幽门螺杆菌黏附素HpaA的克隆、表达及生物学活性研究

幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)是一种慢性、感染率高的细菌 ,是慢性胃炎、胃十二指肠溃疡的重要致病因子 ,并与胃癌、胃相关淋巴组织瘤密切相关。Hp感染最基本的条件之一是黏附定居 ,N 乙酰神经氨酰乳糖结合血凝素(NLBH ,HpaA)是Hp众多黏附素中的一种 ,可激发宿主产生相应抗体 ,引起黏膜和全身性免疫应答 ,针对它所产生的抗体不与非Hp细菌和人胃黏膜组织发生交叉反应 ,是Hp的保护性抗原之一。HpaA由hpaA基因编码 ,属于Hp的外膜蛋白 ,PHD预测 2 6 0个氨基酸的HpaA由胞内区、跨膜区和胞外区 3部分组成。其中 1～ 17位氨基酸为…     

中性红摄入法检测幽门螺杆菌空泡毒素活性

空泡变性细胞毒素 (ＶａｃＡ)是幽门螺杆菌 (Ｈ .ｐｙｌｏｒｉ)分泌的一种重要毒素 ,其相对分子质量 (Ｍｒ)约为 (87～ 95 )×10 3 ,最初发现该毒素与哺乳动物细胞共同孵育后可导致细胞内产生大量的空泡。既往多采用光学显微镜下直接计数空泡形成细胞的比例来评价ＶａｃＡ活性 ,我们采用中性红摄入法 (Ｎｅｕｔｒａｌｒｅｄｕｐ ｔａｋｅａｓｓａｙ ,ＮＲＵ)对Ｈｐ菌株ＶａｃＡ进行定量检测 ,评价该方法检测ＶａｃＡ活性的应用价值。标准Ｈｐ菌株ＣＣＵＧ17874经固体平皿培养后 ,混悬于布氏肉汤液体培养基中 ,置 37℃微需氧环境振荡培养 72…     

人幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位重组蛋白纯化及免疫活性研究

热休克蛋白 (ｈｅａｔｓｈｏｏｋｐｒｏｔｅｉｎ ,Ｈｓｐ)为幽门螺杆菌 (Ｈｐ)共同的抗原成分 ,分为Ａ(ＨｓｐＡ)、Ｂ(ＨｓｐＢ)两个亚单位。目前 ,通过细菌培养获得大量Ｈｐ,并从中纯化出足量的亚单位抗原非常困难。因此 ,我们采用基因工程技术构建重组ＨｓｐＡ基因工程菌 ,并对ＨｓｐＡ重组蛋白纯化条件及免疫学活性进行研究。试验证明ＨｓｐＡ以包涵体形式表达。采用本室建立的包涵体洗涤、溶解方法进行处理 ,溶解包涵体后ＨｓｐＡ纯度大于6 0 % (Ａ级纯化 )。之后我们采用分步稀释法将ＨｓｐＡ复性。对ＨｓｐＡ的Ｂ级纯化选择ＱＳｅｐｈ…     

幽门螺杆菌相关性疾病

幽门螺杆菌感染是目前人类感染率最高的慢性感染之一,在我国普通人群中感染率高达60%。本文主要介绍幽门螺杆菌相关性疾病。     

幽门螺杆菌L型超微结构的研究

扫描电镜发现幽门螺杆菌的Ｌ型与其它细菌的Ｌ型一样形态不规则，呈多形性，有圆球体、巨形体、短杆状、串珠状和腊肠样，大小不等。超薄切片可见细胞壁部分或完全缺失，菌体内部结构稀疏，电子密度降低，部分菌体含有大量原生小体，有的正从细胞内释放出来，是细菌Ｌ型繁殖的方式之一。     

