脑缺血损伤后β淀粉样蛋白及其前体蛋白在脑组织中的表达及治疗

β淀粉样蛋白（Aβ）及其前体蛋白（APP）沉积被认为是Alzheimer病的特征性病理改变之一。近年的研究表明，在缺血性脑损伤后，APP、Aβ也发生沉积，因此APP、Aβ可能参与了缺血后脑损伤的发生与发展。本文就脑缺血损伤后APP、Aβ在脑组织中的表达、作用机制和针对β淀粉样蛋白治疗策略进行综述。     

APP转基因小鼠与正常小鼠脑蛋白质组双向电泳图谱的比较

目的探讨APP转基因小鼠与正常C57小鼠脑蛋白质组双向电泳(2-DE)图谱差异,从蛋白质水平初步探索老年性痴呆发病机制。方法APP转基因小鼠与正常C57小鼠脑组织经蛋白提取后,分别以固相pH梯度等电聚焦为第一向,SDS-PAGE垂直电泳为第二向进行2-DE。图像分析软件ImageMaster 2D Elite分析电泳图谱。结果APP转基因小鼠与正常小鼠脑组织2-DE图谱分别检测出976和947个蛋白点。对两张电泳图进行匹配后,发现有16个蛋白点仅在APP转基因小鼠脑蛋白2-DE图谱检测到表达,而有7个蛋白点只在正常小鼠检测到。部分蛋白在2组小鼠脑组织中含量发生了明显变化。结论差异点的发现初步建立了差异表达蛋白质组学的技术方法;为研究阿尔茨海默病机制及研发新药提供了有益的线索。     

淀粉样前体蛋白酶与β-淀粉样蛋白在衰老痴呆大鼠脑组织中的表达

目的 观察衰老痴呆大鼠脑组织淀粉样前体蛋白酶(APP)、β-淀粉样蛋白(Aβ)表达,探讨APP及Aβ在痴呆衰老中的作用机制.方法 Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、4、6、8 w模型组.穿梭箱实验、Morris水迷宫实验检测认知行为学改变,蛋白质免疫印迹法和酶联免疫吸附法检测APP,酶联免疫吸附法检测Aβ在衰老痴呆大鼠脑组织中的表达,用图象分析仪测定光密度值.结果 4、6及8 w模型组APP、Aβ表达较正常组及假手术组明显增高(P＜0.01),3个模型组间比较无显著差异(P＞0.05),APP和Aβ表达时间上无相关性,APP蛋白表达水平与学习、记忆正相关,Aβ蛋白表达水平与学习、记忆负相关.结论 APP及Aβ在衰老痴呆大鼠脑组织表达增高,推测APP具有脑保护作用,Aβ参与了衰老痴呆的发病机制但不具有病理意义.     

D-半乳糖、氯化铝中毒阿尔茨海默病模型小鼠脑组织Aβ蓄积原因探讨

目的 探讨D-半乳糖及氯化铝中毒阿尔茨海默病模型小鼠脑组织β淀粉样蛋白(Aβ)蓄积的原因.方法 取42只小鼠颈背部皮下注射D-半乳糖(90 mg/kg)和三氯化铝制做模拟Aβ代谢异常的阿尔茨海默病小鼠模型(模型组),另取42只小鼠颈背部皮下注射生理盐水,于用药后0、15,30,45、60、75、90d两组分别取6只大鼠行行迷宫试验,观察两组逃避潜伏期;然后处死大鼠取海马组织,采用定量PCR法检测淀粉样前体蛋白(APP)、β分泌酶(BACE1)、胰岛素降解酶(IDE) mRNA表达;Westernblot法检测Aβ、BACE1和IDE蛋白表达.结果 与对照组比较,模型组逃避潜伏期明显延长;APPmRNA水平无明显变化,Aβ蛋白水平明显升高;BACE1mRNA及蛋白水平均显著升高;IDE mRNA及蛋白水平无明显变化.结论 D-半乳糖及氯化铝中毒阿尔茨海默病模型小鼠脑组织Aβ蓄积的可能为BACE1表达增加所致,而非IDE降解减少或APP表达增加所引起.     

