结直肠癌干细胞中miR-520c-3p的表达及其对丙酮酸代谢的调控机制研究

背景与目的 研究显示,丙酮酸代谢的改变在结直肠癌的发生发展中起重要作用,而结直肠癌干细胞中microRNA（miRNA）表达异常可能与丙酮酸代谢密切相关。笔者前期通过TCGA数据库分析发现,miR-520c-3p在结直肠癌中表达升高,且与预后相关。然而,miR-520c-3p是否参与了丙酮酸代谢尚不清楚。因此,本研究探讨结直肠癌干细胞中miR-520c-3p的表达与丙酮酸代谢的关系。方法 选择人结肠癌细胞株,并从中分离纯化结直肠癌干细胞。检测过表达或敲低miR-520c-3p后,结直肠癌干细胞及结直肠癌细胞增殖能力、丙酮酸氧化水平、乳酸产量的变化。用_D-［U-¹³C］葡萄糖孵育细胞,质量同位素分析追踪葡萄糖衍生碳的命运。通过miRNA序列分析和遗传学手段分析和鉴定miR-520c-3p的功能底物。结果 过表达miR-520c-3p后,结直肠癌干细胞的增殖能力明显增强、丙酮酸氧化水平明显下降、乳酸产量明显升高（均P<0.05）;用_D-（U-¹³C）葡萄糖培养后,未标记的柠檬酸盐（m+0）明显增加,而高阶柠檬酸盐标记（m+1、m+4和m+5）明显减少（均P<0.05）。在敲低miR-520c-3p后,结直肠癌干细胞的上述情况呈反向变化（均P<0.05）。过表达或敲低miR-520c-3p对结直肠癌细胞的上述指标均无明显影响（均P>0.05）。miR-520c-3p可以靶向线粒体丙酮酸载体1（MPC1）mRNA 3''UTR（P<0.05）。过表达miR-520c-3p后,结直肠癌干细胞中MPC1的mRNA与蛋白水平均明显下降,敲低miR-520c-3p后则相反（均P<0.05）。TCGA数据库分析结果显示,低表达MPC1的结直肠癌患者预后较差（P<0.05）。敲低MPC1后,结直肠癌干细胞的丙酮酸氧化水平明显降低、乳酸产量明显增高、增殖能力均明显增强（均P<0.05）;用_D-［U-¹³C］葡萄糖培养后,未标记的柠檬酸盐（m+0）在敲低MPC1的结直肠癌干细胞中明显增加,而高阶柠檬酸盐标记（m+1、m+4和m+5）明显减少（均P<0.05）。同时敲低miR-520c-3p和MPC1后,结直肠癌干细胞丙酮酸氧化水平、乳酸产量、增殖能力均无明显变化（均P>0.05）。结论 结直肠癌中miR-520c-3p的高表达与较差的预后相关,其机制可能是miR-520c-3p靶向MPC1调控结直肠癌干细胞中的丙酮酸代谢水平,促进了结直肠癌干细胞的增殖。     

RUNX3在结直肠癌中的表达与作用及其与TGF-β/SMAD4信号通路的关系

背景与目的 转化生长因子β（TGF-β）/SMAD4信号传导通路在结直肠癌发生与发展中起了重要作用。runt相关转录因子3（RUNX3）在结直肠癌组织中的表达水平显著降低,且可能发挥抑癌作用。但RUNX3的作用与TGF-β/SMAD4通路的关系尚未见报道。因此,本研究旨在探讨RUNX3与SMAD4在结肠癌中的表达及作用,以及两者的关系。方法 收集98例结直肠癌组织和癌旁正常组织标本,分别用Western blot检测RUNX3和SMAD4蛋白的水平,qRT-PCR检测SMAD4 mRNA的水平,并分析两者表达的相关性。将人结直肠癌细胞SW480分别转染RUNX3过表达载体（RUNX3组）、SMAD4过表达载体（SMAD4组）、RUNX3+SMAD4过表达载体（RUNX3+SMAD4组）,以转染阴性对照质粒的SW480细胞为对照组,分别用Western blot与qRT-PCR检测各组细胞RUNX3与SMAD4表达的变化;用CCK-8实验与Transwell实验分析各组细胞的增殖与侵袭能力的差异。结果 结直肠癌组织中的RUNX3蛋白表达量明显低于癌旁正常组织,而SMAD4的mRNA与蛋白表达水平均明显高于癌旁正常组织（均P<0.05）;结直肠癌组织中RUNX3蛋白表达与SMAD4 mRNA和蛋白表达均呈负相关（r=0.511,P=0.004;r=0.487,P=0.009）。与对照组比较,RUNX3组的RUNX3蛋白水平均明显升高,但SMAD4 mRNA和蛋白水平明显降低（均P<0.05）;SMAD4组的RUNX3蛋白水平无明显变化（P>0.05）,但SMAD4 mRNA和蛋白的表达水平明显升高（均P<0.05）;RUNX3+SMAD4组的RUNX3蛋白水平均明显升高（P<0.05）,SMAD4 mRNA和蛋白水平变化不明显（均P>0.05）。RUNX3组细胞增殖与侵袭能力均明显低于对照组（均P<0.05）,SMAD4组的细胞增殖和侵袭能力均明显高于对照组（均P<0.05）,RUNX3+SMAD4组的细胞增殖和侵袭能力介于RUNX3组与SMAD4组之间,与对照组比较,差异无统计学意义（均P>0.05）。结论 RUNX3在结肠癌组织中表达降低,上调RUNX3的表达对结肠癌细胞的恶性生物学行为有抑制作用,其机制可能与抑制TGF-β/SMAD4通路的活性有关。     

原发性中枢神经系统淋巴瘤Toll样受体4表达水平与弥散加权成像表观弥散系数值的相关性

目的 观察原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)Toll样受体4(TLR4)表达水平与MR弥散加权成像(DWI)表观弥散系数(ADC)值的相关性。方法 回顾性分析17例经病理确诊的PCNSL患者,观察病灶ADC值、TLR4及NF-κB表达水平之间的相关性。结果 PCNSL病灶ADC值为460×10^－6~1 034×10^－6 mm²/s,平均(756±147)×10^－6 mm²/s;TLR4表达水平为0.02~0.11,平均0.06±0.03,NF-κB表达水平为0.04~0.15,平均0.08±0.03。TLR4表达水平与ADC值呈负相关(r=－0.76,P<0.01);NF-κB表达水平与TLR4及ADC值之间无明显相关性(P均>0.05)。结论 PCNSL的TLR4表达水平与其ADC值呈负相关。     

