抑制NF-κB通路增强蟾蜍灵诱导的HL-60细胞凋亡

目的:观察蟾蜍灵对HL-60细胞活力和凋亡的影响,对NF-κB通路的作用,探讨NF-κB通路在蟾蜍灵诱导HL-60细胞凋亡过程中的作用.方法:锥虫蓝染色检测细胞活力;流式细胞仪技术检测细胞凋亡和周期分布;采用Western Blot技术检测IKK的磷酸化.结果:蟾蜍灵以时间和剂量依赖性方式诱导HL-60细胞凋亡.24,48和72h抑制细胞活力的IC50浓度分别为26.3,7.8和2.0nmol/L.对照组HL-60细胞有pIKK表达,蟾蜍灵可诱导IKK的快速活化.NF-κB通路的特异性抑制剂Bay 11-7082增强蟾蜍灵的凋亡诱导作用.结论:蟾蜍灵可诱导HL-60细胞凋亡,促进IKK活化与NF-κB通路调节相关,而且与NF-κB通路抑制剂有协同作用.     

Act1分子对骨髓瘤细胞增殖的负调节作用研究

目的:探讨调节因子Act1对骨髓瘤细胞中BAFF(B细胞活化因子)通路的调节作用,进而了解其对骨髓瘤细胞的增殖存活所产生的作用.方法:利用荧光定量PCR的方法测定20例多发性骨髓瘤(MM)病人及20例正常对照者的外周血中的BAFF分子和Act1分子的表达水平;通过小干扰RNA(siRNA)和基因过表达技术构建缺乏和过表达Act1的U266骨髓瘤细胞,利用免疫印迹(Western blot,WB)法测定骨髓瘤细胞在BAFF分子刺激下的NF-κB信号通路活化情况,即磷酸化的IκB(p-IκB)的表达水平.结果:MM病人外周血BAFF和Act1分子的表达水平较对照组均增高(P<0.01),二者之间亦存在相关性;缺乏Act1分子的骨髓瘤细胞IκB磷酸化水平较高,而对照组的细胞IκB磷酸化程度较低,趋势不明显,过表达Act1分子的细胞基本没有磷酸化的发生.结论:Act1分子在多发性骨髓瘤的发生发展中发挥重要作用,其作用是通过对BAFF分子刺激下NF-κB信号通路的负调节作用而发挥的,使其可能成为抑制骨髓瘤细胞增殖的作用靶点.     

姜黄素增强人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1放射敏感性的研究

目的 研究姜黄素对人乳头瘤状甲状腺癌细胞TCP-1放射敏感性的影响,并探索姜黄素可能作用的信号通路,为甲状腺癌放射增敏剂的开发提供新的思路。方法 使用姜黄素和放射性碘处理人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1,CCK-8法检测细胞增殖,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,western blot检测p50、p65、凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达变化。使用NF-κB信号通路抑制剂PDTC抑制NF-κB信号通路活性,检测细胞增殖、克隆形成和凋亡变化。结果 姜黄素和放射性碘处理人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1后,细胞增殖率下降,克隆形成减少,凋亡上升,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白Bax表达上调,并呈浓度依赖性。这些结果表明姜黄素可增加TPC-1细胞的放射敏感性。碘放射后TPC-1细胞NF-κB通路活化,姜黄素可以抑制碘放射后TPC-1细胞NF-κB通路的激活。使用抑制剂抑制NF-κB通路的活性,细胞增殖下降,克隆形成减少,凋亡上升,放射敏感性升高。结论 姜黄素可能靶向NF-κB信号通路,通过抑制NF-κB信号通路活性调节甲状腺癌细胞的放射敏感性。     

