丙型肝炎病毒血清学分型与基因分型研究

为了解某农村单采浆供血员人群所感染丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的血清型和基因型构成，并对两种分型方法进行比较，本工作以ＨＣＶＣ区型特异性多肽对抗－ＨＣＶ进行血清学分型，对已确定血清型的血清进行５′非编码区（ＮＣＲ）逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）和限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析以确定基因型，并对６份扩增产物进行序列测定。结果显示１４０份抗－ＨＣＶ阳性血清中，血清Ⅰ型和Ⅱ型分别为４４份（３１．４３％）和１２份（８．５７％），余８４份未能分型。４４株已知血清型的ＨＣＶ中，１ｂ、２ａ和３ｂ等３种基因型分别为３４株（７７．２７％）、９株（２０．４５％）和１株（２．２７％）。两种分型方法一致率为９３．１８％（４１／４４）。对６株ＨＣＶ５′ＮＣＲ的序列分析证实了ＲＦＬＰ分型的正确性。结论认为该人群ＨＣＶ感染以血清Ⅰ型或基因１ｂ型为主；Ｃ区型特异性多肽血清学分型法与ＲＦＬＰ基因分型法符合率高，具有一定应用价值。     

肝细胞肝癌中丙型肝炎病毒C区、E区、NS3区、NS4区抗原的表达

本文报道研究丙型肝炎病毒抗原在肝细胞肝癌组织内的定位分布情况。以丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的Ｃ、Ｅ、ＮＳ３、ＮＳ４区四种单克隆抗体用免疫组化方法检测了１３９例肝细胞肝癌（ＨＣＣ）的肝脏标本，结果总的阳性率为１５．１％。２１例阳性标本中，Ｃ区单抗检测阳性占８０．９％（１７／２１），Ｅ区占３３．３％（７／２１），ＮＳ３、ＮＳ４区均占５７．１％（１２／２１），表明应用多区段单抗有助于提高ＨＣＶ抗原的检出率。阳性物质主要存在于胞浆中，呈细、粗颗粒及块状，３例出现膜及膜下型，１例核内有阳性反应。ＨＣＶ感染与ＨＣＣ的发生发展有一定的关系。     

从四例丙肝患者系列血清标本分析HCV基因的变异

目的 研究丙型肝炎病人系列血清标本的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因型变化及ＨＣＶ膜区基因变异和“准种”现象。方法 对４例因献血感染ＨＣＶ病人的系列血标本，用特异性引物ＰＣＲ扩增检测，５’－ＮＣＲ和核心区测序确定ＨＣＶ基因莳工对标本膜区基因进行克隆重，每个标本随机选择５～９个克隆进行测序分析。结果 发现随着时间推移，存在ＨＣＶ基因型的转换现象。在２种ＨＣＶ基因型转换期存在混合感染。所有测定序列均为１ｂ或     

线探针核酸杂交分析贵州地区HCV感染株基因型

目的　分析贵州地区丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染株的基因型。方法　用第二代线探针核酸杂交方法,对９８ 例ＨＣＶ感染者血清进行基因分型。结果　１２ 例献血员血清,均为ＨＣＶ１ｂ 型;１５ 例血液病患者中,１４ 例（９３－３％ ）为ＨＣＶ１ｂ ,１ 例（６－７％ ）为ＨＣＶ１ｂ ＋ ２ 型。慢性丙肝患者３７ 例中,ＨＣＶ１ｂ 型３４例（９１－９％ ） ,混合感染基因型３ 例（ＨＣＶ１ａ ＋ １ｂ 、ＨＣＶ１ｂ ＋ ２ 、ＨＣＶ１ａ ．１ｂ ＋ ２ａ２ｃ 各１ 例）。静脉药瘾者３４ 例,其中ＨＣＶ１ｂ 感染１３ 例（３８－２％ ） ,ＨＣＶ６ａ１０ 例（２９－４％ ） ,ＨＣＶ３ｂ４ 例（１１－８％ ） ,ＨＣＶ３ａ１ 例（２－９ ％） ,混合感染６ 例（１７－６ ％） ,大多为ＨＣＶ２ 复合其他基因型。结论　贵州地区ＨＣＶ感染者中,以ＨＣＶ１ｂ 基因型为主,其次为ＨＣＶ６ａ ,尚存在ＨＣＶ３ａ 和ＨＣＶ３ｂ 。其中ＨＣＶ３ａ、３ｂ 、６ａ ,在本地区系首次报告,但主要存在于静脉药瘾者中。虽然有混合感染基因型的存在,但其基因基础需测序分析     

