脑膜炎奈瑟氏菌对青霉素耐药性监测及其机理的初步研究

对１９６６年～１９９３年２１个省分离的２１８株Ａ、Ｂ和Ｃ群脑膜炎奈瑟氏菌（Ｎｍ）检查对青霉素的耐药情况及其机理，耐药菌株和敏感菌株的ｐｅｎＡ基因扩增后经ＨｐａⅡ消化并比较了它们的酶切图谱。１０８株Ａ群Ｎｍ中有２株耐药，它们是１９８７年和１９８８年分离的；１０１株Ｂ群Ｎｍ中有６株耐药，１９８３年以前仅１株，其余５株是以后的，耐药菌株从３．８％上升到６．７％；９株Ｃ群Ｎｍ中分离出１株耐药菌株，为７０年代分离的。上述耐药菌株中，１株Ａ群和５株Ｂ群为病人菌株，其余皆为携带者菌株。耐药的Ａ群和Ｃ群Ｎｍ与其敏感菌株ｐｅｎＡ基因的ＨｐａⅡ酶切图谱相同，但耐药的Ｂ群Ｎｍ的ｐｅｎＡ基因酶切图谱显出５种谱型，它们与敏感菌株的图谱明显不同。实验结果初步表明我国所分离的少数Ｎｍ对青霉素耐药，Ｂ群Ｎｍ较Ａ群耐药明显些，前者对青霉素耐药可能是ｐｅｎＡ基因的改变所致，关于Ａ群和Ｃ群Ｎｍ对青霉素的耐药机理尚需进一步探讨。     

两株B群流脑菌LOS抗原性的研究

在对我国自７０年代以来从病人和带菌者中分离的９１株Ｂ群脑膜炎奈瑟氏菌（Ｎｍ）进行脂寡糖（ＬＯＳ）免疫型分型、外膜蛋白分型／亚型、多位点酶电泳分型等的基础上，挑选了两株具有代表性的菌株３４０７（Ｂ：１５：Ｐ１．２：Ｌ３，７，９：ＲＦＬＰｂ－２０：克隆群Ｉ）和５４２８５２（Ｂ：ＮＴ：Ｐ１．２：Ｌ３，７，９：ＲＦＬＰｂ－２０：克隆群Ｉ）。提取并纯化了它们的ＬＯＳ，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析发现：两株菌的Ｌ     

苏芸金芽孢杆菌的肠毒素及其编码基因的研究

目的对苏芸金芽孢杆菌（简称Ｂｔ）种群不同亚种存在的蜡状芽孢杆菌肠毒素基因及溶血素ＢＬ进行检测，以便评估Ｂｔ对人类及高等动物潜在的致病性。方法采用多重引物ＰＣＲ技术，在同一ＰＣＲ体系同时加两对引物，ｈｂｌＡ及ｂｃｅＴ基因的扩增片段分别为１０１７ｂｐ及４２７ｂｐ，与预期的完全一致；应用ＨＢＬ羊血平板，产溶血素ＢＬ的菌株可产生非连续型溶血环。结果４５株Ｂｔ标准株中，２９株含有ｈｂｌＡ基因，占６４．４％；１５个生产用菌株及野生株中，含ｈｂｌＡ基因的菌株为１０株，占６６．６６％；含ｂｃｅＴ基因的标准株２９株，占６４．４％，含ｂｃｅＴ的Ｂｔ生产用菌株及野生株为１３株，占８６．６％。ＨＢＬ羊血平板检测结果表明：２８．８％的Ｂｔ标准株及３３．３％的Ｂｔ生产用菌株及野生株含溶血素ＢＬ。结论ｈｂｌＡ及ｂｃｅＴ基因在苏芸金芽孢杆菌中是普遍存在的，建议在遴选Ｂｔ生产菌株时，选用不含肠毒素基因或含肠毒素基因而不表达或表达水平不高的菌株     

B群Nm 3407菌株外膜蛋白复合物(OMPC)的提取及免疫原性

目的 Ｂ群脑膜炎奈瑟氏菌Ｎｍ荚膜多糖作为菌苗候选成分效果不理想，有些非荚膜的抗原成分存在血清型和亚型的限制，为了能提取一种免疫原性强，并具有广泛的抗原交叉反应性的Ｂ群Ｎｍ外膜蛋白复合物（ｏｕｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘ，ＯＭＰＣ）以研制更有效的Ｂ群Ｎｍ菌苗提供依据。方法 比较了从病人分离的Ｂ群Ｎｍ３４０７菌株提取ＯＭＰＣ的３种方法，用ＥＬＩＳＡ、杀菌力试验、小鼠免疫试验     

