胰腺癌细胞通过高表达核因子E2相关因子2促进巨噬细胞血管内皮生长因子表达的实验研究

目的:探讨胰腺癌细胞对巨噬细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及核因子E2相关因子2(Nrf2)在其中的作用。方法:检测单一人胰腺癌细胞(PANC-1)培养组、单一巨噬细胞培养组、肿瘤细胞和巨噬细胞共培养组中各细胞VEGF表达。利用野生组、Nrf2过表达组、Nrf2敲减组中PANC-1的条件培养基刺激巨噬细胞,检...     

胰腺星状细胞通过白细胞介素-22影响胰腺癌侵袭转移及化疗耐药的研究

目的探讨具有不同白细胞介素-22(IL-22)表达水平的胰腺星状细胞(PSC)对胰腺癌细胞侵袭转移及化疗耐药的影响。方法将人原代胰腺癌间质PSC细胞与胰腺癌PANC-1细胞共培养后检测IL-22的表达及胰腺癌细胞的生长增殖能力、迁移和侵袭能力变化;构建稳定敲低或者过表达IL-22的人原代胰腺癌间质PSC细胞并与胰腺癌PANC-1细胞进行体外共培养, 检测PANC-1细胞的生长增殖、迁移和侵袭能力;利用稳定敲低或者过表达IL-22的人原代胰腺癌间质PSC细胞并与胰腺癌PANC-1细胞进行体外共培养后检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达情况;将含有不同表达水平的胰腺癌间质PSC细胞与胰腺癌PANC-1细胞体外共培养并加入不同浓度梯度的吉他西滨培养72 h后检测细胞存活率, 计算细胞耐受吉他西滨的半数抑制浓度(IC50);将稳定敲低或者过表达IL-22的人原代胰腺癌间质PSC细胞并与胰腺癌PANC-1细胞进行混合后种植于裸鼠皮下, 40 d后处理裸鼠取出肿瘤并绘制肿瘤生长曲线, 比较两组细胞的成瘤能力。采用t检验分析各组间差异的显著性。结果单纯PANC...     

siRNA沉默HER2对人胰腺癌细胞PANC-1侵袭能力的影响

目的:探讨慢病毒介导的siRNA沉默HER2对人胰腺癌细胞株PANC-1侵袭能力的影响。方法:运用HER2基因小干扰RNA(siRNA)的重组慢病毒稳定转染PANC-1细胞,荧光定量RT-PCR和Western blotting观察HER2 mRNA和蛋白表达的改变,体外侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果:HER2基因小干扰RNA的重组慢病毒稳定转染PANC-1细胞可显著抑制HER2 mRNA和蛋白表达;体外侵袭实验显示siRNA沉默HER2后,PANC-1细胞侵袭能力明显下降。结论:HER2基因小干扰RNA的重组慢病毒能有效抑制HER2的表达,抑制胰腺癌细胞体外侵袭能力。siRNA沉默HER2可能为预防和治疗胰腺癌的侵袭转移提供一种新的策略。     

叉头框蛋白O3在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌细胞的影响

目的分析叉头框蛋白O3(FOXO3)在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌细胞运动和增殖的影响。方法检索LinkedOmics数据库胰腺癌患者胰腺癌和癌旁组织FOXO3表达。Western印迹和实时定量聚合酶链反应检测胰腺癌细胞系和人胰腺星状细胞HPSC中FOXO3表达。选择低表达FOXO3的PANC-1、MIAPaCa-2胰腺癌细胞, 分别转染FOXO3过表达质粒和阴性对照质粒。克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验和细胞周期检测各组胰腺癌细胞运动和增殖能力。结果 LinkedOmics数据库中, 64例胰腺癌患者癌组织中FOXO3蛋白相对表达水平明显低于癌旁组织(t=8.36, P<0.001)。PANC-1细胞过表达FOXO3后细胞克隆数为(30.0±6.6)个(40倍视野下计数), 低于阴性对照细胞的(92.7±6.7)个, 差异有统计学意义(t=11.54, P<0.001)。PANC-1和MIAPaCa-2在上调FOXO3表达后细胞划痕修复率较对照组显著下降。Transwell实验PANC-1细胞FOXO3过表达后(每个100倍视野下)穿膜数(21.0±6...     