沈阳地区各型丙型肝炎患者丙型肝炎病毒的基因分型

目的研究沈阳地区丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因型分布状况及其临床意义。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对沈阳地区８４例血清抗－ＨＣＶ及ＨＣＶＲＮＡ均阳性的各临床型丙型肝炎患者进行ＨＣＶ基因分型。结果８４例丙型肝炎中,ＨＣＶ－Ⅱ型４５例（５３．６％）,ＨＣＶ－Ⅲ型２６例（３０．９％）,Ⅱ／Ⅲ混合型１３例（１５．５％）;ＨＣＶ不同基因型在各型丙型肝炎中总体分布不一致,经统计学处理,Ｐ＜０．０５;在急性肝炎、慢性肝炎轻度、中度、重度及肝炎后肝硬化中,ＨＣＶ－Ⅱ型感染分别占５５．６％,３６．２％,７５．０％,８５．７％及８８．９％;ＨＣＶ－Ⅲ型感染分别占２２．２％,４６．８％,８．３％,０％骸１１．１％。结论沈阳地区ＨＣＶ感染以Ⅱ型为主,其次为Ⅲ型及Ⅱ／Ⅲ混合型;ＨＣＶ基因型与丙型肝炎严重程度密切相关。     

从基因分型看血液透析及肾移植患者丙型肝炎病毒感染状况

采用国产和美国Ｏｒｔｈｏ公司第２代抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）试剂对１００例维持性血透及肾移植患者进行血清丙型肝炎病毒抗体（抗－ＨＣＶ）对比检测。阳性标本用聚合酶键反应（ＰＣＲ）法检测ＨＣＶＲＮＡ并采用型特异的ＨＣＶ亚基因探针对其非结构蛋白ＮＳＳ区扩增产物进行了杂交基因分型。结果表明，这组病人中抗－ＨＣＶ阳性率为４１％，肾移植术后再透析者达５６．５２％，且与透析时间、输血次数、受血量成正相关；国产抗－ＨＣＶ试剂同美国Ｏｒｔｈｏ公司试剂比较阳性符合率达９１．４３％；抗－ＨＣＶ阳性患者中有３１．４３％（１１／３２）血清ＨＣＶＲＮＡＮＳ５阳性；透析患者中，ＨＣＶ基因型各型均有，以混合型为主，占６３．６４％。     

丙型肝炎病毒基因酶切分型及其在干扰素治疗中的应用

为了解广州地区丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染的基因型及其与对干扰素应答效果的关系，应用逆转录－聚会酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对１３３例丙型肝炎病人血清进行ＨＣＶ５’端非编码区基因片段扩增，对１１６例阳性ＰＣＲ产物进行酶切分型。并观察了国产基因工程干扰素对其中５１例慢性丙型肝炎的疗效，结果，ＨＣＶⅡ型感染１０１例（８７．１％），Ｄ型感染１５例（１２．９％），在干扰素治疗的病例中，Ⅱ型感染（４１例）的应答率为４３．９％（１８例），其中完全应答与部分应答分别为２６．８％（１１例）和１７．１％（７例）；Ⅲ型感染（１０例）的应答率为８０％（８例），其中完全应答与部分应答分别为６０％（６例）和２０％（２例）。两组比较有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。表明ＨＣＶⅡ型感染是广州地区的优势株，Ⅲ型感染对干扰素应答较Ⅱ型敏感。     

丙型肝炎病毒基因分型及其与干扰素治疗应答的关系

目的为了解山西省丙型肝炎病毒的基因型和基因型对干扰素疗效的预示价值。方法用ＨＣＶ５’ＮＣ区酶切分型方法对９４例丙型肝炎病人进行基因分型，并观察其中４５例患者对干扰素α１ｂ治疗的应答。结果显示ＨＣＶⅠ组（Ⅰ、Ⅱ型）感染８０例（８５１％），ＨＣＶⅡ组（Ⅲ、Ⅳ型）感染１２例（１２８％），ＨＣＶⅠ／Ⅱ组混合感染２例（２１％）。在接受干扰素治疗的病例中，ＨＣＶⅠ组感染（３５例）的应答率为３７１％，持续应答率为１７１％，而Ⅱ组感染（１０例）的应答率为８０％，持续应答率为６０％，两组相比，有显著性差异（Ｐ＜００５，Ｐ＜００２５）。结论表明山西省以ＨＣＶⅠ组感染为主，干扰素对ＨＣＶⅡ组感染的疗效优于ＨＣＶⅠ组感染，ＨＣＶ基因型有预测干扰素疗效的意义。     

