子宫肌瘤组织差异蛋白表达谱的研究

由于从基因水平研究机体并不能完全阐明机体动态的变化，蛋白质组学应运而生。蛋白质组是指基因组所表达的全套蛋白质，其实质是从蛋白水平研究认识生命活动和疾病发生的分子水平机制。双向凝胶电泳(two-dimensional electmphoresis，2-DE)作为蛋白质组学研究的核心技术之一，能从复杂的细胞内混合物中将成千上万个蛋白分离显示出来。我们建立并优化用于子宫肌瘤的2-DE技术，     

蛋白质组学在心脏疾病研究中的应用

人类基因组研究标志着生命科学进入一个从总体、综合角度理解生命活动的分子基础新阶段。基因的功能主要通过其编码的蛋白质来实现，但一个基因碱基序列并不代表可以识别这个基因所编码的蛋白质，因为一个基因可以产生出多个蛋白质，如人的一个基因大约可编码10个蛋白质；而且DNA序列信息不能说明蛋白质的翻译后修饰，一个蛋白质可能有400多个化学修饰来完成其功能、定位和活性，     

基于生物信息学筛选的CEBPA在子痫前期胎盘组织的表达及对滋养细胞上皮间质转化的影响

目的:鉴定与子痫前期(PE)相关的关键基因及其主要的富集通路。验证差异表达基因(DEG)CCAAT增强子结合蛋白α(CEBPA)在PE胎盘组织的表达情况及对滋养细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法:(1)筛选PE关键基因：在GEO数据库中下载GSE10588、GSE25906、GSE35574 PE胎盘转录组微阵列数据集矩阵数据,分别进行DEG筛选;同时在数据库中下载GSE75010矩阵数据对每个基因的表达量进行单因素Logistics回归分析,以鉴定PE胎盘中的关键基因;利用STRING数据库构建关键基因的蛋白质-蛋白质互相作用网络(PPI),并进行京都基因与基因组百科全书数据库(KEGG)富集分析。(2)验证：收集14例正常妊娠孕妇(对照组)和14例PE孕妇(PE组)的胎盘组织。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测比较CEBPA在两组中的mRNA表达水平,免疫荧光检测CEBPA在胎盘组织的表达以及定位。在HTR8/SVneo细胞系中敲降CEBPA后(细胞转染分为：siNC组、siCEBPA组)检测EMT相关蛋白表达水平。结果:(1)对数据库的微阵列数据进行分析及Logisti...     

卵巢恶性肿瘤的蛋白质组学研究现状与展望

1995年,Wasinger等[1]发表在Electrophoresis的文章中首次使用了由澳大利亚学者Wilkins和Williams于1994年提出的蛋白质组（proteome）的概念,这标志着蛋白质组学（proteomics）的诞生.这一全新学科的诞生有着深刻的时代和科学发展的背景.随着人类基因组计划的顺利完成,生命科学研究已进入了后基因组时代.由于基因只是遗传物质的载体,蛋白质才是生理功能的执行者;基因转录水平的研究只能在一定程度上反映基因表达产物的变化,而真正发挥功能的蛋白质要经过转录后加工、翻译调控以及翻译后加工等许多步骤和调控才能形成;因此,对基因组的研究有时并不能完全反映机体功能的变化,为了减少这种客观存在的相对误差,蛋白质组学作为快捷、有效的蛋白质分析技术应运而生.     

利用生物信息学技术探索人卵巢癌细胞株A2780对顺铂耐药基因的研究

目的:利用生物信息学技术探索人卵巢癌细胞株A2780对顺铂耐药基因的可能机制，为临床化疗提供有效的依据。方法:(1)通过GEO在线GEO2R工具从两组数据库(GSE15372和GSE33482)中，分别比较对顺铂耐药的A2780与对顺铂敏感的A2780中的基因表达差异，并筛选出高表达基因和低表达基因；使用维恩图确定两组数据库中耐药的高表达共同差异基因和低表达的共同差异基因。(2)利用GO分析和KEGG通路富集分析耐药基因的生物学功能。(3)利用蛋白质-蛋白质互作(PPI)网络及Cytoscape软件筛选出A2780对顺铂耐药核心靶基因。(4)利用Kaplan-Meier Plotter工具对Hub基因进行总生存期分析。结果:(1)两组数据集的高表达共同耐药基因共37个，低表达共同耐药基因共2个。(2)GO分析结果显示：生物学过程(BP)分析结果表明，耐药基因主要参与着细胞间信号传导、趋化作用等；细胞组成(CC)分析表明，耐药基因主要位于细胞外区域、细胞间隙、细胞表面；分子功能(MF)分析表明，耐药基因参与着趋化因子相结合等作用。KEGG通路富集分析显示，耐药基因主要在细胞因子与细胞因子...     

