8—MOP与ATRA联合应用对Mc3细胞bcl—2和P~(53)表达的影响

目的:研究8—MOP、ATRA以及二者联合应用对Mc3细胞bcl-2和P~(53)表达的影响。方法:免疫组织化学染色方法。结果:bcl—2表达分别为:对照组( );8-MOP组( );ATRA(-);8—MOP与ATRA联合用药组( );P~(53)表达分别为:对照组( );8-MOP组( );ATRA( );8—MOP与ATRA联合用药组( )。结论:①ATRA处理组细胞bcl—2的阳性表达明显下降,可能导致Mc3细胞发生凋亡;②P~(53)的表达无明显变化。     

8—MOP、ATRA以及二者联合应用对Mc3细胞nm—23表达的影响

目的 研究8—MOP、ATRA以及二联合应用对Mc3细胞mm-23基因蛋白表达的影响．方法 采用免疫组织化学染色法。结果 对照组( )．8—MOP组( ),ATRA组( ),8—MOP ATRA组( )。结论 8—MOP、ATRA及二联合应用使Mc3细胞nm—23的阳性表达下降,可能对Mc3细胞的转移特性有影响。     

8—MOP联合ATRA对腺样囊性癌细胞系SAcc83细胞的抑制作用

为研究8—MOP联合ATRA对人涎腺腺样囊性癌细胞系SAcc83细胞的抑制作用特点,应用MTT法测试并绘制药物抑制曲线,用倒置显微镜观察细胞形态变化。30％细胞生长抑制时,最佳联合用药合并指数(CI_(30))为0.66;50％细胞生长抑制时,最佳联合用药合并指数(CI_(50))为0.37,表明适当浓度的8—MOP与ATRA联合应用对SAcc83细胞可以呈现协同效应。单独应用8-MOP、ATRA或二者联合应用,SAcc83细胞出现退行性病变改变及类似凋亡小体样结构。合适浓度的8—MOP与A-TRA联合应用的临床价值有待进一步研究。     

全反式维A酸对胃癌干细胞相关基因CD133、Sox2及GSK3B表达的影响

 目的 探讨全反式维A酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对胃癌干细胞相关基因CD133、Sox2及GSK3B表达的影响,为胃癌治疗提供新的切入点。方法 建立人胃癌裸鼠移植瘤模型,分为对照组、氟尿嘧啶组、ATRA组、氟尿嘧啶+ATRA组,采用ATRA腹腔注射,观察裸鼠一般状况,取出肿瘤组织,HE染色,检测各组胃癌细胞坏死情况;采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、实时定量PCR方法,分析检测CD133mRNA、Sox2mRNA及GSK3BmRNA基因表达,并通过免疫组化法检测CD133、Sox2及GSK3B蛋白表达。结果 与对照组相比较,氟尿嘧啶组、ATRA组、氟尿嘧啶+ATRA组肿瘤体积缩小,差异有统计学意义(P<0.05);氟尿嘧啶组、ATRA组、氟尿嘧啶+ATRA组高表达CD133、Sox2干细胞相关因子;ATRA组、氟尿嘧啶+ATRA组高表达GSK3B,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ATRA作用后胃癌干细胞标志物CD133、Sox2、GSK3B表达增加;CD133、Sox2、GSK3B表达增加可以抑制肿瘤细胞生长;ATRA老药新用对胃癌的治疗预后有一定的作用。     

全反式维甲酸对甲状腺癌细胞NIS基因表达及摄碘水平的影响

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对甲状腺癌细胞株钠／碘同向转运体(NIS)基因表达及摄碘水平的影响。方法以不同浓度ATRA作用于3株甲状腺癌细胞(FIE-133、K1、8505C)，利用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测NIS mRNA表达，并测定细胞摄碘水平。结果ATRA在10^-7～10^-4mol／L范围内可剂量依赖性上调FTC-133细胞NIS mRNA的表达，增强FIE-133细胞的摄碘能力；ATRA在10^-6～10^-4mol／L范围内可上调K1细胞NIS mRNA的表达，并增加其摄碘水平；不同浓度组均未见8505C细胞NIS mRNA的表达和摄碘水平增加。结论ATRA可上调FIE-133、K1细胞NIS基因表达，提高其摄碘能力，这为ATRA用于分化型甲状腺癌的^131I治疗提供了实验依据。     