苹果多糖抑制脂多糖引起宫颈癌Hela细胞的TLR-4/NF-κB 通路活化

目的:探讨苹果多糖(AP)对脂多糖(LPS)活化人宫颈癌细胞 Hela 中 TLR-4/NF-κB 通路的影响及相关机制.方法:培养Hela 细胞,将其分为对照组、LPS 处理组(1 μg/ml)、AP(0.5 mg/ml)+LPS处理组 (1 μg/ml),采用免疫荧光法观察 NF-κB 在细胞质、细胞核内的分布情况,免疫印迹法检测 Hela 细胞中 IκB-α,磷酸化 IκB-α,细胞核中NF-κB 以及细胞膜上TLR-4的蛋白变化.结果:AP 可抑制 LPS 刺激引起的 Hela 细胞的 NF-κB 核转位,可有效抑制 IκB-α 降解及 IκB-α的磷酸化,可降低细胞膜表面的 TLR-4表达.结论:AP可能通过抑制脂多糖活化 TLR-4分子来抑制NF-κB通路的激活.     

NF-κB在TNF-α诱导的Hela细胞凋亡中的作用

目的探讨核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosisfactor-α,TNF-α)诱导的宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。方法培养宫颈癌Hela细胞,不同处理因素按指定时间作用后,RT-PCR检测NF-κBp65mRNA的表达,免疫印迹和免疫组化检测NF-κB p65活性的变化,TUNEL法检测细胞凋亡。结果静息状态下,在Hela细胞中NF-κB p65具有微弱活性水平,TNF-α诱导Hela细胞NF-κB活化与其诱导细胞凋亡明显相关,NF-κB p65单抗能显著抑制TNF-α(10ng/mL)诱导的Hela细胞NF-κB活化,抑制率为49.69%,并增强其诱导Hela细胞凋亡的作用,凋亡增加率为57.52%。结论TNF-α在诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的同时活化NF-κB。NF-κB p65单抗可通过抑制NF-κB活化以增强TNF-α诱导Hela细胞凋亡的作用。     

NF-κB在TNF-α诱导的Hela细胞凋亡中的作用

目的：探讨核因子-κB(nuclear factorkappa B，NF-κB)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)诱导的宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。方法：培养宫颈癌Hela细胞。不同处理因素按指定时间作用后，RT一PCR检测NF-κB p65 mRNA的表达。免疫印迹和免疫组化检测NF-κB p65活性的变化，TUNEL法检测细胞凋亡。结果：静息状态下。在Hela细胞中NF-κB p65具有微弱活性水平。TNF-α诱导Hela细胞NF—κB活化与其诱导细胞凋亡明显相关，NF-κB p65单抗能显著抑制TNF-α(10ng／mL)诱导的Hela细胞NF-κB活化，抑制率为49．69％，并增强其诱导Hela细胞凋亡的作用，凋亡增加率为57．52％。结论：TNF-α在诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的同时活化NF-κB。NF-κB p65单抗可通过抑制NF-κB活化以增强TNF-α诱导Hela细胞凋亡的作用。     

多靶点酪氨酸激酶抑制剂联合NK细胞的抗肝癌作用及其分子机制

目前,针对晚期肝癌无标准和令人满意的治疗方法。多靶点酪氨酸激酶抑制剂（multi-target tyrosine kinase inhibitor,MTKI）联合NK细胞对肝癌细胞具有协同杀伤作用：一方面,MTKI能阻断肿瘤细胞增殖和血管生成信号通路促进细胞凋亡;另一方面,MTKI诱导肿瘤细胞表达NK细胞活化性配体（natural killer group 2 member D ligand,NKG2DL）,促进肿瘤细胞对NK细胞杀伤的敏感性。MTKI诱导肿瘤细胞表达NKG2DL,主要通过DNA损伤修复反应分子和细胞凋亡通路与转录因子NF-κB（nuclear factor-κB)之间相互作用,活化由NF-κB2和RelB组成的旁路途径调节NKG2DL的转录和表达。MTKI通过NF-κB旁路途径诱导肿瘤表达NKG2DL的分子机制为MTKI联合NK细胞治疗肝细胞癌提供了理论依据。     

