤药物，对２７例肺癌患者的ＴＩＬ进行了药物敏感度试验。方法：用四在偶氮唑蓝（ＭＴＴ）法检测细胞抑制率。结果：实验发现一些化疗药物对ＴＩＬ明显的抑制作用。与自体瘤细胞或人体腺癌细胞株（ＳＰＣ）比较，环磷酰胺、卡铂、柔红霉素、长春新碱、阿糖胞苷和威猛等药物对ＴＩＬ的抑制率最大。结论：临床化疗一ＴＩＬ治疗应该考虑两者的相互作用。     

肝癌瘤苗激活的肿瘤浸润性淋巴细胞对血清sIL-2R水平的影响及意义

目的：为了探讨肝癌瘤苗激活的肿瘤浸润性淋巴细胞（ＴＩＬ）对原发性肝癌（ＰＨＣ）患者血清可溶性白介素－２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）的影响及意义,方法：使用冷冻方法制成肝癌瘤苗,用于激活ＴＩＬ。对２２例原发性肝癌患者使用经肝癌瘤苗激活的ＴＩＬ治疗,并应用双抗体夹心ＥＬＩＳＥＡ法检测治疗前后ｓＩＬ－２Ｒ水平变化以及与对照组相比较,结果：用经肝癌瘤苗激活的ＴＩＬ治疗者,其血清ｓＩＬ－２Ｒ水平下降幅度最大。用未经     

肿瘤出芽与乳腺癌临床病理特征、肿瘤浸润淋巴细胞及患者预后的相关性探讨

目的 探讨肿瘤出芽与乳腺癌临床病理特征、肿瘤浸润淋巴细胞及患者预后的相关性。方法 选取2015年1月～2017年1月我院收治的89例乳腺癌患者肿瘤组织切片和资料,在显微镜下对乳腺癌临床病理特征观察,同时分析肿瘤浸润淋巴细胞与患者预后相关性。结果 乳腺癌临床病理特征与人类表皮生长因子受体2、年龄、Ki67和肿瘤大小没有相关性,脉管癌栓侵袭、淋巴结阳性、组织学分级高与乳腺癌临床病理特征存在相关性;乳腺癌肿瘤浸润淋巴细胞水平与出芽状况呈反比关系,肿瘤出芽数量越多,乳腺癌肿瘤浸润淋巴细胞水平越低,肿瘤出芽数量越少,乳腺癌肿瘤浸润淋巴细胞水平越高;经随访,高肿瘤出芽组无病生存率为90%,低肿瘤出芽组无病生存率为98%,两组生存率存在明显差异,患者预后与乳腺癌肿瘤出芽水平存在相关性。结论 乳腺癌肿瘤浸润淋巴细胞水平与出芽状况呈负相关,乳腺癌肿瘤恶性程度与出芽水平存在相关性,与恶性程度高的临床病理指标密切相关,可对患者预后产生影响。对肿瘤出芽与乳腺癌临床病理特征、肿瘤浸润淋巴细胞及患者预后的相关性探讨,可为患者临床治疗提供更有效理论依据和重要基础。     

肿瘤浸润淋巴细胞免疫治疗胃癌的疗效

目的 对胃癌患者实施肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）免疫治疗。方法 培养收获ＴＩＬ细胞,并回输患者。结果 ＴＩＬ治疗能使部分患者瘤体缩小,生存期延长,一般症状显著改善,治疗前后免疫学参数（ＣＤ３／ＣＤ４,自体ＬＡＫ活性,血清ＳＩＬ－２Ｒ水平）表明,ＴＩＬ治疗可以提高患者机体免疫功能,增强抗癌抑癌能力。结论对胃癌患者综合治疗,ＴＩＬ免疫治疗值得临床进一步扩大应用。     

