癌变与染色质非组蛋白

细胞癌变的重要原因之一是基因表达的调控失常。可能影响真核细胞基因表达的因素和环节是多方面的,如DNA顺序,核小体结构和染色质构型,RNA的转录和转录后加工、转运及其稳定性等变化,均可导致基因表达失常。真核细胞染色质由DNA、组蛋白、非组蛋白和少量RNA组成。DNA携带基因信息,蛋白质则决定染色质的结构,控制和调节基因信息的表达。     

染色质重塑基因ARID1A在妇科肿瘤中的研究进展

<正>在真核细胞中,遗传信息储存于染色质,这是一种由DNA、组蛋白及非组蛋白通过高度浓缩机制而形成的复杂结构,但在DNA复制、修复、重组及转录等过程中需动态变化以促使相关因子与DNA结合,这种作用称为染色质重塑。而染色质重塑包括DNA复制、转录、修复、甲基化和重组,对于细胞核活动至关重要,染色质重塑复合物的分子基因型改变是癌症发病的一个新机制。其中染色质重塑基因ARID1A在多种人类癌     

癌细胞染色质的结构和基因表达(二)

三、染色质活性与基因调控在前几节中主要对染色质的结构进行了探讨。这一节中重点是探讨染色质有什么样的功能。大多数细胞的染色质,不仅仅是一个遗传信息的固定储藏所,而在其中还发生着转录、复制、重组、和修复等各种动态过程。这些过程发生的速率和频率有很大的不同。目前对其控制的机制还了解甚少。 (一)染色质的转录在染色质的一部分DNA中,似乎包含     

人类胚胎发育、精子发生与DNA甲基化关系的研究进展

表观遗传是指基因的核苷酸序列不发生变化,但基因表达却发生了可遗传的改变。DNA甲基化是表观遗传重要的调控机制,它参与了动物胚胎发育、基因印迹和X染色体失活等过程,在基因表达的调控中具有重要作用。DNA甲基化可引起基因组中相应区域染色质结构变化,使染色质高度螺旋化,凝缩成团,失去转录活性。现对DNA甲基化与人类胚胎发育与精子生成的关系等进行综述。     

基于分子结构的IncRNA分子功能的研究进展

研究表明,lncRNA以转录本的形式调控蛋白编码基因的表达,并参与染色质修饰、染色体沉默、基因组印迹以及转录激活等多种生物学过程。lncRNA的自身结构及所结合的靶点不同,其所具有的生物学功能亦不同。本综述将解析lncRNA的结构,包括RNA结构域、蛋白结构域、DNA结构域及模块结构,并分析其生物学功能;着重介绍几种新近的研究方法,包括染色质构象捕获（3C）、三维DNA的筛选和交联（3D-DSL）、RNA反义纯化（RAP）。     

大鼠再生肝与BERH-2肝癌细胞核转录调控的比较研究

我们以正常分裂增殖能力强并具有部分胚胎性质的再生肝细胞与BERH-2肝癌细胞进行基因表达转录水平调控的比较研究,结果显示,再生肝和肝癌细胞核转录活性,尤其RNA聚合酶A的转录活性明显高于正常。RNA聚合酶B在再生肝中转录活性升高,但在肝癌却无明显变化,随着保温时间延长,反而略有下降。 利用DNA酶I为探针,对再生肝和肝癌细胞核进行DNA消化动力学研究表明,再生肝染色质DNA酶I消化百分率与正常相同,说明转录活性部位的数量不变;而肝癌细胞核经短暂消化,其染色质对DNA酶I的敏感性增加,说明转录活性部位数量增加。 利用DNA饱和分析法,在完整细胞核中测定了RNA聚合酶相对含量和相对比活性,显示再生肝RNA聚合酶含量增加,但比活性无明显变化;而肝癌细胞RNA聚合酶含量和比活性都高于正常。     

ZBTB5基因及其表达特征的初步研究

目的了解ZBTB5基因的序列和表达特征。方法运用生物信息学方法分析该基因的序列特征和染色体定位,分子生物学方法分析其表达特征和亚细胞定位。结果ZBTB5基因的N末端含一个BTB结构域,C末端含2个C2H2锌指结构域;根据人类基因组序列数据库搜索,将ZBTB5基因定位在人类基因组第9染色体上。Northern杂交结果表明,ZBTB5基因在不同组织中表达差异明显。免疫胶体金技术显示该蛋白定位于细胞核。结论该基因可能是一个转录因子。     

转录因子C／EBPβ的功能与调控

CCAAT增强子结合蛋白β(CCAAT enhancer binding proteins,CLEBPβ)是转录因子C/EBPs家族的重要成员,其C端具有高度保守的DNA结合域和二聚化功能域.它主要通过对靶细胞基因转录的调节,参与细胞增殖与分化、肿瘤发生与凋亡、细胞周期调控等重要生命活动;其功能受到蛋白酶降解、磷酸化、蛋白质相互作用等多种途径的调控.本文综述有关C/EBPβ的生物学功能及其调控机理近年来的一些研究进展.     