活血清解汤对重症急性胰腺炎大鼠肠道免疫屏障功能的影响及机制

背景与目的 重症急性胰腺炎（SAP）易并发肠道免疫屏障功能障碍,笔者前期发现活血清解汤可缓解SAP,但其作用是否与肠道免疫屏障功能有关尚不清楚。因此,本研究探讨活血清解汤对SAP大鼠肠道免疫屏障功能的作用及机制。方法 将SD大鼠随机分成假手术组、SAP模型组（模型组）、SAP模型+活血清解汤治疗组（治疗组）,SAP模型采用5%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射法诱导,治疗组造模后给予活血清解汤灌胃,假手术组与模型组给予等体积生理盐水代替。分别在术后6、12 h处死动物,ELISA检测各组血清中的促炎因子TNF-α、抗炎因子IL-4、血淀粉酶及脂肪酶的指标变化;HE染色检测胰腺及小肠组织的病理变化;qRT-PCR及Western blot检测小肠组织巨噬细胞M1型标志物iNOS及M2型标志物Arg-1的表达。将大鼠小肠巨噬细胞分别用牛磺胆酸钠、活血清解汤、牛磺胆酸钠+活血清解汤处理,以无处理的大鼠小肠巨噬细胞为空白对照,用qRT-PCR及Western blot检测各组细胞NF-κB、iNOS、TNF-α、IL-4、Arg-1、TIPE2和PPAR-γ的表达。结果 体内实验中,与假手术组比较,模型组与治疗组术后的TNF-α、IL-4、血淀粉酶、脂肪酶水平均有不同程度升高（部分P<0.05）,但治疗组TNF-α、血淀粉酶、脂肪酶升高的程度明显低于模型组,而IL-4升高的水平明显大于模型组（均P<0.05）;模型组与治疗组术后胰腺与小肠组织均出现明显的病理损伤,但治疗组的损伤程度小于模型组,且随时间延长,模型组的损伤程度加重,治疗组则减轻,模型组与治疗组胰腺与小肠组织病理评分差异均有统计学意义（均P<0.05）;iNOS蛋白与mRNA的表达在模型组小肠组织中表达明显升高,而在治疗组的小肠组织中明显降低（均P<0.05）,Arg-1蛋白与mRNA的表达模型组小肠组织后期（12 h）明显升高,而在治疗组的早期（6 h）与后期（12 h）均明显升高,且升高程度大于模型组（均P<0.05）。体外实验中,单独牛磺胆酸钠处理后的大鼠小肠巨噬细胞的NF-κB、iNOS、TNF-α蛋白与mRNA表达水平明显上升（均P<0.05）,而Arg-1、IL-4、TIPE2、PPAR-γ蛋白及mRNA表达无明显变化（均P>0.05）;单独活血清解汤处理后,大鼠小肠巨噬细胞的Arg-1、IL-4、TIPE2及PPAR-γ蛋白及mRNA表达水平明显升高（均P<0.05）,而NF-κB、iNOS、TNF-α蛋白及mRNA表达无明显变化（均P>0.05）;与单独牛磺胆酸钠处理比较,牛磺胆酸钠+活血清解汤处理的大鼠小肠巨噬细胞的NF-κB、iNOS及TNF-α蛋白及mRNA表达水平明显下降,而Arg-1、IL-4、TIPE2及PPAR-γ蛋白及mRNA表达水平明显增加（均P<0.05）。结论 中药活血清解汤对SAP大鼠的肠道免疫屏障功能有保护作用,其作用机制可能与调控小肠巨噬细胞由M1型向M2型转化,促进抗炎因子表达,抑制促炎因子的释放,进而缓解全身炎症反应有关。     

circRAD18/miR-516b/PDK1轴调节葡萄糖代谢重编程与结直肠癌增殖的关系

背景与目的 环状RNA circRAD18被发现在乳腺癌和甲状腺癌的进展中起了促进作用,但其在其他恶性肿瘤的表达及作用尚未被充分揭示。笔者前期通过生物信息学软件预测circRAD18可与miR-516b互补结合,而葡萄糖代谢关键调节酶丙酮酸脱氢酶激酶1（PDK1）可能是miR-516b的靶基因。因此,本研究初步探讨circRAD18在结直肠癌细胞中的表达及作用,及其对靶miRNA及下游靶基因的调控关系。方法 用qRT-PCR检测不同结直肠癌细胞系（SW480、SW620、HT-29）及正常结直肠上皮细胞（NCM460）中circRAD18的表达;用si-circRAD18沉默结直肠癌细胞中circRAD18的表达后,分别用CCK-8实验和相应的试剂盒检测细胞的增殖情况以及葡萄糖摄取量和乳酸产生量。用双荧光素酶报告基因实验与RNA免疫沉淀（RIP）实验分析circRAD18、miR-516b及PDK1之间的结合关系;最后,采用过表达/敲低实验进一步验证三者之间的关系。结果 与正常结直肠上皮细胞比较,circRAD18在各结直肠癌细胞系中的表达均明显上调（均P<0.05）;转染si-circRAD18后,结直肠癌细胞增殖能力、葡萄糖摄取及乳酸产生量均明显降低（均P<0.05）;双荧光素酶报告基因实验与RIP实验证实circRAD18可与miR-516b结合,而PDK1是miR-516b的下游靶基因。miR-516b模拟物及si-circRAD18的转染可明显抑制细胞葡萄糖摄取、乳酸产生及PDK1蛋白表达,且补充PDK1可逆转该抑制作用（均P<0.05）。结论 circRAD18在结直肠癌细胞中表达上调,并与结直肠癌细胞增殖能力的增强密切相关,作用机制可能与circRAD18通过海绵样吸附miR-516b后,上调PDK1表达,从而导致结直肠癌细胞葡萄糖代谢重编程有关。     