淀粉样前体蛋白和β-微管蛋白在脑梗死患者血液中的表达及意义

目的探讨淀粉样前体蛋白(APP)和β-微管蛋白在脑梗死患者血液中的表达及其临床意义。方法收集88例脑梗死急性期患者为观察组,选择30健康体检者为对照组,应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测两组血APP和β-微管蛋白的表达,分析其在不同临床特征之间的关系。结果 APP和β-微管蛋白在观察组患者中高表达,与对照组比较差异有统计学意义(P0.01);APP和β-微管蛋白的表达在大面积脑梗死患者中高于中小面积患者,脑梗死死亡组患者高于存活组患者,差异有统计学意义(P0.05,0.01)。结论联合检测APP和β-微管蛋白可能对脑梗死患者判断预后及指导治疗有重要意义。     

淀粉样肽前体蛋白片段免疫改善糖尿病小鼠脑内β淀粉样肽类蛋白的表达

目的　探讨用 β淀粉样肽前体蛋白 (APP)中的某些肽段免疫小鼠可否减轻小鼠脑内 β淀粉样肽 (Aβ)及其前体蛋白 (APP)的表达。方法　分别用 APP中的 31 9- 335肽段 (APP1 7肽 )、597- 62 4肽段 (APP2 8肽即 Aβ1 - 2 8)免疫小鼠 ,APP1 7肽、Aβ1 - 2 8由我室合成并纯化。第 3次免疫后 ,诱发小鼠糖尿病模型。小鼠分 4组 :即用 APP1 7肽免疫的正常小鼠 (1 7PC) ;用 APP1 7肽免疫后诱发糖尿病的小鼠 (1 7PDM) ;用 Aβ1 - 2 8免疫的正常小鼠 (2 8PC) ;用 Aβ1 - 2 8免疫后诱发糖尿病的小鼠 (2 8PDM)。第 5次免疫后 ,对各组小鼠脑切片进行 Aβ类抗体的免疫组织化学染色。结果　 1 7PC组小鼠海马内表达 Aβ1 - 4 2、 Aβ1 - 1 6及 APP C端抗体的阳性染色神经元数目多 ,而 1 7PDM组小鼠海马内上述各种抗体的阳性染色数目比 1 7PC组明显减少 (P<0 .0 1 ) ;2 8PC组小鼠海马内表达 Aβ1 - 4 2、Aβ1 - 1 6及 APP N端抗体的阳性染色神经元数目多 ,而 2 8PDM组小鼠海马内上述各种抗体阳性染色的数目比 2 8PC组明显减少 (P<0 .0 1 )。结论　糖尿病小鼠血 -脑屏障破坏 ,抗体进入脑组织 ,与β淀粉样肽或其前体蛋白结合而使之易被清除。     

小鼠糖尿病脑病神经元退变的机制及淀粉样β蛋白前体17 …

目的 观察小鼠糖尿病脑淀粉样β肽（Ａβ）和内质网Ａβ结合蛋白（ＥＲＡＢ）的变化,以了解糖尿病神经元退变的可能机制并观察淀粉样β蛋白前体（ＡＰＰ）１７肽的作用。方法 用链脲佐菌素诱发糖尿病小鼠模型,并用ＡＰＰ１７肽保护。４周后,取脑,做ＡＰＰ１７肽,Ａβ１－４０、Ａβ１－４２、Ａβ１－１６及ＥＲＡ经染色。结果 正常小鼠海马内表达ＡＰＰ１７肽、Ａβ１－４０、Ａβ１－４２、Ａβ１－１６及ＥＲＡＢ免疫组化     

小鼠皮层和海马Aβ前体蛋白表达的增龄性改变

目的 探讨年龄对小鼠皮层和海马神经元Aβ前体蛋白(APP) 695表达的影响.方法 C57BL/6J雄性小鼠按照年龄随机分为3组:2月龄组、12月龄组和20月龄组;采用免疫组织化学和免疫印迹方法观测各组皮层和海马神经元APP695蛋白的表达.结果 与2月龄相比,12月龄组海马和皮层神经元APP695蛋白水平明显升高(P＜0.05);20月龄组APP水平较12月龄组明显升高(P＜0.05,P＜0.01).结论 小鼠皮层和海马神经元APP695的表达随着年龄的增长而增高.     

