聚合酶链反应检测EB病毒亚型对区分鼻咽良恶性病变的价值

以ＥＢ病毒核抗原（ＥＢＮＡ）Ａ亚型特异性引物作聚合酶链反应（简称ＰＣＲ－Ａ）同时用Ａ、Ｂ亚型ＤＮＡ片段和Ｂａｍ－Ｗ片段为探针，与鼻咽活检组织ＤＮＡ作打点核酸杂交（简称ＤＢＨ－Ａ、ＤＢＨ－Ｂ和ＤＢＨ－Ｗ）。ＤＢＨ－Ｂ结果全部阴性，ＰＣＲ－Ａ“ＤＢＨ－Ａ和ＤＢＨ０Ｗ检测的阳性率，３１例鼻咽癌分别为８３．９％（２６／３１）、７４．２％（２３／３１）和８０．６％（２５／３１）；３３例非鼻咽癌分别为１５．２     

鼻咽癌活检组织及外周血白细胞EB病毒DNA的检测及其意义

目的：探讨鼻咽组织、外周血血白细胞ＥＢＶ基因组分布及与ＮＰＣ的关系。方法：采用ＰＣＲ法检测２６例ＮＰＣ,４例癌旁及１４例慢性鼻咽炎鼻 组织吸外周血白细胞中ＥＢＶ ＤＮＡ。同时采用酶免疫法测定血清ＶＣＡ－ＬｇＡ。结果：１．ＮＰＣ、癌旁及鼻咽炎组织ＥＢＶ ＤＮＡ无明显差异。２．ＮＰＣ与鼻咽炎组外周血白细胞ＥＢＶ ＤＮＡ有明显差异,Ｐ〈０．０５。３．ＮＰＣ与鼻咽炎组血清ＶＣＡ－ＩｇＡ之间存在明显差异。Ｐ     

鼻咽癌活检组织中HLA,EBNA及间质中T淋巴细胞亚群的…

本实验对人类白细胞抗原（ＨＬＡ）、爱波斯坦－巴尔病毒核抗原（ＥＢＮＡ）、Ｔ细胞亚群的表达及分布进行综合分析，探讨其在癌变过程中的作用。用单克隆抗体Ｗ６／３２（抗ＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ）、ＣＲ３／４３（抗ＨＬＡ－ＤＲ，ＤＰ，ＤＱ）、和Ｔ４、Ｔ８、Ｔ１１，以碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法（ＡＰＡＡＰ）和用鼻咽癌患者血清以抗补体Ｃ３免疫荧光法，检测鼻咽癌（２５例）及慢性鼻咽炎（１０例）活检组织中ＨＬＡ、Ｔ细胞亚群     

鼻咽癌活检组织中HLA、EBNA及间质中T淋巴细胞亚群的分布

本实验对人类白细胞抗原（ＨＬＡ）、爱波斯坦－巴尔病毒核抗原（ＥＢＮＡ）、Ｔ细胞亚群的表达及分布进行综合分析，探讨其在癌变过程中的作用。用单克隆抗体Ｗ＿６／３２（抗ＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ）、ＣＲ＿３／４３（抗ＨＬＡ－ＤＲ，ＤＰ，ＤＱ）、和Ｔ＿４、Ｔ＿８、Ｔ＿（１１），以碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法（ＡＰＡＡＰ）和用鼻咽癌患者血清以抗补体Ｃ＿３免疫荧光法，检测鼻咽癌（２５例）及慢性鼻咽炎（１０例）活检组织中ＨＬＡ、Ｔ细胞亚群分型和ＥＢＮＡ的表达。结果显示，鼻咽癌癌细胞多有ＨＬＡ－Ⅰ和Ⅱ型抗原表达，而以ＨＬＡ－Ⅱ型抗原表达为明显；慢性鼻咽炎上皮细胞表达ＨＬＡ－Ⅰ和Ⅱ型抗原较弱，与癌细胞比较，差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。提示在癌变过程中，存在着ＨＬＡ表达的异常，体内ＥＢ病毒特异性Ｔ细胞可能不能识别带ＨＬＡ－Ⅱ型抗原的癌细胞，因而使其逃脱了机体的免疫监视。鼻咽癌组织中，癌细胞ＥＢＮＡ呈阳性和强阳性；癌间质中Ｔ细胞总数、Ｔ辅助、Ｔ杀伤细胞数量均减少，证明鼻咽癌局部细胞免疫功能降低。     