HER-2低表达与零表达早期乳腺癌患者临床病理特征及预后分析

背景与目的 临床上将HER-2低表达与HER-2零表达乳腺癌均被归类于HER-2阴性乳腺癌,并认为无HER-2靶向治疗条件。然而,近期的新型抗HER-2药物临床试验结果显示,HER-2低表达乳腺癌患者仍可从抗HER-2治疗中获益,使HER-2低表达与HER-2零表达乳腺癌患者之间生物学特性以及治疗反应与预后方面的差异备受关注。因此,本研究探讨HER-2低表达与HER-2零表达早期乳腺癌患者临床病理特征及预后差异,以期为临床提供更多的参考数据。方法 回顾性分析2010年１月—2020年12月间中南大学湘雅二医院乳腺外科收治并经病理确诊的1 002例HER-2阴性早期乳腺癌（M0）患者临床资料,根据患者HER-2表达状态,将患者分为HER-2低表达组（409例）与HER-2零表达组（593例）,比较两组患者相关临床病理指标与预后的差异。结果 与HER-2零表达组比较,HER-2低表达组浸润性导管癌比例更高（93.4%）,且病理分化等级多表现为Ⅱ级（78.7%）;HER-2低表达组TNM分期中处于T1的比例低于HER-2零表达组,而T2分期的比例高于HER-2零表达组,以上差异均有统计学意义（均P<0.05）。HER-2低表达组激素受体（HR）阳性率为87.5%,在199例检测了雄激素受体（AR）的患者中,AR阳性率80.9%,两项数据均高于HER-2零表达组（均P<0.05）。HER-2低表达组Ki-67表达量明显低于HER-2零表达组（P<0.05）。同时,两组间这些差异主要体现在HR阳性患者中（均P<0.05）,而HR阴性患者中以上数据均未见明显差异（均P>0.05）。无论HR表达状况,HER-2低表达组与HER-2零表达组的总生存（OS）期和无病生存（DFS）期均无明显差异（均P>0.05）。此外,HER-2低表达患者中,AR表达状态对OS与DFS均无明显影响（均P>0.05）。结论 HER-2低表达与零表达早期乳腺癌患者间的临床病理特征存在一定差异,尽管两者的预后未见明显差异,但HER-2低表达患者的较高的HR与AR阳性率,以及较低的Ki-67表达水平,提示可能与内分泌治疗的敏感度相关。     

膜联蛋白A5在胰腺癌中的预后意义及机制的生物信息学分析

背景与目的 胰腺癌是一种诊断较晚、预后差的侵袭性疾病，对于胰腺癌的分子机制研究对改善胰腺癌患者的预后具有重要意义。膜联蛋白A5（ANXA5）与人类肿瘤的发生与发展关系密切，但ANXA5与胰腺癌患者预后的关系及具体机制尚不十分清楚。本研究通过生物信息学分析结合实验验证探讨ANXA5的表达与胰腺癌预后的关系及其作用机制。方法 从TCGA和GEO数据库（GSE15471、GSE16515、GSE21501）下载胰腺癌转录组及临床数据，利用R包分析GEO数据库中ANXA5基因在胰腺癌组织与癌旁正常组织的表达情况，并利用GEPIA在线网站分析TCGA数据库中胰腺癌患者组织与GTEx数据库中正常组织ANXA5基因表达情况。采用Kaplan-Meier的方法分析ANXA5的表达水平对胰腺癌患者总生存时间的影响，然后单因素及多因素Cox分析判断胰腺癌相关危险因素，并利用GSEA分析ANXA5在胰腺癌中可能的信号通路并分析其相关性。最后采用免疫组织化学法检测49例胰腺癌组织和癌旁组织中ANXA5的表达，并分析其与预后及胰腺癌临床病理特征的关系。结果 数据库分析显示，在GSE15471与GSE16515数据集，以及TCGA数据库中ANXA5在胰腺癌组织中的均表达明显升高（均P<0.05）；在GSE21501数据集与TCGA数据库中ANXA5高表达的患者总体生存期明显短于低表达患者（均P<0.05）；TCGA中ANXA5表达是胰腺癌患者预后的独立危险因素（HR=1.819，95% CI=1.058~3.126，P=0.03）；ANXA5基因与胰腺癌TGF-β通路及肿瘤上皮-间质转化（EMT）高度相关。胰腺癌组织样本分析结果显示，ANXA5的表达明显高于癌旁组织（P<0.001），且此基因高表达预示着较差的预后（P=0.008 2）；ANXA5表达是胰腺癌患者预后的独立危险因素（HR=3.06，95% CI=1.046~8.952，P=0.041）；ANXA5的表达与肿瘤临床分期（P=0.000 94）及淋巴结转移（P<0.001）明显相关。结论 ANXA5在胰腺癌中表达升高，其高表达是胰腺癌患者预后的危险因素，其机制可能是通过TGF-β通路及EMT进程促进胰腺癌发展有关。     

