Caveolin-1敲除对C57BL/6小鼠繁殖性能及子代离乳前体质量的影响

目的探讨小窝蛋白Caveolin-1敲除对C57BL/6小鼠离乳前繁殖性能及体质量的影响。方法分别对Caveolin-1基因敲除小鼠和同源C57小鼠进行体质量、初产日龄、胎次间隔时间、平均产仔数及离乳存活率的观察及分析。结果 C57BL/6小鼠鼠仔平均体质量均高于Caveolin-1基因敲除鼠,在1、7、14 d时两者比较差异无统计学意义(P>0.05);21 d时,两者差异具有统计学意义(P<0.05);两组初产日龄、胎次间隔时间及平均产仔数差异无统计学意义(P>0.05),但C57BL/6小鼠离乳存活率明显高于基因敲除鼠,两者差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Caveolin-1敲除小鼠的体质量下降、繁殖性能下降。     

与感觉相关的ASIC3 、TRPV1基因敲除小鼠繁殖性能的观察与痛阈的比较

目的 观察酸敏感离子通道亚基3（ASIC3,又名ACCN3）基因敲除ASIC3-/-小鼠、香草酸瞬时受体亚型Ⅰ（TRPV1）基因敲除TRPV1-/-小鼠的繁殖性能,并对其基础痛阈值进行测定和比较.方法 选用成熟的未交配过的ASIC3-/-和TRPV1-/-纯合子小鼠分别进行繁殖交配,统计两种小鼠的妊娠率、窝产仔数、离乳率、头胎产仔数等,并对两种小鼠的基础痛阈值进行测定比较,对照组为同源野生C57BL/6小鼠.结果 ASIC3-/-小鼠的妊娠率、窝产仔数、离乳率较TRPV1-/-小鼠偏低,而TRPV1-/-小鼠妊娠率、窝产仔数、离乳率相对稳定;ASIC3-/-组的基础机械痛阈值与C57BL/6对照组相比显著升高（P ＜0.001）,而热痛阈值没有明显改变;TRPV1-/-组的基础热痛阈值与C57 BL/6对照组显著升高（P＜0.001）.结论 ASIC3-/-小鼠的繁殖能力较TRPV1-/-小鼠弱;ASIC3-/-小鼠的机械痛敏感性下降,TRPV1-/-小鼠的热痛敏感性下降.     

破骨细胞敲除PDK1基因对PMMA颗粒诱导的小鼠颅骨骨溶解抑制作用的实验研究

目的:研究破骨细胞敲除3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)基因对聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)骨水泥颗粒诱导的小鼠颅骨骨溶解的抑制作用.方法:取12只C57BL/6小鼠及6只破骨细胞敲除PDK1基因鼠,构建骨吸收模型,随机分为3组,每组6只,分别为假手术(Sham)组、PMMA+C57BL/6组、PMMA+基因敲除(...     

C57BL/6小鼠和C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠行为学实验研究

目的:通过水迷宫实验、自主活动实验、听源性惊厥实验和悬尾实验来研究C57BL/6小鼠和C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠的行为学差异.方法:通过胚胎复苏获得3只雌性杂合的C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠后与C57BL/6小鼠进行繁殖,最终得到纯合的雌性和雄性C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠各10只进行行为学实...     

小鼠TDO2基因条件性敲除打靶载体的构建

目的 构建小鼠TDO2基因条件性敲除打靶载体,为建立TDO2基因条件性敲除小鼠奠定基础。方法 根据CRISPR/Cas9技术原理,设计并构建单链向导RNA(sgRNA)和Donor载体,以TDO2-201(ENSMUST00000029645.13)转录本的外显子3作为敲除区,在打靶基因两侧各放置一个Loxp元件,建立条件性敲除TDO2第3号外显子的条件性基因打靶载体。将CRISPR/Cas9复合体和Donor载体显微注射到C57BL/6小鼠的受精卵中,获得阳性F0小鼠,再将阳性F0代小鼠与C57BL/6小鼠交配获得F1代小鼠,并经PCR和基因测序鉴定F1代小鼠基因型。结果 结果证实所构建的TDO2基因条件性敲除打靶载体符合设计要求,成功繁育并鉴定出B6/JGpt-TDO2^em1Cflox/Gpt小鼠。结论 成功构建了小鼠TDO2基因条件性敲除打靶载体,为后续进一步构建TDO2基因条件敲除小鼠奠定了基础。     

