Ⅰ型变态反应动物模型内源性抗IgE抗体的诱导及其对血清IgE水平的抑制作用

２５只白兔用卵清蛋白为抗原经全身和鼻粘膜局部免疫，４ｗ后其中１７只动物血清卵清蛋白特异性ＩｇＥ抗体上升到免疫前的５倍以上，并经抗原刺激鼻粘膜诱发出打喷嚏样反应、流清涕等变应性鼻炎样临床症状。这１７只动物用作Ⅰ型变态反应动物模型，其中９只进一步用制备的异种基因型ＩｇＥＦｃε片段为抗原免疫。２ｗ后在血清中检测到较高浓度的抗ＩｇＥ抗体，同时伴有血清总ＩｇＥ抗体浓度下降，上述变化持续观察１０ｗ无明显改变。提示异常增高的ＩｇＥ抗体水平可通过诱导机体产生内源性抗ＩｇＥ抗体的方式抑制。     

分泌抗登革病毒单抗独特型抗体杂交瘤细胞系的建立

将纯化的登革３型病毒（ＤＥＮ－３）单克隆抗体３Ｄ３（ＡｂＩ）连结到载体分子ＫＬＨ上，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞融合。用ＥＬＩＳＡ夹心法检测阳性克隆，融合率达１００％，阳性率为５％，经２～３次克隆化，获得了６株分泌抗登革病毒单抗的独特型抗体（ＭｃＡｂ２）的杂交瘤细胞系。在进行阳性筛选及特异性鉴定时，选择了以３～５μｇ／ｍｌ的最适Ａｂ１包被浓度，并用正常小鼠Ｉｇ及ＫＬＨ分别包被反应板作对照，以排除其抗异种免疫球蛋白的干扰。     

合成人IgE肽抗血清抑制I型变态反应的实验研究

作者设计合成了５个人ＩｇＥ多肽片段，分别交联载体蛋白后免疫小鼠，诱生的抗血清２个在ＥＬＩＳＡ中对人与鼠ＩｇＥ分子有交叉反应，３个无反应，５个抗血清均显示有中等程度的被动皮肤过敏反应（ＰＣＡ）抑制作用，被测试的２个抗血清在大鼠肥大细胞被协致敏试验中也显示了抑制作用，研究结果初步表明，采用人ＩｇＥ分子受体结合部位的适当残基序列合成肽疫苗，免疫动物所诱导的抗体可抑制１型变态反应。     

基因免疫诱导9.1C3分子因影像类抗独特型抗体的产生

本文分别采用真核表达载体ｐＥＦ－ＢＯＳ及ｐＣＭＶ４构建含起始码和终止码的抗９．１Ｃ３分子单隆抗全重链可变区基因重组表达质粒９．１Ｃ３ＶＨｐＥＦ－ＢＯＶ及９．１Ｃ３ＶＨｐＣＭＶ４，并将其分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。取免疫小鼠血清对Ｋ５６２细胞进行间接免疫染色和流式细胞仪表明，其因免疫小鼠体内可诱导９．１Ｃ３分子内影像８类抗独特型抗体的产生。     

内源性IL-12决定人PBMC产生干扰素γ的水平(英)

目的：ＩＦＮ－γ是由被有丝分裂原或抗原所激活的Ｔ细胞和ＮＫ细胞所产生，它具有广泛的免疫调节活性，现认为ＩＬ－１２（外源性）是诱导 ＩＦＮ－γ产生的强诱导剂，并可促进静息 ＣＤ４＋Ｔ细胞朝向 Ｔｈ１表型分化，即诱导细胞免疫。目的是为了解由ＰＢＭＣ产生的内源性ＩＬ－１２是否在体外可诱导ＩＦＮ－γ的产生及通过何机制诱导细胞免疫。方法：用抗ＣＤ３抗体、ＰＨＡ、抗ＣＤ３抗体加抗ＣＤ２８抗体和抗原（ＭＬＣ）来检测被刺激的ＰＢＭ细胞的ＩＦＮ－γ的产生，同时也用ＩＬ－１２和ＩＬ－１２Ｒβ１的中和抗体来抑制ＩＦＮ－γ的产生。结果：激活的人ＰＢＭ中ＩＦＮ－γ分泌依赖于内源性ＩＬ－１２的产生，而且激活的Ｔ细胞可诱导ＡＰＣ细胞产生ＩＬ－１２，此过程是通过Ｔ细胞表面的ＣＤ４０Ｌ和ＡＰＣ的ＣＤ４０相互作用而实现。结论：这些结果提示，内源性ＩＬ－１２在正常宿主抗细胞内抗原的感染反应中起重要作用，在某些形式的自身免疫性疾病和移植排斥反应的免疫病理发生中也起中心作用。     

