金属硫蛋白降低GRP78和CHOP蛋白表达减轻大鼠砷中毒肝细胞凋亡

目的 研究葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)在金属硫蛋白(MT)减轻大鼠砷中毒肝细胞凋亡中的作用.方法 建立MT治疗亚砷酸钠(NaAsO2)诱导的大鼠砷中毒肝损伤模型,用MT治疗2周,以TUNEL法检测肝细胞凋亡,免疫组化法、Western blot检测大鼠肝脏GRP78、CHOP蛋白表达.结果 砷中毒模型组大鼠肝细胞凋亡、肝组织GRP78和CHOP蛋白表达较对照组显著升高(P＜0.05),MT治疗组肝细胞凋亡、肝组织GRP78和CHOP蛋白表达明显回降(P＜0.05),但仍然高于对照组(P＜0.05).结论 MT可通过降低GRP78和CHOP蛋白表达减轻大鼠砷中毒所致的肝细胞凋亡.     

PI3K/Akt信号通路及内质网应激在肝纤维化大鼠肝细胞凋亡中的作用

目的观察磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、生长停滞及DNA损伤基因(CHOP/GADD153)在四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化中的表达并探讨其可能的作用。方法将30只SD大鼠随机分为正常组、肝纤维化模型(皮下注射40%CCl4橄榄油溶液)4及8周组。HE染色法观察肝组织病理形态学;用real-time PCR技术检测肝脏内GRP78及CHOP mRNA的表达;用Western blot检测肝脏内PI3K/Akt信号通路中Akt1、磷酸化Akt1及内质网应激相关蛋白GRP78及CHOP的表达;用原位末端转移酶标记(TUNEL)检测细胞凋亡。结果与正常组大鼠比较,肝纤维化模型4及8周组大鼠肝脏内GRP78及CHOP mRNA和蛋白表达均明显升高(P0.05),而肝脏内Akt1和磷酸化Akt1蛋白的表达则较正常大鼠显著降低(P0.05);与正常组大鼠比较,肝纤维化模型4及8周组大鼠肝细胞凋亡显著升高(P0.05)。结论 PI3K/Akt信号通路及内质网应激可能在肝纤维化大鼠肝细胞凋亡中发挥了重要作用。     

IL-1β诱导内质网应激增加人软骨细胞凋亡

目的分析炎性因子(IL-1β与TNF-α)对内质网应激(ERS)的影响以及与骨关节软骨细胞凋亡的关系,探讨相关分子机制。方法收集正常与OA患者骨关节软骨组织各20例,RT-PCR法检测软骨组织中炎性因子IL-1β、TNF-α及ERS相关因子GRP78、CHOP的mRNA水平。Western blot法检测体外培养软骨细胞中GRP78、CHOP、ATF4和caspase-3表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果与对照组相比,OA患者骨关节软骨组织中IL-1β、TNF-α与GRP78、CHOP的mRNA表达水平均显著上调(P0.01),IL-1β与GRP78、CHOP的高表达呈显著正相关(P0.05)。体外实验表明,IL-1β(2 ng/L)作用下,软骨细胞GRP78、CHOP、ATF4表达水平及细胞凋亡水平较对照组均显著增高(P0.01);TNF-α作用下,GRP78、caspase-3表达水平及细胞凋亡水平较对照组显著上调(P0.01)。结论 2 ng/L及更高浓度的IL-1β可激活ATF4-CHOP介导的ERS反应而诱导软骨细胞凋亡。     