高效液相色谱分析全反式维甲酸在HL-60细胞液中的含量变化

目的　分析HL - 6 0细胞培养液中全反式维甲酸 (ATRA)的含量变化 ,为临床治疗白血病提供实验依据。方法　急性早幼粒白血病细胞株HL - 6 0 ,经ATRA及联合用药处理。乙醚 -丙酮 (8∶1v/v)提取ATRA ,高效液相色谱法分析。结果　A TRA在 2 .5 0× 10 -2 ～ 1.0 0× 10 μmol·L-1的范围内 ,有良好的线性关系。平均回收率 94 .5 % ,相对标准差小于 4 .0 3%。联合用药各组、各时相点的ATRA的含量均高于ATRA单独处理组 ,其环比显示 :联合用药各组 ,各时相点ATRA的分解比ATRA单独处理组低。结论　联合用药治疗急性早幼粒白血病具有协同作用 ,适于临床应用     

17β-雌二醇对人涎腺黏液表皮样癌Mc3增殖周期的影响

目的 探讨17β-雌二醇(E2)对体外培养的人涎腺黏液表皮样癌Mc3细胞系增殖周期的影响。方法 以不同浓度、时间的E2处理Mc3细胞,采用MTT法、流式细胞术、免疫组织化学染色法,检测E2对人涎腺黏液表皮样癌Mc3细胞系细胞群体倍增时间、细胞周期分布以及对CyclinDl、P27^Kip1阳性表达的影响。结果 浓度分别为10^-9、10^-8、10^-7mol／L的E2作用于细胞第5天时,MTT法测得E2处理组细胞增殖促进率分别为29％、54％、59％,CyclinDl的阳性表达率分别增加了16％、9％、24％,P27^Kip1。的阳性表达率分别减少了33％、30％、55％。流式细胞术检查结果显示,10^-7mol／L的E2处理12、18、24h后,细胞周期中S期细胞比相应对照组分别增加了11．3％、6．6％、46．7％,细胞增殖指数分别增加了6．0％、3．6％、205．5％。结论 生理浓度的E2可以促进CyclinD1的表达、降低．P27^Kip1的阳性表达,从而促进细胞周期Gη／s期转换,增加S期细胞数量,加速DNA合成,刺激肿瘤发生、发展。     

MEC-1、Mc3细胞的生长抑素受体表达及其与放射配基结合特性的研究

目的　探讨人涎腺粘液表皮样癌细胞系 (MEC 1)及人粘液表皮样癌高转移细胞株(Mc3)生长抑素受体 (SSTR) 2种亚型 (SSTR1、SSTR2 )的表达 ,及两者与SSTR的放射配基1 2 5I RC 16 0的结合差异。方法　①采用细胞计数法、软琼脂法等观察MEC 1及Mc3细胞株生物学特性 ;②以原位杂交法检测MEC 1、Mc3细胞株SSTR1及SSTR2亚型的表达情况 ;③以放射配基结合分析法分析MEC 1、Mc3细胞与1 2 5I RC 16 0结合情况。结果　①MEC 1、Mc3细胞生长稳定 ,Mc3细胞较MEC 1生长速度略快 ,克隆形成率高 ;②MEC 1细胞高度表达SSTR1及SSTR2 ,表达率分别为 82 .6 %和 81.7% ;Mc3细胞未见 2种亚型表达 ;③MEC 1和Mc3细胞与1 2 5I RC 16 0的特异结合率分别为 (2 3.8± 9.4 ) %和 (3.2± 2 .3) % ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论　MEC 1高度表达SSTR1及SSTR2 ,其与SSTR配基RC 16 0的特异结合率显著高于Mc3细胞。     

