胎鼠听囊细胞体外培养研究

目的:了解哺乳动物听觉细胞的来源,探索听觉细胞前体细胞体外增殖和分化. 方法:取孕鼠胚胎听囊细胞进行体外培养,用免疫细胞化学方法,分别对培养的细胞进行细胞角蛋白、F-肌动蛋白和calretinin染色观察细胞特征;BrdU染色观察细胞增殖. 结果:培养的细胞在体外进行分化和增殖,细胞形态主要有上皮细胞形态、成纤维细胞形态和神经细胞形态3种. 对细胞角蛋白和F-肌动蛋白这两种上皮细胞的标志染色呈阳性. 在原代培养就出现calretinin染色明显阳性的细胞. 传代后结果仍为阳性着染,但强度减弱. BrdU染色显示培养细胞具有明显的增殖活性. 本研究共传8代,历时4 mo,细胞形态维持稳定. 结论:胎鼠听囊细胞在体外自然培养条件下可以分化或者增殖为未成熟毛细胞. 本研究为探索刺激听觉毛细胞再生的治疗方法提供研究思路和方法.     

胎鼠肺细胞的分离纯化及原代培养

目的 建立一套可靠的胎鼠肺细胞分离、纯化和培养技术，用于体外研究肺发育和早产儿肺部疾病。方法 采用胰酶和胶原酶消化19d胎鼠肺组织块，经差速离心和反复贴壁法，分离、纯化胎鼠肺泡Ⅱ型细胞(AECⅡ)和肺成纤维细胞(LF)，并进行原代培养。用细胞角蛋白(cytokeratin)和波形蛋白(vimentin)免疫细胞化学染色和透射电镜对所分离的细胞进行鉴定。结果 该方法所得细胞产量大、纯度高。免疫细胞化学鉴定，AECⅡ细胞cytoker—atin染色阳性，vimentin染色阴性，LF则相反。透射电镜观察AECⅡ，可见细胞内板层小体。结论 该方法是一种可靠的胎鼠肺细胞的分离纯化培养技术，可用于体外研究肺发育与早产儿肺部疾病。     

胎鼠表皮干细胞的分离培养及毛囊再生

0　引言　近年来 ,随着组织工程的飞速发展 ,人类组织干细胞的研究及其临床应用日益成为国内外学者关注的焦点 ,表皮干细胞即是其中之一 .因此 ,表皮干细胞的培养成功为利用组织工程原理及分子生物学手段构建全新的人工皮肤组织带来了希望 .1　材料和方法1.1　材料　ＤＭＥＭ培养基、胰蛋白酶、ｄｉｓｐａｓｅ酶及角朊细胞培养基均购自Ｇｉｂｃｏ公司 ,小鼠ＩＶ型胶原购自Ｓｉｇｍａ公司 ,ｉｎｔｅｒｇｒｉｎ β1兔多抗为ＳａｎｔａＣｒｕｔｚ公司产品 ,一级昆明小鼠由第四军医大学实验动物中心提供 ,裸鼠购自上海生物所 .1.2　方法1.2 .1　…     

胎鼠成纤维细胞组织块体外培养方法的改良

目的:建立改良的胎鼠成纤维细胞(MEF)体外培养的简单有效方法,为成功培养胚胎干细胞奠定基础.方法:分别应用传统的消化法和改良的组织块贴附培养法对MEF进行体外培养,倒置显微镜下观察2种培养方法培养的原代和传代培养的MEF的生长形态、结构及细胞数量的变化.结果与结论:改良组织块贴附培养法省去了消化离心过程,简单易行,培养的成纤维细胞具有良好的增殖能力,原代培养成纤维细胞增长快,细胞产出量高,明显优于消化法培养,是MEF体外培养的良好方法.     

人牙胚体外器官培养模型的建立

目的 :建立人牙胚体外器官培养模型 .方法 :分泌前期人牙胚采用Trowell型支架培养法 ,RPMI 16 4 0培养基(含 2 0 0 g·L-1FBS ,2 0 0mg·L-1谷氨酰胺 ,2 0 0mg·L-1L 抗坏血酸 ,1× 10 -7mol·L-1维甲酸 ,10 0kU·L-1青霉素 ,10 0kU·L-1链霉素 ) ,在 37℃ ,5 0mL·L-1CO2 +95 0mL·L-1空气条件下进行培养 ,每 4 8h更换一次培养基 .体外培养 .2 ,4 ,6和 8d随机抽取牙胚进行组织学观察 .结果 :培养的牙胚组织结构关系与对照组一致 ,牙尖部形态进一步突出 ,细胞形态典型 .在 8d时 ,牙尖之间部分造釉器细胞和成牙本质细胞开始出现坏死 .结论 :为体外研究人类牙齿正常发育及各种因素对牙齿发育的影响提供了一个实用的模型     