直肠黏膜渗液游离亚铁血红素检测在结直肠癌早期诊断中的应用价值

背景与目的 近年来,游离亚铁血红素（FH）检测在恶性肿瘤筛查中表现出较好的筛查效果,然而,目前针对结直肠癌FH检测的研究较少,且样本量小,代表性较差。因此,本研究以较大的样本量进一步评价直肠黏膜渗液FH检测在结直肠癌早期诊断中的应用价值。方法 为分析FH检测对结直肠癌早期诊断的效能以及其普适性或特殊性,将2019年4月—2020年8月于中南大学湘雅三医院胃肠外科行直肠黏膜渗液FH检测的所有符合纳入标准疑似胃肠恶性肿瘤的住院患者均纳入研究,收集患者各项临床资料。将患者区分为胃肠组（所有疑似胃癌与结直肠癌患者）、结直肠组（疑似结直肠癌患者）、右半结肠组（疑似右半结肠癌患者）、左半结肠组（疑似左半结肠癌患者）、直肠组（疑似直肠癌患者）,比较FH检测以及粪便隐血试验（FOBT）、癌胚抗原（CEA）、糖抗原19-9（CA19-9）单独或与FH联合检测对各组患者的诊断价值。结果 共将345例患者纳入研究,其中疑似结直肠癌291例,疑似胃癌54例。FH检测结果显示,除右半结肠组外,FH检测的阳性率在胃肠组、结直肠组、左半结肠组、直肠组的恶性肿瘤中均高于同组的良性疾病（均P<0.05）。以病检结果为金标准,FH检测对胃肠癌、结直肠癌、右半结肠癌、左半结肠癌、直肠癌诊断的敏感度分别为40.72%、47.49%、17.39%、57.89%、72.29%,差异有统计学意义（P<0.05）;特异度分别为80.65%、78.57%、84.62%、73.33%、71.74%,差异无统计学意义（P>0.05）。排除右半结肠组后,FOBT、CEA、CA19-9单独检测的阳性率在胃肠组、结直肠组、左半结肠组、直肠组的恶性肿瘤中均高于各自组的良性疾病（均P<0.05）,但它们的敏感度与特异度在各组间差异均无统计学意义（均P>0.05）。各种不同的联合检测中,结合敏感度与经济性考虑,FH+FOBT为最佳联合检测,其对胃肠癌、结直肠癌、左半结肠癌、直肠癌诊断的敏感度分别为74.86%、85.42%、92.45%、97.22%,特异度分别为64.91%、57.78%、57.14%、60.00%。结论 FH的检测结果具有肿瘤发生位置的特异度,可用于左半结肠癌,尤其是直肠癌的早期诊断,而对胃癌于右半结肠癌的价值不大。FH联合FOBT检测具有经济、简易、高敏感度等优点,为较好的结直肠癌早期诊断方法。     

Ghrelin通过调控NF-κB/NLRP3焦亡信号通路抑制前交叉韧带成纤维细胞焦亡的机制研究

目的 探究胃饥饿素（Ghrelin）调控核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3，NLRP3）信号通路在前交叉韧带成纤维细胞焦亡中的作用。方法 前交叉韧带成纤维细胞分为对照组、肿瘤坏死因子α（tumor necrotic factor-α，TNF-α）炎症模型组、TNF-α+Ghrelin干预组，通过CCK-8确定TNF-α和Ghrelin干预的剂量和时间，Transwell法检测细胞迁移能力，Western Blot检测细胞焦亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1（cysteinyl aspartate specific proteinase，Caspase-1）、白细胞介素18（Interleukin-18，IL-18）、白细胞介素1β（Interleukin-1β，IL-1β）、消皮素D（gasdermin D，GSDMD）的表达，q-PCR检测Caspase-1、IL-18、IL-1β、GSDMD mRNA表达水平，Western Blot检测磷酸化P65（p-P65）和NLRP3的表达。结果 绘制CCK-8结果曲线，确定Ghrelin的干预浓度为20 ng/mL，TNF-α干预浓度为20 ng/mL，干预时间都为48 h；与对照组相比，TNF-α炎症模型组的细胞迁移能力明显降低（P＜0.001），细胞焦亡相关蛋白表达显著增高（P＜0.05），p-P65和NLRP3的表达显著增高（P＜0.05），Ghrelin干预后细胞迁移能力明显提高（P＜0.001），细胞焦亡相关蛋白显著降低（P＜0.05），p-P65和NLRP3的表达显著降低（P＜0.05）。结论 Ghrelin能够显著抑制前交叉韧带成纤维细胞焦亡，改善其迁移能力，这可能是通过调控NF-κB/NLRP3实现的。     

核转录因子HMBOX1在结直肠癌中的表达及其与预后的关系

背景与目的 核转录因子HMBOX1在不同肿瘤中有不同的表达模式,且与胶质瘤、卵巢癌、胃癌及肝细胞癌预后密切相关。但是,目前尚未见HMBOX1在结直肠癌中的表达及与预后的关系的报道,故本研究探讨结直肠癌组织中HMBOX1的表达及与预后的关系。方法 收集2012年1月—2014年1月行结直肠癌切除术的90例患者癌组织标本及临床资料,采用免疫组化染色检测结直肠癌组织中HMBOX1表达,并根据免疫组化结果分为HMBOX1高表达组与HMBOX1低表达组,分析两组临床病理特征的与预后差异,并分析影响结直肠癌术后患者无瘤生存率和总生存率的危险因素。结果 HMBOX1高表达组54例（60.0%）,HMBOX1低表达组36例（40.0%）。HMBOX1高表达与TNM分期、N分类、M分类及分化程度明显有关（均P<0.05）,与年龄、性别和T分类无明显关系（均P>0.05）。HMBOX1高表达组1、3、5年无瘤生存率与1、3、5年总生存率均明显低于低表达组（均P<0.05）。单因素分析显示,III~IV期、N₂、M₁及HMBOX1高表达为影响无瘤生存率的危险因素,多因素分析表明,III~IV期、M₁及HMBOX1高表达是影响无瘤生存率的独立危险因素（均P<0.05）。单因素分析显示,III~IV期、M₁、低分化及HMBOX1高表达为影响总生存率的危险因素,多因素分析表明,III~IV期、低分化及HMBOX1高表达是影响总生存率的独立危险因素（均P<0.05）。结论 在结直肠癌中,HMBOX1的表达与恶性生物学指标密切相关,HMBOX1的表达可作为结直肠癌患者术后预后评估的因素,HMBOX1高表达者预后不良。     