人类白细胞抗原F在妊娠期肝内胆汁淤积症患者胎盘中的表达及意义

目的:研究人类白细胞抗原F(HLA-F)在妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)患者胎盘组织中的表达,并从免疫学角度探讨其与ICP发病的关系。方法:采用免疫组织化学技术对妊娠晚期(ICP组40例和正常对照组40例)胎盘组织中表达的HLA-F蛋白进行定位;再通过PCR及蛋白质免疫印迹技术,研究ICP患者(轻度20例,重度20例)胎盘组织中HLA-F在核酸分子(mRNA)及蛋白中的表达情况。结果:1妊娠晚期胎盘组织中仅蜕膜板绒毛外滋养细胞(EVCT)膜上有HLA-F蛋白表达。2正常对照组和ICP组间胎盘组织中HLA-F mRNA的表达差异无统计学意义(P0.05);正常对照组和轻度ICP、重度ICP3组间胎盘组织中HLA-F mRNA的表达差异均无统计学意义(P0.05);ICP组胎盘组织中HLA-F蛋白的表达水平低于正常对照组(0.6092±0.3370vs1.3451±0.5540),差异有统计学意义(P0.05);重度ICP胎盘组织中HLA-F蛋白的表达水平显著低于正常对照组(0.5328±0.2762vs 1.3451±0.5540)差异有统计学意义(P0.05);而轻度ICP和正常对照组间胎盘组织中HAL-F蛋白的表达量差异无统计学意义(P0.05)。3ICP非地塞米松组和ICP地塞米松组间胎盘组织中HLA-F mRNA及蛋白的表达差异均无统计学意义(P0.05)。结论:HLA-F蛋白表达于妊娠晚期胎盘组织蜕膜板EVCT细胞膜上;ICP患者胎盘组织中HLA-F蛋白表达水平降低可能是导致ICP患者妊娠免疫耐受平衡紊乱的重要机制之一。     

长链非编码RNA与妇科肿瘤研究进展

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)是一类长度超过200个碱基的RNA分子。由于不参与编码形成蛋白质分子,早期观点普遍认为lnc RNA分子是基因组转录过程中形成的副产物,被定义为不具备生物学功能的转录组"背景噪音"。然而,近年来越来越多的研究发现,在哺乳动物基因组中,lnc RNA分子首先由数千个基因位点转录形成,随后,经过加工的成熟lnc RNA分子在动物胚胎发育、基因表达调节以及疾病发生和发展中起关键性调控作用。目前已有研究证实,在多种人类肿瘤疾病中,部分特异性lnc RNA分子的表达水平在疾病进展的各时期中发生显著了变化。在妇科恶性肿瘤中lnc RNA分子表达变化以及lnc RNA通过上下游靶向分子对疾病发生和发展的影响也有了许多报道。综述这一领域最新的研究进展。     

蛋白质组学技术与妊娠相关疾病的研究进展

蛋白质组学(proteomics)是从整体水平研究细胞内动态变化的蛋白质组成成分、表达水平与修饰状态,了解蛋白质之间的相互作用与联系,解释蛋白质功能与细胞生命活动的规律.蛋白质组学技术在临床医学研究领域主要侧重于疾病的发生机制、预防、早期诊断和治疗、寻找疾病的生物标志物以及治疗靶点的研究.就其在妊娠相关疾病如妊娠合并感染、早产、子痫前期、妊娠滋养细胞疾病的研究进展作综述.     

