体外人表皮细胞培养技术：不同滋养层细胞对角朊细胞生长融合的影响

目的：探索和寻找人角朊细胞体外培养适宜的滋养层细胞，完善人角朊细胞体外培养快速扩增的技术和方法。方法：实验于2003-08／2004-03在武装警察部队总医院烧伤整形科组织工程实验室完成。实验分别在3T3细胞、原代培养的人成纤维细胞上接种原代人角朊细胞，并设无滋养层细胞的空白对照。在对不同滋养层细胞的处理上分别采用了^60Co放射线照射的传统方法和丝裂霉素处理，比较两种处理方法对滋养层细胞的影响，并对丝裂霉素适宜的作用浓度进行了研究。结果：①丝裂霉素和^60Co放射线照射分别处理滋养层细胞，可取得相同效果。②终浓度为15mg／L的丝裂霉素c是制备人成纤维细胞滋养层的较适宜浓度；终浓度为10mg／L的丝裂霉素C是制备3T3细胞滋养层的较适宜浓度。③原代人角朊细胞在不同滋养层细胞上的生长速度显示：人成纤维细胞＞3T3细胞＞无滋养层细胞。结论：经丝裂霉素处理的原代培养人成纤维细胞作为滋养层细胞，体外扩增人角朊细胞可以缩短培养时间，减少接种密度。     

表皮细胞、成纤维细胞复合脱细胞真皮基质构建组织工程皮肤

目的:观察体外培养的人皮肤角朊细胞和成纤维细胞的生物学特性,复合脱细胞真皮基质构建组织工程皮肤,为进一步临床应用奠定基础。方法:分别取人皮肤角朊细胞和成纤维细胞体外培养、扩增,测定细胞生长曲线、克隆形成率和染色体倍性;将培养的角朊细胞、成纤维细胞分别接种于脱细胞真皮基质表面,体外构建组织工程皮肤,观察细胞生长增殖情况。结果:在本培养体系下人皮肤角朊细胞和成纤维细胞增殖良好,细胞染色体倍性检测结果均为二倍体细胞。脱细胞真皮基质对角朊细胞、成纤维细胞无明显毒性作用,体外复合培养细胞可生长增殖。结论:此实验方法可以获得生长状态良好的组织工程皮肤种子细胞,复合脱细胞真皮基质可成功构建组织工程皮肤。     

表皮细胞、成纤维细胞复合脱细胞真皮基质构建组织工程皮肤

目的；观察体外培养的人皮肤角朊细胞和成纤维细胞的生物学特性，复合脱细胞真皮基质构建组织工程皮肤，为进一步临床应用奠定基础。方法：分别取人皮肤角朊细胞和成纤维细胞体外培养、扩增，测定细胞生长曲线、克隆形成率和染色体倍性；将培养的角朊细胞、成纤维细胞分别接种于脱细胞真皮基质表面，体外构建组织工程皮肤，观察细胞生长增殖情况。结果：在本培养体系下人皮肤角朊细胞和成纤维细胞增殖良好，细胞染色体倍性检测结果均为二倍体细胞。脱细胞真皮基质对角朊细胞、成纤维细胞无明显毒性作用，体外复合培养细胞可生长增殖。结论：此实验方法可以获得生长状态良好的组织工程皮肤种子细胞，复合脱细胞真皮基质可成功构建组织工程皮肤     

SD大鼠角朊细胞体外培养的实验

目的:观察SD大鼠角朊细胞在体外培养的生长特性。方法:采用dispase酶消化法从SD大鼠仔鼠皮肤获得角朊细胞,在体外进行培养并传代,采用倒置显微镜和MTT法观察细胞的形态学变化和生长曲线。结果:通过酶消化法可以获得较纯的角朊细胞,原代培养10d细胞即可以达到融合,传代后细胞部分发生变性,呈成纤维细胞样,传代次数高,成纤维样细胞比例也相应增高。结论:SD大鼠角朊细胞可以在体外培养分裂增殖,但传代后即发生变     

SD大鼠角朊细胞体外培养的实验

目的：观察SD大鼠角朊细胞在体外培养的生长特性。方法：采用dispase酶消化法从SD大鼠仔鼠皮肤获得角朊细胞，在体外进行培养并传代，采用倒置显微镜和MTT法观察细胞的形态学变化和生长曲线。结果：通过酶消化法可以获得较纯的角朊细胞，原代培养10d细胞即可以达到融合，传代后细胞部分发生变性，呈成纤维细胞样，传代次数高，成纤维样细胞比例也相应增高。结论：SD大鼠角朊细胞可以在体外培养分裂增殖，但传代后即发生变性。     

