超声和微泡超声造影剂介导核因子kB圈套寡核苷酸抗大鼠肝移植后的急性排斥

目的：观察经超声介导的核转移因子kB圈套寡缺苷酸作用后大鼠移植肝的肝功能变化、急性排斥的病理情况及受体的生存时间，探讨超声介导的核因子kB圈套寡核苷酸抗大鼠肝移植急性排斥的作用。方法：实验于2005-04／11在南京医科大学第一附属医院动物实验中心完成。①DA大鼠和Lewis大鼠各36只随机分为3组；每组DA大鼠（供体）、Lewis大鼠（受体）各12只。行DA大鼠至Lewis大鼠的原位肝移植。①对照组：对供肝无干预处理。②生理盐水组：生理盐水1mL＋核因子KB圈套寡核苷酸100 μg灌注供肝，并在冰水浴中经超声（频率2MHz）处理1min。（蓼10％声诺维组：10％声诺维生理盐水1mL＋核因子KB圈套寡核苷酸100 μg灌注供肝，并在冰水浴中经超声（频率2MHz）处理1min。④检测各组受体大鼠（n=4）术后第1．4，7天的肝功能（天冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸转氨酶）变化、病理组织学检查术后第4天移植肝的排斥情况（n=4，按Banff标准进行程度分级，分为0，Ⅰ,Ⅱ，Ⅲ，0级：无排斥证据；Ⅲ级：严重排斥）、统计各组受体大鼠生存率。结果：生理盐水组和10％声诺维组各有1只受体大鼠在术后3d内死亡。未纳入统计。进入结果分析34只。①肝移植术后各组受体大鼠天冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸转氨酶术后第1天便有不同程度的升高；10％声诺维组各时间点的天冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸转氨酶值明显低于对照组和生理盐水组（P〈0．01）；对照组和生理盐水组的转氨酶变化差异无显著性。②术后第4天病理组织学检查各组急性排斥情况：10％声诺维组急性排斥较对照组轻（P〈0．05）。与生理盐水组比较差异无显著性（P〉0．05）。（3）10％声诺维组肝移植术后受体生存时间较对照组和生理盐水组明显延长（P〈0．01）；对照组与生理盐水组之间术后生存时间差异无显著性。结论：超声和微泡超声造影剂介导的核因子KB圈套寡核苷酸处理大鼠移植肝，能够改善术后移植肝功能、减轻术后移植肝的急性排斥反应、延长受体大鼠的术后生存期。     

核转录因子-κB与细胞凋亡

细胞凋亡在体内稳态平衡、机体防御、老年及许多疾病的发生过程发挥重要作用。核转录因子 κB(nuclearfactor kap pa ,NF κB)是细胞内一种重要的核转录因子 ,它在细胞因子诱导的基因表达中起关键性的调控作用 ,并参与机体的免疫反应、防御反应等。近年来 ,NF κB在抗细胞凋亡中的作用及其机制是医学研究中的热点之一。本文将对NF κB、细胞凋亡及其两者的关系作一综述。     

NFκB核定位基序增强超声微泡介导的外源基因转染效率

目的 评价NFκB核定位基序增强超声靶向微泡破坏（UTMD）介导的外源基因转染效率的价值。方法 构建人基质细胞衍生因子1α（phSDF-1α）质粒（phSDF-1α组）,并插入NFκB核定位基序,构建具有核输入功能的目的基因质粒phSDF-1α-NFκB（phSDF-1α-NFκB）。用Cy3核酸染料标记两种质粒后在优化的UTMD条件下分别转染人脐静脉血管内皮细胞。CCK-8检测细胞存活率,流式细胞仪和荧光显微镜分别检测质粒的入胞效率和入核效率,RT-PCR和ELISA检测SDF-1α基因和蛋白表达水平。比较两种质粒的入核效率和目的基因表达率。结果 在优化的UTMD条件下phSDF-1α组和phSDF-1α-NFκB组细胞存活率和质粒入胞效率差异均无统计学意义（P均>0.05）,两组质粒入核率分别为（12.96±4.46）%和（83.25±12.15）%,SDF-1α基因相对表达量分别为（39.25±10.14）%和（118.25±27.57）%,SDF-1α蛋白表达量分别为（14.11±5.74）ng/mg和（65.35±11.12）ng/mg蛋白,后者均显著高于前者。结论 NFκB核定位基序能显著增强质粒入核,提高UTMD介导的外源基因转染效率。     