猪幽门螺杆菌样细菌与人幽门螺杆菌关系的初步研究

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）技术和免疫印迹分析，初步对人幽门螺杆菌（Ｈｐ）与猪幽门螺杆菌样细菌（ＨｐＬＯ）进和了比较研究。结果发现，Ｈｐ与猪ＨｐＬＯ具有不同的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱，但猪ＨｐＬＯ的４８ｋＤ、６２ｋＤ蛋白与Ｈｐ的５１ｋＤ蛋白间有明显的交叉免疫反应，说明猪ＨｐＬＯ不是人Ｈｐ的传染源，但猪感染ＨｐＬＯ后可能会产生与Ｈｐ起交叉反应的高滴度循环抗体。     

幽门螺杆菌L型微结构的研究

扫描电镜发现幽门螺杆菌的Ｌ型与其它细菌的Ｌ型一样形态不规则，呈多形性，有圆球体、巨形体、短杆状、串珠状和腊肠样，大小不等。超薄切片可见细胞壁部分或完全缺失，菌体内部结构稀疏，电子密度降低，部分菌体含有大量原生小体，有的正从细胞内释放出来，是细菌Ｌ型繁殖的方式之一。     

胃蛋白酶原与幽门螺杆菌感染相关性研究

为研究血清胃蛋白酶原亚群（pepsinogen,PG）含量在幽门螺杆菌感染人群血清中的含量及其临床意义,应用酶联免疫吸附实验（ELISA）,对34名正常人、51例幽门螺杆菌阳性者进行血清胃蛋酶原亚群（PGⅠ、PGⅡ）含量测定,并观察PGⅠ/PGⅡ比值变化。Hp阳性组血清与Hp阴性组血清PGⅠ值比较无显著性差异。Hp阳性组血清与Hp阴性组血清PGⅡ值进行比较有显著性差异。Hp阳性组与Hp阴性组PGⅠ/PGⅡ值比较差异非常显著。Hp阳性组血清PGⅡ升高和PGⅠ/PGⅡ比值的降低,是胃癌发生的危险因素,因此血清胃蛋白酶原检测可以作为人群筛查和辅助诊断胃癌的一项血清学指标。     

幽门螺杆菌vacA基因变异性研究

目的：探索幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,简称Hp)vacA基因（vacuolating cytotoxin gene A)的变异性及其与产生空泡毒素活性的关系。方法：用自行设计的两两配对的4条引物对17株Hp的vacA基因进行PCR扩增。结果：每株细菌均可扩增出包括vacA基因不同区域的4条产物,但每种产物在不同菌株间长度有差异;对产毒株与非产毒株的扩增产物长度比较,未发现与产毒有关的区域。结论：Hp vacA基因的变异性相当大,变异部位不仅仅局限于某一区域,沿不能确定与产毒有关的基因区域。推测Hp表达VacA活性与否可能与分泌的量有关。     

PCR快速检测幽门螺杆菌

应用ＰＣＲ扩增１５个幽门螺杆菌分离株的ＤＮＡ，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳均显示一条２９８ｂｐ的区带，而１２株与幽门螺杆菌相关的肠道杆菌都不能扩增出该片段。ＰＣＲ可检出少至１００个幽门螺杆菌细胞，并能检出胃粘膜活检标本中的此菌，全部实验可在５小时内完成。     

幽门螺杆菌L型分子生物学性状的研究

为了探讨幽门螺杆菌L(HP—L)型随着形态学的变异其生物学性状是否发生了改变,作者对HP细菌型和L型作了SDS-PAGE、免疫印迹以及DNA酶切图谱分析。SDS—PAGE结果显示HP—L型分子量为6.9×10~4,6.1×10~4的菌体蛋白含量减少,而分子量为1.25×10~4,5.8×10~4,1.3×10~4菌体蛋白含量增加。免疫印迹显示分子量为1.8×10~4,3×10~4,3.4×10~4蛋白条带基本一致,但L型缺失一些弱反应的条带。用限制性核酸内切酶HindⅢ消化染色体DNA,进行琼脂糖凝胶电泳后显示HP—L型和细菌型的酶切图谱基本相同,无肉眼可测出的差别。     