蛋白质组学在妇科肿瘤中应用的研究进展

随着人类基因组测序工作的完成,人们认识到基因仅仅是遗传信息的载体。研究发现,基因数量远少于原来的设想,生命的特征并不是完全由基因决定的,人类基因只有3-4万个,而蛋白质却有25万种,原先的一种基因只负责合成一种蛋白质的观念可能是错误的,一种基因可能要负责合成几种蛋白质,所以将生命活动的执行者——蛋白质提到了前所未有的高度,因此而诞生的蛋白质组学(proteomics)成了生命科学研究的一个新前沿。     

Expression of MAD2 and BUB1 mRNA and Protein in Human Spontaneous Abortion Embryos with Chromosomal Abnormality

目的:探讨MAD2、BUB1mRNA及蛋白表达水平在人类胚胎染色体分离中的作用.方法:应用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术检测102例自然流产胚胎绒毛染色体数目,将自然流产胚胎分为染色体数目正常组和异常组,分别用RT-PCR和Western blotting检测胚胎绒毛组织中MAD2、BUB1mRNA和蛋白质相对表达水平.结果:①102例自然流产胚胎中检出染色体数目异常50例(49.02％),其中多倍体9例、非整倍体36例、嵌合型5例.②异常组胚胎绒毛中MAD2mRNA及蛋白相对表达水平分别为0.89±0.19和0.45±0.06,均明显高于正常组(0.80±0.21和0.42±0.08,P＜0.05).③异常组胚胎绒毛中BUB1mRNA及蛋白相对表达水平分别为1.04±0.23和0.35±0.05,与正常组(0.98±0.25和0.33±0.07)比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:胚胎染色体数目异常是导致自然流产的重要原因；MAD2在胚胎染色体数目异常组中高表达,延长了纺锤体组装检查点(SAC)的有丝分裂阻滞持续时间,在保证染色体正确分离、维持基因组稳定方面起重要作用.BUB1是SAC的上游基因,在延长有丝分裂阻滞中不起主要作用,但其正常表达对于SAC发挥功能必不可少.     

MAD2、BUB1基因在自然流产染色体数目异常胚胎中的表达

目的:探讨MAD2、BUB1 mRNA及蛋白表达水平在人类胚胎染色体分离中的作用。方法:应用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术检测102例自然流产胚胎绒毛染色体数目,将自然流产胚胎分为染色体数目正常组和异常组,分别用RT-PCR和Western blotting检测胚胎绒毛组织中MAD2、BUB1 mRNA和蛋白质相对表达水平。结果:①102例自然流产胚胎中检出染色体数目异常50例(49.02%),其中多倍体9例、非整倍体36例、嵌合型5例。②异常组胚胎绒毛中MAD2 mRNA及蛋白相对表达水平分别为0.89±0.19和0.45±0.06,均明显高于正常组(0.80±0.21和0.42±0.08,P<0.05)。③异常组胚胎绒毛中BUB1 mRNA及蛋白相对表达水平分别为1.04±0.23和0.35±0.05,与正常组(0.98±0.25和0.33±0.07)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:胚胎染色体数目异常是导致自然流产的重要原因;MAD2在胚胎染色体数目异常组中高表达,延长了纺锤体组装检查点(SAC)的有丝分裂阻滞持续时间,在保证染色体正确分离、维持基因组稳定方面起重要作用。BUB1是SAC的上游基因,在延长有丝分裂阻滞中不起主要作用,但其正常表达对于SAC发挥功能必不可少。     

环氧合酶-2及其与妇科肿瘤关系的研究进展

环氧合酶(COX)是前列腺素(PGs)生物合成的限速酶,具有环氧合酶和过氧化物合成酶双重酶的功能,存在两种同工酶,即COX-1和COX-2。COX-1是结构性表达基因,参与“看家”活动,其mRNA和蛋白质在人体组织内表达水平相对恒定,它催化合成的前列腺素参与机体正常生理过程和保护功能,如保持胃粘膜完整和肾血流的调节等。     

ERβ基因敲除对小鼠阴茎海绵体eNOS-NO通路基因表达的影响

目的:探讨雌激素受体β(ERβ)基因敲除对小鼠阴茎海绵体eNOS-NO通路基因表达的影响。方法:选取ERβ基因敲除(ERβKO)雄性小鼠和相应野生型雄性小鼠各12只,随机分为4组:正常对照组(A组)、ERβKO组(B组)、野生型+肿瘤坏死因子-α(TNF-α)处理组(C组)和ERβKO+TNF-α处理组(D组)。C组和D组每日给予TNF-α6μg/kg腹腔注射,A组及B组则以等量生理盐水替代,连续14 d。采用RT-PCR技术检测小鼠阴茎组织通路相关分子:eNOS、小窝蛋白-1(caveolin-1)、钙调蛋白(Cam)mRNA表达情况;Western blotting检测小鼠阴茎组织eNOS-NO通路相关分子蛋白表达水平的变化情况。结果:RT-PCR结果与Western blotting结果相符:与A组相比,B组eNOS、Cam表达减少,小窝蛋白-1表达上调(P<0.05);TNF-α给药后,与C组比较,D组的eNOS、Cam表达减少,小窝蛋白-1表达上调(P<0.05)。结论:ERβ基因敲除后,尤其在内皮损伤因素TNF-α作用下,eNOS-NO通路表达下调,提示ERβ对阴茎海绵窦内皮具有保护效应。     