丙型肝炎病毒三种不同分型方法的比较

分别应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）产物酶切分型法（酶切法）、型特异引物分型ＰＣＲ法及血清丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）型特异性抗体酶联免疫测定法（ＥＩＡ），对１２０例抗－ＨＣＶ阳性患者血清进行ＨＣＶ分型检测，比较其分型结果。结果显示酶切法与ＰＣＲ法均成功地对９６例（８０％）进行分型，其中Ⅱ型８６例（８９．６％），Ⅲ型８例（８．３％），Ⅱ／Ⅲ型混合感染２例（２．１％），且两种方法的结果完全一致。ＥＩＡ法检测出型特异性抗体７８例（６５％），其中血清１型（相当于基因Ⅰ、Ⅱ型）６８例（８７．２％），血清２型（相当于基因Ⅲ、Ⅳ）６例（７．７％），血清１、２型双阳性者４例（５．１％）。对三种方法均阳性的６６例的分型结果进行比较，ＥＩＡ法与酶切法和ＰＣＲ法的符合率达９７．０％。表明三种分型方法的结果高度一致。     

五种丙型肝炎病毒(HCV)基因重组抗原斑点酶免疫反应检测血清抗-HCV

五种丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因重组抗原斑点酶免疫反应检测血清抗－ＨＣＶ谭德明刘双虎胡国龄刘安国刘国珍应用五种丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因重组抗原，包括ＨＣＶ核心蛋白（Ｃｏｒｅ），包膜蛋白１（Ｅ１）、包膜蛋白２（Ｅ２／ＮＳ１）、ＮＳ３和ＮＳ５抗原〔１，２...     

输血后丙型肝炎病毒非结构区抗体和丙氨酸转氨酶的动态分析

利用重组的丙型肝炎病毒非结构区（ＨＣＶＮＳ５）抗原建立了酶免疫试验（ＥＩＡ），对２５例输血后丙型肝炎进行了不同区抗体及丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）的动态研究，同时对１５６例慢性丙型肝炎患者血清进行ＨＣＶＲＮＡ和抗－ＮＳ５平行检测，两者符合率为６４．１％。抗－ＮＳ５抗体首次检出时间为３０～５７５天（１８２．９±１６８．５），晚于ＡＬＴ异常和其他区抗体的出现时间。在感染后１，３，６，１２和２４个月后抗－ＮＳ５的阳性率分别为２８％，４０％，５２％，６８％和７６％。抗－ＮＳ５的动态变化类型为四种：一过性阳性、间歇性阳性、持续性阳性和２年内持续阴性     

丙型肝炎病毒基因型与血清HCV RNA含量关系及与干扰素应答的研究

目的探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因型与血清ＨＣＶＲＮＡ含量的关系及其对干扰素应答的影响。方法应用定量荧光ＰＣＲ（Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ－ＰＣＲ）技术检测了１３５例不同基因型ＨＣＶ感染的慢性丙型肝炎患者血清ＨＣＶＲＮＡ含量，另对其中７７例进行干扰素治疗并随访１２个月以上。结果ＨＣＶ－Ⅱ型感染血清ＨＣＶＲＮＡ水平（１０７．８±３．４拷贝／ｍｌ）显著高于ＨＣＶ－Ⅲ型感染（１０６．３±２．５拷贝／ｍｌ）（Ｐ＜０．０１），Ⅲ型感染的应答率（７／１３，５３．８％）显著高于Ⅱ型感染（２０／６４，３１．３％）（Ｐ＜０．０５）。应答组治疗前血清ＨＣＶＲＮＡ含量（１０６．８±２．７拷贝／ｍｌ）显著低于无应答组（１０８．３±３．２拷贝／ｍｌ）（Ｐ＜０．０１）。ＨＣＶＲＮＡ含量低于１０６．５拷贝／ｍｌ者，无论何种型别ＨＣＶ感染均应答较好，而ＨＣＶＲＮＡ高于１０８．０拷贝／ｍｌ者则应答极差。结论ＨＣＶ基因型及病毒血症水平是预测干扰素疗效的重要因素，且后者比前者意义更大。Ⅱ型感染病毒血症水平较高可能是影响其疗效的原因之一。     