核因子κB与帕金森病关系的研究

1986年Sen和Baitmore在B淋巴细胞中首次发现核因子κB（nuclear factor kappaB，NF—κB），该因子是一种能与免疫球蛋白k轻链基因增强子κB序列特异性结合的核蛋白，这一发现为人类认识和治疗疾病打开了一个新视野。NF-κB在大多数真核细胞中表达，     

超声联合微泡造影剂介导基因治疗的研究进展

基因治疗将是人类攻克许多难治性疾病的有效方法,超声微泡作为一种新型的基因载体,可以安全、简便、靶向性地将基因转移入特定的组织、细胞。本文阐述了超声联合微泡介导基因治疗的研究进展以及未来的应用前景。     

超声微泡造影剂介导EGFP质粒转染大鼠骨骼肌

目的 探讨增强型绿色荧光蛋白质粒(EGFP)在大鼠骨骼肌微血管通透性增加的条件下表达的可行性.方法 20只清洁级Sprague-Dawley(SD)大鼠,随机均分为裸质粒组(P)、质粒 超声组(P U)、质粒 微泡组(P M)和质粒 超声 微泡组(P U M)共4组进行实验.选择增强绿色荧光蛋白质粒与白蛋白微泡相混合,以超声介导白蛋白微泡破裂的方法 对大鼠骨骼肌行基因转染,转染7 d后,荧光显微镜下观察质粒在大鼠脊斜肌组织中的表达情况.结果 P、P M组大鼠脊斜肌组织中均未见增强型绿色荧光蛋白表达;P U组可见少量微弱绿色荧光,荧光强度较P和P M组明显增强(P<0.05),P U M组可见明显特异性增强型绿色荧光蛋白表达,荧光强度约为P、P M组的10倍,P U组的3倍(P<0.05);P U M组转染率为(42.72±10.07)%较之P U组(13.62±6.17)%明显增高(P<0.05).结论 超声介导微泡造影剂破裂造成的脊斜肌组织毛细血管通透性的增加,是血管内基因成功跨越内膜屏障的主要途径之一.     

超声和微泡造影剂介导细胞基因转染的实验研究

目的 探讨低频超声对细胞基因转染的作用。方法 超声治疗仪频率1MHz，脉冲重复频率100Hz，占空系数20％。质粒DNA为含编码绿荧光蛋白的pEGFP。应用荧光显微镜和流式细胞仪评价细胞基因转染率，台盼蓝染色计算细胞成活率。选用C2C12、3T3-MDEI和CHO3种细胞系为研究对象，加入DNA后辐照不同声强、时间或加入超声造影剂，观察各条件下的细胞基因转染率和成活率。结果 ①超声介导的基因转染与声强和辐射时间有关，最佳剂量为1w／cm^2 20s；②同样超声剂量，较高的声强较早达到最大基因转染率；③较低剂量时，微泡造影剂可使超声介导的基因转染提高2～3倍并可显著提高最高基因转染率。结论 低频超声可介导细胞基因转染，基因转染率不但与超声辐射剂量有关，而且同样剂量时，高声强较早达到最大基因转染率，最佳剂量是1w／cm^2 20s。同时，微泡造影剂可提高超声介导基因转染的最高转染率。     

恒河猴肝移植急性排斥反应中核因子κBp65的表达

背景：核因子κB作为一种重要的核内转录因子,是多种信号转导途径的汇聚点,参与机体免疫细胞的增殖、分化及细胞凋亡等多种反应物质基因的表达调控,在体液和细胞免疫中发挥重要作用。目的：探讨恒河猴移植肝组织内核因子κBP65蛋白表达与急性排斥反应的关系。方法：将恒河猴随机分为2组：急性排斥反应组肝移植后不给予抗排斥处理,对照组肝移植过程中及移植后均给予抗排斥处理。分别在移植后6,12,24和72h4个时间点收集血标本,全自动生化分析仪测定丙氨酸氨基转移酶、总胆红素,取移植肝脏组织行苏木精-伊红染色观察组织形态结构和排斥反应,根据Banff评分系统判断排斥反应程度,采用Western blot法检测肝脏组织中核因子κBp65的表达。结果与结论：肝移植急性排斥反应发生时肝功能变化滞后于肝组织病理学检查。当急性排斥反应发生时,移植肝组织中核因子κBp65表达上调,急性排斥反应程度也随之加剧。并且在急性排斥反应早期,肝功能、病理学仅有轻微改变时,核因子κBp65表达显著升高。因此移植肝组织中核因子κBp65表达水平的检测对移植后急性排斥反应的早期诊断有重要意义,同时核因子κB可能成为控制移植急性排斥反应的新靶点。     