酶消化法分离培养鼠牙胚间充质细胞

目的从小鼠胎鼠的牙胚组织分离培养间充质细胞,鉴定其细胞特性。结论成功培养小鼠胎鼠牙胚间充质干细胞,体外稳定传代6代以上,有成为组织工程种子细胞的应用前景。     

牙胚细胞与PLGA支架体内复合培养的实验研究

目的 摸索胎鼠牙胚细胞体外培养所需的条件及细胞-支架复合物在裸鼠体内培养的条件.方法 取17日龄的胎鼠第一磨牙牙胚组织消化成细胞悬液,然后种植于PLGA支架上,再将细胞支架复合物埋植于裸鼠皮下,术后40d后取出细胞支架复合物,观察细胞与支架的吸附及生长,繁殖情况.结果 细胞呈单层生长;细胞为多角形,紧密镶嵌成铺路石状;牙胚细胞染成蓝色,支架组织染成红色,牙胚细胞较散在分布,细胞与支架紧密贴附,适度伸展,并有基质分泌.结论 牙胚细胞支架复合物在裸鼠体内能够成活,细胞与支架紧密贴附,生长正常并有基质分泌,表明PLGA是牙组织工程良好的支架材料.     

组织快法分离、培养鼠牙胚间充质细胞

目的采用组织块法从小鼠胎鼠的牙胚组织分离培养间充质细胞,鉴定其细胞特性。结论成功培养小鼠胎鼠牙胚间充质干细胞,体外稳定传代6代以上,有成为组织工程种子细胞的应用前景。     

胎鼠海马神经元培养及其鉴定

目的建立胎鼠海马神经元体外培养方法,观察细胞生长情况,免疫组织化学染色鉴定神经元特异性.方法取胎鼠海马,分裂获得细胞悬液,接种于24孔板,经2 h差速帖壁去除成纤维细胞,将细胞液转移并继续培养,以获娶纯度较高的海马神经元.培养第5、11、15天观察细胞和突起生长情况,用NeuN抗体以免疫组化SP二步法染色鉴立神经细胞.结果培养头3 d.细胞生长缓慢,5 d时细胞开始生长,可见突起,11 d时突起连成网状.经Neun染色培养细胞呈阳性反应,证明是神经元.结论本方法获取生长良好,纯度较高的海马神经元.     

小鼠胚胎原始生殖细胞的体外培养

采用细胞生物学方法和组织培养技术研究小鼠胚胎原始生殖细胞(PGCs)的一般形态学特征及生物学特点.在体外培养条件下,PGCs 按体积大小可分大、中、小3类。本研究发现,中、小型原始生殖细胞在培养的第2、3 d 增多,形态似大型原始生殖细胞。培养中的 PGCs 不贴壁而悬浮生长于培养液中,培养到第6～7 d时开始死亡。体细胞(间充质细胞或间皮细胞)贴壁生长,生长旺盛,与PGCs 同时死亡。     

人胎肾上腺髓质细胞原代分离培养

本文介绍了一种较简捷、快速的人胎肾上腺髓质细胞原代分离培养的方法。分离出的人胎肾上腺髓质经胶原酶消化后,用Percoll液密度梯度离心可获得纯度为75～85%的肾上腺髓质细胞,将髓质细胞接种到铺有胶原的培养板上,培养2-7天后髓质细胞胞体增大,长出突起,胞浆含有颗粒,用特异性儿茶酚胺诱发萤光技术进一步确定培养的肾上腺髓质细胞的性质,用HPLC测定培养液中单胺类物质的含量。对培养过程中的某些技巧问题进行了讨论。     

SD大鼠乳鼠咀嚼肌成肌细胞的原代培养

目的 建立SD大鼠乳鼠咀嚼肌成肌细胞体外培养方法。方法 分离SD大鼠乳鼠咀嚼肌，采用胰蛋白酶和胶原酶多次消化法分离细胞，再用差速贴壁法对细胞进行纯化，所得的细胞进行Desmin免疫组化鉴定。结果 95％的培养的细胞Desmin胞浆呈阳性反应，台盼蓝检查细胞成活率超过94％。结论 多次消化和差速贴壁法可获得高产量高纯度的成肌细胞。     