TPM4对人胰腺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨原肌球蛋白4(TPM4)对人胰腺癌细胞侵袭和迁移的影响。方法 采用qRT-PCR检测人正常胰腺导管上皮细胞(HPDE)和人胰腺癌细胞系(ASPC-1、BXPC-3、MIA PaCa-2、PANC-1、SW1990)中TPM4 RNA表达量。采用siRNA或过表达慢病毒感染胰腺癌细胞(MIA PaCa-2、PANC-1),通过qRT-PCR、Western blotting检测各组细胞TPM4的表达,划痕实验及Transwell实验检测各组胰腺癌细胞侵袭和迁移能力。结果 GEPIA数据库中胰腺癌组织TPM4表达明显高于正常胰腺组织(P<0.05),qRT-PCR分析TPM4 RNA在胰腺癌细胞系中表达均高于HPDE(P<0.0001)。与对照组相比,在MIA Paca-2和PANC-1中过表达TPM4促进了胰腺癌细胞侵袭迁移能力(均P<0.01),而敲低TPM4胰腺癌细胞侵袭迁移能力则明显减弱(均P<0.01)。结论 TPM4在胰腺癌细胞中呈现高水平表达,可能在胰腺癌中发挥着癌基因的作用,其并可促进胰腺癌细胞迁移及侵袭能力。     

真核翻译起始因子4γ1通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路促进胰腺癌细胞增殖的机制

目的检测真核翻译起始因子4γ1(EIF4G1)在胰腺癌中的表达, 并探究其促进胰腺癌细胞增殖的相关机制。方法利用在线数据库分析EIF4G1在肿瘤中的表达量与预后意义;实时荧光定量聚合酶链式反应检测人胰腺癌细胞系的EIF4G1表达水平。慢病毒转染构建EIF4G1低表达细胞系, 分别为敲减#1, 敲减#2与对照;慢病毒转染构建EIF4G1过表达细胞系, 为过表达与空载;细胞计数试剂盒(CCK-8)实验与克隆形成实验检测胰腺癌的增殖能力;蛋白印迹法检测EIF4G1敲减后哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号(mTOR)通路的变化, 组间比较选择t检验。结果多个数据库显示EIF4G1在胰腺癌中表达量升高, 与胰腺癌的不良预后有关;低表达组PANC-1在第5天的吸光度显著低于对照组(0.85±0.03、0.92±0.05比1.35±0.04, t=22.160、14.670, P<0.01);低表达组PA-TU-8988T在第5天的吸光度显著低于对照组(1.00±0.05、0.99±0.04比1.99±0.07, t=26.740、29.390, P<0.01);低表达组PANC-1的克隆形成数...     

靶向MMP-2的RNAi抑制胰腺癌PANC-1细胞侵袭性的研究

目的 观察RNAi体外沉默胰腺癌PANC-1细胞MMP-2基因对胰腺癌细胞MMP-2表达及细胞侵袭能力的抑制作用.方法 设计靶向MMP-2的siRNA并构建到pGCsi-U6质粒,重组质粒通过脂质体Lipofectamine 2000转染PANC-1细胞,流式细胞仪检测质粒的转染率,RQ-PCR检测细胞MMP-2的mRNA表达水平;ELISA检测细胞MMP-2蛋白的分泌量;Transwell小室侵袭观察各组细胞侵袭能力;MTT比色法检测各组细胞增殖活性.结果 测序鉴定证实,干扰质粒构建成功,重组质粒转染率最高达82.1%.转染干扰质粒PANC-1细胞的MMP-2基因mRNA表达抑制了71.74%(P＜0.05);MMP-2蛋白分泌下降了49.82%(P＜0.05);细胞侵袭能力抑制率达33.0%(P＜0.05);细胞的增殖活性无明显变化(P＞0.05).结论 靶向MMP-2的RNAi能抑制胰腺癌PANC-1细胞的体外侵袭能力,提示MMP-2可以作为胰腺癌基因治疗的靶点,亟待RNAi能为肿瘤治疗开创崭新局面.     

