抗Wistar大鼠抗二硝基苯抗体的独特型抗体的研究——Ⅱ.应用酶联免疫吸附试验测定抗二硝基苯抗体的独特型

本文以“逆向”ELISA 测定 Wistar 大鼠抗 DNP抗血清中抗体的独特型,即以抗独特型抗体为涂布物来测定抗血清的效价。实验结果表明“逆向”ELISA可以专一地半定量测定大鼠抗 DNP抗血清的独特型,为进一步研究抗独特型抗体对抗体独特型表达的调节作用打下基础。同时,DNP-BSA封闭大鼠抗 DNP抗体的实验初步表明,这抗体的独特型决定簇位于抗体分子的抗原结合部位,至少十分接近抗原结合部位。     

抗独特型抗体的制备与鉴定

内影像抗独特型抗体可模拟外部抗原，刺激机体的免疫反应，其制备的关键步骤包括动物的选择，免疫原的制备，免疫的剂量及方法以及独特型抗体的鉴定。     

抗独特型抗体的制备与鉴定

内影像抗独特型抗体可模拟外部抗原，刺激机体的免疫反应。其制备的关键步骤包括动物的选择，免疫原的制备、免疫的剂量及方法以及独特型抗体的鉴定。     

抗乙型肝炎核心抗体的独特型抗体的研究——Ⅰ.兔抗鼠单克隆抗-HBc独特型的研究

本文用小鼠单克隆抗HBcIgG及其Fad片段免疫家兔,制备出了特异牲的抗独特型抗体(抗Id),抗Id针对的部位与抗体的抗原结合位点密切相关。应用这种抗Id在同种小鼠的抗-HBc中检出了交叉反应独特型(Idx),而在人、猴、马、豚鼠、鸡和鸽的抗-HBc血清中未能检出相应的Idx。我们的研究还表明用IgG Fab片段来免疫制备抗Id较用IgG全分子效果好。此外,我们建立了两种特异检测抗Id的ELISA方法,应用它们可以排除抗同种型和同种异型抗体的干抚,对免疫过程中动物产生抗Id的水平进行观察。     

抗乙肝病毒核心抗体抗独特型抗体的研究——Ⅱ.制备抗人HBcAb的抗独特型抗体的探讨

为了研究抗独特型抗体对乙型肝炎免疫反应的调节作用,我们用人的多克隆抗HBc作为免疫原,制备单克隆抗独特型抗体(抗-Id)。将人HBcAb用亲和层析纯化,并经SPA-Sepharose4B柱提取Fab片段。用4株抗正常人IgG的单克隆抗体与人HBcAb复合,制成免疫复合物,再用作免疫原,采用3种不同的免疫方案,除了采用国内外公认的抗原-抗体结合抑制试验检测外,还做了中和试验。在“独特型结合试验”中,在用人HBcAb包放的同时,还用正常人IgG作对照,以排除其抗异种免疫球蛋白的干扰。同时,还进行了交叉反应独特型的筛选工作。我们共对6300个克隆进行了检测,没有检出特异性的抗独特型抗体,却有1450个抗正常人IgG的阳性克隆。对出现上述结果的可能原因进行了探讨。     

抗独特型抗体的鉴定

抗独特型抗体的研究正向实用发展,日益显示出可喜的前景。抗独特型抗体的鉴定是根据抗独特型抗体能作为始动抗原的内影像而发挥生物学活性来设计的,根据不同的目的,可设计不同的方法,但基本上都是建立在免疫化学和功能鉴定的基础上。     

抗乙肝病毒核心抗体抗独特型抗体的研究 Ⅱ.制备抗人HBcAb的抗独特型抗体的探讨

为了研究抗独特型抗体对乙型肝炎免疫反应的调节作用,我们用人的多克隆抗HBc作为免疫原,制备单克隆抗独特型抗体(抗-Id)。将人HBcAb用亲和层析纯化,并经SPA-Sepharose 4B柱提取Fac片段。用4株抗正常人IgG的单克隆抗体与人HBcAb复合,制成免疫复合物,再用作免疫原,采用3种不同的免疫方案,除了采用国内外公认的抗原-抗体结合抑制试验检测外,还做     