超声微泡造影剂介导VEGF基因治疗大鼠心肌缺血的实验性研究

目的：探讨超声微泡造影剂介导血管内皮生长因子（VEGF）基因转染大鼠缺血心肌的有效性。方法：将15只急性心肌梗塞3天后的雄性Wistar大鼠分为3组，每组5只，第一组采用超声破坏微泡造影剂的方式将pcD2VEGF121基因转染大鼠心肌约6分钟；第二组尾静脉输入同等剂量携pcD2VEGF121基因的造影剂；第三组为对照。2周后，分别行免疫组织化学检测缺血心肌中的VEGF蛋白及毛细血管内皮细胞，结果：采用超声微泡造影剂介导的VEGF基因转染，能明显增强VEGF基因在大鼠心肌组织内的表达，并可促进缺血心肌组织新生血管，结论：超声微泡造影剂介导的VEGF基因治疗是一种无创、新型、高效的基因转移方法。     

超声介导微泡造影剂对大鼠心肌组织的毛细血管和细胞影响的研究

目的探讨超声介导微泡造影剂（MBCA）对大鼠心肌组织的毛细血管和细胞的影响。方法大鼠经股静脉输入含氟碳气体的微泡造影剂,应用超声辐照其心肌组织,超声辐照后取左心室前壁心肌,用透射电镜观察其毛细血管和细胞。结果用透射电镜观察：超声介导MBCA这一技术会使大鼠心肌组织毛细血管壁破裂,红细胞外溢到心肌纤维间,心肌纤维断裂、溶解。结论超声介导微泡造影剂能引起心肌组织的毛细血管,心肌细胞发生变化。     

核因子-κB在小鼠急性肺损伤中的作用

目的　探讨核因子 (NF) κB在内毒素 (LPS)诱导的急性肺损伤小鼠发病中的作用。方法　腹腔内注射LPS诱导小鼠急性肺损伤模型。LPS注射后 0、 1、 3、 6、 12测定肺湿重 /干重比值 (W/D) ,迁移率改变电泳法检测肺组织NF κB活性 ,同时酶联免疫吸附法测定肺组织匀浆中肿瘤坏死因子 (TNF) α、白介素 (IL) 10浓度 ,RT PCR检测mRNA表达。结果　LPS注射后 ,W/D比值明显增高 ,6h升高最明显 (4 82± 0 10 ) ,显著高于LPS注射前 (3 6 7± 1 0 4 ,P <0 0 5 )。LPS注射后肺组织核蛋白NF κB活性明显增强 ,6h达到峰值 (40 5 7± 6 2 4 ) ,显著高于LPS注射前 (44 8± 30 9,P <0 0 5 )。肺组织匀浆TNF α和IL 10浓度分别在LPS注射后 6h和 12h升高最明显 ,分别为 (197 1± 5 2 4 )pg/ml和 (6 4 9± 39 7)pg/ml,显著高于LPS注射前 [分别为 (6 1 2± 10 7)pg/ml和 (71 6± 15 9)pg/ml]。与LPS注射前比较 ,LPS注射后 3～ 12h ,肺组织匀浆TNF α和IL 10mRNA表达显著增高。肺组织病理显示肺泡出血、水肿、大量炎症细胞浸润 ,电镜下见Ⅰ型肺泡上皮细胞断裂 ,Ⅱ型肺泡上皮细胞变性。结论　LPS导致肺组织NF κB的活化 ,介导炎症介质大量表达 ,参与急性肺损伤发生     