TAp63在胰腺癌中的表达及意义

目的:探讨TAp63在胰腺癌中的表达及其意义。方法:分别real-time PCR和Western blot检测TAp63 m RNA与蛋白在21例胰腺癌及其配对癌旁组织、3种胰腺癌细胞(PANC-1、CFPAC-1、Bx PC3)及正常胰腺细胞(HPDE6-C7)中的表达;用TAp63-si RNA转染PANC-1细胞后,观察TAp63 m RNA与蛋白表达的变化,并用MTT和Brd U法检测转染后PANC-1细胞的增值情况。结果:胰腺癌组织中TAp63 m RNA表达量明显低于癌旁正常胰腺组织(t=2.572,P=0.0158);TAp63m RNA与蛋白在3种胰腺癌细胞株中的表达量均明显低于正常胰腺HPDE6-C7细胞(均P0.05)。与未处理的PANC-1细胞比较,转染TAp63-si RNA后的PANC-1细胞TAp63 m RNA与蛋白明显降低,但细胞增殖与DNA合成能力均明显增强(均P0.05)。结论:TAp63在胰腺癌组织与细胞中表达降低,且表达量越低,细胞生长能力越强。     

RNAi载体抑制survivin基因在胰腺癌PANC-1细胞中的表达

目的:观察survivin特异性RNAi载体对胰腺癌PANC-1细胞中survivin mRNA和蛋白的表达的抑制作用。方法:将U6启动子驱动的survivin特异性RNAi质粒载体和阴性对照质粒分别转染PANC-1细胞,用RT-PCR和Western blot分别检测survivin mRNA和蛋白的表达。结果:转染survivin特异性RNAi载体24 h和48 h后,PANC-1细胞survivin mRNA表达抑制率分别为(52.67±3.51)%和(75.33±3.06)%,蛋白表达抑制率分别为(58.00±3.61)%和(76.67±4.73)%;与阴性对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:以U6为启动子的survivin的RNAi载体,能有效地抑制胰腺癌细胞株PANC-1中survivin的表达。     

肿瘤相关巨噬细胞通过PI3K/Akt途径促进胰腺癌浸润迁移的研究

目的研究PI3K/Akt信号通路对胰腺癌细胞PANC-1浸润迁移能力的影响,进一步探讨肿瘤相关巨噬细胞促进胰腺癌发生发展的分子机制。 方法通过密度梯度离心法从健康成人外周血中分离单个核细胞,用IL-4体外诱导选择性激活的巨噬细胞(M2)。采用实时荧光定量PCR和Western blotting法检测胰腺癌PANC-1细胞PI3K、Akt mRNA和蛋白表达水平的变化,利用Transwell侵袭实验与划痕实验观察细胞浸润迁移能力的变化。 结果体外模拟胰腺癌微环境,将胰腺癌PANC-1细胞与不同激活状态的巨噬细胞共培养,证明M2可显著上调胰腺癌PANC-1细胞PI3K、Akt的mRNA和蛋白水平,共培养20 h后可明显促进胰腺癌PANC-1细胞的浸润与迁移能力。 结论肿瘤相关巨噬细胞可通过PI3K/Akt信号通路促进胰腺癌细胞的浸润与迁移。     