生长抑素抗独特型卵黄抗体的制备与鉴定

目的在成功制备中和性生长抑素(SS)单克隆抗体的基础上,制备了SS抗独特型卵黄抗体Ab2,鉴定其生物学特性,探讨其在促进动物生长方面的应用。方法用对SS具有免疫中和性的单克隆抗体2E7免疫产蛋鸡,筛选并收集有高效价抗独特型卵黄抗体的鸡蛋,分离蛋黄,破碎蛋黄组织,用稀释和酸化沉淀法除脂蛋白,用冷酒精沉淀法纯化抗独特型卵黄抗体Ab2。用间接ELISA检测卵黄Ab2的特异性、效价和浓度,用竞争抑制和动物免疫检测卵黄Ab2β,用动物实验检测卵黄Ab2β促进鸡生长的效力。结果该SS抗独特型卵黄抗体Ab2效价为10~(-5),含量为8 mg/mL。且与兔抗SS抗体发生免疫反应,不与兔抗生长激素抗体、兔抗胰岛素抗体、兔抗胃泌素抗体发生免疫反应。该SS卵黄Ab2能和异种动物兔产生的SS抗体发生免疫反应,该免疫反应能被SS竞争抑制,该SS卵黄Ab2能诱导小鼠产生SS Ab3,该SS Ab3能和SS发生免疫反应,说明它是SS卵黄Ab2β。用其作疫苗,以0.8μg/只和3.2μg/只分别皮下注射免疫小鼠,以0.8μg/羽和3.2μg/羽分别肌肉注射免疫鸡,以3.2μg/尾浸泡免疫多宝鱼。一个月后,实验小鼠平均体质量比对照组分别增加33.5%和37.9%,实验鸡平均体质量比对照组分别增加25.6%和34.1%,实验鱼平均体质量比对照组增加24.8%。结论成功制备了特异性强、效价高的SS卵黄抗体Ab2β,以其作疫苗免疫动物,以较小剂量一次性免疫即可产生显著的促鸡和多宝鱼生长效果。     

制备大鼠单克隆抗独特型抗体的免疫方案

抗独特型抗体是研究免疫调节的强有力的试剂,而且作为抗肿瘤和抗传染病的疫苗也有着潜在的意义。比较了三种制备大鼠单克隆抗独特型抗体的免疫方案。即先用750μg 纯化的抗恶性疟原虫单克隆抗体作为免疫原。以腹腔和皮下多点免疫雄性Wistar大鼠,基础免疫3次后,接着用以下、三种免     

抗乙型肝炎核心抗体独特型抗体[抗(抗-HBc)Id]的研究——Ⅰ.兔抗鼠单克隆抗-HBc独特型的研究

本文用小鼠单克隆抗HBcIgG及其Fab片段免疫家兔制备出了特异性的抗独特型抗体(抗Id),抗Id针对的部位与抗体的抗原结合位点密切相关。应用这种抗Id在同种小鼠的抗-HBc中检出了交叉反应独特型(Idx),而在人、猴、马、豚鼠和鸡,鸽的抗-HBc血清中未能检出相应的Idx。我们的研究还表明用IgG Fab片段来免疫制备抗Id较用IgG全分子效果好。此外,我们建立了两种特异检测抗Id的ELISA方法,应用它们可以排除抗同种型和同种异型抗体的干扰,对免疫过程中动物产生抗Id的水平进行观察。     

鼻咽癌抗独特型单克隆抗体的制备和鉴定

本研究用针对鼻咽癌相关抗原的单克隆抗体Fc_1作免疫原,采用常规免疫和杂交瘤方法,制备了一株抗Fc_1V区的独特型的杂交瘤2 A9。双夹心ELISA显示,2A9对Fc_1有较强的亲和力。ELISA结合抑制试验结果显示,2A9能抑制Fc_1对鼻咽癌细     

宫颈癌抗独特型单克隆抗体的制备和鉴定

目的：制备宫颈癌抗独特型单克隆抗体并鉴定其抗原模拟特性。 方法和结果： 以识别小鼠和人宫颈癌相关抗原分子共同表位的单克隆抗体AU14-1（Ab1）为免疫原在含免疫反应剂的无血清培养液中致敏小鼠脾细胞，并将其与SP2/0融合，经筛选和克隆化，建成一株能分泌抗独特型单克隆抗体（Ab2）的杂交瘤细胞系。Ab2的抗原模拟特性经ELISA、结合和竞争抑制试验以及免疫组化染色，表明为Ab2β，具有宫颈癌细胞膜表面抗原的“内影像”。 结论： 获得一株具有宫颈癌抗原内影像的抗独特型单克隆抗体。     

鼻咽癌抗独特型单克隆抗体的制备和鉴定

用针对鼻咽癌癌细胞相关抗原的单克隆抗体Ｆｃ１（Ａｂ１）作免疫原，采用常规免疫和杂交瘤制备方法，获得了一株抗Ｆｃ１Ｖ区独特型的杂交瘤：２Ａ９。双夹心ＥＬＩＳＡ显示２Ａ９所分泌的抗体（Ａｂ２）对Ｆｃ１有效强的亲和力。ＥＬＩＳＡ结合抑制试验结果显示，Ａｂ２能抑制Ｆｃ１对鼻咽癌细胞ＣＮＥ１的反应。这就证明Ａｂ２作用于Ｆｃ１抗体的Ｖ区。用Ａｂ２与钥孔戚血蓝素（ＫＬＨ）交联物免疫小鼠产生的抗－抗独特型抗体（Ａｂ３）的血清，能与Ｆｃ１竞争ＣＮＥ１细胞株上的原始靶抗原。免疫组化证实，Ａｂ３与Ｆｃ１对鼻咽癌细胞有相同的反应，均为细胞膜染色。可以看出Ａｂ３与Ａｂ１（Ｆｃ１）具有相同的配位。以上结果表明：２Ａ９杂交瘤细胞所分泌的抗独特型抗体Ａｂ２是带有鼻咽癌相关抗原内影像的单克隆抗体。     