白血病细胞核因子-κB活化与化疗药物诱导凋亡的关系

目的 研究化疗药物诱导P388白病细胞核因子-κB(NF-κB)活化与凋亡的关系,以及长春新碱(VCR)对它们的影响。方法 采用电泳迁移率变动分析(EMSA)检测细胞NF-κB活化水平;采用TdF介导的dUTF缺口末端标记技术(TUNEL)和DNA电泳方法检测细胞凋亡。结果 化疗药物诱导P388白血病细胞NF-κB活化与化疗药物诱导细胞凋亡有明显关系,0．1μmol／L VCR不仅能显著抑制100μmol／L阿糖胞苷(Ara-C)或100μmol／L鬼臼乙叉甙(Vp-16)诱导的P388细胞NF-κB活化(抑制率分别为52％和63％),而且增强它们诱导P388细胞凋亡的作用(凋亡增加率分别为89%和123%)。P388细胞在接触化疗药物前,NF-κB亦有一定程度的活化。结论 化疗药物诱导P388白血病细胞凋亡的同时,可活化NF-κB;VCR可通过抑制NF-κB活化,增强化疗药物诱导白血病细胞凋亡的作用。     

茶多酚干预信号转导通路的研究进展

芬多酚可干预以激活蛋白质-1(AP-1)和核转录因子-κB(NF-κB)为主的信号转导通路.茶多酚通过JNK通路抑制促癌物诱导的AP-1活性;通过降低抑制蛋白IκB磷酸化来调节NF-κB的活性.荼多酚选择性地阻断肿瘤细胞信号转导通路,从而破坏肿瘤控制性生长调节机制,为其抗癌机制研究开拓新的思路.     

5-Fu诱导结肠癌细胞凋亡与NF-κB活化及uPA表达的关系

 [摘要] 目的 研究5-氟尿嘧啶（5-Fu）诱导结肠癌细胞HCT116凋亡与核转录因子-κB (NF-κB) 活化以及uPA表达的关系，并观察吡咯烷二硫氨基甲酸盐（PDTC）抑制NF-κB活化对5-Fu诱导结肠癌细胞凋亡及uPA表达的影响。方法 采用流式细胞仪Annexin Ⅴ-FITC法检测结肠癌细胞HCT116凋亡;采用免疫组织化学方法半定量分析HCT116细胞NF-κB及uPA表达的动态变化。结果 5-Fu在诱导HCT116细胞凋亡的同时有NF-κB活化，1umol/LPDTC能显著增加5-Fu诱导HCT116细胞凋亡及抑制5-Fu诱导的HCT116细胞NF-κB活化作用(P<0.05), uPA变化与NF-κB一致。结论5-Fu在诱导HCT116细胞凋亡的同时活化了NF-κB，uPA表达亦随之增强；PDTC在抑制5-Fu诱导的HCT116细胞NF-κB活化的同时增强了5-Fu诱导细胞凋亡的作用，uPA表达也相应下降     

NF-κB和Cyto-C在紫杉醇抗肿瘤机制中的作用

核因子(NF)-κB是Rel转换因子家族的成员，正常情况下与细胞内抑制剂IκB-α形成复合物，细胞受刺激后NF-κB出与IκB-α复合物解离，NF-κB转移到细胞内，以调节基因的转录诱导细胞凋亡。细胞色素-C是由于线粒体呼吸频率增加，通透性转移孔(PTP)开放，由线粒体膜释放出来，然后细胞色素C激活caspase的连锁反应，导致细胞凋亡。     