微小RNA-200c对人胰腺癌干细胞上皮-间充质转化的作用

目的观察微小RNA-200c(miR-200c)在人胰腺癌干细胞上皮-间充质转化(EMT)中的作用。方法应用流式细胞术(FACS)在人胰腺癌细胞株PANC-1中分选出以CD24⁺CD44⁺ESA+作为标志物的胰腺癌干细胞。将miR-200c前体片段和阴性对照片段分别转染到胰腺癌干细胞中。应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)和miR-200c的表达。Transwell试验检测细胞的侵袭能力。采用t检验。结果人胰腺癌细胞株PANC-1中分选出CD24⁺CD44⁺ESA+细胞(0.8%)。miR-200c在胰腺癌干细胞中的相对表达值(0.15±0.01)显著低于PANC-1细胞(1.00±0.09),差异有统计学意义(t=3.306,P<0.05)。胰腺癌干细胞平均穿膜细胞数[(321.00±7.62)个]明显高于PANC-1细胞[(70.00±16.47)个],差异有统计学意义(t=2.152,P<0.05)。转染miR-200c前体片段24 h后的胰腺癌干细胞中miR-200c的相对表达值(3.70±0.42)明显高于转染阴性对照片段的胰腺癌干细胞中miRNA-200c的相对表达值(0.22±0.21),差异有统计学意义(t=2.073,P<0.05)。E-cadherin、vimentin、ZEB1 mRNA在转染miRNA-200c前体片段的胰腺癌干细胞中的表达分别为(3.12±0.02)×10^-4、0.36±0.15、(0.38±0.07)×10^-4,在转染阴性对照片段的胰腺癌干细胞中的表达分别为(1.31±0.05)×10^-4、1.16±0.08、(1.13±0.03)×10^-4,两组比较差异有统计学意义(t=1.941、2.165、2.308,P<0.05)。转染miR-200c前体片段后的胰腺癌干细胞的平均穿膜细胞数[(80.00±5.35)个]明显低于转染阴性对照片段的干细胞[(310.00±19.41)个],两组比较差异有统计学意义(t=2.613,P<0.05)。结论miR-200c过表达可以抑制胰腺癌干细胞的上皮-间充质转化,逆转其侵袭能力。     

分选蛋白17对胰腺癌细胞生物学性状的影响

目的:探讨分选蛋白(SNX)17通过激活表皮生长因子受体(EGFR)影响胰腺癌细胞侵袭、增殖和迁移能力。方法:采集3例人胰腺癌组织及癌旁组织样本,自2021年1月至2021年3月收集于贵州医科大学附属医院肝胆外科,用免疫组织化学(IHC)染色检测癌组织与癌旁组织中SNX17的表达量。用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-...     

白藜芦醇对人胰腺癌PANC-1细胞增殖与侵袭的影响

目的 探讨白藜芦醇对人胰腺癌PANC-1细胞增殖与侵袭能力的影响.方法 实验分为空白对照组,0.1%DMSO组,白藜芦醇组(50、100、200 μmol/L).MTT法检测白藜芦醇对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期变化;Transwell侵袭小室检测白藜芦醇对细胞侵袭的影响;荧光实时定量PCR和Western blot检测白藜芦醇对细胞Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达的影响.数据以-x±s表示,多组比较采用方差分析.结果 (1)空白对照组抑制率为0;0.1%DMSO组细胞抑制率为3.25%±0.42%;白藜芦醇50 μmol/L组细胞抑制率为13.23%±1.68%;白藜芦醇100μmol/L组细胞抑制率为42.25%±3.20%;白藜芦醇200μmol/L组细胞抑制率为56.94%±5.31%.各组比较,差异有统计学意义(F=460.10,P<0.05).(2)空白对照组细胞凋亡率为0.05%±0.03%;0.1%DMSO组细胞为凋亡率为3.39%±1.77%;白藜芦醇50 μmol/L组细胞凋亡率为6.92%±1.85%;白藜芦醇100 μmol/L组细胞凋亡率为19.05%±2.01%;白藜芦醇200 μmol/L组细胞凋亡率为27.17%±6.43%.各组比较,差异有统计学意义(F=38.84,P<0.05).(3)0.1%DMSO组对细胞周期无显著影响.白藜芦醇引起PANC-1细胞G0/G1期和S期阻滞,G2/M期细胞减少.(4)空白对照组平均穿膜细胞数为61±13;0.1%DMSO组为54±13;白藜芦醇50 μmol/L组为48±15;白藜芦醇100 μmol/L组为23±6;白藜芦醇200 μmol/L组为18±7.各组比较,差异有统计学意义(F=69.08,P<0.05).(5)白藜芦醇可使PANC-1细胞Bax表达升高,Bcl-2表达下调.MMP-2、MMP-9的表达明显受到抑制,mRNA和蛋白水平变化一致.结论 白藜芦醇可明显抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖,诱导细胞凋亡并抑制其侵袭能力.     