肝细胞核因子的研究进展

肝细胞核因子是调节肝脏内基因特异性表达的一类转录因子,这些转录因子及其相互作用构成的复杂调控网络,精确地控制着肝脏的发育和肝细胞的功能。深入研究肝细胞核因子在胚胎发育和肝癌发生中的作用,可以为胚胎发育的基因调控和寻找更有效的肝癌诊断标志物、治疗靶点提供新思路。     

液-液相分离在基因转录调控中功能机制的研究进展Research progress in functional mechanism of liquid-liquid phase separation in gene transcription regulation

基因表达的转录是指在RNA聚合酶的催化下，以单链DNA为模板，合成mRNA的过程，这一过程需要多种不同蛋白大分子相互协调，在基因组DNA位点上组装成大型稳定的蛋白复合物，通过转录调节在基因表达中发挥核心作用。转录蛋白分子复合物可以通过多价相互作用，形成液-液相分离聚集，定位于细胞核中特异的基因位点处，参与基因转录的调控。目前液-液相分离在转录调控过程中的功能机制尚不完全清楚，现从基因转录抑制、转录激活、转录延伸和剪接等方面阐述液相分离在基因转录过程中的研究进展，总结其对基因表达调控的研究成果，为生物分子液-液相分离在基因转录中的进一步研究提供依据。     

染色体荧光原位杂交快速产前诊断染色体数目异常

目的探讨产前诊断常见染色体数目异常的技术策略。方法 2010年4月-2012年8月来我院产科门诊进行产前诊断的孕妇,常规穿刺采集羊水或脐带血样本,同时采用常规的染色体核型和荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）方法进行检测,比较两种方法的产前诊断结果。结果染色体核型分析报告时间平均为4~5周,494例羊水或脐血样本中有2例分析失败;总染色体异常为8.74%（43/492）;数目异常占异常总数的81.40%（35/43）,结构异常占18.60%（8/43）。在数目异常中,21三体占74.29%（26/35）,18三体17.14%（6/35）,性染色体数目异常8.57%（3/35）。染色体荧光原位杂交报告时间平均为72~96 h;染色体数目异常为7.09%（35/494）,21三体占数目异常的74.29%（26/35）,18三体17.14%（6/35）,性染色体数目异常8.57%（3/35）,对于染色体数目异常的分析结果与核型分析结果一致。FISH未能检出染色体结构异常。结论针对常见的染色体数目异常（21三体、18三体、13三体、性染色体单体或三体）,FISH可直接进行产前诊断;FISH联合染色体核型分析是较全面了解染色体畸形的产前诊断技术策略。     

淮河流域71例Down综合征患者的细胞遗传学分析

目的探讨Down综合征患者的细胞遗传学基础。方法采用具有典型Down综合征临床特征的疑似患者的外周血进行淋巴细胞培养、染色体制片、G显带处理、核型分析。结果71例疑似患者均确诊为Down综合征患者。其中，65例为游离型，占91．6％；易位型为4例，占5．6％；嵌合型为2例，占2．8％。结论染色体检查对Down综合征的诊断是决定性的，并且可以快速准确确诊Down综合征的遗传学类型。在Down综合征患者中，游离型占90％以上，而易位型和嵌合型仅占很少的比例。对高危人群应采用STR多态位点结合DNA定量分析进行基因诊断。     

慢性髓细胞白血病的细胞遗传学和荧光原位杂交分析

目的 探讨慢性髓细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）细胞遗传学、分子遗传学特点及其临床意义.方法 选择196例CML患者,采用直接法和（或）24 h短期培养法制备骨髓染色体标本,采用R显带技术（RHG）进行染色体核型分析;用BCR-ABL双色双融合探针或ES探针对骨髓间期细胞进行荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）检测.结果 将患者分为慢性期和加速/急变期2组.细胞遗传学分析：附加染色体异常、变异易位在2组中比例分别为9/166（5.4%）、7/166（4.2%）和19/30（63.3%）、3/30（10.0%）.196例患者中检出179例Ph阳性标本,占91.3%;其中典型易位169例（94.4%）,变异易位10例（5.6%）,附加染色体异常出现频率最多的为双Ph、＋ 8、I（17q）、-Y.分子遗传学分析：68例患者行FISH 检测,均为BCR-ABL融合基因阳性（含10例变异易位、11例Ph染色体阴性及6例染色体检测失败者）,其中10例（14.7%）为der（9）缺失（含1例染色体检测失败者）,在慢性期、加速/急变期中比例分别为8/55（14.5%）、2/13（15.4%）.68例患者中典型易位41例,变异易位10例,der（9）缺失在典型易位、变异易位中比例分别为5/41（12.2%）和4/10（40.0%）.结论 与慢性期相比,加速/急变期附加染色体、变异易位等异常明显增加,染色体核型分析有助于疾病诊断和进展的分析,并且在遗传学分析的基础上,选用分子遗传学FISH技术可以明显提高疾病的诊断率和染色体异常的检出率及准确率,并可有效检测der（9）缺失.     

