不耐热肠毒素和耐热肠毒素基因的融合

用重组基因技术将产肠毒素大肠杆菌（ＥＴＥＣ）的耐热肠毒素（ＳＴａ）基因与不耐热肠毒素Ｂ亚单位（ＬＴ－Ｂ）基因融合。表达的ＬＴＢ／ＳＴａ融合蛋白，既有ＬＴ－Ｂ的抗原性又有ＳＴａ的抗原性。由于基因融合的方式不同，对ＳＴａ的抗原性影响很大，但对ＬＴ－Ｂ的抗原性没有影响。ＬＴ－Ｂ／ＳＴａ融合多肽保留了ＥＴＥｃ肠毒素结合ＧＭ－１神经节甙酯的能力，却仍具有ＳＴａ的生物毒性。     

产毒性大肠杆菌肠毒素对及豚鼠回肠上皮细胞的影响

产毒性大肠杆菌 (ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ,ＥＴＥＣ)是引起人和家畜急性腹泻病的主要病原菌之一[1] 。ＥＴＥＣ的致病主要与肠毒素有关。它能产生两类肠毒素 :不耐热肠毒素(ｈｅａｔ ｌａｂｉｌｅｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ ,ＬＴ)和耐热肠毒素 (ｈｅａｔ ｓｔａｂｌｅｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ,ＳＴ)。为进一步探讨ＥＴＥＣ肠毒素的作用机制 ,本研究观察了ＬＴ和ＳＴ对豚鼠离体回肠上皮细胞的影响。1　材料与方法1 1　豚鼠 :为非纯种短毛白色豚鼠 ,体重 35 0～ 45 0ｇ ,雌雄不限 ,由本校动物所提供。1 2…     

应用非放射性标记探针测定小肠结肠炎耶氏菌新亚型耐热肠毒素

由致病性小肠结肠炎耶氏菌产生的耐热肠毒素（Ｙ－ＳＴ）至少有三个亚型（Ｙ－ＳＴａ，Ｙ－ＳＴｂ，Ｙ－ＳＴｃ），但以Ｙ－ＳＴａ型多见。我们构建了０．２５ｋｂ的Ｙ－ＳＴａＤＮＡ克隆片段，经用辣根过氧化酶标记后，具特异性。１９株我国分离的致病性小肠结肠炎耶氏菌由乳鼠试验结果显示均可产生Ｙ－ＳＴ。但用此酶标记Ｙ－ＳＴａＤＮＡ探针测定，仅１３株呈杂交反应，表明携带Ｙ－ＳＴａ基因；其余６株均为阴性反应，免疫学试验显示１株产生Ｙ－ＳＴｂ，另外５株产Ｙ－ＳＴｃ。产生耐热肠毒素的大肠杆菌及非０１霍乱弧菌等也不与此探针杂交。     

产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素 B 亚单位基因克隆及表达

产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素Ｂ亚单位基因克隆及表达王万胜方利君王顺林蒋惠秋李宏年顾健人产毒性大肠杆菌（ＥＴＥＣ）是发展中国家婴幼儿腹泻的重要致病原。其产生的不耐热肠毒素（ＬＴ）是其重要致病因素。ＬＴ由一个活性中心Ａ亚单位和５个毒素受体结合点Ｂ亚单位组成...     

人细胞色素P4502B6的GST融合蛋白及其抗体的制备

目的：获得纯化抗原用于制备ＣＹＰ２Ｂ６多克隆抗体方法：ＰＣＲ扩增目的基因片段,亚克隆入融合蛋白表达载体ＰＧＥＸ－３ｂ,构建了重组质粒ＰＧＥＸ／２Ｂ６。然后将该重组质粒转化大肠杆菌ＤＨ５α,ＩＰＴＧ诱导表达,ＳＤＳ＿ＰＡＧＥ分离,获纯化融合蛋白ＧＳＴ－２Ｂ６。用ＧＳＴ－３Ｂ２免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,自腹水中获取ＣＹＰ２Ｂ６多克隆抗体。结果：融合蛋白ＧＳＴ－２Ｂ６（ＣＹＰ２Ｂ６２０２￣３５２ａａ）,并获     