巴戟天寡糖单体HexB减轻HUVECs缺氧复氧损伤

目的:研究巴戟天寡糖单体HexB减轻缺氧复氧(H/R)损伤诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的分子机制。方法:HUVECs分别用HexB、内质网应激(ERS)抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)和ERS诱导剂毒胡萝卜素(TG)干预,并将培养的HUVECs分为:对照组、HexB组、H/R组、HexB+H/R组、4-PBA+H/R组、TG组和HexB+TG组。CCK-8法和流式细胞术检测细胞活性及凋亡率,Western blot法检测ERS标志分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)、凋亡相关蛋白caspase-12及磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的蛋白水平。结果:与对照组比较,H/R组和TG组的细胞凋亡率明显增加,细胞活力明显降低,GRP78、CHOP、caspase-12及p-JNK的蛋白水平上调(P0.05);与H/R组比较,HexB+H/R组及4-PBA+H/R组的细胞凋亡率显著降低,细胞活力升高,GRP78、CHOP、caspase-12及p-JNK的蛋白水平降低(P0.05);与TG组比较,HexB+TG组的细胞凋亡率显著降低,细胞活力升高,GRP78、CHOP、caspase-12及p-JNK的蛋白水平降低(P0.05);HexB+H/R组与4-PBA+H/R组比较,细胞凋亡率、细胞活力及GRP78、CHOP、caspase-12、p-JNK蛋白水平的差异无统计学显著性。结论:通过抑制内质网应激,HexB可以减轻H/R诱导的HUVECs凋亡,其机制可能与下调GRP78、CHOP、p-JNK及caspase-12的水平有关。     

二甲双胍对大鼠脊髓损伤后内质网应激和细胞凋亡的影响

目的:研究二甲双胍(MET)对大鼠脊髓损伤(SCI)后内质网应激(ERS)和细胞凋亡的影响,探讨二甲双胍对SCI的保护作用及机制。方法:成年雌性SD大鼠随机分为3组,分别是假手术组(Sham组)、单纯脊髓损伤组(SCI组)和二甲双胍干预组(MET组)。采用Allen方法制备大鼠SCI模型,MET组和SCI组大鼠建模后,立即腹腔注射MET(50 mg·kg~(-1)·d~(-1))或等量生理盐水,连续处理7天后,取脊髓组织,用实时定量PCR检测各组脊髓组织中葡萄糖调节蛋白78 (GRP78),CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-12(caspase-12)的mRNA水平,免疫印迹检测各组脊髓组织中GRP78、CHOP、caspase-12和active caspase-3的蛋白水平,免疫荧光染色检测各组脊髓组织中GRP78、CHOP和caspase-12的蛋白水平,TUNEL染色法检测各组脊髓组织中细胞凋亡水平,BBB评分检测大鼠SCI后运动功能情况。结果:与Sham组相比,SCI组中GRP78、CHOP和caspase-12的mRNA和蛋白水平明显升高,activecaspase-3蛋白表达和细胞凋亡数目明显增加,BBB评分明显降低;与SCI组相比,MET组中GRP78、CHOP和caspase-12的mRNA和蛋白水平明显降低,active caspase-3蛋白表达和细胞凋亡数目明显减少,BBB运动评分明显升高。结论:二甲双胍可以抑制大鼠SCI后细胞凋亡,促进后肢运动功能恢复,其机制可能与抑制ERS有关。     

内质网应激介导糖原合成酶激酶-3β促进肝细胞凋亡

目的 探讨细胞内信号分子GSK3β在内质网应激(ERS)诱导肝细胞凋亡中的作用.方法 以小鼠肝癌细胞株Hepa 1细胞为研究对象,化学药物衣霉素(20 μg/ml)为ERS诱导剂,建立肝细胞凋亡模型.化学药物SB216763特异性抑制GSK3β活性,在衣霉素诱导细胞凋亡前1h给予干预处理.乙酰氧基甲酯(AM)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)对活细胞/凋亡细胞进行检测;再利用培养细胞上清乳酸脱氢酶(LDH)的检测评价细胞死亡情况;Western blot检测p-GSK3β蛋白、ERS相关凋亡蛋白GRP78、CHOP、caspase-12以及caspase-3、cleaved caspase-3蛋白的表达.结果 研究表明,衣霉素诱导的ERS促进GSK3β活性升高;抑制GSK3β活性缓解了衣霉素诱导的ERS:GRP78、CHOP和caspase-12的表达被抑制;与此同时抑制GSK3β活性显著减轻了ERS诱导的Hepa 1细胞凋亡.与ERS诱导Hepa 1凋亡模型组相比,SB216763干预组PI染色的凋亡细胞显著减少,培养细胞上清中的LDH显著下降;此外,Western blot结果显示GSK3β活性抑制减少了cleaved caspase-3活性蛋白的表达.结论 GSK3β是ERS诱导细胞凋亡通路中的一种重要信号分子,抑制GSK3β活性通过减轻ERS而改善肝细胞凋亡.     