自体胸水上清培养肿瘤浸润性淋巴细胞生长所需白细胞介素-2的适宜剂量

目的：模拟体内环境,摸索出应用自体胸水上清培养肿瘤浸润性淋巴细胞（TIL）时所需白细胞介素-2（IL-2）的最适剂量。方法：恶性胸水中的TIL经贴壁法分离后,分成A、B、C三组,分别应用含有细胞因子IL-2、CD3单克隆抗体（OKT3）及外源凝集素（PHA）的自体胸水上清进行培养,其中A组IL-2终浓度为6000u/ml;B组IL-2首剂终浓度为6 000u/ml,其后换液时改为1000u/ml;C组IL-2终浓度为1000u/ml,比较不同剂量IL-2培养的TIL增殖速率、培养前后免疫表型变化和对自体肿瘤细胞的杀伤活性。结果：培养的第3、7、14和21 d检测发现,三组TIL均发生明显扩增,其中A、B两组间TIL的生长速度无差异,但均明显快于C组;TIL免疫表型变化和对自体肿瘤细胞杀伤活性经组间比较无显著差异。结论：TIL培养时,首剂IL-2的终浓度6000u/ml有着非常重要的意义,它有助于早期解除TIL的免疫抑制状态,使其在培养的第3 d就发生明显的活化和扩增,为自体TIL体外分离后仅作短期培养即回输胸腔,后续胸腔内注入IL-2,使其进一步生长,发挥杀瘤效应,从而为治疗恶性胸水奠定了理论基础。     

食管癌组织肿瘤浸润淋巴细胞穿孔素的表达

目的　探讨食管癌组织中肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)的穿孔素 (PFP)表达情况。　方法　将 4 2例手术切除的食管癌标本 (观察组 )和 2 0例食管息肉或食管平滑肌瘤标本 (对照组 )常规HE染色 ,光镜观察 ,并用免疫组化SABC法检测TIL中PFP的表达。　结果　 4 2例食管癌中 ,32例PFP表达阳性 ,阳性率76 .2 % ;对照组中有 2例发现PFP阳性表达的TIL ,阳性率 10 .0 %。两组有显著性差异 (χ2 =2 3.96 7,P <0 .0 1)。 4 2例食管癌中有淋巴结转移组 (14例 )与无淋巴结转移组 (2 8例 )的PFP阳性率分别为 5 0 .0 %和89 .3% ,两组比较有显著性差异 (χ2 =5 .92 2 ,P <0 .0 5 )。　结论　大部分食管癌组织中存在有杀伤功能的T细胞。PFP在食管癌细胞局部转移中起抑制作用。     

小鼠肿瘤浸润淋巴细胞的形态学研究

目的　为探讨小鼠肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)的功能和生物学治疗提供形态学基础。方法　建立B1 6 黑色素瘤小鼠模型 ,将 30只小鼠随机分为 3组 ,1组小鼠肿瘤长至 0 .5cm× 0 .5cm ,2组小鼠肿瘤长至 1 .0cm× 1 .0cm ,3组小鼠长至 1 .5cm× 1 .5cm ,分别处死小鼠 ,取瘤周区部位皮肤组织 ,光镜和电镜观察TIL细胞的形态和分布特征。结果　 1组瘤周区肿瘤浸润淋巴细胞最多 ,3组最少。 3组瘤周区肿瘤浸润淋巴细胞形态多呈不规则表现 ,1组瘤周区肿瘤浸润淋巴细胞较规则。结论　肿瘤愈大 ,肿瘤浸润淋巴细胞愈少 ,TIL形态愈不规则     

白细胞介素-12抑制肿瘤血管生成的研究进展

白细胞介素-12(IL-12)可诱导干扰素-γ(INF-γ)的产生，上调干扰素诱导蛋白-10(IP-10)、单核因子(MIG)、组织金属蛋白酶抑制剂(TIMP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等血管生成抑制因子，下调血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、基质金属蛋白酶(MMP)等血管生成诱导因子，协同抑制肿瘤新生血管的形成，促进肿瘤消退。IL-12可以不依赖免疫系统而发挥抑制肿瘤血管生成的作用。