聚合酶链反应检测EB病毒亚型对区分鼻咽良恶性病变的价值

以ＥＢ病毒核抗原（ＥＢＮＡ）Ａ亚型特异性引物作聚合酶链反应（简称ＰＣＲ－Ａ）同时用Ａ、Ｂ亚型ＤＮＡ片段和Ｂａｍ－Ｗ片段为探针，与鼻咽活检组织ＤＮＡ作打点核酸杂交（简称ＤＢＨ－Ａ、ＤＢＨ－Ｂ和ＤＢＨ－Ｗ）。ＤＢＨ－Ｂ结果全部阴性，ＰＣＲ－Ａ“ＤＢＨ－Ａ和ＤＢＨ０Ｗ检测的阳性率，３１例鼻咽癌分别为８３．９％（２６／３１）、７４．２％（２３／３１）和８０．６％（２５／３１）；３３例非鼻咽癌分别为１５．２     

鼻咽组织及脱落细胞中EB病毒对鼻咽癌诊断价值的对照研究

目的：探讨一种快速准确普查及诊断鼻咽癌（NPC）的方法。方法：应用聚合酶链反应（PCR）技术对临床怀疑NPC的144例患者的鼻咽组织和鼻咽脱落细胞中EB病毒（EBV）DNA进行检测,并与病理诊断对照。结果：PCR技术检测鼻咽组织中EBV DNA诊断NPC的敏感性和特异性分别为92．16％和80．95％;检测鼻咽脱落细胞中EBV DNA诊断NPC的敏感性和特异性分别为86．27％和71．43％,其差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论：检测鼻咽脱落细胞中EBV快速、简单,患者痛苦小,敏感性和特异性均较高,可用于NPC的诊断;对NPC的普查及流行病学调查尤其方便、实用,值得推广。对凡是EBV检测阳性的患者均应提高警惕,追踪观察。     

用聚合酶链反应检测鼻咽癌脱落细胞中EB病毒DNA

应用聚合酶连反应（ＰＣＲ）技术检测３５例鼻咽癌患者（２４例刚进行￣（６０）Ｃｏ放疗或未治疗，１１例放疗接近结束或刚结束）的鼻咽部脱落细胞中的ＥＢ病毒ＤＮＡ，１２例急、慢性扁桃体炎或咽炎患者为正常对照组，另有４例鼻咽癌的活检组织。结果：２４例鼻咽癌未治疗或刚治疗组中脱落细胞ＥＢ病毒ＤＮＡ阳性２０例（８３．３％），阴性４例（１６．７％）；１１例鼻咽癌放疗将近结束或刚结束组ＥＢ病毒阳性１例（９．１％），阴性１０例（９０．９％）；１２例对照组ＥＢ病毒ＤＮＡ阳性１例（８．３％），阴性１１例（９１．７％）。４例鼻咽部活检组织ＥＢ病毒ＤＮＡ均阳性。说明应用鼻咽部刮片脱落细胞进行ＰＣＲ反应检测ＥＢ病毒ＤＮＡ是一种方法简单、痛苦少，特异性强、灵敏度高的检测手段，可用于鼻咽癌的诊断、普查、流行病学调查等。     

鼻咽癌患者鼻咽组织和血清中EBV检测

目的：比较血清爱泼斯坦－巴尔病毒（ＥＢＶ）抗体滴定度测定与癌组织ＥＢＶ基因组检测对鼻咽癌（ＮＰＣ）的诊断价值。方法：１４６例患者采用双盲法测定血清ＥＢＶ－ＶＣＡ－ＩｇＡ,ＥＢＶ－ＥＡ－ＩｇＡ和活检组织ＥＢＶ－ＤＮＡ（ＰＣＲ）。全组病例按活检病理检查结果分析：ＮＰＣ组,非ＮＰＣ组（对照组）。结果：ＮＰＣ组中ＥＢＶ－ＤＮＡ（ＰＣＲ）,ＥＢＶ－ＶＣＡ－ＩｇＡ和ＥＢＶ－ＥＡ－ＩｇＡ的阳性率分别为９０．８％     