ATP结合盒转运蛋白A5在胰腺癌中的预后意义的生物信息学分析与验证

背景与目的 ATP结合盒（ABC）转运蛋白家族的成员ABCA5在多种肿瘤中发挥着重要的作用。然而，ABCA5在胰腺癌中的研究尚不清楚。因此，本研究通过生物信息学分析及临床样本验证，探讨ABCA5在胰腺癌中的表达及与患者预后的关系，同时对ABCA5在胰腺癌中的可能作用机制进行分析。方法 使用TCGA和GEO数据库，分析ABCA5在胰腺癌组织及正常组织中的表达情况，并用Kaplan-Meier方法绘制生存曲线，Cox比例风险模型进行单因素与多因素分析。采用免疫组织化学法检测65例胰腺癌组织和癌旁组织中ABCA5的表达，并分析其与预后及胰腺癌临床病理特征的关系。使用TIMER、STRING和Gene MANIA数据库对ABCA5与免疫细胞浸润、蛋白互相作用网络（PPI）和基因-基因互作网络进行分析。利用基因富集分析（GSEA）和相关性分析对ABCA5在胰腺癌中可能参与的信号通路及其可能的作用机制进行探索。通过癌症药物敏感性基因组学（GDSC）分析ABCA5与治疗药物敏感性的关系。结果 在TCGA和GEO数据集中，ABCA5在胰腺癌组织中的表达明显低于正常组织（均P<0.05）。在TCGA和GSE62452数据集中，ABCA5低表达的患者生存时间明显缩短（均P<0.05）；ABCA5的表达是胰腺癌患者预后的独立影响因素（HR=0.458，P=0.001；HR=0.439，P=0.017）。65例临床病例分析显示，ABCA5在癌组织与癌旁组织相比处于低表达水平，且ABCA5低表达患者的预后更差（均P<0.05），单因素与多因素Cox回归分析表明ABCA5的表达是胰腺癌患者预后的独立影响因素（HR=0.327，P=0.032）。TIMER数据库结果显示，ABCA5表达与免疫浸润密切相关。PPI蛋白互作网络显示，有14个与ABCA5相关的互作蛋白；基因-基因互作关系网络图得到20个与ABCA5相关的互作基因。基因富集分析与相关性分析结果显示，ABCA5在胰腺癌中可能与细胞周期和铁死亡有关。ABCA5高表达患者对5种治疗药物的IC₅₀明显低于ABCA5低表达患者（均P<0.05）。结论 ABCA5在胰腺癌组织中低表达并与患者不良预后相关，其表达水平是胰腺癌患者预后的独立影响因素，ABCA5在胰腺癌中的作用机制可能与细胞周期、免疫调节和铁死亡有关。     

lncRNA MIR31HG和miR-101在分化型甲状腺癌组织中的表达及临床意义

背景与目的 研究表明长链非编码RNA（lncRNA）与微小RNA（miRNA）的表达异常以及两者的相互作用在恶性肿瘤的发生与发展中起了重要作用。本研究探讨分化型甲状腺癌患者癌组织lncRNA MIR31HG与miR-101的表达特点,以及两者表达与患者临床病理特征及预后的关系。方法 用qRT-PCR检测92例分化型甲状腺癌患者的癌组织及癌旁组织手术标本中lncRNA MIR31HG和miR-101表达水平,收集患者的临床资料与随访资料,分析两者表达与患者临床病理因素的关系,用Kaplan-Meier法分析患者生存率,采用Cox比例风险回归模型分析患者预后不良的影响因素。结果 分化型甲状腺癌组织中lncRNA MIR31HG相对表达量明显高于癌旁组织,而miR-101相对表达量明显低于癌旁组织（均P<0.01）。lncRNA MIR31HG和miR-101相对表达量均与患者的临床分期、分化程度、淋巴结转移明显有关（均P<0.05）。lncRNA MIR31HG高表达患者的累积生存率低于lncRNA MIR31HG低表达患者（84.7% vs. 94.6%,χ²=7.032,P=0.016）,miR-101低表达患者累积生存率低于miR-101高表达患者（78.3% vs. 95.6%,χ²=8.482,P=0.004）。临床分期Ⅲ~Ⅳ、分化程度高、癌组织lncRNA MIR31HG相对表达量>1.5和miR-101相对表达量<0.5是分化型甲状腺癌预后不良的危险因素（均P<0.05）。结论 分化型甲状腺癌组织中lncRNA MIR31HG表达上调与miR-101表达下调,是分化型甲状腺癌预后不良危险因素,两者可能成为分化型甲状腺癌预后不良标志物。     

鼠李糖乳杆菌代谢物吲哚-3-乳酸拮抗SP3/TNF-α通路促进结直肠癌细胞凋亡的机制研究

背景与目的 众所周知,肠道系统的微生物群是调节肠道健康与否的重要微环境。拥有平衡的微生物群有助于预防疾病,特别是与胃肠系统有关的癌症。鼠李糖乳杆菌（L. rhamnosus）具有抗肿瘤作用,但是具体机制尚不明确,基于此,本研究探讨L. rhamnosus对人结直肠癌（CRC）细胞凋亡的影响和潜在机制。方法 将人CRC细胞HCT-116、HT-29以及正常结肠上皮细胞NCM-460用L. rhamnosus的培养上清液（LRCS）或大肠埃希菌（E. Coli）的培养上清液（ECCS）处理后,检测细胞活力、凋亡水平和细胞周期分布。使用3 kDa超滤管将细菌培养上清液分为低分子量组分（<3 kDa）和高分子量组分（>3 kDa）,分析这两个组分对细胞凋亡的影响。非靶向LC-MS/MS以鉴定LRCS有效组分中的抗CRC细胞的代谢物,并使用5 μmol/L浓度的上述代谢物筛选影响凋亡的关键代谢物。细胞凋亡通路siRNA筛选鉴定关键代谢物的作用靶标。分子对接分析关键代谢物与靶标分子的相互作用位点。结果 LRCS呈浓度依赖性降低CRC细胞的活力,且明显促进CRC细胞的凋亡（均P<0.05）,而ECCS无上述作用（均P>0.05）。进一步分析发现,仅LRCS低分子量能产生上述作用。非靶向LC-MS/MS鉴定以及验证实验表明,吲哚-3-乳酸（I3L）影响CRC细胞凋亡的L. rhamnosus关键代谢物。通过siRNA筛选,将CRC细胞的特异性蛋白3（SP3）敲除后,I3L对CRC细胞的凋亡水平、TNF-α的表达与分泌水平均无明显影响（均P>0.05）。分子对接发现,I3L与SP3的K551、E551和E552存在相互作用。将SP3敲除CRC细胞分别转染SP3野生型过表达质粒和SP3突变型过表达质粒,I3L可以促进前者的细胞凋亡水平和TNF-α分泌水平（均P<0.05）,但对后者无此作用（均P>0.05）。结论 L. rhamnosus能促进CRC细胞的凋亡,作用机制可能与其代谢物I3L通过结合SP3的K551、E551和E552位点,增加TNF-α的转录和分泌有关。     