肝纤维化大鼠肝细胞内质网形态及GRP78表达的研究

目的: 观察四氯化碳(CCl₄)致大鼠肝纤维化过程中内质网形态及内质网应激标志性蛋白——葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达变化, 探讨内质网应激在肝纤维化发病机制中可能的作用。方法: 雄性Wistar大鼠皮下注射CCl₄制备肝纤维化模型,分别在4周及8周处死大鼠测定肝脏指数、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性, 观察肝组织病理改变和肝细胞内质网形态, 免疫组化和real-time PCR分别检测肝组织GRP78蛋白及mRNA表达变化。结果: 肝纤维化组大鼠肝脏指数、血清ALT和AST活性显著高于正常对照组(P<0.01),肝纤维化明显, 电镜下见肝细胞内质网扩张,数量明显减少; 肝细胞胞浆中GRP78蛋白表达量及mRNA表达量较正常组显著增加(P<0.01)。结论: 在CCl₄诱导的肝纤维化发生过程中肝细胞内质网形态有明显损伤性变化, 内质网应激蛋白GRP78蛋白及基因表达水平明显增加, 提示内质网应激参与肝纤维化发生发展。     

吡格列酮对非酒精性脂肪肝模型大鼠内质网应激性高血脂、炎性因子和Caspase-12水平的影响

目的:观察吡格列酮(PIG)对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠内质网应激(ERS)标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、血脂、炎性细胞因子和细胞凋亡分子Caspase-12水平的影响。方法:23只SD大鼠采用连续高脂饮食8周,复制NAFLD模型,将20只成模大鼠随机平分为模型组和PIG干预组。另取10只未行造模SD大鼠普通饲料喂养8周作为对照组。PIG干预组采用PIG溶液2ml(药物剂量1.6mg/kg)灌胃,1次/日,模型组和对照组给予等体积生理盐水灌胃。4周后,取三组大鼠下腔静脉血,酶法检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)水平;比色法检测游离脂肪酸(FFA)水平;ELISA检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平。取三组大鼠肝组织,用ELISA和Western Blotting分别检测肝组织匀浆中TNF-α、IL-6和GRP78、Caspase-12水平。结果:三组大鼠ALT、TC、TG、FFA、TNF-α、IL-6、GRP78及Caspase-12水平差异有统计学意义(P均<0.01)。模型组与对照组相比,ALT、TC、TG、FFA、TNF-α、IL-6、GRP78及Caspase-12水平均显著升高(均P<0.01)。PIG干预组与模型组相比,ALT、TC、TG、FFA、TNF-α、IL-6、GRP78及Caspase-12水平均下降(P<0.05或P<0.01)。结论:PIG干预可能减轻NAFLD大鼠肝细胞ERS从而改善脂质代谢和炎症,减少细胞凋亡。     