鼻咽分泌物中β_2微球蛋白测定的临床意义

为了探讨鼻咽分泌物中β２微球蛋白（β２－ｍｉｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎ，β２－ＭＧ）含量的临床意义，以放射免疫法测定了７３例鼻咽癌患者、３０例慢性鼻咽炎患者和３０例健康人鼻咽分泌物β２－ＭＧ含量，并对３１例鼻咽癌患者作了治疗前后动态观察。结果发现：鼻咽癌组为４．８７±２．５１ｍｇ／Ｌ，慢性鼻咽炎组为１．０５±０．６４ｍｇ／Ｌ，对照组为０．８５±０．３２ｍｇ／Ｌ。鼻咽癌组明显高于鼻咽炎组与对照组，差异有显著意义（Ｐ＜０．０１）。在动态观察中发现放射治疗治愈组明显降低，放射治疗失败组仍增高。提示鼻咽部也具有β２－ＭＧ分泌功能，在患鼻咽癌时其水平升高，并与肿瘤的消长有一定相关性，其作为肿瘤标志物或病程转归判断指标的意义，值得进一步探讨。     

鼻咽癌病人端粒酶表达的研究

目的：研究端粒酶（ＴＬＭＡ）在鼻咽癌（ＮＰＣ）中的表达。方法：采用ＴＲＡＰ ＰＣＲ ＥＬＩＳＡ法探讨１８例ＮＰＣ，２例放疗后ＮＰＣ，４例癌旁组织及４例慢性鼻咽炎鼻咽部活检组织中ＴＬＭＡ表达。结果：１８例ＮＰＣ ＴＬＭＡ阳性率为８８．９％。４例癌旁组织阳性率为７５．０％，慢性鼻咽炎全部为阴性。１例复发性ＮＰＣ为阳性，１例疗后未复发为阴性。ＴＬＭＡ表达与ＮＰＣ分期、颈淋巴结转移似无明显关系。结论：ＴＬ     

用聚合酶链反应检测鼻咽癌脱落细胞中EB病毒DNA

应用聚合酶连反应（ＰＣＲ）技术检测３５例鼻咽癌患者（２４例刚进行￣（６０）Ｃｏ放疗或未治疗，１１例放疗接近结束或刚结束）的鼻咽部脱落细胞中的ＥＢ病毒ＤＮＡ，１２例急、慢性扁桃体炎或咽炎患者为正常对照组，另有４例鼻咽癌的活检组织。结果：２４例鼻咽癌未治疗或刚治疗组中脱落细胞ＥＢ病毒ＤＮＡ阳性２０例（８３．３％），阴性４例（１６．７％）；１１例鼻咽癌放疗将近结束或刚结束组ＥＢ病毒阳性１例（９．１％），阴性１０例（９０．９％）；１２例对照组ＥＢ病毒ＤＮＡ阳性１例（８．３％），阴性１１例（９１．７％）。４例鼻咽部活检组织ＥＢ病毒ＤＮＡ均阳性。说明应用鼻咽部刮片脱落细胞进行ＰＣＲ反应检测ＥＢ病毒ＤＮＡ是一种方法简单、痛苦少，特异性强、灵敏度高的检测手段，可用于鼻咽癌的诊断、普查、流行病学调查等。     

MDM 2基因在鼻咽癌中的表达及其与p53蛋白表达、EB病毒潜伏感染的关系

目的：探讨ＭＤＭ２基因在鼻咽癌（ＮＰＣ）中的表达情况及其与ｐ５３蛋白表达、ＥＢ病毒（ＥＢＶ）潜伏感染的关系。方法：运用非同位素原位杂交、免疫组化和多聚酶链反应技术对４６例ＮＰＣ、１２例慢性鼻咽炎症粘膜（ＣＩＮＥ）分别进行ＭＤＭ２ｍＲＮＡ、ＭＤＭ２蛋白、ｐ５３蛋白及ＥＢＶ－ＤＮＡ的检测。结果：４６例ＮＰＣ中,１４例ｍＲＮＡ及ＭＤＭ２蛋白高表达,３８例为ｐ５３蛋白阳性,４３例为ＥＢＶ－ＤＮＡ阳性,１２     