活化淋巴细胞及其染色质诱导IgG1亚类抗双链DNA抗体生成

目的：抗双链ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）抗体的诱生机理不明，试图研究诱导该自身抗体产生的自身抗原。方法：取体外活化的Ｂａｌｂ／ｃ小鼠脾细胞及其染色质免疫同系小鼠，用ＥＬＩＳＡ方法检测ＩｇＧ类双链ＤＮＡ抗体及其ＩｇＧ亚类。结果：水同原因活化的脾细胞及其染钯质均可诱导ＩｇＧ类抗双链ＤＮＡ抗体产生，且抗体均为ＩｇＧ１亚类。结论：活化淋巴细胞及其活性染色质是诱导双链ＤＮＡ抗体生成的自身免疫原。     

活化淋巴细胞及其染色质诱导抗核抗体生成

目的诱导抗双链ＤＮＡ抗体和其它抗核抗体生成的免疫原是什么？迄今不明。本研究试图阐明不同原因活化的淋巴细胞是诱导抗核抗体生成的免疫原。方法用丝裂原（ＣｏｎＡ／ＬＰＳ）或ＩＬ－２活化淋巴细胞及其染色质免疫同系ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，用ＥＬＩＳＡ测定ＩｇＧ抗ｄｓＤＮＡ抗体，用免疫荧光法检测抗核抗体核型和免疫复合物沉积，用免疫印迹法测定抗Ｓｍ和抗ＲＮＰ等抗核抗体。结果上述原因活化的淋巴细胞及其活性染色质均能诱导抗双链ＤＮＡ抗体和其它抗核抗体生成，免疫小鼠的肾脏有显著的免疫复合物沉着。结论据本文结果推测活化淋巴细胞及其细胞核和染色质是诱发抗ｄｓＤＮＡ抗体和其它抗核抗体生成的免疫原。     

分泌抗登革病毒单抗独特型抗体杂交瘤细胞系的建立

将纯化的登革３型病毒（ＤＥＮ－３）单克隆抗体３Ｄ３（ＡｂＩ）连结到载体分子ＫＬＨ上，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞融合。用ＥＬＩＳＡ夹心法检测阳性克隆，融合率达１００％，阳性率为５％，经２－３次克隆化，获得了６株分泌抗登革病毒单抗的独特型抗体（ＭｃＡｂ２）的杂交瘤细胞系。在进行阳性筛选及特异鉴定时，选择了以３－５μｇ／ｍｌ的最适Ａｂ１包被浓度，并用正常小鼠Ｉｇ及ＫＬＨ分     

抗CD3单抗对T细胞的作用

抗ＣＤ３单抗可作为一种免疫调节剂对Ｔ细胞的多种功能产生调节作用，它与ＩＬ－２具协同作用，诱导Ｔ细胞扩增，增强胞毒活性，体内转输ＣＤ３－ＡＫ细胞能降低肿瘤的转移和生长，高剂量的抗ＣＤ３单抗具有免疫抑制作用。该抗体对Ｔ细胞的作用机制目前尚不十分清晰，可能与磷酸肌醇，细胞内Ｋ＾＋、Ｃａ＾＋浓度的变化以及ＩＬ－１，ＩＬ－６和ＩＬ－２的级联相关作用有关。     

I型变态反应动物模型内源性抗体IgE抗体的诱导及其对血清Ig…

２５只白兔用卵清蛋白为抗原经全身和鼻粘膜局部免疫，４ｗ后其中１７天动物血清卵清蛋白抗特异性ＩｇＧ抗体上升到免疫前５倍以上，并经抗原刺激鼻粘膜诱发出喷样反应。流清涕等变应性鼻炎临床症状，这１７只动物用作Ｉ型变态反应动物模型，其中９只进一步用制备的异种基因型ＩｇＥＦｃ片段为抗原免疫，２ｗ后在血清中检测到较高浓度的抗ＩｇＥ抗体，同时伴有血清部ＩｇＥ抗体浓度下降，上述变化持续观察１０ｗ无明显改变，提示异常     

Calculation of monoclonal antibody affinity constants directly from antibody dilution curves

A method for estimating the affinity constants of monoclonal antibody directly from antibody dilution curves is described.     

