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支原体污染是人和动物细胞系体外培养中常见的问题,污染细胞系与未污染细胞系的形态学,酶细胞化学和免疫细胞化学分析等表型均无差异。支原体在细胞融合中却能严重地减少杂交细胞的产生,因而急需建立一个可靠的去除支原体的方法以排除它们对融合率的破坏作用. 相似文献
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细胞培养中支原体污染的去除 总被引:1,自引:0,他引:1
在运用细胞培养手段的生物学研究和生物工程产品中,支原体污染仍是一个颇为棘手的问题。11株人的细胞SPC-A1、K562、HUT-102、BT-325、6T-CEM、NKM-45、CNE、HL-60、QGY-7701、QZG、人羊膜细胞;3株小鼠细胞P388-1、YAC-1、P815;1株绒猴细胞B95-8;和一株杂交瘤QKT3等,已污染了支原体的细胞经MC-210 1μg/ml处理7天,支原体污染 相似文献
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IST支原体培养与PCR解脲支原体检测方法的比较 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:比较分析PCR解脲支原体检测法与IST支原体培养法的结果及两种方法的优缺点。方法:同时采集88例临床上诊断为非淋菌性尿道炎(NGU)、阴道炎患者分泌物标本两份,分别用IST支原体培养法和PCR解脲支原体(Uu)检测法进行对照实验和分析。结果:IST支原体培养法Uu阳性25例(28.94%),人型支原体(Mh)1例(1.14%),Uu+Mh5例(5.68%)。PCR检测Uu阳性30例(34.04%),其中男性5例PCR检测Uu为阳性,而IST支原体培养法为阴性;女性3例PCR检测Uu阴性,培养法为阳性。两种方法的Uu阳性率经统计学x2检验(P>0.05)无显著性差别。结论:IST支原体培养法与PCR检测Uu法均能适用于临床Uu的检测。IST支原体培养法操作简便,不需要特殊仪器;能进行支原体的种类鉴别;有参考病理阈值并可同时做药敏实验,特别适合基层医院的支原体检测工作。 相似文献
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应用PCR与培养法检测解脲支原体感染的研究 总被引:2,自引:1,他引:1
本文应用聚合酶链反应(PCR)对198便病人进行检测,阳性率38.9%,同时应用培养法进行对照检测,阳性率21.7%。结果表明PCR法检测 同于培养法检测阳性率,确定PCR法是目前对支原体诊断的准确性、敏感性、特异上于最佳的检测方法。 相似文献
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本文报道了用荧光染料HOECHST 33258核染色,检查细胞培养物中支原体污染的方法,并将荧光法与电镜及常规培养法进行了比较。荧光法与电镜法的结果基本一致,但荧光法简便、快速、结果可靠、又经济,适用于常规实验室检查细胞培养物中支原体污染用。 相似文献
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在生物制剂的生产和研发领域,细胞培养扮演着极其重要的角色:用原代细胞或传代细胞制造疫苗;杂交瘤细胞制造单克隆抗体;基因工程或细胞生物学的研究等。然而支原体污染常常成为细胞培养的不速之客,严重影响着细胞及生物制剂的质量。污染细胞最常见的支原体包括: 相似文献
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目前,小儿呼吸道腺病毒感染的检测方法主要包括病毒抗原以及病毒抗体的检测。一般感染腺病毒后,大部分患者7天可检测到腺病毒抗体IgM,但水平较低,14天达高峰。本研究将小儿呼吸道腺病毒感染的检测从以往的病毒抗体转换为病毒核酸,旨在临床上建赢一种病毒分离培养与鉴定相结合的灵敏、特异、准确的新检测方法。 相似文献
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人型支原体套式PCR检测研究 总被引:5,自引:2,他引:3
本文报告灵敏、特异、快速的人型支原体套式PCR检测技术,12种标本中,Mh特异阳性,其他均阴性。在388例临床标本检测中,盆腔炎症阳性率66%,早产合并肺炎74.4%,输卵管妊娠占57.7%。 相似文献
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目的 检测细胞培养中细菌类(包括支原体)微生物的污染情况。方法 用细胞培养中常见的培养物人为污染He-La细胞,设计细菌类微生物16S rRNA基因序列通用引物,PCR扩增16SrRNA基因序列片断,建立PCR检测培养细胞污染的方法,并用该方法检测本室保存的细胞株的污染情况。结果 人为污染绿脓杆菌、大肠杆菌、白色葡萄球菌和支原体M.fernentans的Hela细胞的培养上清中均扩增出大小的片段,与目的片段相符。本室所收藏的15个细胞株有3株的培养上清中扩增出大小的片段。结论 本实验建立了:16SrRNA基因序列通用引物PCR法,可用于快速检测培养细胞中细菌类微生物的污染。 相似文献
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多聚酶链反应检测恙虫病立克次体核酸 总被引:2,自引:0,他引:2
作者设计合成一对恙虫病立克次体sta58基因的DNA引物,分别从恙虫病立克次体karp、Gilliam及CMY株基因组中扩增出1kb片段,普氏及莫氏立克次体、西伯利亚立克次体和贝氏柯克斯体则不能,表明该引物为恙虫病立克次体种特异。以含sta58基因片段的重组质粒为模板作敏感性鉴定,表明PCR可检测到10pg的靶DNA。用该引物作PCR检测实验感染恙虫病立克次体的小鼠血、腹水及脾标本均获满意结果。 相似文献