维甲酸提高膀胱癌细胞缝隙连接蛋白Cx26的表达

目的:体外观察全反式维甲酸(ATRA)对人源膀胱移行细胞癌BIU-87细胞的缝隙连接蛋白Cx26表达的影响。方法:分别用终浓度为0μmol/L、1μmol/L和10μmol/L的ATRA作用72h后免疫细胞化学法和半定量RT-PCR观察连接蛋白Cx26的表达情况及mRNA水平。结果:对照组细胞Cx26表达为阴性,mRNA水平低,几乎不表达,经过维甲酸刺激后表达显著增高,mRNA水平也显著提高。结论:ATRA可以促进Cx26基因转录,提高mRNA水平,增加Cx26连接蛋白的表达。     

维甲酸诱导白血病细胞分化对WT1基因表达的影响

为了解WT1基因的表达与白血病细胞分化的关系以及WT1基因在白血病细胞分化中的作用。本文采用全反式维甲酸（ATRA）诱导HL-60、K562细胞系分化,然后应用NBT还原试验和RT-PCR方法分别测定细胞分化程度笔WT1基因表达的变化。结果发现,ATRA作用5天后可以诱导HL-60细胞分化,WT1的表达随着HL-60细胞的分化而降低;ATRA对K562细胞无诱导分化作用。其WT1的表达也无显著变化。提示WT1基因的表达与造血细胞分化呈负相关,与白血病细胞的分化有密切联系。     

低频超声联合苦参素对人卵巢癌OVCAR-3细胞生物学特性影响

目的研究低频超声和苦参素联合应用对人卵巢癌OVCAR-3细胞生物学行为的影响。方法培养人卵巢癌OVCAR-3细胞,采用随机分组分为4组:对照组、低频超声组、苦参素组和联合组(低频超声+苦参素)。分别给予如下处理:低频超声组为超声840 k Hz,0.75 W/cm~2×3 min辐照;苦参素组为药物浓度为10 mg/ml培养24 h;联合组叠加处理因素。应用CCK-8检测各组细胞增殖;流式细胞仪检测各组细胞凋亡;Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果单独应用低频超声或苦参素均可抑制OVCAR-3细胞增殖、诱导细胞凋亡、促进细胞侵袭。与单独应用组相比,低频超声和苦参素联合,上述作用显著增强。结论低频超声可增强苦参素诱导的抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭能力以及诱发凋亡的作用。     

全反式维甲酸对乳腺癌MCF-7细胞周期和增殖活性的影响及restin基因表达的初步研究

目的:检测全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)在乳腺癌MCF-7细胞周期、增殖、分化和凋亡过程中的作用,以及对。restin基因表达的影响,从而为研究其功能提供线索。方法:用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期的变化;MTT 法检测细胞增殖活性;RT-PCR检测restin基因表达。结果:在ATRA诱导下,细胞出现G1期阻滞和生长抑制,增殖活性下降,restin基因开始表达,并呈增长趋势。结论:在ATRA诱导MCF-7细胞分化、凋亡过程中,ATRA能使MCF-7细胞 G1期阻滞,并能抑制MCF-7细胞生长,促使其凋亡,restin基因参与细胞周期的调控,特别是细胞凋亡。     

高压氧通过下调miR-720表达抑制卵巢癌SKOV-3细胞恶性生物学行为的研究

目的探讨高压氧(HBO)处理对卵巢癌SKOV-3细胞miR-720的表达及其恶性生物学行为的影响。方法卵巢癌SKOV-3细胞按照实验设计分为对照组和HBO组, 对照组SKOV-3细胞常规培养, HBO组SKOV-3细胞常规培养完成后予以0.2 MPa HBO处理。同时将培养好的卵巢癌SKOV-3细胞按照随机数字表法再分为3组, 正常对照(NC)组、HBO组和HBO+miR-720组, 其中HBO组按照HBO条件进行培养, HBO+miR-720组在HBO处理前转染miR-720质粒, HBO组和NC组同时转染NC质粒, 转染24 h后收集细胞进行后续实验。应用qPCR检测SKOV-3细胞miR-720 mRNA表达水平, 应用Western印迹法检测SKOV-3细胞上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白(N-cadherin、E-cadherin、Vimentin)和miR-720蛋白的表达水平, 应用CCK-8法检测SKOV-3细胞增殖能力, 应用克隆形成实验检测SKOV-3细胞克隆形成能力, 应用细胞划痕实验和Transwell实验检测SKOV-3细胞侵袭和迁移能力。结果应用HBO处理...     