Slug敲除促进γ-射线照射小鼠肠上皮细胞损伤的体内研究

目的：观察γ射线照射对Slug敲除C57BL/6小鼠肠粘膜上皮细胞损伤的影响及机制。方法：Slug敲除C57BL/6小鼠和非Slug敲除C57BL/6小鼠各12只,以8Gy 60Coγ射线全身一次性照射制作动物模型,分别在照射后第1、3、8天处死小鼠,取小肠组织4%多聚甲醛液固定作病理学检查;取非Slug基因敲除小鼠和Slug基因敲除小鼠各24只,予以8Gy 60Coγ射线全身一次性照射,分别在照射后第2、4和24 h处死,采用免疫组化法检测肠道细胞PUMA表达,TUNEL染色检测细胞凋亡。结果：8Gy 60Coγ射线照射后,Slug基因敲除小鼠死亡率91.67%,明显高于非基因敲除小鼠的25.00%,差异有统计学意义（P=0.004）。Slug敲除小鼠肠道细胞凋亡指数、PUMA阳性表达细胞数以及肠道损伤的严重程度均明显高于非敲除组。结论：Slug基因敲除加重γ射线引起的放射性肠道损伤。     

免疫抑制受体igsf 9基因敲除鼠的构建以及对肿瘤生长的影响

目的构建免疫抑制受体igsf 9基因敲除小鼠模型,并探究该小鼠模型对肺癌细胞生长的影响。方法将Cas 9 mRNA和igsf 9-sg RNA显微注射到C57BL/6小鼠受精卵中,利用非同源重组修复引入突变,造成igsf 9基因蛋白移码突变、功能缺失;应用PCR和测序技术进行基因型鉴定。将2×10⁶个Lewis肺癌细胞(LL/2)皮下接种到C57BL/6-igsf 9^+/+和C57BL/6-igsf 9^-/-小鼠皮下,每3天检测肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线;当肿瘤体积大于2 cm³时,在麻醉状态下处死小鼠,称肿瘤质量、流式细胞仪检测肿瘤组织各免疫细胞水平。结果 igsf 9基因4-9外显子区域出现了2 892 bp缺失,igsf 9基因发生移码突变,提前出现终止密码子,成功构建igsf 9基因敲除小鼠模型,而且该小鼠的体质量以及外周血、脾脏和骨髓中免疫细胞的比例未见明显差异。与C57BL/6-igsf 9^+/+小鼠相比,C57BL/6-igsf 9^-/-小鼠...     

利用CRISPR/Cas9技术建立RelB敲除小鼠模型

目的：利用CRISP/Cas9技术敲除C57BL/6小鼠中的RelB基因,为核因子（nuclear factor,NF）?κB转录因子蛋白家族的RelB基因与肿瘤转移等方面的研究提供RelB基因敲除实验动物模型。方法：利用基因编辑技术CRISPR/Cas9系统,设计并构建针对目的基因RelB第4外显子sgRNA,同时利用T7 RNA聚合酶体外转录Cas9 mRNA。取C57BL/6小鼠受精卵体外注射sgRNA和Cas9 mRNA后,进行胚胎移植,实现靶基因敲除。待小鼠出生后提取DNA并进行PCR鉴定,获得F0代,后与野生型交配后繁殖,取样提取DNA,测序分析鉴定后获得F1代小鼠,并在蛋白质水平和基因组水平分别验证敲除效果。结果：获得了4个在RelB基因突变的首建鼠,并得到了稳定遗传的RelB基因敲除小鼠。基因组测序结果示,敲除实验组中RelB的mRNA出现无义突变,令其mRNA翻译终止。与对照组相比,敲除实验组检测不到RelB蛋白表达。同时,Western blot结果显示,NF?κB家族中其他成员RelA、p50和p52的蛋白表达不受影响。结论：成功获得特异性敲除RelB的C57BL/6小鼠,为RelB在肿瘤转移、耐药中的研究提供了重要工具。     

盘状结构域受体1对实验性结肠炎小鼠肠道炎症及纤维化的影响

目的 探究盘状结构域受体1(discoidin domain receptors,DDRl)在慢性结肠炎小鼠肠道炎症及肠纤维化中的功能.方法 针对DDR1基因exon4设计并合成gRNA序列,与编码Cas9的mRNA混合显微注射入C57BL/6小鼠受精卵内,构建DDR1基因突变小鼠.选择F4代基因敲除纯合子小鼠(DDR...     