中脑星形胶质细胞源性神经营养因子蛋白对脓毒性心肌病大鼠的心脏保护作用机制

目的探究中脑星形胶质细胞源性神经营养因子(MANF)蛋白对脓毒性心肌病(SIC)大鼠的心脏保护作用机制。方法 45只SD大鼠随机分为对照组、模型组、MANF组,每组15只,通过盲肠结扎穿刺制备脓毒症心肌病大鼠模型,对照组盲肠不结扎不穿孔,MANF组大鼠从造模开始给予200μg/kg外源MANF蛋白腹腔注射,12 h重复给药,24 h时观察大鼠一般情况,采血,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清中心肌标志物(CK-MB、cTnI)水平及炎性因子(TNF-α、IL-6)水平,采血后处死大鼠取其心肌组织伊红-苏木素(HE)染色,观察各组大鼠心肌病理学改变,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测心肌细胞中内质网应激(ERS)相关蛋白葡萄糖调节蛋白94(GRP94)、CAAT区/增强子结合蛋白环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(Caspase-12)蛋白表达。结果 HE染色显示,MANF组病理损伤较模型组明显减轻,心肌细胞形态结构趋于正常,心肌细胞轻度肿胀,横纹清楚,间质充血水肿不明显,少量炎性细胞浸润。模型组大鼠血清中TNF-α、IL-6、CK-MB、cTnI及心肌细胞中GRP94、CHOP、caspase-12蛋白水平显著高于对照组(P0.05);MANF组大鼠血清中TNF-α、IL-6、CK-MB、cTnI及心肌细胞中GRP94、CHOP、caspase-12蛋白水平显著低于模型组(P0.05);MANF组大鼠血清中TNF-α、IL-6、CK-MB、cTnI及心肌细胞中GRP94、CHOP、caspase-12蛋白水平较对照组差异有统计学意义(P0.05)。结论 MANF蛋白可能通过抑制ERS激活的GRP94、CHOP、caspase-12表达而减少心肌细胞凋亡,减轻心肌损伤,从而起到保护心脏的作用,这可能为脓毒性心肌病的新治疗靶点。     

黄芪注射液联合葛根素注射液对2型糖尿病小鼠心肌的保护作用及其机制

目的:探讨黄芪注射液联合葛根素注射液对2型糖尿病小鼠心脏的保护作用及其机制。方法:将造模成功的2型糖尿病KKAy小鼠随机分为模型组和治疗组(黄芪注射液联合葛根素注射液腹腔注射),同周龄雄性KKAy小鼠作为正常对照组,并于21、24和28周龄时分别处死小鼠。HE染色观察心肌组织形态变化;TUNEL染色法检测心肌细胞凋亡;real-time PCR检测小鼠心脏组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)和p53上调凋亡调控因子(PUMA) mRNA的表达;Western blot检测小鼠心脏组织中GRP78、CHOP、PUMA、caspase-3、cleaved caspase-3、caspase-9、cleaved caspase-9、多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)和cleaved PARP蛋白的表达。结果:模型组小鼠心肌细胞发生肥大,可见到部分细胞出现肌浆溶解和坏死,治疗组小鼠病变减轻;与对照组比较,模型组小鼠心肌细胞凋亡数显著增加(P0.01),治疗组小鼠心肌细胞凋亡数较模型组显著降低(P0.05);模型组小鼠21、24和28周龄心肌组织中GRP78、CHOP和PUMA mRNA和蛋白水平,以及cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和cleaved PARP蛋白表达水平与正常对照组比较显著增加(P0.01);治疗组小鼠心肌组织中GRP78、CHOP和PUMA mRNA和蛋白水平以及cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和cleaved PARP蛋白表达水平均显著低于模型组(P0.01)。结论:黄芪注射液联合葛根素注射液对2型糖尿病小鼠心肌具有保护作用,其机制可能与抑制内质网应激和caspase通路的活化,从而抑制细胞凋亡有关。     