分泌抗金黄色葡萄球菌C1型肠毒素杂交瘤细胞系的建立及初步应用

应用常规方法建立了３株稳定分泌抗金黄色葡萄球菌Ｃ１型肠毒素（ＳＥＣ１）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系Ｂ３、Ｃ４和Ｇ８。其中Ｂ３和Ｃ４均为ＩｇＧ１（ｋ），Ｇ８为ＩｇＧ２ａ（ｋ）。Ｂ３和Ｇ８与ＳＥＡ，ＳＥＢ及ＳＥＤ均无交叉反应；Ｃ４虽与ＳＥＡ和ＳＥＤ无交叉反应，但与ＳＥＢ有交叉反应。间接ＥＬＩＳＡ测定小鼠腹水效价为１０＾－５～１０＾－８。应用识别不同表位的ＭｃＡｂ建立了双ＭｃＡｂ夹心ＥＬＩＳ     

使用神经网络检测心电图(ECG)“左心室劳损”

使用神经网络检测心电图（ＥＣＧ）“左心室劳损”［英］／ＢｅｖｉｎｅＢ…／／ＭｅｄＢｉｏｌＥｎｇＣｏｍｐｕｔ．－１９９３，Ｊｕｌｙ．－３４３本文研究了利用人工神经网络对ＥＣＧ的ＳＴ—Ｔ段异常的分类。我们从１０５例ＥＧＣ中选出３５６个侧导联的数据组成训练...     

肠毒素大肠杆菌耐热肠毒素与谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白的制备和耐热肠毒素抗体测定

目的：弥补ST的弱抗原性，实现ST抗体测定。方法：采用生物工程技术，融合表达GST和带有前导序列的突变耐热肠毒素proSTm，制备ST融合蛋白，测定ST抗体。结果：测到了抗ST的血清IgG和黏膜IgA。结论：融合蛋白GST／proSTm能有效提高ST的抗原活性，可直接用于ST抗体测定。     

hIL—13融合表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

通过ＲＴ－ＰＣＲ技术直接从激活的健康人外周血单个核细胞（ＨＰＢＭＣ）中扩增出的０．３ｋｂ的ｈＩＬ－１３基因片段，经ＤＮＡ重组技术，插入到融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－２中，转化入感受态的大肠杆菌ＴＧ１中，成功地构建了ｈＩＬ－１３的基因工程表达菌株ｈＩＬ－１３「ｐＧＥＸ－４Ｔ－２／ＴＧ１。经异丙基硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导后表达的ＧＳＴ－ＩＬ－１３融合蛋白经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证明分子量约３６ｋＤ、     

球孢菌素对超抗原SEB致小鼠肝损伤的保护作用

用超抗原葡萄球菌肠毒素Ｂ（ＳＥＢ）、Ｄ－氨基半乳糖（Ｄ－ＧａｌＮ）混合腹腔注射Ｂａｌｂ／ｃ小鼠及预先注射环孢菌素（ＣＳＡ）的小鼠，动态观察小鼠肝细胞变化和血清ＴＮＦ，ＩＦＮ－γ水平及及小鼠死亡率。结果发现ＳＥＢ＋Ｄ－ＧａｌＮ注射后２ｈ、６ｈ时出现肝细胞凋亡，１２ｈ后出现肝坏死，小鼠２４小时死亡率达５０％。小鼠血清ＴＮＦ２ｈ升到最高，ＩＦＮ－γ在６－１２ｈ较高。而预注ＣＳＡ的小鼠上述指标正常。推测Ｓ     

汉防已甲素对大鼠实验性脑梗塞的影响

目的和方法：选用热凝造成大脑中动脉阻断（ＭＣＡＯ）而致实验性大鼠脑局灶性缺血模型，观察汉防己甲素（ｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅ，ＴＥＴ）对大鼠脑局灶性缺血的防治作用。结果：ＴＥＴ组用药七天，脑梗塞范围明显小于缺血组，缺血区脑组织Ｃａ２＋、Ｎａ＋、过氧化脂质（ＬＰＯ）、血浆血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）明显低于缺血组，而超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）明显高于缺血组，６－酮－前列腺素Ｆ１α（６－ｋｅｔｏＰＧＦ１α）无显著改变，ＴＸＢ２／６－酮（Ｔ／Ｋ）比值明显低于缺血组。结论：ＴＥＴ具有对大鼠ＭＣＡＯ局灶性脑缺血有效的防治作用，其机制可能与减少脑组织缺血区Ｃａ２＋、Ｎａ＋、ＬＰＯ含量，降低ＴＸＢ２，使Ｔ／Ｋ比值趋于正常有关。     