单克隆抗DNA自身抗体及其抗血清独特型交叉反应

由严重存在SLE,并无需外源免疫能自发产生抗DNA自身抗体的小鼠MRL-Lpr/Lpr脾细胞与SP2/0-Ag-14骨髓瘤细胞杂交,获得一系列杂交瘤细胞株,它们分别分泌单克隆抗DNA自身抗体。我们用其中的细胞株H241的单抗免疫家兔,从免疫血清中收获到抗H241独特型扰体。通过放射免疫分析法(RIA),对H241进行了敏感度分析,并研究了H241与抗H211血清反应中,H241与另24个抗DNA单抗独特型交叉反应。结果表明,H241是高敏感度的单抗,6ng非标记H241能使~(125)I-H241与抗H241独特型抗体的结合达50%抑制。实验还证明,24个抗DNA单抗中有15个与H241不同程度地存在独特型交叉反应。实验提示,虽然抗DNA自身抗体独特型往往结构分离,从而表现抗体多样性,但有些抗体由于独特型结构类似,多样性受到限制;全身性红斑狠疮小鼠控制免疫球蛋白合成的胚系基因含有某些抗DNA抗体的相关位点。     

抗独特型抗体制备和应用的方法要点

抗独特型抗体是近年来发展起来的一种免疫生物性制剂,其制备和试验性应用都还处于探索阶段。本文从实用角度,对抗独特型抗体的制备(包括免疫原、免疫的动物、剂量和方法及特性鉴定)和应用(包括应用的方法和剂量)的方法要点进行了介绍。     

具有抗—HBs结合活性的单克隆抗—抗独特型抗体的制备和鉴定

B_3为我室建立的带有HBsAg表位内影像的单克隆抗独特型抗体(mAb_2)。本文采用脾脏内和尾静脉内注射途径,用B_3免疫BALB/c鼠,获得了具有抗-HBs结合活性的同系单克隆抗-抗独特型抗体(mAb_3)3B_8株。这一结论基于以下两点观察:(1)3B_8能与纯化的HBsAg结合。纯化的HBsAg或抗-HBs均能以剂量依赖形式抑制这一结合;(2)3B_8能以剂量依赖形式抑制抗-HBs与B_3的结合。小鼠在从未接触HBsAg的情况下,单独用B_3免疫,获得了具有抗-HBs结合活性的单克隆抗-抗独特型抗体3B_8,进一步证明我室过去建立的mAb_2B_3株,确实带有HBsAg表位内影像。     

抗SARS抗体独特型单链抗体的筛选及鉴定

目的从人源噬菌体抗体库中筛选抗SARS独特型抗体为SARS的诊断及疫苗的研究奠定基础。方法以混合SARS病人恢复期血清免疫球蛋白（Ig）作为筛选分子,从噬菌体抗体库中筛选出能与病人血清IgG（IgM）结合的抗体,并通过与混合正常人血清Ig作负性筛选,从而获得抗SARS病毒的独特型抗体（AId）。通过4轮“吸附-洗涤-扩增”,从最后一轮所得单克隆菌株中分别通过ELISA筛选出能和SARS病人恢复期血清Ig结合的菌株,提取质粒DNA,并对PCR扩增产物进行DNA序列测定,最后用所筛选的克隆通过与不同人群血清反应,证实其特异性。结果随机挑选经第4轮筛选后的200个单克隆菌落,其中有10个与SARS病人恢复期血清Ig结合的OD值明显高于其与正常人Ig结合的OD值;以上10个克隆经PCR扩增,其中有6个克隆于l000bp处有电泳条带;其DNA序列经与BLAST数据库和IMGT／QUEST软件比对有5个均与人的重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）高度同源,且与其同源性最高的人Ig的VH属VHI亚群,VL属k链,属VKⅡ亚群;最后确认有3个克隆其噬菌体抗体和SARS病人血清Ig结合的OD值均明显高于与正常人血清Ig结合的OD值。结论利用抗体库技术可不经免疫制备特异性抗SARS抗体独特型抗体,为SARS诊断及疫苗的研制奠定基础。     

制备大鼠单克隆抗独特型抗体的免疫方案(文摘)

抗独特型抗体在免疫调节的研究中是一种有效的试剂,而且作为抗肿瘤及传染病的疫苗具有潜在的实用意义。本文中作者对制备单克隆抗独特型抗体进行了研究,并且比较了3种制备大鼠单克隆抗独特型抗体的免疫方案。 方法是先用750μg纯化的抗恶性疟原虫单克隆抗体免疫雄性Wistar大鼠,免疫途径