用聚合酶链反应检测鼻咽癌脱落细胞中EB病毒DNA

应用聚合酶连反应技术检测３５例鼻咽癌患者（２４例刚进行＾６０Ｃｏ放疗或未治疗，１１例放疗接近结束或刚结束）的鼻咽部脱落细胞中的ＥＢ病毒ＤＮＡ，１２例急、慢性扁桃体炎或咽炎患者为正常对照组，另有４例鼻咽癌的活检组织。结果：２４例鼻咽癌未治疗或刚治疗组中脱落细胞ＥＢ病毒ＤＮＡ阳性２０例（８３．３％），阴性４例（１６．７％）；１１例鼻咽癌放疗将近结束或刚结束组ＥＢ病毒阳性１例（９．１％），阴性１０例（９     

EB病毒DNA与鼻咽癌关系的动态研究

目的：探讨EB病毒DNA（EBV—DNA）在鼻咽癌放疗前后的动态变化及与复发、远处转移的关系。方法：采用PCR加限制性内切酶酶切技术检测EBVDNA。结果：放疗前,74例标本中有71例（95．9％）EBV—DNA片段检出阳性;放疗50Gy／5周时,23例鼻咽原发灶和颈部淋巴结消失,其阳性率为13．0％（3／23）,余51例肿块未消者阳性率为62,7％（32／51）;放疗至70Gy／7周时,7例放疗后有残留,有残留者在放疗结束时EBV—DNA片段的检出阳性率为71．4％（5／7）,在67例肿块消失者中未检出阳性EBV—DNA片段。12例复发者中,11例EBV-DNA片段检出阳性;8例转移者中EBV—DNA片段检出均为阳性。结论：检测血浆EBV—DNA能很好地反映肿瘤的消长,是诊断鼻咽癌残留、复发及远处转移的敏感指标。     

鼻、鼻窦恶性肿瘤中EB病毒和人乳头状瘤病毒的检测

目的：探讨ＥＢ病毒和人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）与鼻、鼻窦恶性肿瘤的关系。方法：用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测,３２例鼻、鼻窦恶性肿瘤组织蜡块的ＥＢ病毒和ＨＰＶ（ＨＰＶ６、１１、１６、１８、３３型）基因,分析其与病理分型及ＴＮＭ分期的关系。结果：３２例中检出ＥＢ病毒１２例（３７．５％）,ＨＰＶ２１例（６５．６％）,其中混合感染６例,５例均未检出。与之对照的１０例鼻息肉中未检出ＥＢＶ和ＨＰＶ。ＴＮＭ分     

EB病毒反义LMP1基因对人低分化鼻咽癌CNE－3细胞株生长的抑制作用

为研究鼻咽癌基因治疗的可能性，应用ＥＢ病毒反义ＬＭＰ１基因的重组逆转录病毒载体，用ＰＡ３１７细胞包装成假型逆转录病毒，免疫荧光检查该病毒能明显抑制Ｂ９５－８细胞内ＥＢ病毒的激活，抑制率达７１％。用此病毒成功地感染了人低分化鼻咽癌ＣＮＥ－３细胞株，使ＣＮＥ－３细胞生长速率下降约７０％，软琼脂集落形成和裸鼠致瘤能力均明显下降。用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实转染的肿瘤组织细胞中有较高水平的ｐＺＩＰ载体ｎｅｏ基因存在，证实了ＥＢ病毒反义ＬＭＰ基因能有效地抑制人低分化鼻咽癌ＣＮＥ－３细胞的生长和裸鼠致瘤能力，为鼻咽癌的基因治疗提供了实验依据。     

鼻咽癌患者血浆游离爱泼斯坦-巴尔病毒DNA定量测定的临床应用价值

目的分析血浆游离爱泼斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barr virus，EBV)DNA定量测定在鼻咽癌诊治中的临床应用价值。方法采用荧光定量聚合酶链反应(fluorescence quantitative polymerase chain reaction，FQ-PCR)技术，测定66份治疗前或治疗后的鼻咽癌患者血浆EBV-DNA含量，并与30例健康对照者相比较。分析该含量与鼻咽癌分期、淋巴结转移灶负荷以及治疗后短期疗效之间的相关性。结果鼻咽癌患者血浆EBV-DNA阳性率(66．7％，28／42例)和复制(中位数522．0拷贝／m1)均明显高于健康对照者(阳性率10％，3／30例；复制中位数0)；治疗前组中，Ⅲ～Ⅳ期患者复制量(中位数3130．0拷贝／m1)高于Ⅰ～Ⅱ期(中位数400．0拷贝／m1)，N2-3患者(中位数3250．0拷贝／m1)高于NO-1(中位数400．0拷贝／m1)。而且，治疗后患者(中位数0)低于治疗前(中位数522．0拷贝／m1)。治疗后短期疗效评估发现，病灶有残留者DNA含量(中位数2083．0拷贝／m1)高于病灶消退良好者(中位数0)。结论血浆游离EBV-DNA定量测定有可能成为反映鼻咽癌进展和预后的量化指标。     