利用多组套式引物检测庚型肝炎病毒RNA

利用庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）ＮＳ３～５区序列合成了四组套式引物，建立了灵敏、特异的庚型肝炎病毒ＲＮＡ双扩增聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测方法。用此方法检测了１０份庚型肝炎病毒抗体阳性患者血清及１０份阴性的健康人血清。前者不同组引物的检出率为ＮＳ３（１）引物９份阳性，ＮＳ３（２）引物８份阳性，ＮＳ４引物４份阳性，ＮＳ５（１）引物５份阳性，ＮＳ５（２）引物９份阳性；后者各组引物检测均为阴性。结果表明，庚型肝炎病毒不同区域引物用于ＲＴ－ＰＣＲ检出率差异较大。ＮＳ３（１）及ＮＳ５（２）这两组引物检出率最高，更适合用于ＲＴ－ＰＣＲ检测庚型肝炎病毒ＲＮＡ。     

我国急性散发性戊型肝炎病毒部分核苷酸序列分析

用逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）自深圳、长春、杭州等地４１份急性散发性戊型肝炎病人血清中获得２８株ＨＥＶｃＤＮＡ，对其中３株ＨＥＶｃＤＮＡ的ＯＲＦ２基因片段，用荧光法直接测定其核苷酸序列，并与戊型肝炎病毒墨西哥株（Ｍ）、缅甸株（Ｂ）和新疆流行株（ＣＨ１·１）进行了比较，结果该３株散发性ＨＥＶ与Ｍ株的核苷酸序列同源性分别为８０．２％、７９．９％和７９．４％；与Ｂ流行株的同源性为９５．５％、９３．９％和９５．１％；与散发株的同源性为９３．４％、９２．３％和９３．８％；与ＣＨ１·１的同源性为９７．０％、９６．５％和９５．９；表明该３株散发性ＨＥＶ与ＨＥＶ（Ｂ）和ＣＨ１·１的核酸序列同源性较高，可能属同一亚型。     

聚合酶链反应快速论断疱疹病毒性脑炎

选择疱疹病毒科病毒ＤＮＡ多聚酶基因高保守区中的１对引物，１次聚合酶链式反应可同时扩增疱疹病毒科的４种病毒相应的ＤＮＡ片段。根据扩增产物的分子量大小及对扩增产物酶切分析，可将标本中的４种病毒准确分型。用该法检测临床疑为病毒性脑炎患者和其他中枢神经系统疾病患者的脑脊液，脑炎组ＣＳＦ阳性率３０％，对照组ＣＳＦ阳性率６．７％；其中８例为ＨＳＶ１阳性，２例为ＨＣＭＶ阳性，１例为ＨＳＶ２阳性。     

丙型肝炎病毒非结构基因5b的变异及与干扰素治疗的关系

以聚合酶链反应直接序列分析方法测定了４例无症状慢性丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染者，与９例接受干扰素治疗的慢性丙型肝炎患者血清中ＨＣＶ非结构基因５ｂ（ＮＳ５ｂ）ｃＤＮＡ的序列。发现，与已发表的Ⅱ／１ｂ型ＨＣＶ序列相比，无症状慢性ＨＣＶ感染者的ＨＣＶ在核苷酸水平的同源性高于干扰素治疗有效的慢性丙型肝炎患者（９５．６５％±２．６１％比９４．３５％±２．２９％），后者又高于干扰素治疗无效的慢性丙型肝炎患者（９２．７０％±１．９０％）。还发现在干扰素治疗后，治疗无效者血清中ＨＣＶＮＳ５ｂｃＤＮＡ序列发生明显变化，在所测定的３８０个核苷酸中有９～４８个发生碱基替换，从而导致所编码的氨基酸中有６～２０个发生突变。结果提示，ＨＣＶＮＳ５ｂ基因变异与病情及干扰素治疗有一定关系。变异较大者常出现明显的临床表现，且干扰素治疗可能趋势于失败。     

丙型肝炎病毒（HCV）E2／NS1相对保守区多肽抗原在检？…

目的 研究（ＨＣＶ）Ｅ２／ＮＳ１相对保守区多肽抗原在检测抗－ＨＣＶ中的意义。方法 利用ＨＣＶＥ２／ＮＳ１基因编码的膜区糖蛋白合成Ｅ２／ＮＳ１相对保守区多肽抗原,建立酶免疫试验（ＥＩＡ）,对９６例ＨＣＶ感染者及４０例正常献血员进行ＨＣＶＥ２／ＮＳ１抗体的检测,同时平行检测ＨＣＶＲＮＡ肝炎为１３．５５％,慢性丙型肝炎为２５．０４％,无症状感染者为２．０８％;正常献血员中发现３例抗ＨＣＶＥ２／ＮＳ１抗体     