IFITM1在胰腺癌中的表达及对胰腺癌细胞生物学行为的影响

背景与目的:干扰素诱导的跨膜蛋白1(IFITM1)是一种在淋巴细胞中转导同型黏附信号的膜复合物,在胰腺癌组织中表达量异常,但是其在胰腺癌中的作用机制则仍不清楚,因此,本研究初步探讨IFITM1的表达对胰腺癌细胞生物学行为的影响.方法:用Western blot法检测78例胰腺癌患者(32例转移,46例未转移)的癌组织和...     

高糖环境下肝细胞外泌体对胰腺癌细胞迁移与侵袭能力的影响

背景与目的：在肿瘤微环境的影响和调控下,一些非肿瘤细胞通过外泌体在肿瘤的转移中起着关键作用。研究表明在胰腺癌中,高糖微环境可以促进其侵袭和转移。肝脏既是糖代谢的重要器官,也是胰腺癌转移的高发器官,胰腺癌肝转移的机制尚不清楚。因此,本研究探讨在高糖微环境下肝细胞分泌的外泌体对胰腺癌细胞侵袭、迁移的影响及机制。方法：将永生化肝细胞MIHA分别在高糖与正常糖培养基中培养后,从上清液中提取外泌体,并通过透射电镜、粒径分析和Western blot对两种培养基来源的外泌体进行鉴定;用荧光染料PKH67标记两种培养基来源的外泌体后,分别与荧光染料DAPI标记的胰腺癌细胞PANC-1共培养,通过实时激光扫描共聚焦显微镜观察PANC-1细胞对外泌体的吞噬情况。将PANC-1细胞分别与高糖培养基来源的外泌体（高糖组）及正常糖培养基来源的外泌体（正常糖组）共培养,以未加外泌体培养的PANC-1细胞为阴性对照组,随后分别用划痕试验、Transwell实验检测各组PANC-1细胞的迁移与侵袭能力,用Western blot检测各组PANC-1细胞中上皮-间充质转化（EMT）相关蛋白E-cadherin和N-c...     

小干扰RNA沉默血管内皮生长因子对ACHN肾癌细胞黏附、侵袭及迁移的影响

目的 观察小干扰RNA (siRNA)沉默血管内皮生长因子(VEGF)对ACHN肾细胞癌细胞生物学行为的影响.方法 化学合成针对VEGF的小干扰RNA,实验分4组,转染后收集细胞,通过蛋白印迹方法检测VEGF的表达,噻唑蓝(MTT)比色法、细胞黏附实验、划痕实验及Transwell法测定细胞的增殖、黏附、迁移及侵袭能力.结果 siRNA 1～2组VEGF表达水平明显低于空白对照组及阴性对照组;在24、48、72 h,siRNA 1～2的增殖抑制率均高于空白对照组及阴性对照组(P＜0.05),其中以siRNA2组最为显著;与空白对照组比较,siRNA 1～2组的细胞黏附数量明显下降[(81.5±3.1)％比(40.5±2.6)％、P＜0.05,(81.5±3.1)％比(22.5±2.4)％、P＜0.05],其中以siRNA2组最为明显;siRNA1～2组的细胞迁移数量明显下降(162±9比81±5,P＜0.05;162±9比38±4,P＜0.05);siRNA1～2组细胞侵袭能力明显下降(P＜0.05),且siRNA 2组的细胞侵袭能力明显低于siRNA 1组(P＜0.05).结论 VEGF基因在肾细胞癌细胞黏附、迁移和侵袭中发挥着重要作用;以靶向VEGF的siRNA转染肾细胞癌细胞,可抑制肾细胞癌细胞黏附、迁移和侵袭能力.     