磷酸丝氨酸磷酸化酶在肝细胞癌中的表达及其促进增殖和转移的作用机制

背景与目的 磷酸丝氨酸磷酸化酶（PSPH）在多种肿瘤中表达上调,发挥促进肿瘤生长和转移的作用,但其在肝细胞癌（HCC）中的作用尚未完全清楚。因此,本研究旨在探讨PSPH在HCC中的表达与作用及其作用机制。方法 分别用Western blot和qRT-PCR检测PSPH在HCC组织和癌旁组织中以及不同HCC细胞株（HepG2、Huh-7、HCCLM3）与正常肝细胞株（HL-7702）中的表达。HepG2细胞过表达或敲低PSPH后,分别用CCK-8、EdU染色、Transwell侵袭实验及Western blot法检测PSPH对HepG2细胞增殖、侵袭以及细胞增殖标记蛋白CCND1和Ki-67表达的变化;同时,用Western blot法检测自噬相关蛋白LC3-II/LC3-I、p62以及侵袭相关蛋白MMP-9的表达,用免疫荧光法检测p65蛋白入核情况。结果 与癌旁组织比较,HCC组织中PSPH蛋白的表达明显上调;与正常肝细胞比较,各HCC细胞株中的PSPH基因的表达明显升高（均P<0.05）。过表达PSPH后,HepG2细胞的增殖和侵袭能力明显增强,CCND1和Ki-67的表达明显上调,LC3-II/LC3-I表达上调而p62表达下调,p65蛋白核转位明显增加,MMP-9表达明显上调（均P<0.05）;敲低PSPH后,HepG2细胞的上述指标均呈相反变化（均P<0.05）。NF-κB通路抑制剂能抑制过表达PSPH对p65入核的促进作用和对MMP-9的上调作用,而NF-κB通路激动剂能逆转敲低shikonin对p65入核的抑制作用和对MMP-9的下调作用（均P<0.05）。结论 TNF-α在HCC中表达上调,PSPH高表达能增强HCC细胞增殖与转移能力,其作用机制可能涉及对自噬的抑制作用以及对NF-κB/MMP-9信号通路的活化作用。     

TMEM117调控TGF-β信号通路促进胃癌的作用及机制研究

背景与目的 跨膜蛋白（TMEM）是一种跨越整个脂质双分子层的蛋白质。TMEM117是TMEM家族中很重要的一员，以往研究发现TMEM117主要在调节血糖、预防心肌肥厚、参与内质网应激等方面发挥重要作用，然而TMEM117在胃癌（GC）中的作用机制尚不清楚。因此，本研究探索TMEM117在GC中的表达及其生物学功能与作用机制。方法 通过生物信息学方法分析TMEM117在泛癌中的表达情况，用qRT-PCR与Western blot检测人正常胃上皮细胞与不同GC细胞系中TMEM117 mRNA与蛋白水平的表达。用qRT-PCR检测TMEM117在GC组织与对应癌旁组织中mRNA的表达。分别在不同GC细胞系中对TMEM117进行敲低或者过表达，然后通过CCK-8实验、EdU实验、Transwell实验检测TMEM117对GC细胞功能的影响，通过Western blot检测相关通路蛋白水平以及加入相关抑制剂分析TMEM117对GC细胞产生影响的机制。最后，观察敲低TMEM117对GC细胞在裸鼠体内生长的影响。结果 数据库分析结果显示，TMEM117在多种癌症组织中表达升高，TMEM117在GC组织中的表达明显高于正常组织（P<0.05），TMEM117高表达GC患者的预后较差（P<0.05）。qRT-PCR与Western blot结果显示，GC细胞中TMEM117的mRNA与蛋白表达均明显高于正常胃上皮细胞，GC组织中的TMEM117的mRNA表达明显高于癌旁组织（均P<0.05）。细胞功能实验结果显示，敲低TMEM117的GC细胞的增殖、侵袭和迁移能力明显降低，而过表达TMEM117的GC细胞则呈反向变化（均P<0.05）；敲低TMEM117的GC细胞中TGF-β的表达明显下调，而过表达TMEM117的GC细胞中TGF-β的表达明显上调；使用TGF-β抑制剂LY2157299可以部分逆转过表达TMEM117对GC细胞恶性表型的促进作用（均P<0.05）。裸鼠体内成瘤实验显示，敲低TMEM117的GC细胞在裸鼠体内的生长被明显抑制。结论 TMEM117在GC中高表达且与患者的不良预后密切相关，其促进GC进展的作用机制可能与活化TGF-β信号通路促进GC细胞的增殖及侵袭与迁移能力有关，TMEM117有可能是治疗GC的有效靶点。     