内质网应激在创伤致大鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的:探讨内质网应激(ERS)在创伤致大鼠心肌细胞凋亡中的作用。方法:应用Noble-Collip创伤仪构建机械创伤SD大鼠模型,并将大鼠随机分为伪创伤组(n=6),创伤组(创伤后0 h、3 h、6 h、12 h和24 h各时点n=6)和创伤+ERS抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)组(n=6)。用试剂盒检测大鼠心肌组织凋亡蛋白caspase-3活性;用Western blot检测大鼠心肌组织caspase-3的活化水平,ERS标志分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录激活因子6(ATF6)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)和需肌醇酶1α(IRE1α)的表达或磷酸化水平,以及ERS相关凋亡分子C/EBP同源蛋白(CHOP)和caspase-12的表达或活化水平。结果:与伪创伤组相比,创伤组大鼠心肌组织caspase-3活性增强,cleaved caspase-3、GRP78、ATF6、磷酸化PERK、磷酸化IRE1α、CHOP和cleaved caspase-12蛋白水平均显著升高(P0. 05或P0. 01);而给予创伤大鼠4-PBA处理后,caspase-3活性及CHOP、cleaved caspase-12和cleaved caspase-3蛋白水平均显著降低(P0. 05)。结论:创伤所致大鼠心肌细胞凋亡可能是由于激活ERS凋亡途径引起的。     

前列腺素E1通过抑制内质网应激保护心肌梗死后大鼠的心脏

目的:探讨前列腺素E1(PGE1)对心肌梗死(MI)后大鼠心脏的影响及相关分子机制。方法:将SPF级雄性SD大鼠分为假手术组、模型组和模型+PGE1组。通过结扎冠状动脉左前降支建立MI大鼠模型。通过超声心动图分析大鼠心功能变化;通过HE和Masson染色分析心肌组织形态学变化;通过TTC染色评估心肌梗死情况;通过TUNEL法检测心肌细胞死亡情况;通过免疫组化和Western blot检测内质网应激(ERS)相关因子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)和caspase-12,以及凋亡相关因子Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3的表达情况。结果:与假手术组比较,模型组大鼠心功能降低,心肌组织出现病理形态学改变,心肌梗死面积扩大,心肌细胞死亡增多,心肌组织中GRP78、CHOP、caspase-12、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平升高,Bcl-2表达降低(P0. 01)。与模型组比较,模型+PGE1组大鼠心功能明显提高,心肌组织病理损伤明显减轻,心肌梗死的面积显著减小,心肌细胞死亡显著减少,心肌组织中GRP78、CHOP、caspase-12、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平降低,Bcl-2表达升高(P0. 01)。结论:PGE1能通过降低ERS水平而减少胶原沉积、减轻炎症并提高心功能,从而保护心肌细胞免受MI的损伤。     

肝纤维化大鼠肝脏中内质网应激相关分子CHOP和TRB3的表达变化

 目的： 观察内质网应激相关分子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP）和Tribbles同源蛋白3（TRB3）在四氯化碳（CCl4）致大鼠肝纤维化过程中的表达变化,探讨其在肝纤维化过程中的可能作用。方法： 体重180～200　g的雄性Wistar大鼠随机分为正常4周组、正常8周组、肝纤维化4周组和肝纤维化8周组,肝纤维化组大鼠皮下注射40%CCl4制备肝纤维化模型,分别在4周和8周处死大鼠,观察肝组织病理改变,Western blotting检测肝脏活化转录因子6（ATF6）蛋白,免疫组化、Western blotting和real-time PCR分别检测肝脏CHOP和TRB3蛋白和mRNA表达变化,TUNEL法检测肝脏细胞凋亡。结果： 肝纤维化组大鼠肝脏可见假小叶形成,p90ATF6蛋白表达量较正常组明显减少（P<0.01）,p50ATF6蛋白表达量较正常组明显增加（P<0.01）,肝细胞胞浆CHOP和TRB3蛋白及mRNA表达量较正常组显著增加（P<0.01）,细胞凋亡率较正常组显著增加（P<0.01）。结论： 内质网应激相关分子CHOP和TRB3在CCl4致大鼠肝纤维化过程中蛋白及mRNA表达水平明显增加,其变化趋势与大鼠肝细胞凋亡率一致,提示内质网应激可能通过CHOP和TRB3促进肝细胞凋亡,参与肝纤维化发生发展。     