CPG ODN对人胰腺癌细胞株Panc-1生物学行为的影响及TLR9蛋白在胰腺癌中的表达

目的 检测TLR9在人胰腺癌及胰腺癌细胞中的表达,研究CPG ODN2216对Panc-1细胞生物学行为的影响,并探讨其临床意义.方法 通过免疫组织化学方法确认TLR9蛋白在胰腺癌组织中的高表达,免疫荧光确认其在胰腺癌细胞株Panc-1中的高表达.通过细胞黏附、划痕实验、侵袭实验、细胞克隆及MTT增殖实验,研究CPG ODN2216对细胞黏附力、活动力及增殖力的影响.结果 人胰腺癌标本及人胰腺癌细胞株Panc-1均高表达TLR9.划痕实验、体外黏附实验、基质胶侵袭实验、细胞克隆实验证明CPG ODN2216实验组细胞黏附力及活动力明显低于未加序列对照组.MTT法检测序列组增殖力明显低于未加序列对照组,且增殖活性具有时间剂量依赖性.结论 TLR9基因与人类胰腺癌的侵袭转移潜能相关,外源配体CPG ODN2216的使用可明显抑制人类胰腺癌细胞Panc-1的侵袭、迁移能力.

Abstract：

Objective To detect the expression of Toll-like receptor 9 (TLR9) in pancreatic cancer and to study the effect of CPG ODN2216 on the biological behavior of pancreatic cell carcinoma, and to explore their clinical significance. Methods Immunohistochemical method was used to examine the expression of TLR9 protein in pancreatic cancer tissue and immunofluorescence staining was also performed to detect TLR9 protein expression in pancreatic carcinoma cells. In vitro cell adhesion, wound-healing scrape assay, transwell invasion assay and cell colony formation assay were performed to assess the effect of CPG ODN2216 on the invasive properties of Panc-1 cells. Results TLR9 were highly expressed in the pancreatic cancer tissue and pancreatic carcinoma cells. In vitro experiments as cell spreading assays, cell adhesion, colony formation assay and invasion assays showed the cell adhesion and cell motility properties of CPG ODN 2216 group to be apparently weakened compared with the control group. MTT assay showed cell proliferation ability in the CPG ODN group to be notably decreased, and CPG ODN2216 had inhibitive effects on the growth of panc-1 cells in a dose and time-dependent manner. Conclusions TLR9 gene was correlated with the invasive and metastatic potentials of pancreatic carcinoma. The used of CPG ODN2216 induced the inhibition of migration and invasion of the Panc-1 cell line.     

酸性神经磷脂酶及神经酰胺在吉西他滨诱导胰腺癌PANC-1细胞耐药中的作用

目的 建立对吉西他滨耐药的胰腺癌PANC-1/Gem细胞株,检测诱导耐药前后该细胞株生物学特性的变化.探讨吉西他滨诱导胰腺癌耐约的可能机制.方法 通过逐渐增加培养基中吉西他滨的浓度,建屯对吉西他滨耐药的胰腺癌PANC-1/Gem细胞株,TUNEL染色检测细胞株凋亡,MTT方法 检测胰腺癌PANC-1和胰腺癌PANC-1/Gem细胞的半数抑制浓度(IC_(50))和耐药指数(RI),Western印迹法检测酸性神经磷脂酶表达变化、二酰基甘油激酶(diacylglycerol kinase,DAGK)法检测神经酰胺含量变化.结果 经过24周成功诱导出对吉西他滨耐药的胰腺癌PANC-1/Gem细胞株,吉西他滨对PANC-1和PANC-1/Gem细胞的IC_(50)值分别为:亲本(8.13±0.85)μg/ml,24周(285.40±34.83)μg/ml,与亲本细胞相比耐药倍数为35.10倍,且凋亡率降低.Western印迹检测发现吉西他滨诱导24周的胰腺癌细胞PANC-1/Gem酸性神经磷脂酶的表达低于亲本细胞.两组细胞的神经酰胺含量分别为:亲本(364.95±46.11)pmol/mg protein,24周(120.61±20.07)pmol/mgprotein.结论 酸性神经磷脂酶的表达降低,导致神经酰胺含量减少可能是胰腺癌PANC-1细胞株对吉西他滨产生耐药的机制之一.