组织工程新技术:胚胎干细胞滋养层细胞的培养及其预处理条件

背景人胚胎干细胞的培养及相关研究一直是近年来国内外科学家关注的热点,而胎鼠成纤维细胞作为滋养层细胞则是胚胎干细胞培养中不可或缺的条件.目的探讨胎鼠成纤维细胞作为滋养层细胞在培养、传代及预处理等方面的条件.设计分组实验研究.地点和对象解放军第四军医大学西京医院烧伤科完成,对象为一级昆明小鼠,孕龄12 d左右,由该校实验动物中心提供.干预用胰蛋白酶消化法培养胎鼠成纤维细胞,观察细胞在增殖、传代、冻存及复苏等方面的条件;用不同浓度的丝裂霉素对细胞进行预处理,利用MTT法测定细胞的生长曲线,筛选最佳浓度及作用时间.主要观察指标胎鼠成纤维细胞的培养和预处理.结果胎鼠成纤维细胞的增殖速度较快,在第4代以后细胞开始变形并趋于衰老;以20 mg/L丝裂霉素处理细胞2 h,可明显抑制细胞的增殖而不引起细胞的死亡.结论作为滋养层细胞,胎鼠成纤维细胞应选择第4代以前的细胞,丝裂霉素处理条件为20 mg/L作用2 h.     

组织工程新技术：胚胎干细胞滋养层细胞的培养及其预处理条件

背量：人胚胎干细胞的培养及相关研究一直是近年来国内外科学家关注的热点，而胎鼠成纤维细胞作为滋养层细胞则是胚胎干细胞培养中不可或缺的条件。目的：探讨胎鼠成纤维细胞作为滋养层细胞在培养、传代及预处理等方面的条件。设计：分组实验研究。地点和对象：解放军第四军医大学西京医院烧伤科完成，对象为一级昆明小鼠，孕龄12d左右，由该校实验动物中心提供。干预：用胰蛋白酶消化法培养胎鼠成纤维细胞，观察细胞在增殖、传代、冻存及复苏等方面的条件；用不同浓度的丝裂霉素对细胞进行预处理，利用MTT法测定细胞的生长曲线，筛选最佳浓度及作用时间。主要观察指标：胎鼠成纤维细胞的培养和预处理。结果：胎鼠成纤维细胞的增殖速度较快，在第4代以后细胞开始变形并趋于衰老；以20mg／L丝裂霉素处理细胞2h，可明显抑制细胞的增殖而不引起细胞的死亡。结论：作为滋养层细胞，胎鼠成纤维细胞应选择第4代以前的细胞，丝裂霉素处理条件为20mg／L作用2h。     

中波紫外线对角朊细胞合成碱性成纤维细胞生长因子的作用

目的 研究中波紫外线（UVB）对培养的角朊细胞合成碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)的作用。方法 采用原位杂交法及免疫组化法,观察UVB（302nm,100mJ/cm^2）对培养人角朊细胞合成bFGF的作用。结果 政党皮肤组织基底层和棘层的角朊细胞及真皮的成纤维细胞可合成bFGF;培养的角朊细胞经UVB照射后细胞内bFGF mRNA及蛋白的表达量均较照射前有明显增长（P＜0.05）。结论 bFGF可能参与了UVB照射所引起的皮肤色素沉着,并减少UVB所引起的黑素细胞的损伤及凋亡,维持皮肤内黑素细胞的数量稳定。     

人羊膜负载猪角朊细胞构建皮肤表皮替代物的实验研究

背景人羊膜为半透明的薄膜,含有多种促进细胞增殖的营养成分,是一种较好的负载角朊细胞的生物材料.目的将人羊膜负载培养猪角朊细胞构建皮肤表皮替代物,并观察猪角朊细胞在人羊膜上生长增殖的形态特点.设计以细胞为研究对象,单一样本研究,重复测量观察.单位解放军第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所.材料实验于2001-01/11在创伤、烧伤和复合伤国家重点实验室,第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所完成.猪角朊细胞取自3月龄贵州小香猪.方法将贵州小香猪的角朊细胞原代培养,传代扩增后,将角朊细胞以1.63×105/cm2的密度接种于人羊膜基质面,逐日于倒置显微镜下观察角朊细胞的生长增殖变化情况,并于培养3 d与15 d进行光镜、电镜观察,检测角朊细胞在人羊膜上的生长情况.主要观察指标角朊细胞在人羊膜上的生长情况.结果倒置显微镜下观察接种后30 min内明显见到角朊细胞在人羊膜上黏附,24 h内大部分黏附生长,3 d形成单层完全覆盖人羊膜.光镜下人羊膜负载角朊细胞3 d,可见角朊细胞在人羊膜基质面黏附呈单层生长,细胞扁平紧密排列.扫描电镜下可见胞体呈多边形,多见胞膜突起.透射电镜下可见角朊细胞与人羊膜黏附良好,生长在人羊膜上的角朊细胞内有许多角质丝.生长至15 d,在倒置显微镜和扫描电镜下均可见,细胞因过于拥挤而隆起,因老化而形成较多碎片,部分细胞有空洞形成.结论人羊膜是角朊细胞在体外培养的良好载体,对角朊细胞有明显的促增殖作用.但人羊膜负载角朊细胞生长至15 d,因老化部分细胞有空洞形成.     