舒尼替尼通过NF-кB旁路途径诱导人肝癌HepG2细胞NKG2DLs的表达

目的：探讨舒尼替尼通过NF-κB信号通路诱导肝癌HepG2细胞表达自然杀伤细胞2族成员D配体（natural killer group 2 member D ligands, NKG2DLs)的分子机制。方法： 常规体外培养HepG2细胞,单细胞凝胶电泳检测1 μmol/L舒尼替尼处理HepG2细胞24 h前后DNA损伤情况,实时荧光定量PCR检测药物处理前后细胞DNA损伤修复分子mRNA的表达,Western blotting 检测分别以NF-κB激动剂和抑制剂处理HepG2细胞前后NKG2DLs蛋白表达及IKKα和IκBα表达情况。结果： 舒尼替尼药物处理后,HepG2细胞均发生不同程度DNA损伤;且AP-1、ATM、ATR mRNA表达水平明显升高,而CHK1、CHK2、GSK3β mRNA表达水平明显降低;不同处理组间DNA损伤修复相关信号分子mRNA表达有显著差异（F=61.242,P=0.000）。NF-κB转录活性抑制剂JSH-23可降低HepG2细胞NKG2DLs蛋白表达量,而NF-κB转录活性激动剂TNF-α、PMA均可增加HepG2细胞NKG2DLs蛋白表达量（F=15.043,P=0000）;舒尼替尼处理肿瘤细胞后NF-κB的抑制分子IKKα被抑制,而激活分子IκBα被激活。结论： 舒尼替尼可通过DNA损伤修复分子激活NF-κB旁路途径诱导肿瘤细胞表达NKG2DLs。     

NF-κB抑制剂增敏卡铂对卵巢癌细胞毒性作用的机制研究

[目的]探讨NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）增敏卡铂对卵巢癌细胞的毒性作用及其机制。[方法]采用凝胶迁移率变动试验（EMSA）法,观察卡铂作用下和卡铂与PDTC共同作用下NF-κB的活化反应;MTT和流式细胞仪分别比较2种情况下SKOV3细胞的生长情况和凋亡率;RT-PCR方法检测2种情况下survivinmRNA的表达。[结果]EMSA实验结果表明,卡铂可以诱导NF-κB活化,PDTC可以抑制此作用。PDTC预处理后可增强卡铂对卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用。卡铂作用24h、48h后卵巢癌SKOV3细胞的凋亡率分别为3.4%、20.1%;卡铂＋PDTC作用24h、48h后卵巢癌SKOV3细胞的凋亡率明显增加,分别为14.0%、32.7%,与卡铂组相比有显著性差异（P〈0.01）。卡铂作用3d、5d后卵巢癌SKOV3细胞中survivinmRNA的相对表达量分别为0.48±0.04、0.57±0.03,卡铂＋PDTC组分别为0.33±0.04、0.38±0.04,对应时间点两组差异显著（P〈0.01）。[结论]卡铂能诱导NF-κB的活化,NF-κB抑制剂可以增强卡铂诱导的SKOV3细胞的凋亡。NF-κB可能通过上调SKOV3细胞内survivinmRNA的表达来抵抗卡铂诱导的SKOV3细胞的凋亡。     

Rab11通过NF-κB信号通路调控膀胱癌细胞的增殖和侵袭

目的:探讨Rab11调控膀胱癌细胞增殖和侵袭的分子机制。方法:用Western blot方法检测膀胱癌BIU-87、T24、RT4、5637细胞系中Rab11的内源表达量。在BIU-87（Rab11低表达）和T24（Rab11高表达）细胞系中分别转染Rab11过表达质粒和Rab11 siRNA。用荧光素酶报告实验检测转染后细胞内的NF-κB信号通路的活性,通过Western blot技术分析与NF-κB信号通路相关蛋白p-IκB的变化情况。用NF-κB抑制剂Bay 11-7082处理转染Rab11过表达质粒的BIU-87细胞系,通过Western blot检测细胞系中细胞周期相关因子cyclin D1和侵袭相关因子MMP9蛋白的变化。结果:转染Rab11过表达质粒的BIU-87细胞系中NF-κB活性水平提高,p-IκB表达量显著提高;而敲除Rab11后NF-κB活性受到抑制,p-IκB的表达受到抑制,而p-IκB与NF-κB信号通路的活性呈正相关。NF-κB抑制剂Bay 11-7082阻遏了Rab11诱导cyclin D1和MMP9表达上调的过程。结论:Rab11通过NF-κB信号通路调控膀胱癌细胞的增殖和侵袭。     