鞭毛蛋白属共同抗原表位在沙门氏菌分类中的作用探讨

应用４株鞭毛蛋白共同抗原单抗ＣＢ８、ｄｅ７、ｃｃ６和ＤＤ４，在直接ＥＬＩＳＡ试验中测定了鞭毛蛋白属共同抗原表位在沙门氏菌７个ＤＮＡ同源群２１９株菌株中的分布情况。结果表明，它们广泛存在于各个ＤＮＡ同源群内，在沙门氏菌属内的检出率分别高达９５．４％，９３．６％，９５．４％和９２．２％，其中ＣＢ８＋ｄｅ７可达９９．１％。经与脂多糖Ｏ－Ｉ噬菌体识别的共同表位比较研究表明，鞭毛蛋白共同抗原表位更加特异和准确，前者在ＤＮＡ同源群Ⅲａ、Ⅳ中的分布很低或检测不出。这些结果为沙门氏菌属新分类概念提供了新的科学依据，同时预示着鞭毛蛋白属共同抗原表位在沙门氏菌分类中具有重要作用。     

HLA—A,B血清学分型与DNA分型的比较

目的：比较１３６例样本ＨＬＡ－Ａ，Ｂ血清学分型与ＤＮＡ分型结果。方法：应用聚合酶链反应－序列特异性引物（ＰＣＲＳＳＰ）技术，设计３８对引物，检测常见的ＨＬＡ－Ａ，Ｂ基因。结果：１３６例样本中有６０例血清学分型与ＤＮＡ分型结构不符合（４４．１％）；ＨＬＡ－Ａ特异性血清学分型错误率在纯合子中分别占２３．３％与９．４％（共１１．２％），在ＨＬＡ－Ｂ中分别占４７．４％与１８．４％（共２０．６％）；ＨＬＡ－Ａ特异性血清学分型假阴性６．６％，假阳性２．５％，错误指认特异性２．１％，ＨＬＡ－Ｂ错异性则分别为６．７％，３．６％，１０．３％。结论：ＩＬＡ－Ａ纯合子血清学分型错误率明显高于杂合子（Ｐ〈０．０５）；ＨＬＡ－Ｂ纯合子血清学分型错误率也明显高于杂合子（Ｐ〈０．００５）；ＨＬＡ－Ｂ特异性血清学分型错误率显著高于ＨＬＡ－Ａ特     

中国人HLA—B27、B7、B13和B40的检测及其相互杂？…

目的 检测１１９４例初诊怀疑患强直性脊柱炎（ＡＳ）和其它关节性疾病患者的ＨＬＡ－Ｂ２７、Ｂ７、Ｂ１３和Ｂ４０位点抗原的分布，并分析这些位点的相互杂合和其抗原的交叉反应性。方法 微量细胞毒反应法，在同一块反应盘上同时检测。结果 １．在１１９４例患者中，ＨＬＡ－Ｂ２７抗原阳性率达３８．６％；Ｂ７的抗原阳性率为７．４％；Ｂ１３为１４．６％；Ｂ４０为１３．４％。２．在ＨＬＡ－Ｂ２７阳性人群中，Ｂ７抗原的阳     

神经外科医院感染及产超广谱β-内酰胺酶菌株感染分析

目的 研究神经外科医院感染的主要病原菌分布及其耐药情况，以及产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株感染特点，为临床治疗提供依据。方法 通过对患者病历及细菌培养和药敏试验结果的统计分析，计算各种病原菌的构成比和各种抗菌药物的耐药率，不同年份比例的变化趋势采用趋势检验。结果 2003～2005年神经外科281倒患者分离菌株共408株，其中革兰阴性菌占77．2％，革兰阳性菌22．8％。G^-菌对常用的大多数头孢类抗生素耐药率极高，对亚胺硫霉素的敏感率93．7％。G^＋菌对青霉素类抗生素已基本耐药，对万古霉素的敏感率80．6％。分离产ESBLs菌株36株，各年产ESBLs菌占各年总菌株数的比例呈逐年上升趋势。36株产ESBLs菌株对临床常用抗生素耐药率普遍较高，对亚胺硫霉素无耐药。结论 G^- 菌是神经外科医院感染的主要病原菌；病原菌耐药性普遍较高；产ESBLs菌株引起的感染率逐年升高；预防细菌耐药．必须积极采取综合措施，建立细菌耐药监测系统，合理使用抗菌素，以求达到控制或延缓细菌耐药。     