角质形成细胞的培养及其表皮生长因子受体表达

目的:在成功分离人皮肤角质形成细胞的基础上,观察表皮生长因子受体在人皮肤角质形成细胞中的表达情况。方法:实验于2006-3/10在北京大学深圳医院中心实验室进行。采用dispase Ⅱ-trypsin两步消化法获取表皮基底层细胞,用小鼠皮肤成纤维母细胞滋养层和黄素腺嘌呤二核苷酸培养液进行培养。小鼠皮肤成纤维母细胞的预处理:向对数生长期的小鼠皮肤成纤维母细胞培养液中加入丝裂霉素C至终浓度为4mg/L,37℃下培养4h,弃去培养液,用D-Hank’s液洗3次,加入浓度为0.25g/L的胰蛋白酶消化,分离出细胞,离心(200g,5min),用黄素腺嘌呤二核苷酸培养液悬浮细胞,计数,以5.0×104/cm2的密度种于培养皿内,37℃、体积分数0.05的CO2培养箱下培养。角质形成细胞的培养:将分离的角质形成细胞悬浮在黄素腺嘌呤二核苷酸培养液中,以2.0×104/cm2的密度接种在前1天经丝裂霉素C处理的小鼠皮肤成纤维母细胞滋养层上,37℃、体积分数0.05的CO2培养箱下培养。24h换液,以后每3d换1次液。采用免疫细胞化学的方法检测表皮生长因子受体的表达,采用复合逆转录聚合酶链反应检测角质形成细胞中表皮生长因子受体mRNA的表达。结果:采用dispaseⅡ消化法分离了真皮和表皮,获得较多的角质形成细胞,可以避免真皮成纤维细胞的污染。人皮肤角质形成细胞在黄素腺嘌呤二核苷酸培养液中培养5d可见明显的集落,约10d可长满单层。免疫细胞化学显示表皮生长因子受体在细胞表面有明显的表达,复合逆转录聚合酶链反应显示表皮生长因子受体mRNA有明显的表达。结论:用小鼠皮肤成纤维母细胞滋养层和黄素腺嘌呤二核苷酸培养液可以较好地培养原代人皮肤角质形成细胞,表皮生长因子受体在细胞表面有明显的表达,这些结果为与表皮生长因子受体相关的皮肤病(如银屑病)的研究奠定了基础。     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

Determination of loss of quality of life

Physiatrists are a valuable resource in legal settings, where assessment of functional capacity to perform work and of future medical needs must be determined. Physiatrists help determine what future medical care is needed to restore and maintain an individual at the maximum level of life function. This article focuses on the use of a quality of life (QOL) rehabilitation model, rather than a medical model, for enhancing functional performance, modifying environments, and facilitating patient coping. We discuss use of the QOL model to describe and influence a patient's physical, psychological, cognitive, vocational/economic, and social/leisure domains.     

护士选择性应用静脉留置针现状分析

[目的]了解护士选择性应用留置针的现状以及主要影响因素,为指导临床留置针合理应用提供理论依据。[方法]采用自设问卷对138名护士留置针选择性使用情况及其影响因素进行调查。[结果]约1／4的护士并不知道应选择性使用留置针,近60％的护士在实际工作中选择留置针的意识较差;护士选择性应用留置针的决策受多因素影响;不同科室、职称及是否具有带教资格选择性应用留置针的影响因素不尽相同;绝大部分护士希望参加选择性应用留置针相关内容的培训。[结论]临床护士操作前考虑留置针选择的意识有待加强。建议实施有针对性的培训以提高护士选择性应用留置针的能力。     

血液透析患者家庭护理提供者的生活质量调查

目的:了解江汉油田血液透析(血液透析)患者家庭护理提供者(护理者)的生活质量。方法:对60例血液透析患者的家庭护理提供者进行一般情况和生活质量综合评定问卷(QOLI-74)调查,并进行相关性和多因素回归分析。结果:家庭护理提供者各维度的主观生活满意度与其客观指标相关,但也与其需求、年龄、文化程度、与患者的关系有关。结论:客观状态是影响主观生活满意度的重要因素,同时应考虑护理者的需求、年龄、文化程度、与患者的关系对护理者主观生活满意度的影响。