聚合酶链反应对颈部肿块的EBV检测

目的：探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）对隐匿性鼻咽癌的诊断意义。方法：采用ＰＣＲ检测５８例颈部肿块的细针抽吸标本中的ＥＢ病毒（ＥＢＶ）。结果：３５例颈中、上淋巴结转移癌２８例ＥＢＶ阳性,３例淋巴瘤阴性,４例锁骨上淋巴结转移癌阴性;１６例淋巴结炎性病变１例为弱阳性,１５例均为阴性;该法诊断鼻咽癌的灵敏度为８９．３％,特异性为８６．７％。结论：用ＰＣＲ检测颈部转移癌中的ＥＢＶ－ＤＮＡ,对隐匿性鼻咽癌的诊断具     

鼻咽癌活检组织中HLA、EBNA及间质中T淋巴细胞亚群的分布

本实验对人类白细胞抗原（ＨＬＡ）、爱波斯坦－巴尔病毒核抗原（ＥＢＮＡ）、Ｔ细胞亚群的表达及分布进行综合分析，探讨其在癌变过程中的作用。用单克隆抗体Ｗ＿６／３２（抗ＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ）、ＣＲ＿３／４３（抗ＨＬＡ－ＤＲ，ＤＰ，ＤＱ）、和Ｔ＿４、Ｔ＿８、Ｔ＿（１１），以碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法（ＡＰＡＡＰ）和用鼻咽癌患者血清以抗补体Ｃ＿３免疫荧光法，检测鼻咽癌（２５例）及慢性鼻咽炎（１０例）活检组织中ＨＬＡ、Ｔ细胞亚群分型和ＥＢＮＡ的表达。结果显示，鼻咽癌癌细胞多有ＨＬＡ－Ⅰ和Ⅱ型抗原表达，而以ＨＬＡ－Ⅱ型抗原表达为明显；慢性鼻咽炎上皮细胞表达ＨＬＡ－Ⅰ和Ⅱ型抗原较弱，与癌细胞比较，差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。提示在癌变过程中，存在着ＨＬＡ表达的异常，体内ＥＢ病毒特异性Ｔ细胞可能不能识别带ＨＬＡ－Ⅱ型抗原的癌细胞，因而使其逃脱了机体的免疫监视。鼻咽癌组织中，癌细胞ＥＢＮＡ呈阳性和强阳性；癌间质中Ｔ细胞总数、Ｔ辅助、Ｔ杀伤细胞数量均减少，证明鼻咽癌局部细胞免疫功能降低。     

Detection of Epstein-Barr Virus in Nasopharyngeal Carcinoma by In Situ Hybridization and Polymerase Chain Reaction

The association of Epstein-Barr virus (EBV) with nasopharyngeal carcinoma (NPC) has been shown by various methods. The purpose of this study is to identify the most useful method to detect EBV in NPC. Both polymerase chain reaction (PCR) for EBV-DNA and in situ hybridization for EBV-encoded small RNAs(EBERs) were examined in formalin-fixed, paraffin-embedded NPC specimens. In situ hybridization was performed in 56 cases, and PCR for EBV-DNA was performed in 42 cases. EBV-DNA was detected in 0 of 3 keratinizing squamous cell carcinomas(KSCC), 22 of 24 nonkeratinizing carcinomas (NKC), all 13 undifferentiated carcinomas (UNPC), and 0 of 2 adenocarcinomas (AC). EBERs were detected in 0 of 5 KSCC, 30 of 32 NKC, 16 of 17 UNPC, and 0 of 2 AC. Among them, EBERs was detected in 35 of 42 cases in which PCR was also performed, 0 of 3 KSCC, 22 of 24 NKC, all 13 UNPC, and 0 of 2 AC, respectively. Both results were consistent in 40 of 42 cases. We conclude that both PCR and in situ hybridization are useful to detect EBV in NPC. In situ hybridization has a particular advantage because it can demonstrate the localization of EBV in neoplastic cells. In addition, close association of NKC and UNPC but not KSCC and AC with EBV is suggested.     