Effects of ERβ Knockout on the Expression of eNOS-NO Pathway in Mouse Corpus Cavernosum Penis

目的:探讨雌激素受体β(ERβ)基因敲除对小鼠阴茎海绵体eNOS-NO通路基因表达的影响.方法:选取ERβ基因敲除(ERβKO)雄性小鼠和相应野生型雄性小鼠各12只,随机分为4组:正常对照组(A组)、ERβKO组(B组)、野生型+肿瘤坏死因子-α(TNF-α)处理组(C组)和 ERβKO+TNF-α处理组(D组).C组和D组每日给予TNF-α6μg/kg腹腔注射,A组及B组则以等量生理盐水替代,连续14d.采用RT-PCR技术检测小鼠阴茎组织通路相关分子:eNOS、小窝蛋白-1(caveolin-1)、钙调蛋白(Cam)mRNA表达情况;Western blotting检测小鼠阴茎组织eNOS-NO通路相关分子蛋白表达水平的变化情况.结果:RT-PCR结果与Western blotting 结果相符:与A组相比,B组eNOS、Cam表达减少,小窝蛋白-1表达上调(P＜0.05); TNF-α给药后,与C组比较,D组的eNOS、Cam表达减少,小窝蛋白-1表达上调(P＜0.05).结论:ERβ基因敲除后,尤其在内皮损伤因素TNF-α作用下,eNOS-NO通路表达下调,提示ERβ对阴茎海绵窦内皮具有保护效应.     

HOXA10基因在子宫内膜异位症不孕患者内膜组织中的表达及意义

目的:探讨HOXA10基因在子宫内膜异位症(EMs)不孕中的作用及作用机制。方法:以行腹腔镜手术并经病理确诊为EMs合并不孕症的患者为研究对象(18例,A组),以同期行腹腔镜手术的输卵管性不孕患者(18例,B组)、正常生育组(15例,C组)为对照。分别应用荧光定量PCR、免疫组织化学和Western blotting等方法从mRNA及蛋白质水平检测HOXA10基因在EMs不孕症患者在位、异位子宫内膜以及对照组在位子宫内膜的表达。结果:HOXA10 mRNA及蛋白表达水平在C组的内膜较高;B组稍低于C组,但两者相比差异无统计学意义(P>0.05);A组的在位及异位内膜表达水平较C组明显降低(P<0.01);但A组的在位内膜与异位内膜基因和蛋白的表达水平均无统计学差异(P>0.05)。结论:HOXA10基因在EMs不孕患者在位子宫内膜中的表达显著降低,可能是EMs不孕患者子宫内膜容受性降低,进而引起不孕的重要因素之一。     

妊娠期糖尿病中miR-372-3p参与调控胰岛素抵抗的关系研究

目的在妊娠期糖尿病(GDM)中探讨miR-372-3p表达及其与胰岛素抵抗(IR)的相互关系并初步探究其分子机制;方法选取2018年1月至2019年1月于兰州大学第二附属医院正规产检并住院分娩的56例GDM孕妇为GDM组,选取同期在本院分娩的60例正常孕妇作为正常对照组(NC组)。观察对比两组孕妇一般临床资料(如年龄、产前BMI、OGTT孕周等)和代谢相关生化指标(总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)空腹血糖值(FPG)、餐后2 h血糖(2 h PG)、空腹胰岛素(FINS)等),并计算胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR); RT-PCR检测两组受试者胎盘组织中的miR-372-3p的表达水平;Pearson相关系数分析GDM组中miR-372-3p表达量与代谢相关指标的相关性;生物信息学选取GLUT-4作为miR-372-3p的目标靶基因,并采用双荧光素酶基因报告实验进行验证两者的靶向关系;在HTR-8细胞中转染miR-372-3p mimics或miR-372-3p inhibitor进行上调或抑制miR-372-3p表达,RT-PCR检测转染效率后,Western blot实验检测miR-372-3p对GLUT-4蛋白表达的影响。结果与NC组相比,GDM组孕产妇仅产前BMI显著增加(P 0.01),其余临床资料差异均无统计学意义(P0.05);代谢相关指标相比,GDM组的TC、TG、FPG、2 h PG、FINS及HOMA-IR均较NC组显著增加(P 0.01),而HOMA-β显著低于NC组(P 0.01),其余指标差异均无统计学意义(P0.05);GDM组的胎盘miR-372-3p表达较NC组显著升高(P 0.05)且其表达水平与FPG、FINS、HOMA-IR均呈正相关关系(P 0.05);双荧光素酶基因报告实验证实miR-372-3p可靶向调控GLUT-4表达且在HTR-8细胞中miR-372-3p可负向调控GLU-4蛋白表达;结论在GDM中miR-372-3p可能通过负向调控GLUT-4表达参与胰岛素抵抗。     