表观遗传和蛋白质翻译后修饰对β位淀粉样前体蛋白裂解酶1表达调控的研究进展

<正>β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)最早于1999年被发现鉴定,它是催化β淀粉样蛋白(Aβ)生成的关键限速酶,而Aβ单体的异常聚集所形成的淀粉样斑块是阿尔茨海默病(AD)的典型病理特征。在AD患者的大脑及体液中BACE1的浓度及活性异常增高,BACE1在AD的病理级联过程中发挥重要作用。因此,BACE1是减少Aβ生成,改善早期AD的重要药物靶标。BACE1除了参与淀粉样前体蛋白的淀粉样途径,     

阿尔茨海默病发病机制中突触病理及突触囊泡内吞蛋白的改变

<正> 阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是常见于老年人的中枢神经系统退行性变疾病,以进行性认知功能障碍为主要临床表现。由β淀粉样肽(β-amyloid peptide,Aβ)沉积形成的老年斑(senileplaques,SP)、高度磷酸化Tau蛋白聚集形成的神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs)及神经元丢失构成AD脑组织中典型的神经病理学改变。最近的研究显示,突触丧失亦是AD脑组织中另一个较为突出的神经病理改变,是AD早期学习记忆能力减退的病理学基础。通过对AD患者尸体解剖研究发现,AD脑组织突触功能低下,不同脑区内许多与突触功能密切相关的蛋白表达异常,其中网格蛋白(clathrin)介导的突触囊泡回收蛋白在AD脑组织中表达显著下降。本研究就AD的突触病理改变及网格蛋白介导的突触囊泡内吞蛋白作用研究进展进行简述。     

前咽缺陷蛋白-1在APP/PS1转基因阿尔茨海默病小鼠模型中枢神经系统的分布及表达

目的 研究y-分泌酶组件蛋白APH-1(anterior pharynx defective 1,APH-1)在成年APP/PS1双转基因痴呆小鼠中枢神经系统(central nervous system,CNS)中的分布及表达,以及在阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型鼠和野生型小鼠脑中的表达差异,以进一步明确APH-1与AD的关系.方法 对APP/PS1双转基因AD模型种鼠交配后产下的子代进行基因分型,用免疫组化方法检测APH-1在成年APP/PS1双转基因痴呆模型小鼠CNS内的分布及表达,以及比较APH-1在出生后1d、7d、21 d、120 d的痴呆小鼠及同窝野生型小鼠脑内的表达和分布情况.结果 APH-1广泛分布于成年痴呆小鼠CNS的各区域,包括大脑皮质、海马、嗅脑、丘脑、纹状体、尾状核、中缝大核、小脑、脑干和脊髓等;出生1 dAD模型鼠与同窝野生型小鼠大脑皮质内APH-1均有高水平表达,而出生7d、21d表达水平较低,且成年小鼠脑中其表达量有所回升;各时间点痴呆小鼠脑内APH-1免疫阳性反应都比同窝野生型小鼠显著增强(P＜0.05).结论 APH-1在痴呆小鼠的CNS中广泛分布,但不同脑区分布和表达存在差异;且痴呆小鼠和正常野生型小鼠脑内APH-1分布和表达有区别,这些差异可能与AD的发生相关.     

二苯乙烯苷对APP/PS1双转基因阿尔茨海默病小鼠脑内β淀粉样前体蛋白及分拣蛋白相关受体1 mRNA表达的影响

目的研究二苯乙烯苷(TSG)对APP/PS1双转基因小鼠脑内β淀粉样前体蛋白(APP)及分拣蛋白相关受体(SORL)1表达的影响。方法 3月龄APP/PS1双转基因鼠50只,随机分为模型组、阳性药石杉碱甲组、TSG高、中及低(0.3,0.1,0.033 g/kg)剂量组,另取同龄C5B7L/6J鼠10只为正常对照组。各组给予相应药物60 d后,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察小鼠海马神经元的一般结构;免疫组化SABC法检测各组小鼠脑组织APP蛋白的表达。FQ-PCR法检测SORL1 mRNA表达情况。结果与模型组比较,各组小鼠大脑皮层及海马区形态均有不同程度恢复;APP表达量均下降(P0.01,P0.05);SORL1 mRNA表达均有所上调(P0.05)。结论 TSG治疗阿尔茨海默病(AD)的机制可能与促进SORL1 mRNA生成、抑制APP异常代谢、减少老年斑的生成等机制有关。     