姜黄素抑制ox-LDL诱导HUVECs凋亡

目的研究姜黄素对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的保护作用及其可能机制。方法体外培养HUVECs,实验分为:对照组、ox-LDL组、ox-LDL加内质网应激(ERS)抑制剂PBA组、姜黄素组、ox-LDL加姜黄素组和ox-LDL加姜黄素加PI3K抑制剂LY294002组。CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡;激光共聚焦显微镜观察活化转录因子6(ATF6)转位;Western bolt检测ERS相关蛋白:糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶样内质网激酶(PERK)和肌醇激酶-1(IRE-1)以及相关通路蛋白:LOX-1、AKT和p-AKT的表达。结果与对照组相比,ox-LDL可增加细胞凋亡,提高ERS相关蛋白的表达(P0.01),促使ATF6向核内转位,以及提高LOX-1(P0.01)和降低p-AKT的表达(P0.01);与ox-LDL组相比,PBA可抑制ox-LDL诱导的细胞凋亡(P0.01),姜黄素可抑制ox-LDL诱导的ERS相关蛋白和LOX-1的表达(P0.01),ATF6的核转位,内皮细胞的凋亡(P0.01),同时它还可提高ox-LDL引起的p-AKT表达下调(P0.01);LY294002可部分削弱姜黄素抑制ox-LDL诱导ERS相关蛋白表达的作用(P0.05)。结论姜黄素可降低ox-LDL诱导HUVECs的凋亡,其可能机制是通过抑制LOX-1的表达和激活AKT通路减轻细胞ERS来实现的。     

抗衰老Klotho蛋白减轻大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的:观察抗衰老Klotho蛋白对大鼠乳鼠原代心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的作用并探讨其作用机制。方法:建立大鼠乳鼠心肌细胞H/R模型,并将心肌细胞分为正常对照组、H/R模型组和不同浓度(0.1μmol/L、1μmol/L和10μmol/L)Klotho作用H/R组。观察各组心肌细胞H/R前后搏动频率变化,利用MTT方法检测细胞存活率;测定各组心肌细胞H/R后LDH、CK、AST的漏出量及MDA含量、SOD活性;流式细胞术检测各组心肌细胞的凋亡率;real-time PCR检测各组心肌细胞中内质网应激标记及凋亡相关分子GRP78、CRT和CHOP和caspase-12 mRNA的表达情况;Western blot法检测心肌细胞内内质网应激凋亡蛋白CHOP和caspase-12蛋白表达及Akt磷酸化水平。结果:与正常对照组相比,H/R模型组中心肌细胞搏动频率和细胞存活率显著下降,细胞凋亡率显著升高(P0.05);LDH、CK、AST和MDA含量升高而SOD活性显著降低(P0.05);GRP78、CRT、CHOP和caspase-12 mRNA表达显著增高(P0.05);CHOP和caspase-12蛋白表达随之增高而Akt的磷酸化水平显著降低(P0.05)。与H/R模型组相比,抗衰老Klotho蛋白作用H/R心肌细胞后,心肌细胞搏动频率和细胞存活率显著升高,细胞凋亡率逐渐降低(P0.05),LDH、CK、AST和MDA含量下降而SOD活性显著增高(P0.05),GRP78、CRT、CHOP和caspase-12 mRNA的表达逐渐降低(P0.05),CHOP和caspase-12蛋白表达也随之降低,而Akt磷酸化水平显著增加(P0.05)。结论:抗衰老Klotho蛋白能够提升H/R损伤后心肌细胞的存活率,抑制细胞凋亡,通过抵抗氧化应激和过度内质网应激反应发挥作用,并与激活Akt磷酸化有关。     