THE ROLE OF ACTIVE EFFLUX IN ANTIBIOTIC-RESISTANCE OF CLINICAL ISOLATES OF HELICOBACTER PYLORI

Purpose: In gram-negative bacteria, active efflux pumps that excrete drugs can confer resistance to antibiotics however, in Helicobacter pylori this role is not well established. The purpose of this study is to evaluate the role of active efflux in resistance of H. pylori isolates to antibiotics. Materials and Methods: Twelve multiple antibiotic resistant (MAR) isolates resistant to at least four antibiotics, including β-lactams, metronidazole, tetracycline, erythromycin, and ciprofloxacin; three resistant to only β-lactams, and two hyper-susceptible isolates, were obtained from screening of 96 clinical isolates of H. pylori. Their minimal inhibitory concentrations (MICs) for antibiotics and ethidium-bromide (EtBr) were compared in the presence-and absence of a proton-conductor, carbonyl cyanide-m chlorophenyl-hydrazone (CCCP) using agar-dilution and disc diffusion. Drug accumulation studies for EtBr and antibiotics were assessed in the presence and absence of CCCP using spectrofluorometry. Results: MIC of EtBr for eight MAR-isolates was decreased two- to four-folds in the presence of CCCP, of which five showed reduced MICs for β-lactam, metronidazole, tetracycline, and ciprofloxacin with CCCP. Accumulation of EtBr by the MAR-isolates was rapid and not dependant on the pattern of multiple resistance. Antibiotic accumulation assay confirmed the presence of energy-dependant efflux of β-lactam, metronidazole, tetracycline, and ciprofloxacin, but no erythromycin in five MAR isolates. Energy-dependant efflux of EtBr or antibiotics was not observed for four MAR-isolates, and three isolates were resistant only to β-lactams. Conclusion: Energy-dependant efflux plays a role in the resistance of H. pylori clinical isolates to structurally unrelated antibiotics in a broadly specific multidrug efflux manner. Difference in the efflux potential of MAR isolates may be related to the presence or absence of functional efflux-pumps in diverse H. pylori isolates.     

脑电波生物反馈治疗仪的研制

本文介绍一种脑电波生物反馈治疗仪，常用元器件构成的电路结构简单、成本低，闪光频率和闪光强度可调。有节律的闪光可以诱发和加强相应的脑电波，从而达到治疗的目的。     

幽门螺旋杆菌对慢性胃炎患者胃窦黏膜内G、D细胞的影响

目的　了解幽门螺旋杆菌 (HP)对慢性胃炎胃窦黏膜内G、D细胞的影响。　方法　用免疫组织化学双重染色法 ,观察正常人、HP- 组和HP+ 组慢性胃炎患者胃窦黏膜内G、D细胞的数量 ,G D细胞的比值以及G、D细胞接触的百分率。　结果　G细胞数量在 3组中无明显差异 (P >0 0 5 ) ,HP+ 胃炎组D细胞显著减少 ,与其他 2组相比有显著性差异 (P <0 0 1) ;而G D细胞比值增高 ,G、D细胞接触的百分率下降。　结论　HP可抑制胃窦D细胞生长抑素的合成和D细胞的增殖 ,从而可能减少D细胞对G细胞胃泌素分泌的抑制。     

用逐步回归法分析慢性胃炎与幽门弯曲菌感染的关系

本文用逐步回归法从胃病病人的性别、年龄、香烟嗜好、病程、幽门螺旋菌（ＨＰ）感染等因素中，筛选出与慢性胃炎有关的因素。发现慢性浅表性胃炎与慢性萎缩性胃炎都和ＨＰ感来有线性关系。     

幽门螺旋杆菌对慢性胃炎患者粘膜内D细胞及生长抑素mRNA表达的影响

目的　了解幽门螺旋杆菌 (Hp)感染与慢性胃炎患者胃窦粘膜内D细胞及生长抑素mRNA+ 细胞 (DmRNA+ 细胞 )减少的关系。　方法　免疫细胞化学和原位杂交技术。　结果　正常组D细胞与Hp- 胃炎组无差别(P >0 0 5 ) ,但Hp+ 胃炎组D细胞显著减少 ,与Hp- 胃炎组相比有显著性差异 (P <0 0 1)。DmRNA+ 细胞 ,Hp+ 胃炎组也低于其他 2组且有显著性差异 (P <0 0 1)。　结论　Hp+ 胃炎组内D细胞及DmRNA+ 细胞减少与Hp感染有密切关系。它能减少D细胞分泌的生长抑素对G细胞分泌的影响 ,但是生长抑素基因的转录和蛋白的合成依然运行。     