花生四烯酸产物对系膜细胞增殖作用的研究

用［３Ｈ］胸腺嘧啶核甙（［３Ｈ－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ，［３Ｈ］－ＴｄＲ）掺入法测定花生四烯酸产物对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞的增殖作用。前列腺素Ｅ２（ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ，ＰＧ）抑制血清所致的系膜细胞增殖。血栓素Ａ２（ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ，Ｔｘ）类似物Ｕ４６６１９、白三烯（ｌｅｕｋｏｔｕｉｅｎｅ，ＬＴ）Ｃ４、ＬＴＤ、１２－羟二十碳四烯酸（１２－ｈｙｄｒｏｘｙｅｉｃｏｓａｔｅｔｒａｅｎｏｉｃａｃｉｄ，１２－ＨＥＴＥ）、１５－ＨＥＴＥ促进静息的系膜细胞增殖，ＬＴＢ４及５－ＨＥＴＥ无此作用。用特异性蛋白激酶Ｃ（ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ，ＰＫｃ）抑制剂可抑制Ｕ４６６１９、ＬＴＣ４、ＬＴＤ４及１２－ＨＥＴＥ的促增殖作用。ＰＧＦ２α、Ｕ４６６１９、ＬＴＣ４、ＬＴＤ４促进系膜细胞合成二脂酰甘油（ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ，ＤＡＧ）。ＰＧＦ２α及ＬＴＤ４刺激系膜细胞合成三磷酸肌醇（ｉｎｏｓｉｔｏｌｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ＩＰ３）。提示部分花生四烯酸产物活化ＰＫＣ而促进系膜细胞增殖。     

内皮素对成年鼠离体心室肌细胞内游离钙浓度的影响及机制

目的和方法：采用分离的Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠心室肌细胞,以Ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光指示剂负载,检测心肌细胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）变化,探讨内皮素－１（ＥＴ－１）对［Ｃａ２＋］ｉ的作用及其机制。结果：ＥＴ－１（１×１０－７ｍｏｌ／Ｌ）引起［Ｃａ２＋］ｉ升高分两个时相：快速相和持续相,可被ＥＴＡ的特异性受体阻断剂ＢＱ１２３（２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ）所阻断。移去细胞外液钙以及用百日咳毒素（２００ｎｇ／ｍＬ）处理１０ｈ后,ＥＴ－１仍引起快速相,但持续相消失。Ｒｙａｎｏｄｉｎｅ（４μｍｏｌ／Ｌ）和异搏定（２×１０－５ｍｏｌ／Ｌ）对ＥＴ－１诱导［Ｃａ２＋］ｉ升高的作用无显著影响。结论：ＥＴ－１升高［Ｃａ２＋］ｉ是通过ＥＴＡ受体介导;快速相［Ｃａ２＋］ｉ升高主要由胞内Ｒｙａｎｏｄｉｎｅ不敏感的钙池释放造成,与百日咳毒素敏感的Ｇ蛋白无关;持续相［Ｃａ２＋］ｉ升高主要由胞外Ｃａ２＋内流引起,不是通过电压依赖性Ｌ－型钙通道介导,与百日咳毒素敏感的Ｇ蛋白有关     

应用非放射性标记探针测定小肠结肠炎耶氏菌新亚…

由致病性小肠结肠炎耶氏菌产生的耐热肠毒素（Ｙ－ＳＴ）至少有三个亚型（Ｙ－ＳＴａ，Ｙ－ＳＴｂ，Ｙ－ＳＴｃ），但以Ｙ－ＳＴａ型多见。我们构建了０．２５ｋｂ的Ｙ－ＳＴａＤＮＡ克隆片段，经用辣根过氧化酶标记后，具特异性。１９株我国分离的致病性小肠结肠炎耶氏菌由乳鼠试验结果显示均可产生Ｙ－ＳＴ。但用此酶标记Ｙ－ＳＴａＤＮＡ探针测定，仅１３株呈杂交反应，表明携带Ｙ－ＳＴａ基因；其余６株均为阴性反应，免疫学试验     

HCV替代HBV作为慢性肝炎继续的原因

ＨＣＶ替代ＨＢＶ作为慢性肝炎继续的原因［英］／ＬｉａｗＹＦ…／／Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇ．－１９９４，１０６（４）．－１０８４～１０５３在慢性ＨＩＳＶ感染中，自发性ＨＢｓＡｇ清除是一种不常见事件。在ＨＢｓＡｇ清除后，血清ＡＳＴ和ＡＬＴ通常正常化...     

STUDY AND APPLICATION OF BELT MULTI-POINT PULSE THERAPEUTIC APPARATUS

ＳＴＵＤＹＡＮＤＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＯＦＢＥＬＴＭＵＬＴＩ－ＰＯＩＮＴＰＵＬＳＥＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＡＰＰＡＲＡＴＵＳＪｉａＸｕｅＱｉ１，ＧｕｏｓｈｅｎｇＹａｎｇ，ＹｉｎｇＣｈｅｎＺ，ＹｕｍｅｉＤｏｎｇ，ＢｉｎｇｅＦｕ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢ...     