AT1受体自身抗体对糖尿病肾病大鼠肾脏细胞凋亡及JNK表达的作用

 目的:探讨血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体（angiotensin Ⅱ type 1 receptor autoantibody,AT1-AA）对糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）大鼠肾脏细胞凋亡及内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）相关的JNK表达的作用。方法:高糖高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射制备DN大鼠模型,采用ELISA法检测大鼠AT1-AA阳性率,根据检测结果随机选择AT1-AA阳性和AT1-AA阴性大鼠共12只纳入DN组,同时选择6只正常大鼠纳入NC组;TUNEL法检测肾脏细胞凋亡;Western blotting技术测定肾组织ERS标志蛋白葡萄糖调节蛋白78 （GRP78）及凋亡蛋白p-JNK的表达水平。结果:DN组大鼠肾脏细胞凋亡率较NC组显著升高,且AT1-AA阳性大鼠凋亡率明显高于AT1-AA阴性大鼠（P<0.01）。Western blotting结果显示,GRP78和p-JNK蛋白在DN组大鼠肾组织中的水平较NC组显著升高,AT1-AA阳性DN大鼠肾组织中,前述蛋白的改变较AT1-AA阴性DN大鼠更为明显（P<0.05）。结论: AT1-AA可诱导DN大鼠肾脏ERS反应,并通过ERS相关的JNK凋亡途径介导肾脏细胞凋亡,损害肾脏功能。     

促红细胞生成素对横纹肌溶解大鼠急性肾损伤时内质网应激相关蛋白的影响

目的探讨促红细胞生成素(EPO)能否通过减轻内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达以及减轻横纹肌溶解致急性肾损伤。方法将SD大鼠随机分为4组:对照组(control,n=6)、单纯EPO组(EPO,n=18)、急性肾损伤组(AKI,n=18)和EPO干预组(AKI+EPO,n=18),EPO组、AKI组和AKI+EPO组又分为3个亚组,即1,6和24 h组(均为n=6)。在各自的时间点留取标本,检测血中尿素氮、肌酐和肌红蛋白水平;HE染色法观察肾脏病理;免疫组化观察GRP78和CHOP蛋白表达,实时荧光定量PCR检测GRP78和CHOP mRNA的表达。结果与对照组比较,AKI和AKI+EPO组大鼠尿素氮、肌酐和肌红蛋白水平升高,GRP78和CHOP蛋白及mRNA表达水平均显著上调(P0.05);AKI组肾脏结构出现损伤;与AKI组比较,AKI+EPO组6和24 h血肌酐水平,GRP78、CHOP蛋白和mRNA表达水平较同期均下降(P0.05)。结论 EPO可以通过影响横纹肌溶解致大鼠急性肾损伤时内质网应激相关蛋白的表达,发挥肾脏保护作用,其机制可能与调节未折叠蛋白反应有关。     

高脂血症对大鼠肾脏内质网应激的影响及辛伐他汀的干预作用

目的： 探讨内质网应激在高脂血症引起的肾脏损伤中的作用及辛伐他汀的干预作用。方法: 30只雄性Wistar大鼠随机分为3组：正常对照组（n=10）给予普通饲料喂养;高脂组（n=10）给予高脂饲料喂养;辛伐他汀组（n=10）在高脂饲料喂养的基础上给予辛伐他汀10 mg·kg-1·d-1灌胃。18周后检测大鼠24 h尿蛋白及血清胆固醇、甘油三酯水平。光镜观察大鼠肾组织病理改变。免疫组化方法检测大鼠肾脏GRP78、p-JNK的表达。TUNEL检测肾组织凋亡细胞。RT-PCR检测肾组织GRP78 mRNA、CHOP mRNA的表达。结果: 18周时,高脂组大鼠24 h尿蛋白、血脂水平、GRP78及p-JNK蛋白的表达、GRP78及CHOP mRNA的表达、肾组织凋亡细胞均高于正常对照组（P<0.01）; 辛伐他汀组上述改变显著低于高脂组（均P<0.05）。结论: 内质网应激参与了高脂血症引起的肾脏损伤,辛伐他汀可以通过抑制肾脏的内质网应激反应而起肾脏保护作用。     