2-羟基-3-甲基蒽醌联合紫杉醇对卵巢癌细胞Caspase-8、Caspase-9及Caspase-3表达影响

目的研究中药白花蛇舌草的有效成分2-羟基-3-甲基蒽醌联合紫杉醇对人卵巢癌细胞A2780生长的抑制作用和细胞凋亡的影响,以探讨两药联合对A2780细胞的作用机制。方法将对数生长期的A2780细胞随机分为空白对照组(A组)、B组(紫杉醇3μg/ml)、C组(2-羟基-3-甲基蒽醌50μM)和D组(2-羟基-3-甲基蒽醌50μM+紫杉醇3μg/ml)。采用MTT法检测各组细胞的活性,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;采用荧光比色法测定Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3蛋白酶的活性。结果与A组比较,B、C、D组对A2780细胞均有明显的抑制生长及诱导凋亡作用;D组对A2780细胞的抑制及诱导凋亡作用显著高于C组或B组(P<0.05);各组抑制率及凋亡率均呈时间依赖性(P<0.05)。Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3蛋白酶的表达从A~D组呈逐渐升高的趋势。结论 2-羟基-3-甲基蒽醌可协同紫杉醇促进A2780细胞凋亡,其机制可能是通过增加Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3的表达。     

全反式维甲酸对急性白血病骨髓基质细胞GJIC功能的影响

目的 观察在全反式维甲酸(ATRA)作用下急性白血病骨髓基质细胞间连接蛋白43(Cx43)表达的变化及通讯功能的改变.方法 体外培养急性白血病骨髓基质细胞,传代后加入ATRA(1×10-5mol/L),采用细胞免疫化学及流式细胞术检测加药前后Cx43表达的变化;采用细胞划痕染料传输技术比较二者间隙连接细胞间通讯(GJIC)功能的差异.结果 急性白血病骨髓基质细胞加药前后,细胞免疫化学方法检测Cx43表达的阳性率分别为47.2%±2.04%和54.5%±5.66%,流式细胞术检测Cx43的含量为38.75%±23.95%和49.5%±5.46%;加药后染料可传输至4～5列细胞,明显高于加药前(P＜0.01).结论 加入ATRA后,急性白血病骨髓基质细胞间通讯功能较加药前明显增强.     

氨甲蝶呤辐射增敏作用与RAD51的相关性研究

目的 探讨同源重组修复蛋白RAD51与氨甲蝶呤辐射增敏作用的相关性.方法 分别采用Western blot和RT-PCR法,观察γ射线、氨甲蝶呤及二者联合应用对人骨肉瘤细胞RAD51表达的影响,克隆形成实验观察氨甲蝶呤对RAD51高表达前后骨肉瘤细胞辐射增敏作用的影响.结果 氨甲蝶呤在蛋白质和RNA水平抑制RAD51的表达,氨甲蝶呤和射线联合应用可明显降低RAD51的表达水平;HOS细胞和RAD51高表达的HOS-RAD51细胞加药前后的辐射增敏比分别为1.51和0.99,表明氨甲蝶呤对HOS细胞具有较好的放射增敏性.结论 RAD51可能参与了氨甲蝶呤的辐射增敏作用.     