EZH2组蛋白甲基转移酶在肿瘤发生发展中的作用

PcG (Polycomb group)蛋白家族是一组在胚胎发育中起作用的基因调控因子,根据其功能不同分为两种蛋白质复合物,即PRC1和PRC2.PRC2是一个作用于组蛋白H3赖氨酸位点K27的高度保守的组蛋白甲基转移酶,EZH2是构成PRC2蛋白复合物的一个催化亚基.大部分肿瘤研究表明,EZH2过表达于多种癌组织,如...     

米非司酮对早孕绒毛组织Notch/Snail/E-钙黏素表达的影响

目的:初步探讨米非司酮抗早孕的作用机制和Notch信号转导通路的关系。方法:采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应技术(TR-qPCR)和免疫组织化学技术检测正常早孕绒毛组织中及不同剂量米非司酮作用后绒毛组织中Notch信号转导通路相关分子Notch-1、Snail、E-钙黏素(E-cadherin)在mRNA水平及蛋白水平的表达情况。结果:米非司酮对早孕绒毛组织的作用以200mg组(D组)最为显著,Notch-1、Snail基因以及E-钙黏素蛋白表达较对照组(A组)、100mg组(B组)、150mg组(C组)作用明显,差异有统计学意义(P<0.05);B组与A组比较差异无统计学意义(P>0.05)。C组Notch-1mRNA、Snail蛋白与A组比较差异有统计学意义(P<0.05),其余各基因及蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:米非司酮抗早孕机制可能和Notch信号转导通路有关。     

卡铂诱导的卵巢上皮性癌耐药细胞中差异表达蛋白质分析

卵巢上皮性癌(卵巢癌)是一种常见的妇科肿瘤,中晚期患者主要采用化疗,但疗效并不理想,总的10年生存率仍徘徊在4%～20%,其主要原因之一为卵巢癌患者对化疗产生耐药性[1].目前,对卵巢癌耐药机制的研究大都在基因水平,但DNA和RNA水平的变化并不能完全反映蛋白质水平的变化,而且某些蛋白质被合成后需经"翻译后修饰"才呈现功能,所以从生物功能的直接执行者--蛋白质水平人手寻找差异分子才更加准确、直接、真实、可靠.     

MBD2过表达对子宫肌瘤生物学功能的影响及其基因启动子区甲基化分析

目的前期研究发现子宫肌瘤组织中存在甲基化CpG结合蛋白2(methyl-CpG binding domain protein 2, MBD2)基因和蛋白的差异性表达下调,本研究探讨MBD2过表达对子宫肌瘤生物学功能的影响,并分析子宫肌瘤组织中MBD2基因启动子区甲基化状态。方法采用慢病毒包装MBD2真核过表达载体,通过转染至293T细胞,检测293T细胞的增殖、凋亡及周期情况;利用飞行时间质谱技术检测子宫肌瘤(病例组)及瘤旁肌层组织(对照组)中MBD2的基因启动子区甲基化水平,分析MBD2基因CpG位点的甲基化率与MBD2mRNA水平的关系。结果①MBD2真核过表达载体成功转染293T细胞,上调293T细胞MBD2的表达对其增殖、凋亡和周期均无显著影响。②共46对标本的MBD2基因启动子区的10个CpG位点进行甲基化分析法发现,单点甲基化水平分析中,所有CpG位点上,MBD2 mRNA与MBD2甲基化的表达在病例组与对照组比较,差异均无统计学意义(P均0.05)。结论过表达MBD2对子宫肌瘤细胞生物学功能并不产生影响,子宫肌瘤组织中MBD2基因的表达下调与其基因启动子区甲基化状可能无关。