鼻咽癌患者鼻咽组织和血清中EBV检测

目的：比较血清爱泼斯坦－巴尔病毒（ＥＢＶ）抗体滴定度测定与癌组织ＥＢＶ基因组检测对鼻咽癌（ＮＰＣ）的诊断价值。方法：１４６例患者采用双盲法测定血清ＥＢＶ－ＶＣＡ－ＩｇＡ,ＥＢＶ－ＥＡ－ＩｇＡ和活检组织ＥＢＶ－ＤＮＡ（ＰＣＲ）。全组病例按活检病理检查结果分析：ＮＰＣ组,非ＮＰＣ组（对照组）。结果：ＮＰＣ组中ＥＢＶ－ＤＮＡ（ＰＣＲ）,ＥＢＶ－ＶＣＡ－ＩｇＡ和ＥＢＶ－ＥＡ－ＩｇＡ的阳性率分别为９０．８％     

鼻咽癌患者单个核细胞mIL-2R表达和血清sIL-2R水平的检测及意义

目的：探讨ＩＬ－２Ｒ与鼻咽癌发生、发展的关系。方法：应用间接免疫荧光法和ＥＬＩＳＡ法对６２例鼻咽癌、２１例鼻咽良性病变和２６例健康对照者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）经植物血凝素（ＰＨＡ）刺激后的ｍＩＬ－２Ｒ和血清ｓＩＬ－２Ｒ水平进行检测。结果：１）鼻咽癌患者ｍＩＬ－２Ｒ表达显著低于鼻咽良性病变和健康对照组（Ｐ＜０．０５）;２）鼻咽癌患者血清ｓＩＬ－２Ｒ水平显著高于鼻咽良性病变和健康对照组（Ｐ＜０．０１）;３）与无远处转移的鼻咽癌患者相比,有远处转移的鼻咽癌患者血清ｓＩＬ－２Ｒ显著升高（Ｐ＜０．０１）;４）鼻咽良性病变与健康对照组之间ｍＩＬ－２Ｒ表达和ｓＩＬ－２Ｒ水平无显著差异。结论：结果提示ｍＩＬ－２Ｒ表达低下和ｓＩＬ－２Ｒ异常升高在鼻咽癌患者机体免疫抑制中可能起重要作用。     

Nasopharyngeal and adjacent neoplasms: A clinico-pathologic and immunologic study

Summary Thirteen cases of nasopharyngeal carcinoma (NPC) and 16 cases of non-NPC tumors in the nasopharynx or in adjacent locations were investigated clinically, immunologically, and pathologically. All tumors were classified according to the TNM classification, and the stage and course of the disease was correlated with the histological tumor type, the T- and B-cell distribution in tumor tissue and in the peripheral blood, as well as with antibody titers against Epstein-Barr virus (EBV). The results showed a positive correlation of decreased T- and B-cells in tumor tissue and of decreased T-cells in the peripheral blood with the extend of the tumor in both NPC and non-NPC cases, with some exceptions of lymphocyte rich neoplasms (lymphoepithelial carcinoma and malignant lymphoma). Antibodies against EBV (early antigen and capsid antigen) became progressively elevated with increasing tumor stage in NPC-cases but not in non-NPC cases. The latter, however, was observed only in two histological types of NPC's: anaplastic carcinoma and lymphoepithelial carcinoma; titers in the remaining tumor types stayed insignificant.Immunopathologic and tissue culture studies were supported by grants of the Volkswagen Foundation, the German Science Foundation, and the State Ministry of Science and Research of Northrhine-Westfalia     

Nasopharyngeal and adjacent neoplasms: a clinico-pathologic and immunologic study.

Thirteen cases of nasopharyngeal carcinoma (NPC) and 16 cases of non-NPC tumors in the nasopharynx or in adjacent locations were investigated clinically, immunologically, and pathologically. All tumors were classified according to the TNM classification, and the stage and course of the disease was correlated with the histological tumor type, the T- and B-cell distribution in tumor tissue and in the peripheral blood, as well as with antibody titers against Epstein-Barr virus (EBV). The results showed a positive correlation of decreased T- and B-cells in tumor tissue and of decreased T-cells in the peripheral blood with the extend of the tumor in both NPC and non-NPC cases, with some exceptions of lymphocyte rich neoplasms (lymphoepithelial carcinoma and malignant lymphoma). Antibodies against EBV (early antigen and capsid antigen) became progressively elevated with increasing tumor stage in NPC-cases but not in non-NPC cases. The latter, however, was observed only in two histological types of NPC's: anaplastic carcinoma and lymphoepithelial carcinoma; titers in the remaining tumor types stayed insignificant.     