不同HER-2表达水平乳腺癌患者新辅助化疗疗效与生存分析

背景与目的 新辅助化疗是早期高危或局部晚期乳腺癌降期保乳和提高整体治愈率重要的治疗策略,新辅助化疗人群的选择和方案的制订依赖于分子分型。然而目前尚缺乏不同人表皮生长因子受体2（HER-2）表达水平的乳腺癌新辅助化疗疗效及生存预后差异的研究。本研究通过比较不同HER-2表达水平的乳腺癌患者新辅助化疗疗效及生存预后的差异,旨在明确其新辅助化疗疗效及生存预后的影响因素,为临床新辅助化疗人群选择和方案制订提供参考。方法 回顾性分析2018年1月—2022年5月于中南大学湘雅医院乳腺外科接受新辅助化疗且行根治性手术的乳腺癌患者资料。比较不同HER-2表达水平（0表达、低表达、过表达）患者临床病理特征的差异,用Logistic回归分析筛选病理完全缓解（pCR）的独立影响因素,用Kaplan-Meier方法估计患者的生存曲线,用Log-rank检验比较生存率的差异,通过Cox回归分析筛选预后的独立影响因素。结果 共纳入601例患者,其中HER-2 0表达231例（38.4%）、HER-2低表达137例（22.8%）、HER-2过表达233例（38.8%）。与HER-2 0表达患者和HER-2过表达患者比较,HER-2低表达患者具有更高的BMI,合并肿瘤家族史更少见,组织学分级更低,激素受体（HR）阳性比例更高;HER-2过表达患者的肿瘤纤维化程度明显低于HER-2 0表达和HER-2低表达患者（均P<0.05）。HER-2低表达患者中,HR阴性亚组患者较HR阳性亚组患者肿块更大,组织学分级更高,Ki-67水平更高（均P<0.05）。全组患者中,HER-2表达水平、pCR、临床淋巴结分期（cN）是患者无病生存（DFS）的独立影响因素（均P<0.05）。HER-2过表达患者的新辅助化疗pCR率及DFS率明显高于HER-2低表达和HER-2 0表达患者（均P<0.05）,但HER-2低表达和HER-2 0表达患者的新辅助化疗pCR率及DFS率无明显差异（均P>0.05）。肿瘤纤维化程度和雌激素受体（ER）状态是HER-2 0表达乳腺癌pCR的独立影响因素,间质肿瘤浸润淋巴细胞（sTILs）水平是HER-2低表达乳腺癌pCR的独立影响因素,肿瘤纤维化程度和ER状态是HER-2过表达乳腺癌pCR的独立影响因素（均P<0.05）。结论 新辅助化疗对HER-2过表达乳腺癌患者的疗效优于HER-2 0表达和HER-2低表达乳腺癌患者。ER状态和纤维化程度、sTILs水平分别是HER-2 0表达与低表达患者pCR的独立影响因素,而ER状态与纤维化程度是HER-2过表达患者pCR的独立影响因素。     

富亮氨酸α2糖蛋白1在乳腺癌中的表达及其功能的生物信息学分析

背景与目的 富亮氨酸α2糖蛋白1（LRG1）是富亮氨酸重复序列（LRR）家族蛋白成员,近些年研究显示LRG1在恶性肿瘤的发生、上皮间质转化、侵袭转移、异常血管生成、预后预测中发挥重要作用。然而LRG1在乳腺癌中的表达、预后、功能和潜在机制方面尚待阐明。本研究旨在通过生物信息学方法系统分析LRG1在乳腺癌中的表达及意义。方法 使用TCGA、Breast Cancer Gene-Expression Miner、UALCAN、Kaplan-Meier Plotter、GeneMANIA、DAVID等多个数据库对LRG1在乳腺癌中的表达与临床病理特征关系、预后价值、相互蛋白作用网络及功能富集进行综合分析。结果 TCGA数据库分析显示,LRG1 mRNA在乳腺浸润癌中的表达量明显高于正常组织（23.461 vs. 8.357,P<0.001）。在不同分子亚型中,luminal型乳腺癌中LRG1 mRNA表达量为37.462（9.930~74.197）,高于HER-2阳性型乳腺癌和三阴性乳腺癌（TNBC）（均P<0.01）;I、II、III期乳腺癌中LRG1 mRNA的表达水平均高于正常乳腺组织（均P<0.05）。Breast Cancer Gene-Expression Miner数据库分析显示,雌激素受体（ER）和（或）孕激素受体（PR）阳性乳腺癌中LRG1 mRNA的表达水平高于ER和（或）PR阴性乳腺癌,HER-2阴性乳腺癌中LRG1 mRNA表达高于HER-2阳性型乳腺癌（均P<0.05）;淋巴结阳性乳腺癌LRG1 mRNA表达量高于淋巴结阴性乳腺癌（P<0.000 1）。用GEPIA在线平台对TCGA数据库中乳腺癌数据进行生存分析发现,LRG1高表达患者总生存率（OS）及无复发生存率（RFS）均低于低表达患者,但差异无统计学意义（HR=0.81,P=0.200;HR=0.70,P=0.064）;用Kaplan-Meier plotter对TCGA中乳腺癌数据进行生存分析发现,LRG1的表达与luminal A型、luminal B型、HER-2阳性型乳腺癌的OS无明显关系（均P>0.05）,但在basal-like亚型中,LRG1低表达患者OS明显优于LRG1高表达患者（HR=3.12,95% CI=1.54~6.29,P<0.001）。使用GeneMANIA数据库进行分析,共筛选出20个与LRG1相互作用蛋白质,GO富集分析显示,LRG1及与其共表达相关的20个蛋白富集于细胞胞外区,外泌体,血液微粒,受体复合物等结构中,参与细胞的血管生成调控、上皮间充质的转化、缺氧反应等相关生物学过程。结论 LRG1在乳腺癌组织中表达上调,并可预测部分不良乳腺癌亚型的预后,LRG1可能为乳腺癌治疗提供新的靶点。     