MS-275阻断STAT3和NF-κB信号通路并诱导U266细胞凋亡机制的探讨

于G0/G1期;瑞氏-姬姆萨染色显示,细胞发生明显变化;蛋白质印迹法检测表明,MS-275作用U266细胞后, PARP发生剪切,导致细胞凋亡;对细胞凋亡相关信号通路STAT3及NF-κB检测结果表明,STAT3,IκB-α发生磷酸化水平受到明显抑制.结论:MS-275对U266细胞的杀伤作用主要是通过诱导细胞凋亡实现,与细胞增殖相关的STAT3及NF-κB信号通路被阻断是凋亡发生的机制之一.     

细胞核因子-κB在肿瘤化疗耐药方面的研究进展

细胞核因子-κB(nuclear factor of kappa B,NF-κB)是一种重要的转录调节因子.1956年由Sen和Baltimore等[1]从成熟的B淋巴细胞中提取的一种能与免疫球蛋白κ轻链基因增强子特定κB部位结合的蛋白质.许多研究证实,NF-κB与免疫应激,细胞分化,细胞周期调控,细胞凋亡及恶性肿瘤有关.近年来,NF-κB研究涉及肿瘤发生、浸润、转移和耐药许多研究方面.以NF-κB作为靶点来探索解决肿瘤化学治疗中的耐药问题更是作为研究的热点.本文针对NF-κB在肿瘤化学治疗中耐药问题做一综述.     

HCV C 蛋白调控肝门部胆管癌细胞中NF-κB活性的研究

目的探讨HCV C蛋白在肝门部胆管癌细胞中对核转录因子κB(NF-κB)调控作用.方法利用稳定表达HCV C蛋白的QBC939细胞株(QBC939 HCV C ),通过NF-κB报道基因分析法、凝胶迁移率分析(EMSA)检测HCV C蛋白增强肝门部胆管癌细胞NF-κB的DNA结合活性和反式激活活性.RT-PCR、Western blot检测HCV C蛋白对核转录因子κB抑制蛋白α(IκBα)mRNA及p50、p65、IκBα蛋白表达及IκBα蛋白磷酸化的影响.结果①EMSA结果显示QBC939HCV C 细胞系中NF-κB相对信号密度明显比QBC939细胞高.②将pNF-κB-lun表达质粒转染稳定表达HCV C蛋白胆管癌细胞系中,通过单光子检测仪检测荧光素酶活性,结果显示QBC939HCV C 细胞中活化NF-κB为12.8倍,而QBC939细胞中NF-κB为2.6倍.③RT-PCR显示IκBα mRNA在QBC939 HCV C 细胞和QBC939细胞中的表达无明显差异;Western blot结果显示稳定表达HCV C蛋白的QBC939 HCV C 细胞株的胞核中的p50、p65蛋白高水平表达,而未转染HCV C蛋白的QBC939细胞仅检测出极低水平的p50、p65蛋白.在QBC939HCV C 细胞胞浆中IκBα蛋白低水平表达,QBC939细胞高水平表达,但IκBα蛋白磷酸化水平则相反.结论HCV C蛋白通过增加IκBα降解激活的NF-κB在肝门部胆管癌的发生中起重要作用.     