MHC Ⅰ类基因逆转录病毒表达载体的构建及其在造血细胞中的表达

目的构建BALB/c小鼠MHC Ⅰ类基因的逆转录病毒表达载体并探讨该基因在C57BL/6小鼠造血细胞中的表达.方法由逆转录病毒载体pMSCV介导,将BALB/c小鼠的H-2Dd基因导人C57BL/6小鼠的造血细胞中,并用逆转录聚合酶链反应和流式细胞仪检测转染后基因的表达.结果用EcoRⅠ和Xho Ⅰ双酶切鉴定证实,H2Dd基因正确插入载体pMSCV.重组逆转录病毒感染的C57BL/6小鼠造血细胞整合了BALB/c小鼠的H2Dd基因,且能转录为mRNA,在其细胞膜上有H2Dd分子的表达.结论成功构建小鼠H-2Dd编码基因的逆转录病毒载体,该基因已稳定地整合进C57BL/6小鼠造血细胞的基因组内,且在细胞中得到表达.     

蛋白4.1R基因敲除小鼠的引种及繁殖

目的:引种、繁殖4.1R基因敲除小鼠,用于蛋白4.1R功能的研究.方法:按照国家进出境动物检验检疫的具体要求,对引种自美国的3对4.1R基因敲除小鼠进行隔离、检疫.引进的种鼠按照SPF动物饲养标准操作规程在IVC屏障系统中进行1雄1雌长期同居方式繁殖,C57BL/6J对照组小鼠采用同样方式饲养繁殖.定期观察记录种鼠的繁...     

TNFα和TNFR1基因敲除小鼠对内质网应激反应所致急性肾损伤的易感性及其机制研究

1材料与方法1.1小鼠C57/B6小鼠,雌性,3-5月龄,TNFα-/-、TN-FR1-/-、TNFR2-/-和TNFR1R2-/-小鼠,购买于Jackson实验室(Bar Harbor,ME)。所有基因敲除小鼠与C57/B6小鼠回交至少6代。PCR基因分型参照Jackson实验室提供的方法(http://jaxmice.jax.org/prot     

C57BL/6小鼠与BALB/c小鼠对脓毒症反应的差异

目的 探讨C57BL/6与BALB/c两种小鼠对脓毒症的反应能力.方法 C57BL/6小鼠和BALB/c小鼠各30只,分别随机分成假手术组与脓毒症组,每组15只.脓毒症组用盲肠结扎穿孔法(CLP)建立小鼠脓毒症模型.术后6h,每组随机选出5只,Bio-plex悬浮蛋白芯片系统检测其外周血IL-1β、IL-2、IL-4,IL-5、IL-10、GM-CSF、IFN-γ和TNF-α的浓度.剩余小鼠用于1周存活率分析.结果 两品系小鼠假手术组1周存活率均为100%.C57BL/6小鼠脓毒症组1周存活率为10%,BALB/c小鼠脓毒症组存活率为50%.C57BL/6小鼠脓毒症组的存活率显著低于BALB/c小鼠脓毒症组(P＜0.05).与假手术组相比,C57BL/6小鼠脓毒症组分泌的IL-4、TNF-α和IL-10明显升高.而BALB/c小鼠脓毒症组分泌的8种细胞因子较假手术组均未见明显增加.结论 C57BL/6与BALB/c两种小鼠对脓毒症的反应能力有差异,C57BL/6小鼠反应更敏感.     