血培养阳性病原菌的临床分布及耐药性分析

目的了解血培养中分离菌株的构成比及耐药情况。方法采用回顾性分析．对BacT／Alert3D全自动快速血液细菌培养系统培养的2138份血液标本进行检测，分离所得菌株用VITTEK32全自动微生物分析／药敏系统进行鉴定和药敏试验。结果分离152株阳性菌株。阳性率为13．97％。革兰阴性杆菌103株，占67．3％；革兰阳球菌34株，占22．2％；真菌15株，占9．8％。血中产超广谱B一内酰酶（ESBLs）的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检出率分别为22．5％和32．5％。在凝固酶阴性葡萄球菌和金黄色葡萄球菌中MRSCN和MRSA分别是85．7％和55．0％。结论目前深圳市第二人民医院菌血症仍以革兰阴性杆菌为主，对血培养中分离的菌株进行耐药性监测很有必要，及时了解血培养结果对临床有针对性的抗菌治疗可提供科学依据．提高治愈率，降低病死率。     

中国莱姆病螺旋体rRNA基因多态性分析

本文作者首次应用地高辛标记的大肠杆菌１６＋２３ＳｒＲＮＡ基因探针分析中国莱姆病螺旋体ｒＲＮＡ基因限制性图谱。４５株中国菌株和６株国外菌株（美国Ｂ３１，２９７；法国２００４７；瑞士ＶＳ４６１；德国ＬＷ２和俄罗斯菌株ＩＰ２ｌ）用于实验，选用ＥｃｏＲⅤ和ＨｉｎｄⅢ两种限制性内切酶。实验结果表明，中国菌株遗传差异性较大，分属三个基因种，即ＧｅｎｏｓｐｅｃｉｅｓⅠ（Ｂ．ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉＳｅｎｓｕＳｔｒｉｃｔｏ），ＧｅｎｏｓｐｅｃｉｅｓⅡ（Ｂ．ｇａｒｉｎｉ）和ＧｅｎｏｓｐｅｃｉｅｓⅢ（Ｂ．ａｆｚｅｌｉ），其中Ｂ．ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉＳｅｎｓｕＳｔｒｉｃｔｏ基因种在亚洲菌株中是首次发现。此外还发现中国菌株ＨＢ１８的ｒＲＮＡ基因杂交图谱与国内外其它菌株不同。分属于三个基因种的中国菌株的ｒＲＮＡ基因杂交图谱与欧洲和美国菌株略有差异。中国菌株ＨＢ１８可能属于一个新的基因种。     

OF抑制试验对A族β溶血性链球菌的分型

本研究通过ＯＦ（ＯｐａｃｔｏＦａｃｔｏｒ，混度因子）抑制试验对临床分离的１１０株Ａ族β溶血性链球菌（ＧＡβＨＳ）进行ＯＦ分型。结果表明，（１）ＯＦ分型阳性率仅有３０％。（２）ＯＦ阳性菌株集中在Ｍ６８，Ｍ７５，Ｍ６０，ＰＴ２８４１，Ｍ２２五个Ｍ型，其中Ｍ６８，Ｍ７５明显占优势达６６．６％。（３）全部Ｍ６８型菌株均取自咽扁桃体炎和猩红热患儿，大部分脓疮病ＯＦ阳性株为Ｍ７５株。提示：（１）我国儿童ＧＡ６ＨＳ感染流行菌株有明显不同于欧美等国家的Ｍ／ＯＦ菌型谱。（２）这时期在北京地区有Ｍ６８，Ｍ７５感染菌株的局部流行。（３）对我国ＧＡＲＨＳ感染菌株分型研究应在采用Ｍ／ＯＦ方法的基础上，进一步探讨其它分型方法。     

利血平对耐药结核分枝杆菌临床株的作用

目的观察泵抑制剂（利血平）对耐药结核分枝杆菌临床分离株的作用。方法应用3组BacT．ALERT3D培养仪系统的培养基。分别命名为A、B、C组培养基。3组培养基均接种42株耐药结核分枝杆菌临床分离株，其中A、B组同时加入利福平1μg／mL；环丙沙星2μg／mL；利福平1μg／mL和环丙沙星2μg／mL；A、C组同时加入利血平20mg／L：C组未加入任何抗结核药物。结果在A组培养基中，耐利福平1μg／mL的14株菌株中有2株恢复对利福平的敏感性，12株仍然耐药；耐环丙沙星2μg／mL的6株菌株和耐利福平1μg／mL及环丙沙星2μg／mL的22株菌株全部恢复药物敏感性。在B组培养基中，42株耐药结核分枝杆菌临床分离株．药物耐药性无变化。在C组培养基中，42株耐药结核分枝杆菌临床分离株明显生长，说明利血平对所研究菌株无抑制作用。A组与B组培养基细菌的药物敏感性差异有统计学意义（P〈0．01）。结论结核分枝杆菌存在耐药机制之一的外排系统；泵抑制剂之一利血平对耐药的结核分枝杆菌临床分离株有抑制其外排作用，使结核分枝杆菌恢复敏感性。     

甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌耐药性及分子流行病学调查

目的了解甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌(MRSA)的耐药性及分子流行病学特点。方法采用纸片扩散法及琼脂稀释法检测2002年从北京协和医院住院患者分离的165株MRSA的耐药性；采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对其中重症监护病房(ICU)和呼吸重症监护病房(RCU)分离的65株MRSA作同源性分析。结果165株MRSA对万古霉素和替考拉宁的敏感率为100％，对庆大霉素的耐药率为100％；对左氧氟沙星、四环素、红霉素耐药率分别为98．2％、96．3％、93．9％。对甲氧苄啶，磺胺甲噁唑和氯霉素敏感率分别为95．8％及98．8％；ICU和RCU病房分离MRSA的PFGE图谱有5种类型(A—E型)，以A型为主(56株)，A型又包括A1亚型(55株)和A2亚型(1株)。结论医院获得性MRSA是多重耐药菌，在ICU和RCU病房发生了基因型为A1亚型的MRSA菌株暴发流行。     

Coltivirus新成员的分离和鉴定

１９９１年，在甘肃和北京地区采集蚊子，从中分离到１０株病毒，该类病毒在Ｃ６／３６，ＢＨＫ－２１及Ｖｅｒｏ细胞上可出现病变，使乳鼠发病、致死，抵抗乙醚和５－溴脱氧尿苷，电镜观察为球形、无包膜，直径约６２．７±３．１３ｎｍ。ＰＡＧＥ示该类病毒ＲＮＡ为１２节段，分为４个不同的电泳带型，均与云南分离株不同。交互中和试验和交互补体结合试验表明，中国分离株之间抗原性有变异。中国分离株与Ｃｏｌｔｉｖｉｒｕｓ属已知成员科罗拉多蜱热病毒、加利福尼亚分离株Ｓ６－１４－０３及德国分离株Ｅｙａｃｈ有血清学交叉反应（１：４～１：８），但血清型明显不同，因而，中国分离株当属Ｃｏｌｔｉｖｉｒｕｓ属的新的成员。     

广东省佛山市新生儿乙型肝炎血源疫苗免疫后1—7？…

１９９４年抽查佛山市１９８７－１９９３年出生时经乙型肝炎（乙肝）疫苗免疫的儿童共９６１例，用国产放射免疫（ＲＩＡ）药盒检测，结果，免疫儿童的抗－ＨＢｓ一率由后１年的８４．０％降至免疫后７年的６９．２％；免疫后１－７年儿童的ＨＢｓＡｇ阳性率由免疫前的１６．９％下降至１．３５％；保护率达９２．０％；抗ＨＢｃ阳性率由免疫前的４０．９％下降至３．６％。表明新生儿经乙肝疫苗免疫后７年仍具有良好的免疫保护效果     

腹泻儿童粪便分离的大肠杆菌中eaeA基因的检测及携带eaeA菌株的特性研究

用碱性磷酸酶标记的ｅａｅＡ基因寡核苷酸探针，对３７个血清群的２２１株从肯尼亚５岁以下腹泻患儿粪便中分离的大肠杆菌进行检测，并对ｅａｅＡ基因阳性菌株进一步做了ｂｆｐＡ和ｓｌｔ基因检测，ＨＥｐ－２细胞粘附及荧光肌纤蛋白染色（ＦＡＳ）试验。结果表明，ｅａｅＡ基因的携带率为１９．５％，ＥＰＥＣ、ＥＨＥＣ和其它血清群中ｅａｅＡ基因的携带率分别为３１．６％、６６．７％和８．９％，根据ｂｆｐＡ和ｓｌｔ基因检测及ＨＥｐ－２细胞粘附和ＦＡＳ试验的结果，可将携带ｅａｅＡ基因的大肠杆菌分成５种类型。提示ｅａｅＡ基因的分布不仅限于ＥＰＥＣ和ＥＨＥＣ，而且携带ｅａｅＡ基因菌株含有多种毒力决定因子。     