意外胆囊癌二次术后早期复发的危险因素及辅助化疗疗效分析

背景与目的 术后早期复发是胆囊癌预后不良的重要危险因素，越来越多的证据表明辅助化疗可以改善患者的预后。但目前有关意外胆囊癌（IGBC）二次术后早期复发及辅助化疗对患者预后的影响尚未见报道。因此，本文探讨IGBC二次术后早期复发的危险因素及分析辅助化疗对于早期复发和非早期复发患者的疗效，以为临床提供决策支持。方法 回顾性收集2011年1月—2021年12月于西安交通大学第一附属医院肝胆外科因IGBC行意向性根治术的170例患者的临床病理资料，分析患者术后早期复发的影响因素（早期复发定义为二次意向根治术后12个月内），以及患者术后无复发生存（RFS）与总体生存（OS）的影响因素。结果 170例行IGBC意向性根治术后患者，随访期间复发者73例（42.94%）、早期复发者41例（24.12%）。IGBC术后早期复发患者中位OS时间明显短于非早期复发患者（χ²=192.910，P<0.001）。病理分化程度（OR=20.758，95% CI=5.557~80.239）、CA19-9水平（OR=7.920，95% CI=1.557~39.771）及病灶残留（OR=8.050，95% CI=3.062~21.160）是IGBC术后早期复发的独立危险因素（均P<0.05）。病理分化程度（HR=6.160，95% CI=2.877~13.193）、CA19-9水平（HR=2.538，95% CI=1.297~4.965）、手术切除范围（HR=2.111，95% CI=1.154~3.860）、病灶残留（HR=2.571，95% CI=1.547~4.273）是IGBC术后RFS时间的独立危险因素（均P<0.05）。病理分化程度（HR=3.225，95% CI=1.461~7.121）、早期复发（HR=29.558，95% CI=14.250~61.311）、病灶残留（HR=2.416，95% CI=1.361~4.287）是IGBC术后OS时间的独立危险因素（均P<0.05），辅助化疗是术后OS时间的独立保护性因素（HR=0.260，95% CI=0.123~0.551，P<0.05）。按有无病灶残留及是否早期复发分层分析的结果显示，辅助化疗可延长病灶残留患者术后RFS时间及OS时间，亦可延长早期复发患者术后OS时间（均P<0.05）。结论 病灶残留是IGBC二次术后早期复发及预后的独立危险因素，术后辅助化疗可以有效改善病灶残留及早期复发患者的预后。     

长链非编码RNA PCAT19对胰腺癌细胞增殖与侵袭的影响及其作用机制

背景与目的 长链非编码RNA PCAT19（lncRNA PCAT19，简称PCAT19）在多种肿瘤中表达上调，且与恶性进展和不良预后密切相关。然而，PCAT19在胰腺癌中的表达、功能及作用机制尚无研究报道。笔者前期通过starBase数据库预测PCAT19可与miR-195-5p互补结合，因此，本研究探讨PCAT19在胰腺癌细胞中的表达与作用，及其与靶基因和相应miRNA的调控关系。方法 用qRT-PCR检测人胰腺导管上皮细胞系（HPNE）和胰腺癌细胞系（PANC-1、SW1990、HS766T、CFPAC-1）中PCAT19及miR-195-5p的表达。用双萤光素酶报告基因分析PCAT19与miR-195-5p的靶向结合作用。将PANC-1细胞分别转染PCAT19沉默序列si-PCAT19（si-PCAT19组）、阴性对照序列（si-NC组）、miR-195-5p抑制序列+si-PCAT19（共转染组）后，用MTT测定细胞增殖能力，Transwell测定细胞侵袭能力，Western blot检测Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白的表达。结果 各胰腺癌细胞系中PCAT19表达水平均明显高于HPNE细胞，而miR-195-5p的表达水平均明显低于HPNE细胞（均P<0.05）。双萤光素酶实验显示miR-195-5p是PCAT19的靶miRNA。与si-NC组PANC-1细胞比较，si-PCAT19组PANC-1中miR-195-5p表达水平明显升高，细胞增殖能力与侵袭能力明显降低，β-catenin、c-Myc和cyclin D1表达水平明显下调（均P<0.05），而共转染组以上各项指标与si-NC组差异均无统计学意义（均P>0.05）。结论 PCAT19在胰腺癌细胞中表达升高，其可促进胰腺癌细胞增殖和侵袭，机制可能与调控miR-195-5p并影响Wnt/β-Catenin信号通路有关。     

甲状腺乳头状癌细胞中长链非编码RNA FoxP4-AS1的表达及其生物学功能

背景与目的 笔者前期研究发现,长链非编码RNA FoxP4-AS1（lncRNA FoxP4-AS1）在甲状腺乳头状癌（PTC）组织中异常表达,其低表达是PTC区域淋巴结转移的独立危险因素,但其功能及作用机制尚不清楚。因此,本研究探讨lncRNA FoxP4-AS1在PTC细胞中的表达,初步分析其对PTC细胞生物学行为的影响。方法 用qRT-PCR检测PTC细胞系（TPC-1、K1细胞）和正常甲状腺滤泡上皮细胞（Nthy-ori3-1细胞）中lncRNA FoxP4-AS1的表达;将TPC-1、K1细胞分别转染FoxP4-AS1过表达慢病毒载体和空载病毒载体（阴性对照）后,并分别用CCK-8实验、克隆形成实验、EdU、Transwell实验、流式细胞术分析细胞生物学功能的变化;通过GEPIA数据库和LncTar网站预测FoxP4-AS1的靶基因,并用Western blot进行验证。用以上转染后的细胞构建小鼠皮下移植瘤模型,观察移植瘤的生长情况,免疫组化检测瘤组织Ki-67的表达。通过KEGG数据库初步分析FoxP4-AS1可能影响的信号通路。结果 qRT-PCR结果显示,与正常甲状腺滤泡上皮细胞比较,lncRNA FoxP4-AS1在两种PTC细胞中的表达水平均明显降低（均P<0.05）。细胞功能实验显示,转染FoxP4-AS1过表达慢病毒载体的TPC-1、K1细胞增殖活力明显减弱、侵袭和迁移能力均较阴性对照组细胞明显降低,且细胞周期阻滞在G₀/G₁期（均P<0.01）。GEPIA数据库和LncTar网站预测FoxP4-AS1与CDK4存在潜在的相互作用靶点,Western blot结果显示,转染FoxP4-AS1过表达慢病毒载体两种细胞的CDK4/cyclinD1表达水平较各自阴性对照组细胞明显降低（均P<0.05）。皮下移植瘤实验结果显示,转染FoxP4-AS1过表达慢病毒载体的PTC细胞较转染空载病毒载体的PTC细胞在小鼠体内生长慢,形成的瘤体小,且瘤组织中Ki-67表达减少。KEGG通路富集分析显示,FoxP4-AS1低表达主要富集于PI3K-Akt-mTOR通路、细胞周期、细胞凋亡、免疫调节相互作用,FoxP4-AS1高表达主要富集于DNA甲基化、氧化应激通路等。结论 lncRNA FoxP4-AS1在PTC细胞中表达下调,且与PTC细胞的恶性生物学行为密切相关,FoxP4-AS1可能通过抑制CDK4/cyclinD1表达抑制PTC细胞增殖,作为保护性因素发挥作用。