乙型肝炎病毒基因型和基因变异在乙型肝炎病毒相关性肾小球肾炎中的意义

目的探讨HBV基因型及基因变异等病毒因素在乙型肝炎病毒相关性肾小球肾炎（HBV-GN）中的意义。方法选择41例HBV-GN患者,采用荧光PCR法检测HBV-GN患者基因型,HBV多态性芯片检测基因变异,同时测定尿常规、肾功能和血压等临床资料。结果41例HBV-GN患者,B基因型14例,C型24例（86．8％）,B＋C混合型3例。B型和C型患者间24h尿蛋白有显著性统计学差异（P〈0．05）,尿红细胞计数、血压、尿素氮和血清肌酐无显著性统计学差异（均P〉0．05）。12例为前C区1896位变异,1896位变异与未变异者间小便常规,血压和肾功能无显著性差异。结论HBV-GN患者HBV基因以B、C两型为主,C型为多。C型患肾脏损害可能更为严重。前C区1896位变异和YMDD变异对HBV-GN患者小便常规、血压和肾功能无明显影响。     

荧光原位杂交技术在快速诊断胎儿染色体数目异常中的应用

目的 探讨荧光原位杂交（FISH）技术在快速产前诊断胎儿染色体数目异常中的价值.方法 采用13、18、21、X和Y染色体特异性DNA探针,对123例高危孕妇的羊水间期细胞进行FISH检测,同时行常规染色体核型分析平行诊断,以此监测对比荧光原位杂交结果的准确性.结果 所测123份标本的13、18、21、X、Y染色体数目均与常规染色体核型分析的结果相符,其中,检测结果显示染色体数目正常的为120例,染色体数目异常的为3例,分别为21-三体2例,18-三体1例;正、异常与常规染色体核型分析结果符合率均为100%.结论 荧光原位杂交技术检测过程简单、快捷,特异性较强,且灵敏度较高,是一种可用于临床的快速产前诊断方法.     

L-甲硫氨酸通过调节脊髓DNA甲基化水平减轻甲醛溶液所致急性炎性痛机制研究

背景　甲硫氨酸能够促进DNA甲基化的发生,DNA甲基化参与疼痛的发生发展和维持。急性炎性痛是临床常见症状,控制不及时会转化成慢性炎性痛,外源性补充甲硫氨酸可能通过调节DNA甲基化参与调节急性炎性痛,改善患者疼痛症状。目的　本研究采用甲醛溶液诱导急性炎性痛模型大鼠,观察注射L-甲硫氨酸（L-MET）是否会减轻大鼠足底急性炎性痛并探讨其机制,以期为寻找新的疼痛生物标志物和开发理想的镇痛新药提供理论依据。方法　2017年7月-2018年12月,将24只健康成年清洁级雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠按照随机数字表法分为A组（0.9%氯化钠溶液+0.9%氯化钠溶液组）、B组（L-MET+0.9%氯化钠溶液组）、C组（0.9%氯化钠溶液+2 g/L甲醛溶液组）、D组（L-MET+2 g/L甲醛溶液组）,每组6只。B组、D组腹腔注射L-MET,2次/d,总量不超过0.18 mg/kg,连续注射3 d;A组、C组注射等量0.9%氯化钠溶液。C组、D组左后足足跖部皮下注射2 g/L甲醛溶液20 μl,制作甲醛溶液所致急性炎性痛模型,大鼠足部肿胀并会出现相应的抬足舔足行为视为模型制作成功;A组、B组注射等量0.9%氯化钠溶液。全程记录给药后60 min大鼠行为学,并记录疼痛次数,每隔3 min为1个观察时段,共分20个观察时段。行为学检测结束后,将大鼠处死,取脊髓L4~L6之间脊髓组织,检测大鼠脊髓全基因组DNA甲基化水平及大鼠脊髓DNA甲基化转移酶（DNMT）1、DNMT2、DNMT3a、DNMT3b RNA水平。结果　A组、B组大鼠无明显不适异常反应;C组、D组大鼠出现躁动不安、注射足抬起不着地、舔咬或抖动注射足等反应,其疼痛行为反应呈典型的双相变化,从注射后即刻开始,持续3~5 min的急性疼痛时相（第一时相）,5~10 min的静息期,随后出现可持续0~45 min的继发性疼痛时相（第二时相）。C组、D组大鼠各时间点疼痛次数均多于A组、B组（P<0.05）;D组大鼠6~39 min疼痛次数少于C组（P<0.05）。B组、D组大鼠脊髓全基因组DNA甲基化水平高于A组（P<0.05）;C组、D组大鼠脊髓全基因组DNA甲基化水平低于B组（P<0.05）;D组大鼠脊髓全基因组DNA甲基化水平高于C组（P<0.05）。C组、D组大鼠脊髓DNMT3a、DNMT3b RNA水平高于A组、B组（P<0.05）;D组大鼠脊髓DNMT3a RNA水平低于C组,DNMT3b RNA水平高于C组（P<0.05）。结论　L-MET对于甲醛溶液所致急性炎性痛模型大鼠具有明显镇痛作用,其机制与脊髓全基因组DNA甲基化水平以及DNMT水平的变化有关。     