中国4株丁型肝炎病毒抗原编码区基因的cDNA克隆与序列分析

从我国四川、广西、河南的丁型肝炎病毒抗原（ＨＤＡｇ）或抗体（ａｎｔｉ－ＨＤ）阳性的ＨＢｓＡｇ携带者中，筛选出４株ＨＤＶＲＮＡ阳性标本，经逆转录和聚合酶反应（ＲＴ－ＰＣＲ）后，获得包含ＨＤＶ抗原编码区的ＣＤＮＡ片段，并对其进行克隆与序列测定。经计算机分析比较表明：四川、广西株与美国－１株同源性最高，分别为９９．３％、９９．０％；而河南－１、河南－２株与台湾株的同源性较高。分别为９４．３％、９２．１％，上述４株与日本－１、秘鲁－１的同源性在６６．１％－７７．８％之间。推导的ＨＤＡｇ的氨基酸序列的同源性为：四川、广西株与美国株分别为９９．５％、９６．４％；河南－１、河南－２株与台湾株分别为８９．７％、８９．３％，故我国至少存在基因型Ｉ型的两种亚型，其中四川、广西株为ＩＡ型；河南２株皆为ＩＢ型。同时，实验结果还证实了ＨＤＶ毒株的异质性呈地区分布特征。     

79株肺炎链球菌的耐药性测定

目的调查北京地区肺炎链球菌对青霉素等抗生素的耐药率。方法用Ｅｔｅｓｔ及琼脂稀释法测定临床分离的７９株肺炎链球菌１５种抗生素的最低抑制浓度（ＭＩＣ）。结果Ｅｔｅｓｔ测得１０株（１２．７％）低耐青霉素（ＭＩＣ０．１２５～１μｇ／ｍｌ），１株（１．３％）高耐青霉素（ＭＩＣ４μｇ／ｍｌ）；仅１株处于头孢曲松、头孢噻肟中介范围（ＭＩＣ１μｇ／ｍｌ）．琼脂稀释法测得阿莫西林、阿莫西林／棒酸、头孢呋肟、环丙沙星、氯霉素、四环素、红霉素的耐药率分别为１．３％、１．３％、２．５％、２．５％、１６．５％、４９．４％、４０．５％，所有菌株对头孢曲松、万古霉素敏感。结论北京地区１４％的肺炎链球菌耐青霉素，耐三代头孢菌素及多重耐药株罕见。     

我国登革2型病毒43株非结构蛋白NS1基因的特征

对我国１９８７年从广西分离的登革２型病毒４３株非结构蛋白ＮＳ１基因的核苷酸序列进行了分析，结果表明登革２型病毒４３株非结构蛋白ＮＳ１基因含有１０５６核苷酸编码３５２个氨基酸，并就其核苷酸序列及其相应的氨基酸序列与我国１９８５年海南流行高峰期分离的Ｄ２－０４株、国际参考株新几内亚Ｃ株（ＮＧＣ）、牙买加株（ＪＡＭ）、候选疫苗株（Ｓ１）和马来西亚流行株Ｍ１（登革出血热）、Ｍ２（登革休克综合征）、Ｍ３（登革热）进行比较，发现核苷酸序列的同源性分别为９２．２％，９３．７％，９３．３％，９０．７％，８９．９％，８９．５％，８９．３％，氨基酸的类似性分别为８９．８％，９２．６％，９３．３％，９１．２％，９０．６％，９０．１％，８９；９％，推断的氨基酸序列含有两个糖基化位点，分别位于氨基酸残基的１３０和２０７位，一个可能的蛋白裂解位点３５０～３５２和１０个保守的半胱氨酸残基。     

2007年茂名地区霍乱弧菌流行菌型及其耐药性研究

目的掌握茂名地区霍乱弧菌的流行菌型及其耐药性，为霍乱的防控工作提供参考。方法采集霍乱日常监测标本和霍乱疫情标本，参照《霍乱防治手册》（第5版）进行霍乱弧菌的分离培养和菌型鉴定，并利用全自动微生物鉴定仪对获得的霍乱弧菌菌株进行临床常用的20种抗菌药物的药敏分析。结果共采集各类标本334份，检出12株01群埃尔托型（El Tor）霍乱弧菌稻叶型流行株（1d）。12株霍乱弧菌对20种药物的敏感度完全一致，其中敏感抗生素有菌必治、庆大霉素等11种，占55％（11／20）；中敏抗生素有氨苄青霉素等8种，占40％（8／20）；100％耐药的抗生素为复方新诺明1种，占5％（1／20）。结论2007年茂名地区霍乱弧菌的流行菌型为01群埃尔托型（El T0r）霍乱弧菌稻叶型流行株（1d）；该流行菌型的菌株除对1种抗生素（复方新诺明）耐药外，对其余大多数抗生素均敏感（或中敏），没有出现多重耐药菌株。