APP17肽对糖尿病小鼠微管结构和tau蛋白磷酸化有关酶类的影响

目的　观察ＡＰＰ１７ 肽对糖尿病小鼠微管结构及ｔａｕ 蛋白磷酸化有关酶类变化的影响。　方法　用链脲佐菌素（ＳＴＺ）诱发小鼠糖尿病模型,并皮下注射ＡＰＰ１７ 肽对糖尿病小鼠进行保护。４周后,小鼠灌注固定。取各组小鼠的海马ＣＡ１ 区组织进行光镜和电镜观察。行冰冻切片,做糖原合成激酶（ＧＳＫ３）、细胞周期动态激酶（ＣＤＫ５）、蛋白磷酸酶１（ＰＰ１）、蛋白磷酸酶２Ａ（ＰＰ２Ａ）、微管蛋白（ｔｕｂｕｌｉｎ）免疫组化染色。　结果　（１）糖尿病小鼠海马神经元的微管结构出现明显的断裂或溶解现象,而用ＡＰＰ１７ 肽保护可使这种现象得到明显改善;（２）糖尿病小鼠海马内表达磷酸化ｔａｕ 蛋白的两种蛋白激酶ＧＳＫ３、ＣＤＫ５ 及表达脱ｔａｕ 蛋白磷酸化的磷酸酯酶ＰＰ１、ＰＰ２Ａ 均明显减少,用ＡＰＰ１７ 肽保护的糖尿病小鼠上述酶类表达均恢复至正常水平。　结论　糖尿病小鼠脑组织代谢紊乱,蛋白质合成降低。ＡＰＰ１７ 肽可能是一种能量代谢激动剂,通过保持糖尿病小鼠海马神经元ｔａｕ 蛋白的正常磷酸化而维护微管的正常结构。     

黄精多糖对阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆力影响及作用机制研究

目的 探讨黄精多糖对实验性阿尔茨海默病(AD)小鼠的疗效及作用机制.方法 26只淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)转基因AD小鼠随机分为高剂量组9只、低剂量组9只和模型组8只,每天分别采用16%及4%的黄精多糖溶液1 ml和饮用自来水1 ml灌胃1次,连续45 d;采用Morris水迷宫法测试小鼠的主动学习记忆能力,光镜观察小鼠大脑海马结构,免疫组织化学染色检测海马组织β淀粉样蛋白(Ap)含量和乙酰胆碱转移酶(CHAT)活性.结果 高剂量组、低剂量组与模型组比较:(1)逃避潜伏期缩短,第7天分别为(26.0±9.4)s、(31.2±8.7)s和(39.3±10.9)s,P＜0.05;(2)120 s内穿越隐匿平台位置的次数增多,分别为(5.28±0.76)次、(3.00 ±0.77)次和(1.00±0.63)次,差异有统计学意义(P＜0.01);(3)120 s内在目标象限(第4象限)游泳时间明显延长,分别为(75.50±8.39)s、(51.39±11.99)s和(36.87±1.25)s,差异有统计学意K(P＜0.05),且高剂量均优于低剂量(P＜0.05);(4)治疗组海马组织中ChAT活性增高,Aβ含量减少(P＜0.01),且高剂量组优于低剂量组(P＜0.05);(5)高剂量组、低剂量组神经元数目较多、细胞改变不明显、分布规则;模型组神经元数目明显减少,且可见部分神经元细胞核有固缩状态、细胞变性、凋亡.结论 黄精多糖可减少AD小鼠大脑海马组织中Aβ沉积和增加ChAT的活性,显著改善AD小鼠的学习记忆能力,是治疗实验性AD的有效药物.     