版纳微型猪染色体显带研究

采用外周血淋巴细胞及肺成纤维细胞培养方法，以及Ｃ带、Ｇ带显带和银染技术，对云南版纳微型猪进行了染色体显带研究。测量了染色体的相对长度，着丝点指数及臂比。结果表明，Ａｇ－ＮＯＲｓ定位于７号和１０号染色体，版纳微型猪的Ｇ带带型与其它家猪相似，Ｃ带和Ａｇ－ＮＯＲｓ具有多态性。     

介入诊疗对心血管病患者外周淋巴细胞DNA的损伤

目的 探讨心血管疾病介入诊疗中X射线的电离辐射对DNA损伤的影响.方法 选取菏泽市立医院于2012年1月至2013年1月收治的207例心血管病患者作为研究对象,按照介入方法分为经皮冠状动脉造影术组（A组）、经皮冠状动脉介入术组（B组）以及射频消融术组（C组）,比较三组患者的辐射面积剂量乘积（DAP）、介入参考点累积皮肤表面入射剂量（CD）以及透视时间（FT）;比较患者介入手术前后染色体微核率变化情况.结果 三组患者DAP、CD、FT各项指标的比较,差异有统计学意义（F=6.23,2.73,4.87,P＜0.05）;B组患者的DAP、CD以及FT指标均显著高于A组和C组（P＜0.05）,而A组与C组各指标比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）;207例患者介入手术后2 h 及24 h的染色体微核率相比介入手术前显著增高（P＜0.05）.结论 心血管疾病患者接受不同的介入方法治疗后,均会引起不同程度X射线的电离辐射,导致患者DNA损伤,在临床应用介入治疗时,应注意对患者的防护.     

利用重叠延伸PCR快速构建中国株乙型肝炎病毒的感染性克隆

目的：体外扩增中国株乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）的基因组全长序列,快速构建中国株HBV感染性克隆,建立中国株HBV体外复制细胞模型。方法：设计保守引物,扩增HBV全长基因组序列。对扩增到的HBV基因组进行DNA测序及计算机辅助分析,确定病毒的基因型。通过重叠延伸PCR（splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR）技术,构建1.3倍基因组长度的HBV感染性克隆质粒pHBV1.3。将pHBV1.3质粒转染人肝癌细胞系HepG2,采用Western Blot、酶联免疫吸附试验及Real-PCR检测病毒复制及表达情况。检测该感染性克隆对临床抗病毒药物阿德福韦的敏感性。结果：成功扩增到1株C基因型HBV全长基因组,其GenBank登陆号为KF495606。构建了中国株HBV感染性克隆pHBV1.3（C）质粒,该质粒能在肝癌细胞株中进行有效的复制、转录和表达。阿德福韦能在体外抑制该HBV感染性克隆的复制,抑制程度依赖于药物浓度。结论：利用SOE-PCR可快速构建HBV感染性克隆,所构建的感染性克隆能介导高水平病毒复制,可用于HBV复制机制和抗病毒等方面的研究。     

荧光原位杂交技术在唐氏综合征筛查中的应用

目的探讨荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization,FISH）在唐氏综合征筛查的应用,评价其应用的可行性。方法采集200名妊娠16～20周孕妇的羊水标本,应用荧光标记21号染色体特殊位点探针（locus-specific probe,LSP）及X/Y染色体着丝粒探针（centromeric probe,CEP）对未培养的细胞进行FISH;同步进行羊水细胞培养,通过染色体核型分析,并以核型分析为金标准,评价FISH技术准确性。结果FISH分析羊水间期细胞性染色体数量均正常（XX107例,XY93例）;200例标本中21号染色体异常者3例,经核型分析为典型的21三联体,取脐血进行G带染色体核型分析得以验证2例为47,XY,＋21;1例为47,XX,＋21。产前诊断正常者进行产后新生儿外周血染色体检查无异常。结论荧光原位杂交技术FISH是快速进行产前唐氏综合症筛查的一个简易可靠值得推广的技术。