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霍乱弧菌PCR快速检测及应用研究 总被引:9,自引:1,他引:9
霍乱弧菌快速、准确的检定是控制霍乱流行的重要手段。本研究建立了ctxA-PCR快速检测鉴定方法,并用于新疆霍乱弧菌O139腹泻暴发的病人诊断和环境水体的污染状况评价,取得了较理想的效果。该方法灵敏度高、特异性好、被扩增样品中含4个以上活菌细胞即可检出,为霍乱防治和分子流行病学研究提供了又一有效手段。 相似文献
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聚合酶链反应技术检测弓形虫核酸的研究 总被引:6,自引:0,他引:6
本文通过克隆的RH株弓形虫核酸TGR4片段,设计并合成了一对长度为20bp的寡核苷酸引物,扩增靶序列长度为778bp,建立了聚合酶链反应技术检测弓形虫核酸的特异敏感方法。检测7株弓形虫株及临床疑似弓形虫病患者样本,均出现特异扩增带,而其它8种病原体以及正常人及动物的DNA均未见特异扩增带。扩增产物用地高辛素标记作探针,与以上出现特异扩增带的DNA模板能斑点杂交,而与无扩增带的其余模板DNA无斑点杂交。结果显示,该引物具有高度的保守性及特异性。在含105个人白细胞中,可检测到2个弓形虫DNA或1pgDNA。并通过人工感染弓形虫鼠血样品的检测表明,所建立的聚合酶链反应体系具有高度的敏感性,能早期检出弓形虫感染样品,在弓形虫病的临床诊断中具有重要的应用价值。 相似文献
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原位PCR技术检测石蜡包埋肝组织中HBV DNA 总被引:2,自引:0,他引:2
采用原位PCR技术对22例石蜡包埋肝组织中HBV DNA进行检测,并与提取组织DNA PCR技术及原位杂交技术进行比较。结果表明,22例标本经原位PCR检测有9例为阳性;经提取组织DNA PCR检测有7例阳性,两者敏感性相近,符合率达80%;经原位杂交检测有4例阳性,其敏感性只及原位PCR的44%。提示原位PCR是项快速、敏感及特异性较高的检测技术。 相似文献
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THE POTENTIAL USES OF GENOTYPING OF PLASMODIUMFALCIPARUMISOLATESBYTHENESTEDPOLYMERASECHAINREACTION 总被引:1,自引:0,他引:1
巢式PCR方法被应用于泰国疟区(Borai)恶性疟原虫的基因分型。应用特异的等位基因引物扩增了恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1(MSP1)基因的1、4变异多态区。以凝胶电泳分析扩增的目的基因片段。结果表明:共分别检测出恶性疟原虫6个MAD20等位基因型、4个K1和1个RO33等位基因型。在9个月的流行季节,上述虫株的等位基因频率没有明显的改变,关存在较高程度的恶性疟原虫不同等位基因株的混合感染。本文进一步阐明了巢式PCR技术在疟疾流行病学上的应用前景及优点。 相似文献
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选用与A组人类轮状病毒(HumanRotavirus,HRV)编码VP7蛋白的第9(或8)基因片段中保守序列互补的两个引物,建立检测A组HRVRNA的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,扩增产物片段约342bp。经检测35例无腹泻症状新生儿129份粪便标本,并与聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)方法进行比较,结果前者检出HRV核酸77份(59.69%),而后者则检出49份(37.98%),PCR结果可能比较接近新生儿排泌轮状病毒的实际情况。 相似文献
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聚合酶链反应快速诊断结核病的应用研究 总被引:3,自引:0,他引:3
应用聚合酶链反应(PCR)技术建立了扩增结核杆菌特异重复序列IS6110部分基因的方法。对9种抗酸分枝杆菌、3种普通菌进行检测,结果仅人型结核杆菌、牛型结核杆菌及BCG扩增出123bp特异性条带,PCR产物经SalⅠ酶切后产生70bp与53bp两个片段。PCR检测人型结核杆菌的敏感性达10fgDNA或5个菌体。应用PCR检测了109份结核临床标本,其总阳性率为72.5%,明显高于抗酸染色涂片(2.8%)与细菌培养(9.2%)的阳性率(P<0.001)。PCR的检出率也较ELISA法检测抗PPD-IgG的阳性率(63.3%)为高,但尚无统计学差异(p>0.05),但是ELISA检测抗体有19.0%的假阳性。研究表明,PCR是一种特异、敏感、快速诊断结核病的方法。 相似文献
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用PCR技术产前诊断人巨细胞病毒感染 总被引:3,自引:0,他引:3
用ELISA法筛选早孕妇女血人巨细胞病毒IgM(HCMV-IgM),在孕12 ̄20周用聚合酶链式反应(PCR)技术检测其羊水中HCMV-DNA,对胎儿巨细胞病毒感染作出产前诊断。在384例孕妇中,筛选出血HCMV-IgM阳性26例为实验组,其羊水HCMV-DNA检出率为34.62%;从258例HCMV-IgM阴性中选出20例为对照组,其羊水HCMV-DNA检出率为10.0%,两组比较有显著性差异( 相似文献
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从常规保存的骨髓涂片抽提DNA为模板,应用聚合酶链反应(PCR)技术检测多发性骨髓瘤(MM)与反应性浆细胞增多症(RP)IgH基因重排方式。结果36例MM中有29例呈单克隆IgH基因重排,8例RP均呈多克隆重排。表明该方法有助于鉴别MM与RP,结合临床其他资料,可作为临床上MM早期诊断及不典型MM诊断的手段,具有临床应用价值。 相似文献