阿尔茨海默病中与淀粉样前体蛋白有关的三种分泌酶的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种多发生在老年,以近期记忆障碍为主要临床病理表现的进行性神经变性疾病。其主要的病理改变是老年斑和神经纤维缠结等。β淀粉样蛋白是老年斑的主要成分。而α、β、γ三种分泌酶是与淀粉样前体蛋白转变为β淀粉样蛋白过程密切相关的三种酶,因此进一步明确这三种酶的重要性就显得极为必要。     

游泳运动对β淀粉样前体蛋白/早老素1小鼠海马紧密连接蛋白表达和学习记忆的影响

目的 探讨游泳运动对β淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)双转基因小鼠闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(occludin)表达和学习记忆的影响。方法 将20只APP/PS1小鼠随机分为模型组和游泳组每组10只,对照组选取同窝阴性小鼠10只。游泳组采用游泳运动干预,用新物体识别实验、免疫蛋白印迹法以及免疫荧光检测小鼠学习记忆能力、海马紧密连接蛋白ZO-1、occludin表达和海马CA1区神经元表达情况;硫黄素S染色法检测海马β淀粉样蛋白(Aβ)斑块沉积情况。结果 与对照组比较,模型组辨别指数(RI)明显降低(P<0.01);与模型组比较,游泳组RI明显升高[(63.63±13.35)%vs(50.38±9.83)%,P<0.01]。与对照组比较,模型组ZO-1、occludin明显降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,游泳组ZO-1、occludin明显增加(0.81±0.02 vs 0.38±0.08,1.07±0.03 vs 0.68±0.12,P<0.05)。与对照组比较,模型组神经元阳性表达明显减少(P<0.01);与...     

丙戊酸钠对APP/PS1转基因小鼠脑内海马区老年斑形成的影响

目的研究丙戊酸钠(VPA)对APP/PS1转基因小鼠脑内海马区老年斑(SP)形成的影响。方法 APP/PS1转基因小鼠随机分为对照组和VPA治疗组,VPA治疗后应用免疫组化技术检测APP/PS1转基因小鼠脑内海马区SP的数量及大小。ELISA测定脑组织β淀粉样蛋白(Aβ)的含量变化。结果 VPA治疗组小鼠海马区域出现的阳性SP数目与对照组相比分别显著减少65%,斑块沉积也分别由0.65%降到0.22%(P0.01)。ELISA结果显示,VPA治疗组小鼠脑内可溶性Aβ的水平(75 pg/mg)较对照组明显下降(92 pg/ml,P0.05)。结论 VPA可以减少APP/PS1转基因小鼠脑内SP的形成,抑制Aβ的生成。     

去痴灵对AD模型小鼠脑内β-淀粉样前体蛋白和脑啡肽酶基因表达的影响

目的探讨去痴灵对老年性痴呆(Alzheimer′s disease,AD)小鼠学习记忆及脑内β-淀粉样前体蛋白(amyloid beta-protein precursor,APP)和脑啡肽酶(Neprilysin,NEP)基因表达的影响。方法选用昆明种小鼠,腹腔注射D-半乳糖和灌胃三氯化铝制备AD模型小鼠,第51天开始,治疗组分别灌胃低、中、高剂量(10、20、40g.kg-1.d-1)的去痴灵,以石杉碱甲作为阳性对照药,连续40d。通过Morris水迷宫和半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定去痴灵对AD小鼠学习记忆和脑内APP和NEPmRNA含量的影响。结果低、中、高剂量的去痴灵均能改善AD小鼠的学习记忆能力,下调APP基因表达,高剂量去痴灵能上调NEP基因的表达。结论去痴灵能改善AD小鼠学习记忆能力,降低APP基因表达及增加NEP基因表达。     

维生素E抑制痴呆模型大鼠海马结构淀粉样前体蛋白表达的实验研究

目的观察ＶＥ对ＡＤ大鼠海马β－ＡＰＰ表达的影响。方法使用三氯化铝诱导建立ＡＤ模型大鼠。用ＶＥ（１０ｍｇ／ｄ／只）对ＡＤ模型大鼠进行灌胃治疗３月。采用行为测试,光镜免疫细胞化学ＡＢＣ法,观测大鼠海马结构淀粉样前体蛋白反应阳性神经元的数目和β－淀粉样前体蛋白表达的变化。结果ＶＥ组大鼠受电击次数和潜伏期较对照组明显减少和延长（Ｐ＜０．０５）;ＶＥ组大鼠海马结构齿状回和ＣＡ１区淀粉样蛋白反应阳性神经元的数目较对照组均有明显减少（Ｐ＜０．０５）,β－淀粉样前体蛋白呈弱阳性表达。结论ＶＥ可以改善ＡＤ模型大鼠的学习记忆,降低海马结构β－淀粉样前体蛋白过度表达。