辐射诱导对小鼠巨噬细胞钙结合蛋白S100A8表达及调控影响的初步研究

目的 探讨辐射诱导后小鼠巨噬细胞中钙结合蛋白S100A8 mRNA的表达情况及其调控机制.方法 体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,按处置方法不同分为4组:A组正常培养48h;B组经10Gy射线照射后培养48h;C组用5g/ml LPS培养24h后,更换新鲜培养基继续培养24h;D组经10Gy射线照射后培养24h,然后添加5g/ml LPS继续培养24h.采用RT-PCR及定量PCR方法检测各组细胞S100A8 mRNA表达的变化.分别采用H2O2和喜树碱处理细胞,定量PCR检测S100A8 mRNA表达的变化.构建上游5′端系列报告基因表达载体并转染细胞,采用双荧光素酶法榆测报告基因的表达水平.结果 经γ射线或LPS刺激后,RAW264.7细胞S100A mRNA表达明显增加,二者联合作用后增加更为明显(P<0.05);H2O2处理后S100A8 mRNA表达增加,而喜树碱处理后其表达没有明显变化.单独经γ射线或LPS刺激后,报告基因的表达无明显变化,而二者联合作用后报告基因表达明显增加(P<0.05).结论 辐射诱导可促进RAW264.7细胞中钙结合蛋白S100A8 mRNA的表达.     

维甲酸诱导甲状腺癌细胞摄碘的实验研究

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)诱导甲状腺癌细胞系的钠碘同向转运体(NIS)表达及其碘摄取。方法通过ATRA诱导甲状腺癌细胞系滤泡状甲状腺癌细胞株(FIE-133)、乳头状甲状腺癌细胞株(W3)及未分化甲状腺癌细胞株(8505C)后，经逆转录．聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测甲状腺癌细胞系的NIS mRNA及其蛋白质表达，并测定甲状腺癌细胞系诱导后的摄碘变化。结果ATRA诱导甲状腺癌细胞系48h后，FTG-133和W3的NIS mRNA及蛋白质表达增高，8505C未见变化；ATRA诱导甲状腺癌细胞系2周后．FTC-133和W3的摄碘增高。结论ATRA能诱导分化型甲状腺癌细胞摄碘增高，为ATRA诱导分化治疗甲状腺癌提供了依据。     

组蛋白乙酰转移酶GCN5对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的作用

目的 探讨组蛋白乙酰转移酶GCN5介导的组蛋白H3乙酰化对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞(A549细胞)增殖、凋亡及炎性因子表达的作用。方法 将A549细胞随机分为6组：对照组、LPS组、NC+LPS组、GCN5+LPS组、MB-3(GCN5抑制剂)+LPS组和GCN5+MB-3+LPS组。分别比较对照组、LPS组和GCN5+LPS组，以及LPS组、MB-3+LPS组和GCN5+MB-3+LPS组的组蛋白H3乙酰化水平、GCN5表达水平、细胞活性与增殖情况、细胞凋亡情况、炎性因子水平的差异。采用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测GCN5 mRNA表达水平；CCK-8试剂盒检测细胞活性；EdU实验检测细胞增殖情况；流式细胞术检测细胞凋亡情况；Western blotting检测GCN5、H3K9ac、H3K14ac、H3K23ac、Caspase-3和Bcl-2蛋白表达水平；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平。结果 与对照组A549细胞比较，LPS组的H3K9ac、H3K14ac、H3K23ac...     

今又生联合h-R3对不同放射敏感性食管癌细胞的作用研究

目的探讨重组腺病毒-p53抗癌注射液（今又生）、重组人源化表皮生长因子受体单克隆抗体（h-R3）单独及联合应用对不同放射敏感性食管癌细胞的作用。方法用MTT法测定h—R3、今又生及两药联合对TE13及放射抗拒性细胞TE13R120的生长情况的影响；采用流式细胞术检测两种药物单独及联合作用对TE13、TE13R120细胞周期分布的影响及对Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。结果h-R3、今又生及联合用药组均对两种细胞增殖产生抑制作用，联合用药组对两种细胞的抑制作用高于h-R3单药组和今又生单药组，但差异均无统计学意义（P〉0.05）。h-R3与今又生同时作用后12h，对TE13细胞产生明显的G1期阻滞（P〈0.05），而对TE13R120可产生轻度的G1期阻滞。两药同时作用后12h，对凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达的影响不明显。结论h—R3与今又生联合应用对不同放射敏感性的食管癌细胞产生了增殖抑制作用，这种增殖抑制作用的发生可能与G1期阻滞有关，其具体机制有待于进一步研究。