抑制NF—κB通路增强蟾蜍灵诱导的HL-60细胞凋亡

目的：观察蟾蜍灵对HL-60细胞活力和凋亡的影响,对NF—κB通路的作用,探讨NF—KB通路在蟾蜍灵诱导HL-60细胞凋亡过程中的作用。方法：锥虫蓝染色检测细胞活力;流式细胞仪技术检测细胞凋亡和周期分布;采用WesternBlot技术检测IKK的磷酸化。结果：蟾蜍灵以时间和剂量依赖性方式诱导HL-60细胞凋亡。24,48和72h抑制细胞活力的Ic50浓度分别为26．3,7．8和2．0nmol／L。对照组HL-60细胞有pIKK表达,蟾蜍灵可诱导IKK的快速活化。NF—κB通路的特异性抑制剂Bay11—7082增强蟾蜍灵的凋亡诱导作用。结论：蟾蜍灵可诱导HL-60细胞凋亡,促进IKK活化与NF—κB通路调节相关,而且与NF—κB通路抑制剂有协同作用。     

硼替佐米作用不同时间对K562耐药细胞株核因子-κB途径的影响

 目的　观察硼替佐米（商品名：万珂,PS-341）对柔红霉素（DNR）诱导的K562耐药细胞株（K562／DNR）核因子-κB（NF-κB）、抑制蛋白κB（IκB）及P-糖蛋白（P-gp）表达的影响,探讨PS-341逆转耐药的分子机制。方法　以100 μg／ml DNR单用或联合应用4 μg／L PS-341分别作用于K562／DNR 12、24及36 h,检测不同时间点各组NF-κB、IκB及P-gp表达情况,同时测定NF-κB p65活性,检测各组细胞凋亡率。结果　Western blot结果显示：与阴性对照组相比,DNR可诱导NF-κB表达上调及活性增强、IκB表达下调、P-gp表达上调;加用PS-341可显著抑制 DNR诱导的NF-κB及P-gp表达,使IκB表达增加。加用PS-341后,NF-κB活性12 h为（15.3±1.87）%[DNR组为（23.8±2.27）%],24 h为（10.2±1.69）%[DNR组为（25.4±1.98）%],36 h为（6.08±2.53）%[DNR组为（26.9±2.58）%],与相应单用DNR组相比均有明显下降,差异有统计学意义（P值均＜0.05）。DNR与PS-341联用后,细胞凋亡率12 h为（35.23±5.15）%[DNR组为（15.56±4.12）%],24 h为（40.26±6.89）%[DNR组为（17.25±2.89）%],36 h为（43.58±7.69）%[DNR组为（22.47±4.58）%],与DNR组相比,细胞凋亡率均明显增加,差异具有统计学意义（P值均＜0.05）。上述作用呈时间依赖性。结论　PS-341可减少K562／DNR细胞NF-κB的活化,降低P-gp表达,逆转细胞耐药,促进细胞凋亡。     

Gambogic Acid通过影响NF-κB信号通路诱导A549细胞凋亡

目的:研究Gambogic Acid（GA）对人非小细胞肺癌A549细胞系中NF-κB信号通路的影响及其对细胞凋亡的促进作用。方法:Western blot法和共聚焦显微镜成像技术检测GA对NF-κB的信号通路的影响,MTT及流式细胞（FCM）术检测GA对A549细胞的促凋亡作用。结果:Western blot发现GA能显著抵抗TNF-α诱导导致的IκB磷酸化水平上升及IκB的降解;共聚焦显微镜成像进一步发现GA有效阻止了NF-κB入核;MTT结果显示GA能显著抑制A549细胞的增殖,当药物浓度为5.0μmol/L时抑制率可达到（93.5±6.5）％（P<0.05),IC50值为1.2±0.4 μmol/L;凋亡检测结果显示A549细胞在0.0、0.5、1.0、2.0、3.0及5.0 μmol/L药物处理下细胞凋亡率分别是（6.0±0.7）%、（15.5±2.3）%、（35.0±3.6）%、（43.5±2.7）%、（43.0±3.8）%及（53.7±2.6）%（P<0.05);结论:实验表明,GA能有效地抑制A549细胞增殖和诱导其凋亡,其机制可能是通过影响NF-κB信号通路而发生作用。