Monitoring tumor recurrence with nasopharyngeal swab and latent membrane protein-1 and epstein-barr nuclear antigen-1 gene detection in treated patients with nasopharyngeal carcinoma

OBJECTIVES: Epstein-Barr virus (EBV) is closely related to nasopharyngeal carcinoma (NPC). Detection of EBV genomic DNA in a nasopharyngeal swab specimen may indicate the presence of NPC, and the EBV genomic DNA is only detected in patients with NPC and not in other head and neck cancers. This study aims to prove that detection of EBV genomic DNA by means of the latent membrane protein (LMP)-1 gene and the Epstein-Barr nuclear antigen (EBNA)-1 gene in the nasopharynx in NPC patients after radiation therapy indicates local recurrence of NPC. STUDY DESIGN: Prospective. METHODS: Nasopharyngeal swab with polymerase chain reaction (PCR)-based LMP-1 and EBNA-1 gene detection was used to monitor local recurrence in 84 NPC patients who completed radiation therapy. RESULTS: Of the 12 patients demonstrating positive LMP-1 and EBNA-1 gene, 11 had local recurrence, and 10 of them had early rT1 mucosal recurrence. Subsequent salvage nasopharyngectomy controlled local disease in nine. Only one local recurrence in the skull base failed to show LMP-1 gene initially. Detection of LMP-1 gene and later verification with EBNA-1 gene from nasopharyngeal swabs in NPC patients after radiation therapy predicted local recurrence with a sensitivity of 91.7% and a specificity of 98.6%. CONCLUSIONS: Nasopharyngeal swab with LMP-1 and EBNA-1 gene detection is a useful and reliable method to monitor local recurrence in NPC patients. It helps to detect recurrence early and may improve local control and enhance survival.     

血浆EB病毒DNA含量定量检测对鼻咽癌的诊断和预后评价

目的探讨血浆EB病毒DNA定量检测对鼻咽癌的诊断和预后评估价值.方法收集2002年2月～2003年6月在本院确诊的初诊鼻咽癌患者100例,放疗后鼻咽癌患者106例,以及健康对照者40例,分别采集血浆标本,应用Real-time PCR方法检测EB病毒DNA含量,比较健康者和初诊鼻咽癌患者、放疗后转移或复发及持续临床缓解鼻咽癌患者的血浆EB病毒DNA拷贝数差异.结果初诊鼻咽癌患者、放疗后转移和复发鼻咽癌患者的血浆中游离EB病毒DNA检出阳性率分别为90.7%（97/100）,96.5%（27/28）和100.0%（18/18）,明显高于健康对照组的7.5%（3/40）,持续临床缓解鼻咽癌患者的10.0%（6/60）和其他肿瘤患者的阳性检出率（P＜0.001）.血浆EB病毒DNA定量检测对初诊鼻咽癌患者的诊断敏感性为97.0%,特异性为92.0%.另有3例持续临床缓解而血浆EB病毒DNA水平升高的鼻咽癌患者,在随后的6个月随访中,最终出现肿瘤复发或转移.结论血浆EB病毒DNA定量检测是一种敏感而可靠的实验方法,对鼻咽癌的诊断、病情监测和预后评估具有重要价值.     

EB病毒基因BARF1在鼻咽癌中的表达及其意义

目的 EB病毒与鼻咽癌(特别是低分化鳞癌)密切相关。BARF1基因是EBV裂解期中的早期基因，本研究通过检测BARF1基因在鼻咽癌组织中的表达，希望能进一步揭示EB病毒与鼻咽癌的关系及致癌的可能机制。方法 对经病理确诊的47例鼻咽低分化鳞癌病人分别取癌组织、癌旁组织及相对正常鼻咽黏膜和13例其他头颈部恶性肿瘤癌组织及8例正常人鼻咽黏膜组织(均证实有EB病毒潜伏感染)，采用巢式-PCR技术检测BARF1在这些组织中的表达情况。结果 鼻咽癌组织BARF1基因表达率为91．5％(43／47)，其中39例相对强表达，4例弱表达；癌旁组织BARF1基因表达率为46．8％(22／47)，其中儿例相对强表达，儿例弱表达；相对正常黏膜BARF1基因表达率为6．4％(3／47)，3例均为弱表达；携带EB病毒的其他头颈部恶性肿瘤组织、正常人鼻咽黏膜组织均未检测到：BARY1基因表达。结论 从相对正常鼻咽黏膜到癌旁组织再到鼻咽癌组织BARF1基因的表达趋势为从不表达到表达，从弱表达到强表达。说明EB病毒与鼻咽癌的发生确实存在密切相关性；提示启动BARF1基因的表达有可能是EB病毒致鼻咽癌的重要条件之一。     