幽门螺杆菌尿素酶抗原的分离和纯化

本研究采用层析技术，以ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２００分离幽门螺杆菌尿素酶，从幽门螺杆菌超声破碎物离心上清中一次提纯了尿素酶抗原，产物接近电泳纯并保持了良好的抗原性。我们对５５份抗幽门螺杆菌抗体阴性村本和５０分阳性标本检测发现，符合率达１００％，假阴性和假阳性均为零；大样本临床标本检测也取得了很好的结果。     

IN VITRO INHIBITION OF HELICOBACTER PYLORI UREASE WITH NON AND SEMI FERMENTED CAMELLIA SINENSIS

Purpose: Helicobacter pylori is the etiological agent in duodenal and peptic ulcers. The growing problem of antibiotic resistance by the organism demands the search for novel compounds, especially from natural sources. This study was conducted to evaluate the effect of Camellia sinensis extracts on the urease enzyme that is a major colonization factor for H. pylori. Methods: Minimum inhibitory concentrations of nonfermented and semifermented C. sinensis methanol: water extracts were assessed by broth dilution method. Examination of the urease function was performed by Mc Laren method, and urease production was detected on 12% SDS polyacrylamide gel electrophoresis from whole cell and membrane bound proteins. Results: Both extracts had inhibitory effects against H. pylori and urease production. At a concentration of 2.5 mg/ml of nonfermented extract and 3.5 mg/ml of semifermented extract the production of Ure A and Ure B subunits of the urease enzyme were inhibited completely. A concentration of 4 mg/ml of nonfermented and 5.5 mg/ml of semifermented extract were bactericidal for H. pylori. Conclusions: C. sinensis extracts, especially the nonfermented, could reduce H. pylori population and inhibit urease production at lower concentrations. The superior effect of nonfermented extract is due to its rich polyphenolic compounds and catechin contents.     

脂多糖注入黑质对恒河猴运动行为和多巴胺能神经元的影响

目的观察恒河猴黑质内注射脂多糖后运动行为和黑质多巴胺能神经元的变化,探讨脑内炎症反应在黑质多巴胺能神经元慢性变性过程中的作用。方法成年恒河猴5只,分别定位注射生理盐水(对照,编号M5)和脂多糖(存活24周:编号M1和M2,存活48周:编号M3和M4)。上述注射均在存活前0周、8周、16周,向右侧黑质部位注射3次,每次40μl(2.5g/L)。术后观察猴行为改变(包括随意运动和上肢活动),免疫组织化学染色观察黑质部位酪氨酸羟化酶阳性神经元的变化及小胶质细胞的激活情况。结果1.猴全身运动:注射脂多糖24周和48周后,各个动物运动距离和平均速度与术前自身相比随观察时间呈减少趋势,对照组动物两个指标与术前比较无变化。2.猴上肢活动:猴M1和M2,注射对侧前臂取食时间术后24周较术前分别延长了36.1%、27.1%,手爪抓取食物时间分别延长了41.2%、28.6%。猴M3和M4,注射对侧前臂取食时间术后48周较术前分别延长了76.5%(P<0.01)、50%(P<0.01),手爪抓取食物时间分别延长了81.8%(P<0.01)、55.6%(P<0.01),4只实验动物同侧上肢未见影响。3.注射脂多糖各个动物注射侧黑质阳性神经元数量与对侧相比较,有不同程度的减少,存活48周动物神经元减少更加明显;对照动物两侧黑质部位神经元数量无变化。4.注射脂多糖各个动物注射侧黑质部位小胶质细胞出现不同程度的激活,在24周组较明显。结论脂多糖诱导的炎症反应能引起猴黑质部位多巴胺能神经元的变性损伤和行为学的改变,这些改变呈慢性进展的特点,行为改变与多巴胺能神经元损伤程度相关。