高脂血症促进载脂蛋白E基因敲除小鼠牙周炎进展的实验研究

目的探讨高脂血症是否影响牙周炎进展。方法以ApoE基因敲除的C57BL/6J(ApoE-/-)小鼠和相同基因背景的野生型C57BL/6J(C57)小鼠各分为实验组和对照组,采用丝线结扎小鼠的上颌双侧第二磨牙,实验组接种牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis),对照组只完成牙周结扎过程而不接种细菌。用纸尖从牙周袋获取P.gingivalis进行菌落计数;截取上颌骨标本行亚甲基蓝染色,观察牙周组织损伤程度。结果普通饮食条件下,ApoE-/-小鼠血清脂质水平显著高于C57小鼠;实验第7d时实验组ApoE-/-小鼠牙周组织中获取的P.gingivalis菌落数为(8 341.66±1 217.88)个,显著高于C57小鼠(4 466.66±1 115.87)个(P<0.05);实验组ApoE-/-小鼠牙槽骨吸收量为(506.87±93.89)μm,显著高于C57小鼠(322.18±41.40)μm(P<0.05)。结论 ApoE-/-小鼠血清脂质水平升高,牙周清除P.gingivalis能力下降,牙周病进展加速。     

6种常用SPF级大小鼠繁殖性能测定与分析

目的测定、分析本中心保存的6种常用SPF级大小鼠(SD大鼠、C57BL/6小鼠、BALB/c小鼠、NIH小鼠、KM小鼠、ICR小鼠)的主要繁殖性状。方法近交系小鼠采用全同胞同居交配,封闭群大鼠和小鼠采用循环交配。测定这6种品系大小鼠第1~4胎所生仔鼠的平均产仔数、平均带仔数和平均离乳数,并计算离乳率。同时测定初配日龄、初产日龄、初产间隔和各胎胎间隔。结果近交系小鼠的平均产仔数均为6~7只,前3胎繁殖数据基本保持稳定,第4胎各项数据相比第3胎明显下降(P0.05)。BALB/c小鼠的离乳率在98%~99%,C57BL/6小鼠为96%~98%。封闭群实验动物的平均产仔数可达12~14只,第2~3胎平均产仔数均较第1胎明显升高(P0.05),但第4胎又比第3胎显著下降(P0.05)。NIH、KM和ICR小鼠的离乳率都维持在98%~99%;SD大鼠的离乳率则略低(95%~97%)。小鼠的初配日龄在70 d~80 d之间,大鼠在109 d;封闭群小鼠的初产日龄和初产间隔低于近交系小鼠,大鼠的初产日龄和初产间隔分别为136.3 d和27.7 d;近交系小鼠的胎间隔在34 d~40 d之间,封闭群小鼠在25.5 d~28.7 d之间,大鼠在32.8 d~33.8 d之间。结论本中心保存的6种常用大小鼠繁殖性能较高,获得的繁殖性能参数为华南地区实验大小鼠商业化生产和啮齿类实验动物资源库的建立提供依据和基础数据。     

创伤反应早期BALB/C和C57BL/6小鼠肝组织基因表达谱比较研究

目的：探讨BALB/C和C57BL/6小鼠创伤反应差异性的分子遗传学机制。方法：利用基因芯片技术对BALB/C和C57BL/6小鼠在创伤后1h和6h肝组织基因表达谱进行比较研究。对在两种小鼠创伤反应早期差异表达的基因进行聚类分析。结果：对1327条差异表达的基因进行聚类分析后发现有两大族基因的表达在BALB/C小鼠和C57BL/6小鼠创伤后早期存在明显差异，BALB/C小鼠糖类代谢，脂类代谢和激素代谢活跃，细胞信号转导以G蛋白信号通路和Ca^2 信息通路激活为主，而且与组织损伤相关的基因也出现高表达，而C57BL/6小鼠急性时相反应和免疫反应被激活。细胞凋亡途径被抑制，细胞信号转导以酪氨酸蛋白激酶系统激活为主要特征，结论：BALB/C和C57BL/6小鼠的创伤反应差异性可能与它们在创伤后基因组的表达方式不同相关。     

HBV转基因小鼠与C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞分离培养的比较研究

目的 比较研究乙型肝炎病毒(HBV)转基因小鼠和C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的分离培养体系.方法 采用贴壁培养法建立HBV转基因小鼠和C57BL/6小鼠BMSCs分离培养体系,通过在培养液中添加不同浓度的血清进行培养,分析HBV转基因小鼠和C57BL/6小鼠BMSCs细胞形态和数量的差异.结果 C57BL/6小鼠原代BMSCs生长迅速,按1∶3传代后呈漩涡状生长,形态类似成纤维细胞.HBV转基因小鼠原代BMSCs生长缓慢;以1∶2传代后生长缓慢,有明显的血清依赖性及密度依赖性.结论 在相同的生长环境下,不同血清浓度的培养液中,HBV转基因小鼠BMSCs生长较正常C57BL/6小鼠的BMSCs生长明显缓慢.     