非酒精性脂肪性肝病大鼠肝细胞凋亡及核因子κB的活化

目的:观察肝凋亡细胞及活性核因子κB在非酒精性脂肪性肝病大鼠模型中的表达及其意义。方法:实验于2005-05/09在解放军南京军区福州总医院动物实验室进行。取40只雄性SD大鼠随机分为2组:造模组30只,给予88%基础饲料 10%猪油 2%胆固醇;正常对照组10只,给予基础饲料。对照组大鼠于8周后处死,造模组分别于8,12,16周处死,取肝组织标本,行苏木精-伊红观察肝组织光镜下的病理改变;苦味酸染色观察肝脏纤维化程度;用TUNEL法检测肝细胞凋亡;活性核因子κB通过免疫组化检测核因子κBp65来表示。采用Pearson相关分析和spearman秩相关分析评估核因子κBp56与肝组织病理学改变及凋亡的相关性。结果:40只大鼠全部进入结果分析。①随着造模时间的延长,造模组大鼠肝组织炎症、脂肪变程度逐渐加重,造模16周窦周出现轻度纤维化(P<0.05)。②造模组12周、16周大鼠肝细胞凋亡细胞数和核因子κBp65阳性细胞数明显多于对照组(P<0.01)。③活化的核因子κB与肝组织炎症、脂肪变及纤维化呈显著正相关(r=0.8491,0.6703,0.4237,P<0.01,0.05);凋亡程度与炎症、脂肪变相关亦呈显著正相关(r=0.6286,0.5936,P<0.01)。④核因子κBp56表达与凋亡存在明显相关关系(r=0.6412,P<0.01)。结论:在非酒精性脂肪性肝病大鼠模型中,肝损伤与肝细胞凋亡的增加明显相关,凋亡与核因子κBp65表达、疾病严重程度相一致。     

非酒精性脂肪性肝病大鼠肝细胞凋亡及核因子kB的活化

目的：观察肝凋亡细胞及活性核因子kB在非酒精性脂肪性肝病大鼠模型中的表达及其意义。 方法：实验于2005-05／09在解放军南京军区福州总医院动物实验室进行。取40只雄性SD大鼠随机分为2组：造模组30只。给予88％基础饲料＋10％猪油＋2％胆固醇；正常对照组10只，给予基础饲料。对照组大鼠于8周后处死，造模组分别于8，12，16周处死，取肝组织标本，行苏木精-伊红观察肝组织光镜下的病理改变；苦味酸染色观察肝脏纤维化程度：用TUNEL法检测肝细胞凋亡；活性核因子kB通过免疫组化检测核因子．kBp65来表示。采用Pearson相关分析和spearman秩相关分析评估核因子kBp56与肝组织病理学改变及凋亡的相关性。 结果：40只大鼠全部进入结果分析。①随着造模时间的延长，造模组大鼠肝组织炎症、脂肪变程度逐渐加重，造模16周窦周出现轻度纤维化（P〈0．05）。②造模组12周、16周大鼠肝细胞凋亡细胞数和核因子kBp65阳性细胞数明显多于对照组（P〈0．01）。③活化的核因子kB与肝组织炎症、脂肪变及纤维化呈显著正相关（r=0．8491，0．6703，0．4237，P〈0．01，0．05）；凋亡程度与炎症、脂肪变相关亦呈显著正相关（r=0．6286，0．5936，P〈0．01）。④核因子kBp56表达与凋亡存在明显相关关系（r=0．6412, P〈0．01）。 结论：在非酒精性脂肪性肝病大鼠模型中，肝损伤与肝细胞凋亡的增加明显相关，凋亡与核因子kBp65表达、疾病严重程度相一致。     

磁共振扩散峰度成像对肝移植术后急性排斥反应的诊断价值

目的 探讨磁共振扩散峰度成像(DKI)对于原位肝移植术后患者发生急性排斥反应(ACR)的诊断价值.方法 回顾性连续收集2014年10月～2018年4月肝移植术后随访在我院进行磁共振检查的病人112例,其中13例未见明确病变、9例肿瘤复发、3例图像质量不佳被剔除,18例经穿刺病理诊断为ACR,另外69例对照组包括56例胆...     

大黄素对大鼠原位肝移植术后急性排斥反应的干预

目的:目前国外已有少量报道证实中药大黄素具有极强的免疫抑制效应。实验拟进一步验证大黄素对同种异体大鼠肝移植术后早期急性排斥反应的干预效果。方法:实验于2004-01/2005-02在西安交通大学第一附属医院肝胆外科实验室完成。制备SD→Wistar大鼠全血供肝移植模型(n=80),按随机数字表法分为4组,每组20只。模型对照组、大黄素组、环孢素A组及环孢素A 大黄素组分别腹腔注射给予9g/L生理盐水、1.5mg/(kg·d)大黄素、3mg/(kg·d)环孢素A及3mg/(kg·d)环孢素 1.5mg/(kg·d)大黄素。术后观察大鼠一般情况,并于第7天各组分别处死10只大鼠,取肝脏标本及血清,观察移植肝组织排斥反应强度、Fractalkine(Fkn)阳性表达情况及大鼠血清中白蛋白含量及谷丙转氨酶活性,余受体继续应用药物干预直至死亡,记录其生存时间。结果:各组受体手术成功数量分别为模型对照组17只、大黄素组18只、环孢素A组18只、环孢素A 大黄素组18只。①与模型对照组相比,各用药组大鼠术后存活时间明显延长(P<0.05),以环孢素A 大黄素组存活时间最长。②与模型对照组相比,各用药组大鼠术后第7天移植肝排斥反应强度明显降低(P<0.05),血清中白蛋白含量明显升高,而谷丙转氨酶活性明显降低(P均<0.05),肝组织中Fkn表达阳性率明显降低(P<0.05),以环孢素A 大黄素组表现最为显著。结论:大黄素具有抑制同种异体大鼠肝移植急性排斥反应发生、发展的作用,与环孢素A联用具有协同作用。     