西洋参茎叶总皂苷通过抑制内质网应激减轻毒胡萝卜素诱导的心肌细胞凋亡

 目的:研究西洋参茎叶总皂苷 (PQS) 减轻毒胡萝卜素(TG) 诱导的心肌细胞凋亡的分子机制。方法:原代培养的心肌细胞分为：control组、TG组、PQS (40 mg/L、80 mg/L及160 mg/L)+TG组、牛磺酸 (40 mmol/L)+TG组、蛋白激酶R样内质网激酶 (PERK)敲低+TG组及随机双链RNA转染对照 (mock)+TG组。通过向培养液中加入1 μmol/L TG作用24 h诱导离体培养的乳大鼠心肌细胞凋亡。以RNAi方法敲低心肌细胞PERK基因。CCK-8法和流式细胞术检测细胞活性及凋亡率,Western blotting方法检测内质网应激(ERS)标志分子葡萄糖调节蛋白78 (GRP 78)、钙网蛋白 (CRT)、PERK、p-PERK、真核起始因子2α (eIF2α)、p- eIF2α、活化转录因子4 (ATF4)、C/EBP同源蛋白 (CHOP) 及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:与对照组比较,TG孵育明显诱导细胞凋亡,降低细胞活力,上调PERK和eIF2α磷酸化以及GRP78、CRT、ATF4、CHOP及促凋亡蛋白Bax表达,降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达 (P<0.05);与TG组比较,PQS 160 mg/L及敲低PERK均可显著降低细胞凋亡率,升高细胞活力 (P<0.05);3种不同浓度的PQS可呈剂量依赖性降低Bax蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达 (P<0.05),敲低PERK基因及PQS (160 mg/L) 预处理均可降低ERS分子GRP78、CRT、ATF4及CHOP表达,降低PERK及eIF2α的磷酸化水平 (P<0.05)。结论: PQS 160 mg/L 减轻ERS诱导剂TG诱导的心肌细胞凋亡,PQS预处理可以模拟PERK敲低减轻TG致心肌细胞凋亡的效应,提示PERK-eIF2α-ATF4-CHOP途径参与PQS减轻ERS相关凋亡的作用。     

内质网应激诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞系凋亡

目的探讨内质网应激(ERS)致雌激素受体阴性(ER-)人乳腺癌MDA-MB-231细胞系凋亡及钙激活中性蛋白酶2(calpain2)在凋亡效应中的作用。方法实验设空白对照组(DMEM)、对照组(DMEM+DMSO)和实验组,用不同浓度衣霉素(TM)诱导乳腺癌细胞不同时间,MTT法和流式细胞术检测细胞增殖抑制率及凋亡率;Western blot法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达量,以GRP78表达最高点确定ERS模型建立,检测凋亡相关蛋白caspase4和CHOP表达以及calpain及其内源性抑制酶calpastatin的表达,用ERS抑制剂(4-PBA)和calpain抑制剂(calpeptin)分别预处理细胞2 h,观察对上述效应的影响。结果 9、12和18μmol/L TM诱导ERS对该细胞增殖有明显抑制效应,抑制率分别为33.88%±1.32%、51.51%±8.85%和55.77%±2.61%,细胞凋亡率分别为9μmol/L TM组16.70%±0.46%和12μmol/L TM组28.1%±1.09%,与对照组相比有明显差异(P0.05);9μmol/L TM诱导细胞24 h的GRP78表达上调最高(P0.01);ERS还可明显上调caspase4、CHOP和calpain表达,下调calpastatin表达(P0.01或P0.05),上述效应均能被4-PBA和calpeptin减弱或阻断(P0.05)。结论 ERS可诱导MDA-MB-231细胞凋亡,calpain2参与调控凋亡发生。