小鼠慢性应激性抑郁症易感品系筛选及其机制初步研究

目的 筛选对慢性、轻度不可预见性应激(CUMS)敏感的小鼠品系,并初步研究其敏感机制.方法 选用KM、ICR、BABL/c、C57BL/6小鼠建立CUMS抑郁模型,通过体质量、糖水偏好、旷场实验得分考察不同品系小鼠对CUMS的敏感性.通过对小鼠海马组织糖皮质激素受体(GR)、5-羟色胺(5-HT)、犬尿氨酸(KYN)含量的测定,对其易感机制进行初步研究.结果 造模后C57BL/6小鼠体质量、糖水偏好、旷场实验水平运动和垂直运动得分等指标均对CUMS表现出显著敏感性,BABL/c小鼠对糖水偏好、旷场实验水平运动和垂直运动得分较为敏感.对照组C57BL/6小鼠海马组织GR、KYN含量与其他三种小鼠存在显著差异.结论 在筛选的4个品系小鼠中,C57BL/6小鼠对CUMS最为敏感,适于建立CUMS抑郁症动物模型,其敏感机制可能与海马组织GR、KYN含量有关.     

非洲爪蟾TGF-β5和小鼠TRP-2联合免疫诱导产生抗肿瘤免疫应答

目的研究非洲爪蟾转化生长因子-β5(aTGF-β5)基因免疫对肿瘤治疗性质粒DNA疫苗诱导抗肿瘤免疫应答的效能的影响,探讨所诱导免疫应答的抗肿瘤机制.方法用aTGF-β5真核表达质粒和小鼠酪氨酸酶相关蛋白2(mTRP-2)真核表达质粒联合免疫野生型C57BL/6小鼠、CD4缺陷的C57BL/6小鼠和CD8缺陷的C57BL/6小鼠,于免疫前或免疫后接种黑色素瘤细胞B16F10,观测肿瘤生长和小鼠存活情况.结果两种质粒联合免疫能在野生型C57BL/6小鼠体内诱导产生保护性和治疗性抗肿瘤免疫,而mTRP-2真核表达质粒单独免疫野生型C57BL/6小鼠及两种质粒联合免疫CD4或CD8缺陷的C57BL/6小鼠均不能诱导产生抗肿瘤免疫应答.结论 aTGF-β5基因免疫能增强编码mTRP-2的肿瘤治疗性质粒DNA疫苗诱导抗肿瘤免疫应答的能力;T细胞免疫应答的诱导是抗小鼠黑色素瘤免疫应答所必需的.     

博来霉素诱导G57BL/6与ICR小鼠肺间质纤维化模型的比较

目的 探讨C57BL/6与ICR小鼠在博来霉素(BLM)致肺纤维化过程中的种属差异.方法 8周龄雌性C57BL/6小鼠19只,ICR小鼠16只,分别经尾静脉一次性注射BLM 150 mg/kg,观察每组小鼠体重、生存率及肺组织病理改变.结果 ①C57BL/6与ICR小鼠最低体重分别发生在静脉注射处置后的7 d和5 d,最低体重分别为注射前的65.46%和73.21%,两组间无显著的统计学差异.②C57BL/6与ICR小鼠的生存率分别为36.84%和56.25%,两组间存在显著的统计学差异.③C57BL/6小鼠BLM注射后28 d,在胸膜下及血管周围形成广泛、稳定的间质纤维化病理改变,而ICR小鼠肺组织未见明显纤维化形成.C57BL/6小鼠肺纤维化病理评分明显高于ICR小鼠(P＜0.001).结论 BLM诱导的肺纤维化作用在C57BI/6与ICR小鼠间存在着明显的种属差异.C57BL/6小鼠较ICR小鼠更适于复制博来霉素诱导的肺纤维化动物模型.