大黄素对大鼠肝移植后急性排斥反应中肝细胞凋亡的影响

背景:抑制急性件排斥反应的高效免疫抑制剂为器官移植所必需,较多的中药成分具有免疫调节作用.课题组在前期实验成功建立全血供大鼠肝移植模型基础上,初步发现大黄素对大鼠肝移植后急性排斥反应具有抑制作用,而且这种抑制作用可以通过多途径达到.目的:观察大黄素对同种异体大鼠肝移植后早期急性排斥反应过程中肝细胞凋亡的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-04/09在西安交通大学第一附属医院肝胆外科实验室完成.材料:供体选用SD大鼠80只,雌雄不限;受体选用雄性Wistar大鼠80只,制备SD→Wistar大鼠全血供肝移植模型.方法:将制备的80只大鼠模型按随机数字表法分为4组,每组20只.于移植后第1天开始按分组设计行腹腔内药物注射,模型对照组仅给予生理盐水,大黄素组给予大黄素1.5 mg/(kg·d),环孢素A组给予环孢素A 3 mg/(kg·d),环孢素A+大黄素组给予环孢素A3 mg/(kg·d)+大黄素1.5mg/(kg·d).主要观察指标:移植后第7天各组处死10只大鼠,取肝脏标本,观察移植肝组织急性排斥反应强度、肝细胞凋亡指数、Bcl-2蛋白的表达.余受体继续应用药物干预直至死亡,记录其生存时间.结果:与模型对照组相比,大黄素组、环孢素A组、环孢素A+大黄素组大鼠移植后存活时间明显延长(P<0.05),以环孢素A+大黄素组存活时间最长.移植后第7天,与模型对照组相比,大黄素组、环孢素A组、环孢素A+大黄素组大鼠移植肝排斥反应强度、肝细胞凋亡指数显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05);大黄素+环孢素A组大鼠的移植肝排斥反应强度、肝细胞凋亡指数显著低于其他3组(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著高于其他3组(P<0.05).结论:大黄素具有抑制同种异体大鼠肝移植急性排斥过程中肝细胞凋亡程度,改善肝功能的作用,与环孢素A具有一定的协同作用,同时又能减轻环孢素A引起的肝功能损害.     

同种异基因大鼠肝移植急性排斥反应模型的建立

背景:移植后急性排斥反应是制约国内肝移植发展的主要障碍之一.目的:探索同种异基因大鼠肝移植急性排斥反应模型的建立方法.设计、时间及地点:病理学水平的实验方法改进,于2007-06/2008-11在中南大学实验动物学部完成.材料:供体选用SD大鼠,雌雄不拘;受体选用雄性Lewis大鼠,供受体各120只.方法:采用改良Kamada's二袖套法,并在此基础上加以改良:肝上下腔静脉重建采用改良连续缝合:支架法重建肝动脉,肝脏灌注采用全自动静脉输液泵控制,建立同种异基因大鼠肝移植急性排斥反应模型.共实施大鼠肝移植120例,其中定型手术80例.主要观察指标:移植手术时间,移植成功率,大鼠精神状态,对刺激的反应,活动及进食情况,急性排斥反应Banff评分.结果:80例定型手术中,供肝热缺血时间为0～2 min,冷缺血时间为80 min,无肝期平均为16～21min,手术成功率为85%(68/80).急性排斥反应出现于移植后第3天,表现为食欲不佳、精神萎靡;移植后第5天出现局部黄染;移植后第7天黄疽进行性加重,并出现明显腹水和死亡.移植后第3,5,7天的急性排斥反应Banff评分分别为3.98,4.96及6.03.结论:同种异基因大鼠采用改良Kamada's二袖套法、重建肝动脉、改进肝上下腔静脉缝合及肝脏灌注方法可建立稳定的大鼠肝移植急性排斥反应模型.