SLE病人外周血Bcl—2／JH基因重排检测的意义

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测３１例ＳＬＥ病人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）Ｂｃｌ－２／ＪＨ基因重排现象和流式细胞仪间接双标记法分析其Ｔ（ＣＤ３）、Ｂ（ＣＤ１９）细胞Ｂｃｌ－２蛋白的表达。结果显示，ＳＬＥ病人Ｔ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达明显高于正常人（４２．９５％±２８．４７％对比９．９４％±４．９６％，Ｐ＝０．０００４），尤其以活动期ＳＬＥ病人为明显，而Ｂ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达与正常人之间并无统计学差异（７９．２１％±１０．６９％对比８１．９６％±６．９７％；Ｐ＝０．４６０２）。７例ＳＬＥ病人具有典型的Ｂｃｌ－２／ＪＨ基因重排（占２２．５８％），且均为ＳＬＥ活动期病人，其Ｔ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达明显高于无基因重排的ＳＬＥ病人，其Ｂ细胞Ｂｃｌ－２表达并无差异（Ｐ＞０．３９０５）。说明Ｂｃｌ－２／ＪＨ基因重排现象可见于ＳＬＥ，并与Ｔ细胞Ｂｃｌ－２蛋白高表达有关，表明细胞凋亡抑制基因Ｂｃｌ－２在ＳＬＥ发病机制中具有重要作用。     

恶性疟原虫疫苗研究VⅡ.PfCMR基因与人白细胞介素—2基因…

用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ和Ｓａｌｌ将恶性疟原虫复合抗原基因ＰｆＣＭＲ从质粒ＰＷＲ４５０－１／ＰｆＣＭＲ中切下，插入质粒ＰＢＶ２２０／ＩＬ－２中人白细胞介素－２（ＩＬ－２）基因的ＥｃｏＲＩ位点，重组质粒转化大肠杆菌ＤＨ５ａ，通过ＰＣＲ扩增和酶切鉴定，筛选出自向插入的重组载体ＰＢＶ２２０／ＰｆＣＭＲ－ＩＬ－２。为表达ＰｆＣＭＲ－ＩＬ－２融合蛋白打下基础。     

恶性疟原虫疫苗研究VIPfCMR基因与人白细胞介素-2基因的连接与克隆

用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ和ＳａｌＩ将恶性疟原虫复合抗原基因ＰｆＣＭＲ从质粒ｐＷＲ４５０－１／ＰｆＣＭＲ中切下，插入质粒ｐＢＶ２２０／ＩＬ－２中人白细胞介素－２（ＩＬ－２）基因的ＥｃｏＲＩ位点。重组质粒转化大肠杆菌ＤＨ５ａ，通过ＰＣＲ扩增和酶切鉴定，筛选出正向插入的重组载体ｐＢＶ２２０／ＰｆＣＭＲ－ＩＬ－２。为表达ＰｆＣＭＲ－ＩＬ－２融合蛋白打下基础。     

CAAT／增强子结合蛋白在IL—6调节血管紧张素原基因表达中的作用

目的血管紧张素原是血管活性多肽－血管紧张素Ⅱ的唯一前体，又是急期蛋白之一。因此，研究ＩＬ－６调节血管紧张素原基因表达对阐明人体感染时血浆血管紧张素Ⅱ水平增加致高血压有重要意义。方法应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交技术检测了ＩＬ－６刺激的肝癌细胞Ｈｅｐ３Ｂ中血管紧张素原ｍＲＮＡ，并且进一步通过ＤＮＡ－蛋白质电泳泳动漂移、ＤＮＡ重组和瞬时转染技术分析了人血管紧张素原基因５′端侧翼序列－５６８位置的一个ＩＬ－６反应元件同源序列（ＨＡＧＩＬ－６ＲＥ）。结果ＩＬ－６使血管紧张素原ｍＲＮＡ明显提高，位于血管紧张素原基因启动子中的ＨＡＧＩＬ－６ＲＥ结合于转录因子ＣＡＡＴ／增强子结合蛋白（Ｃ／ＥＢＰ）；将多拷贝的ＨＡＧＩＬ－６同ＴＫ核心启动子连接，再与氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）基因融合，构成异源表达载体，转染ＨｅｐＧ２细胞，发现ＩＬ－６增强Ｃ／ＥＢＰα的作用活性。结论Ｃ／ＥＢＰ在ＩＬ－６诱导血管紧张素原基因表达中具有调节作用。