治疗性抗体的改造

市场上已有18个被FDA批准的单克隆抗体,它们用于治疗如肿瘤、移植排斥、自身免疫病、病毒感染等人类疾病。治疗性抗体代表了生物制药业发展最快的领域之一。随着技术的发展,各种形式的工程抗体被构建来改善它们的特性和效能,包括:鼠抗体人源化,提高生物学活性,如亲和力成熟,改进效应功能,改善药代动力学。文章评述了这一领域的最新进展,同时也讨论了工程抗体的免疫原性和亲和力。     

A rapid method for the determination of antibody affinity

A rapid method for estimating antibody affinity is described. To perform the assay fixed amounts of radiolabeled antigen and antibody are mixed in different total reaction volumes. The fraction of antigen bound to antibody is measured in aliquots from each reaction volume by the ammonium sulfate precipitation technique. Affinity constants can be estimated from these data graphically or by means of a microcomputer. This method is much quicker and easier to perform than traditional techniques for estimating antibody affinity.     

免疫性抗体在不孕不育妇女诊治中的作用

目的探讨抗精子抗体（AsAb）、抗子宫内膜抗体（EMAb）、抗心磷子抗体（ACAb）和抗卵巢抗体（AO-Ab）在不孕不育过程中的作用。方法采用ELISA法检测AsAb、EMAb、ACAb和AOAb。结果AsAb阳性率为29.7%,EMAb阳性率为16.3%,ACAb阳性率为15.2%,AOAb阳性率为14.1%。结论AsAb、EMAb、ACAb和AOAb和不孕不育密切相关,对女性不孕不育有一定的诊断价值。可以作为不孕不育症妇女常规检查的项目。     

Identification of HBsAg-specific antibodies from a mammalian cell displayed full-length human antibody library of healthy immunized donor

Hepatitis B immunoglobulin (HBIG) is important in the management of hepatitis B virus (HBV) infection. Aiming to develop recombinant monoclonal antibodies as an alternative to HBIG, we report the successful identification of HBV surface antigen (HBsAg)-specific antibodies from a full-length human antibody library displayed on mammalian cell surface. Using total RNA of peripheral blood mononuclear cells of a natively immunized donor as template, the antibody repertoire was amplified. Combining four-way ligation and the Flp recombinase-mediated integration (Flp-In) system, we constructed a mammalian cell-based, fully human, full-length antibody display library in which each cell displayed only one kind of antibody molecule. By screening the cell library using fluorescence-activated cell sorting (FACS), eight cell clones that displayed HBsAg-specific antibodies on cell surfaces were identified. DNA sequence analysis of the antibody genes revealed three unique antibodies. FACS data indicated that fluorescent strength of expression (FSE), fluorescent strength of binding (FSB) and relative binding ability (RBA) were all different among them. These results demonstrated that by using our antibody mammalian display and screening platform, we can successfully identify antigen-specific antibodies from an immunized full-length antibody library. Therefore, this platform is very useful for the development of therapeutic antibodies.     