体外培养成人及成年大鼠肾上腺嗜铬细胞

成人及成年大鼠肾上腺髓质组织比较致密,消化困难,应选用消化能力较强的胶原酶。在体外培养条件下,嗜铬细胞较其它类型细胞贴壁能力差,以多聚赖氨酸或鼠尾胶原包被底壁有利于细胞贴壁生长。神经生长因子(NGF)可促进嗜铬细胞贴壁,存活和生长出神经轴突样突起,但是成人及成年大鼠肾上腺嗜铬细胞对于NGF的依赖程度存在种属差异。在合NGF的培养基中大鼠嗜铬细胞存活数量增加,存活时间延长,并有较多细胞发育出神经轴突样突起。成人嗜铬细胞对NGF也产生一定反应,但其依赖程度不如鼠嗜铬细胞明显。     

胎牛主动脉内皮细胞的培养

目的 建立动脉内皮细胞（ＥＣｓ）的体外研究模型。方法 用消化法结合机械法的方法分离胎牛主动脉ＥＣｓ,在ｐＨ７．０的Ｍ１９９培养液中培养。结果 用Ⅷ因子相关抗原免疫荧光法以及倒置显微镜下细胞融合后呈单层生长、鹅卵石状排列,证实所培养的细胞为ＥＣｓ,在无内皮细胞生长因子的条件下体外连续培养的细胞达１８代。结论 在人动脉取材极为不易的情况下,胎牛主动脉ＥＣｓ的培养是很好的补充。     

ICR小鼠胚胎NSCs体外培养和诱导分化

利用表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维生长因子（bFGF）的联合促进作用使原代胚胎皮层神经干细胞（Neural Stem Cells,NSCs)稳定增殖,以此来分离培养ICR小鼠胚胎NSCs,并在体外高效诱导成神经元。通过诱导分化的对照实验获得神经元分化比例最高的方法。免疫细胞化学不仅证实了培养的NSCs可表达Nestin并具有多分化潜能,还发现NSCs与支持细胞(SCs)共培养时神经元分化比例高达60%(P＜5)。研究发现细胞生长因子EGF（20 ng/mL）和bFGF(20 ng/mL)能有效促使NSCs在无血清条件下增殖,并且支持细胞促进其向神经元分化。     

外消旋聚丙交酯与人胚半月板细胞构建复合物的研究

目的: 研究外消旋聚丙交酯(PDLLA)作为半月板组织工程支架材料应用的可行性.方法: 采用胶原酶阶段消化法获取人胚半月板纤维软骨细胞,碱性成纤维细胞生长因子(Bfgf)作用于第3代细胞,并用MTT比色法得出最佳效应浓度,扩增后的细胞种植于多聚赖氨酸修饰前、后的PDLLA上,在光镜、荧光显微镜、扫描电镜下观察PDLLA的亲水性、细胞吸附性和细胞增殖情况.结果: Bfgf扩增人胚半月板细胞的最佳效应浓度为50 μg/L(P＜0.05);PDLLA亲水性及细胞吸附性欠佳,予多聚赖氨酸修饰后明显改善,细胞在PDLLA上生长良好,3周时已有大量细胞生长.结论: 50 μg/L 的Bfgf可用于体外大量扩增人胚半月板细胞;PDLLA经多聚赖氨酸修饰后可表现出良好的亲水性、细胞吸附性和体外生物相容性,可作为半月板组织工程细胞培养支架材料用.     

人胎小肠上皮细胞体外培养的研究

联合应用粗胶原酶和中性蛋白酶消化胎儿小肠组织小块，可简便、快速地获得大量活率高的小肠上皮细胞（ｉｎｔａｓｔｉｎａｌｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ，ＩＥＣ）。培养细胞１～２ｄ内贴壁，７～８ｄ明显增殖，１０～１２ｄ汇合成片。免疫组化检查，细胞角质蛋白和上皮细胞膜抗原染色阳性。组化检查显示存在碱性磷酸酶表达。光镜下，培养细胞呈扁平多角形，单层排列。电镜下，细胞表面可见大量微绒毛及细胞间紧密联结、桥粒等。讨论了人ＩＥＣ体外培养应注意的问题及减少、异源细胞增殖的方法。     

探索大鼠骨髓基质干细胞体外培养的方法

目的探讨体外培养大鼠骨髓基质干细胞的一些具体的方法、原则和技巧．方法通过具体的选材、取材、首次换液、换液、传代。获得大量的大鼠骨髓基质干细胞。从中探索培养的方法、原则和技巧．结果体外培养获得大量的大鼠骨髓基质干细胞．结论通过理论联系实际，遵循一定的方法、原则和技巧，在不同的环境可以快速准确的体外培养出大量的大鼠骨髓基质干细胞．