鼻咽癌组织细胞死亡受体DR4和DR5 mRNA的表达

目的：分析鼻咽癌（NPC）组织细胞死亡受体（death receptor,DR)DR4和DR5 mRNA的表达。方法：从NPC癌组织提取的细胞总RNA逆转录生成第一条cDNA链后,再用DNA多聚酶链式反应扩增,经电泳,臭乙锭染色后,分析DR4和DR5受体mRNA的表达。结果：20例NPC癌组织有12例可检测到DR4 mRNA的表达,表达阳性率为60％,而所有20例NPC癌组织均可检测到DR5 mRNA的表达,8例非NPC鼻咽组织也都可检测到DR5 mRNA的表达,但未能检测到DR4 mRNA的表达。结论：DR4受体mRNA在NPC癌组织与非NPC鼻咽组织之间表达不同,而DR5受体mRNA在NPC癌组织与非NPC鼻咽组织之间的表达无差别,提示DR4和DR5死亡受体在NPC癌组织与非NPC鼻咽组织可能起着不同的作用。     

新疆汉族和维吾尔族鼻咽癌组织的PCR和免疫组化检测比较

目的：了解新疆汉族维吾尔族（维）族鼻咽癌（ＮＰＣ）发病因素的差别。方法：用ＰＣＲ与免疫组化技术对７３例ＮＰＣ组织（汉族４１例,维族３２例）分别进行ＥＢ病毒脱氧核糖核酸（ＥＢＶ－ＤＮＡ）、ＥＢ病毒核抗原（ＥＢＮＡ２）、潜伏膜蛋白（ＬＭＰ－１）检测。     

bcl-2、P 5 3基因及Epstein-Barr病毒在鼻咽癌中的表达

目的探讨鼻咽癌组织中p53、bcl-2、EBV表达情况及与主要临床指标间关系.方法免疫组化检测p53、bcl-2蛋白,多聚酶链反应(PCR)检测EBV.结果慢性炎性组织中p53、bcl-2及EBV阳性率分别为7.7%、23.1%和7.7%,明显低于鼻咽癌组织中的阳性率(分别为75.9%、88.9%和87.0%)(P<0.01).三者在鼻咽癌组织中共同阳性率为72.2%,p53、bcl-2明显正相关(r＝0.78,P<0.01).鼻咽癌伴颈淋巴结转移组p53阳性率(90.0%)明显高于无颈淋巴结转移组(58.3%)(P<0.01),临床Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期p53阳性率(分别为92.9%、78.9%和100%)均明显高于临床I期(38.5%)(P<0.01),且表达强度有增加的趋势.结论p53、bcl-2及EBV可作为鼻咽癌早期诊断的辅助指标之一,p53阳性的鼻咽癌患者较易发生颈淋巴结转移,随着鼻咽癌病程的发展,p53表达率及表达强度均增加,三者在鼻咽癌发生发展中起着重要作用.     

重庆地区鼻咽癌患者血浆EBV-LMP1基因检测及缺失变异分析

目的:研究重庆地区鼻咽癌和非鼻咽癌患者血浆EB病毒潜伏膜蛋白l(EBV-LMP1)基因存在情况及碱基缺失变异状况,探讨其在鼻咽癌发生中的作用.方法:收集重庆籍鼻咽癌患者外周血48例,非鼻咽癌对照者外周血40例,提取DNA后,采用PCR特异性地扩增LMP1基因N端(包含Xho Ⅰ酶切位点)和C端(包含30 bp缺失的区域),N端PCR产物进行Xho Ⅰ酶切.用8%聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳分离分析酶切及PCR产物,用双脱氧终止法对部分PCR产物进行测序,用DNAssist软件对序列进行碱基缺失变异分析.结果:48例鼻咽癌外周血中,全部扩增出特异性LMP1基因条带,阳性率为100%.40例非鼻咽对照者外周血中,38例扩增出特异性条带,阳性率为95%.与B95-8原型LMP1比较,电泳分离、酶切分析、测序及软件序列分析,48例鼻咽癌患者和38例非鼻咽癌对照者外周血未发现1例存在LMP1基因N端Xho Ⅰ酶切位点和C端30 bp的缺失变异.结论:我国重庆地区鼻咽癌患者和非鼻咽癌对照者血浆携带的EBV为非缺失型(原型);LMPl基因缺失变异与鼻咽癌发病的确切关系还需进一步研究.