52 例病毒性肝炎患者肝组织中丙型肝炎病毒 RNA 和 HCAg-NS3 的测定

应用地高辛标记探针原位杂交法和单克隆抗ＨＣＶ－ＮＳ３－ＨＲＰ建立直接酶标免疫组化法分别测定５２例肝炎患者肝组织ＨＣＶＲＮＡ和ＨＣＡｇ－ＮＳ３。结果抗ＨＣＶ阳性组ＨＣＶＲＮＡ检出率５７．１％（１６／２８），ＨＣＡｇ－ＮＳ３检出率５３．６％（１５／２８）；抗ＨＣＶ阴性组其两项检出率均为１２．５％（３／２４）。肝组织中ＨＣＶＲＮＡ阳性物呈蓝紫色细小颗粒存在于肝细胞核或胞浆内，其在肝小叶中的分布可分为３型，即弥漫型、局灶型、散在型。肝组织中ＨＣＡｇ－ＮＳ３阳性物呈棕黄色细小颗粒分布于肝细胞核或胞浆内，以单个或数个阳性细胞散布于肝小叶中。２３例ＨＣＶＲＮＡ或／和ＨＣＡｇ－ＮＳ３阳性病例以肝炎后肝硬化（ＬＣ）病例占多数（１４／２３），其次为慢性重型肝炎（ＣＳＨ）和中度慢性肝炎（ＣＡＨ）。此两种检测方法具有较高符合率（９０．４％，４７／５２），表明病毒核酸及其表达产物均存在于肝细胞内，与ＨＣＶ感染密切相关。这为ＨＣＶ感染诊断提供了直接依据，有利于研究ＨＣＶ感染中病毒复制、慢性化进程、抗病毒治疗监测及重叠感染时病毒相互关系。     

广东地区血红蛋白H病基因型分析及高危胎儿基因诊断

为了解广东地区血红蛋白Ｈ病基因型的分布特点及各基因型频率，对广东地区１０５例血红蛋白Ｈ（ＨｂＨ）病患者采用α珠蛋白基因探针－限制性内切酶谱直接分析法，进行了基因型分析，检出非缺失型ＨｂＨ病１４例（１３．３％）；缺失型ＨｂＨ病９１例（８６．７％）．其中右缺失型５９例，占缺失型ＨｂＨ６４．８％；左缺失型３２型，占３５．２％。对１７例ＨｂＨ病高危胎儿进行了产前基因诊断，结果有５例为α地贫２杂合子，３例ＨｂＨ病，５例α地贫１杂合于或正常，１例ＨｂＢａｒｔ＇ｓ水肿胎，其余３例由于双亲一方为非缺失型α地贫，故对胎儿的基因型不能作出准确判断。还对缺失型和非缺失型ＨｂＨ病的血红蛋白和血红蛋白Ｈ的相对含量进行了比较，结果显示非缺失型ＨｂＨ病的血红蛋白含量显著低于缺失型ＨｂＨ病（Ｐ＜０．００１），而血红蛋白Ｈ相对含量则显著高于缺失型ＨｂＨ病（Ｐ＜０．００５）．为高危胎儿的产前诊断提供了依据。     

用合成寡肽的酶免疫法检测丙型肝炎病毒血清型

目的探讨适合我国临床广泛推广应用的丙型肝炎分型方法。方法采用丙型肝炎病毒核心区及ＮＳ４区合成寡肽建立酶联免疫检测方法，对血清中丙型肝炎病毒抗体进行分型。用此方法对某地个体供血者及慢性肝病患者的血清标本进行测定。首先使用美国ＡｂｂｏｔＩＭｘ试剂测定抗－ＨＣＶ，阳性者再测定其血清型。为验证血清分型与基因型的关系，对ＨＣＶＲＮＡ阳性的标本用型特异性引物的分型ＰＣＲ方法测定其基因型。结果７０例已往单采血浆供血者中ＨＣＶＲＮＡ阳性为３０％，抗－ＨＣＶ阳性率６８．６％，其中血清分型阳性率为７２．９％。血清１型与基因Ⅱ（１ｂ）型相对应；血清２型与基因Ⅲ（２ａ）型相对应。结论本方法操作简便、快速，具有较强特异性，基本能满足国内临床需要，对丙型肝炎发病及流行病学研究具有重要意义。