抗CD3/抗CD20双特异双链抗体的生物学活性研究

目的研究抗CD3/抗CD20双特异双链抗体的生物学活性.方法采用亲和层析法纯化本室构建的抗CD3/抗CD20双特异双链抗体可溶性表达产物,并用SDS-PAGE,Westernblot和分子排阻层析鉴定纯化产物;采用FACS法和玫瑰花环试验测定纯化产物与靶细胞的结合活性;采用3H-TdR掺入实验和51Cr释放试验测定该双特异双链抗体的生物学性质.结果纯化的抗CD3/抗CD20双特异双链抗体具有与Jurkat(CD3+)和Daudi细胞(CD20+)的结合活性,且能同时与Jurkat和Daudi细胞结合形成玫瑰花环,并能竞争性封闭亲代鼠源性抗体HIT3a和HI47与Jurkat和Daudi细胞的结合位点;该双特异双链抗体具有促有丝分裂原作用和介导激活的T细胞杀伤Daudi细胞的活性.结论抗CD3/抗CD20双特异双链抗体具有与亲代鼠源性抗体HIT3a和HI47相同的性质,且能介导激活的T细胞杀伤表达CD20抗原的肿瘤细胞,是一个有望用于B细胞恶性肿瘤临床治疗的双特异性抗体.     

微型双功能抗体抗CD3／抗CD20的构建和表达

目的：构建和表达抗CD3／抗CD20微型双功能抗体,并测定微型双功能抗体的生物学活性。方法：采用PCR和overlap PCR方法构建抗CD3／抗CD20微型双功能抗体,并用双脱氧终止法测定DNA序列;采用亲和层析法纯化该产物,并用Western blot和分了排阻层析鉴定纯化产物;采用FACS法和玫瑰花环试验鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性。结果：DNA序列测定结果表明：抗CD3／抗CD20微型双功能抗体已构建成功,表达可溶性产物的产量达1mg/ml以上,纯化产物中二聚体的比例达90％,具有与Jurkat(CD3^ 0和Daudi细胞（CD20^ ）结合的活性,且能同时与Jurkat和Daudi细胞结合形成玫瑰花环。结论：利用Diabody形式,首次成功地构建了抗CD3／抗CD20微型双功能抗体,并获得较高表达,表达产物具有与相应2个靶抗原结合的活性。     

单克隆的抗-HBs在同系鼠体内诱导抗-HBs的观察

作者采用BALB/c鼠的抗-HBs单克隆抗体(Ab_1)作为抗原,免疫同系BALB/c小鼠,使其在自身体内产生Ab_2,观察了由Ab_2诱导的Ab_3的消长情况。经测定其血清,免疫小鼠在第7天出现Ab_2,随后第9天、第19天出现Ab_2的显著增高。Ab_3的出现是在第9天,随后在第11天,第17天和第21天出现增高现象。Ab_2与Ab_3的量的变化,呈周期性消长。一般说来,当Ab_2增高时,Ab_3减低;若Ab_2降低,则Ab_3增高。实验过程中,还发现Ab_3能与外界进入体内的HBsAg结合。上述实验中出现的Ab_2和Ab_3之间的相互刺激和相互中和的现象,表明是小鼠体内自身的抗个体型抗体的调节作用的结果,因而出现了上述周期性的动态变化,支持体内存在着一个个体型——抗个体型免疫网络的理论,本文依据实验事实,认为传统的被动免疫方法,在一定条件下,也能诱导出主动免疫。     

反复自然流产的免疫因素分析探讨

为分析探讨反复自然流产的免疫性因素，应用补体微量淋巴细胞毒实验方法检测女性反复自然流产的封闭抗体，用ELISA法检测女性反复自然流产的抗心磷脂抗体(ACA)、抗精子抗体(ASA)共752例。结果显示，封闭抗体与反复自然流产明显相关，抗心磷脂抗体与反复自然流产有一定关系，抗精子抗体与反复自然流产无明显相关。研究表明，封闭抗体、抗心磷脂抗体是造成反复自然流产的重要免疫因素。     

抗核抗体核型分布及核型与特异性抗体相关性分析

目的通过对ANA核型分布及核型与特异性抗体相关性分析,为临床对ANA和ANA谱检测结果判读提供参考。方法用间接免疫荧光法检测ANA,免疫印迹法检测ANA谱,对449例ANA或ANA谱阳性的结果进行核型和特异性抗体分析。结果 ANA核型分布以核颗粒型为主,占78.2%;核型与特异性抗体有一定的相关性,但同一种自身抗体可出现不同的荧光核型。结论 ANA和ANA谱同时检测能提高AID的检出率,有助于准确的判断特异性抗体,对AID的诊断、病情监测、预后判断有十分重要的作用。