EB病毒在鼻咽癌发生中的作用

目的 :探讨鼻咽癌 (NPC)组织及患者外周血白细胞和血清中EB病毒DNA的分布及其与NPC的关系。方法 :采用多聚酶链反应 (PCR)检测 39例NPC组织 (NPC组 1)中EB病毒DNA ,2 4例NPC患者 (NPC组 2 )外周血白细胞及血清中EB病毒DNA ,2 0例慢性鼻咽炎组织 (对照组 1)中EB病毒DNA ,10例头颈部其他部位肿瘤患者 (对照组 2 )和 10例慢性鼻咽炎患者 (对照组 3)外周血白细胞及血清中EB病毒DNA ;同时采用免疫酶法检测NPC组 2、对照组 2和对照组 3血清中EB病毒VCA IgA抗体效价。 结果 :NPC组 1EB病毒DNA阳性率为 71.8% (2 8/ 39) ,对照组 1阳性率为 15 .0 % (3/ 2 0 ) ,其差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;NPC组 2外周血白细胞中EB病毒DNA阳性率为 4 1.6 7% (10 / 2 4 ) ,对照组 2阳性率为 10 .0 0 % (1/ 10 ) ,对照组 3外周血白细胞中EB病毒DNA为阴性 ,NPC组 2分别与对照组 2和对照组 3比较 ,差异均有统计学意义 (均P <0 .0 5 ) ;NPC组 2、对照组 2和对照组 3血清中EB病毒DNA均为阴性 ;NPC组 2血清中EB病毒VCA IgA抗体效价分别与对照组 2和对照组 3比较 ;差异均有统计学意义 (均P <0 .0 1)。结论 :NPC组织中检测出EB病毒DNA的阳性率较高 ,外周血白细胞中阳性率较低 ,血清中未能检测出EB病毒DNA ,说明EB病毒从癌组织—→外     

分泌性中耳炎中耳积液的Epstein-Barr病毒测定

目的：探讨在分泌性中耳炎（ＳＯＭ）中的发病过程中是否有Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒（ＥＢＶ）参与。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对３４例ＳＯＭ患者（ＳＯＭ组）的血清、口腔含濑液和中耳积液（ＭＥＥ）进行ＥＢＶ检测,并与２０例正常人进行比较。结果：ＳＯＭ组血清和口腔含漱液标本中ＥＢＶ的检出率明显高于对照组,ＳＯＭ组ＭＥＥ中的ＥＢＶ检出率高于其血液标本。结论：在ＳＯＭ的发病过程中有ＥＢＶ的参与。     

EB病毒核抗原1对鼻咽癌细胞增殖及细胞周期的影响

目的 研究EB病毒核抗原1(Epstein-Barr virus nuclear antigen 1,EBNA1)对人鼻咽癌细胞增殖及细胞周期的影响.方法 构建特异性的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)EBNA1慢病毒干扰载体,包装慢病毒后感染过表达EBNA1的鼻咽癌细胞C666-EBNA1(简写为CE).应用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)和细胞计数法检测细胞增殖状态,流式细胞术、荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法检测细胞周期及相关调控因子变化.结果 成功构建含shRNA EBNA1的重组慢病毒,其感染可显著下调CE细胞中EBNA1表达.细胞计数和MTT均证明CE-shRNA细胞的增殖能力较CE-对照组显著下降(P值均＜0.05).细胞周期提示干扰EBNA1后CE细胞G0-G1期比例由(62.43±6.62)%升高到(89.66±0.64)%,两者比较差异有统计学意义(t=-7.091,P=0.002),S期比例由(34.93±7.36)%下降为(7.82±2.44)%,两者比较差异有统计学意义(t=6.095,P=0.004),G2-M期无明显变化(t=0.090,P=0.933).抑制EBNA1后,c-myc、CDK4、CDK6、pRb的mRNA水平分别下调65.60%、34.06%、41.05%、55.29%.蛋白免疫印迹法证实抑制EBNA1后4种蛋白的表达亦下调.结论 沉默EBNA1基因可抑制鼻咽癌细胞增殖,其机制之一可能是通过影响c-myc、CDK4、CDK6、pRb等基因的表达使鼻咽癌细胞阻滞于G0-G1期.