X射线对人肺癌A549细胞Bmi-1表达的影响

目的：研究X射线照射对人肺癌A549细胞株中Bmi-1 mRNA和蛋白表达的影响。方法：用不同剂量（0、2、4、6Gy）的X射线照射体外培养的人肺癌A549细胞株,分别采用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测照射0、6、12、24、48和72 h后Bmi-1 mRNA和蛋白的表达水平。结果：与对照组比较,2、4、6 Gy X射线照射A549细胞后48 h内Bmi-1 mRNA表达升高,差异均有统计学意义（P〈0.05）;（2 Gy 48 h组除外）,2 Gy组照射后6 h、4 Gy组12 h、6 Gy组24 h升高最显著（P〈0.05）。照射后48 h内蛋白表达升高（4Gy除外）,48 h后蛋白表达逐渐下降,至72 h时接近未照射组水平。各时间点（除4 Gy 48 h和72 h外）的蛋白表达与对照组相比差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：在本实验条件下,2～6 Gy剂量X射线照射48 h内可使人肺癌A549细胞Bmi-1表达升高,之后表达逐渐降低。     

X射线对人肺癌细胞Pokemon表达影响

目的 研究不同剂量X射线照射及照射后不同时间点对体外培养的人肺癌A₅₄₉细胞系Pokemon基因和蛋白表达的影响。方法 用X射线2、4、6、8 Gy吸收剂量照射体外培养的A₅₄₉细胞系,分别采用荧光实时定量PCR技术和蛋白印记法检测A₅₄₉细胞照射后2、4、8、12、24、48 h的Pokemon mRNA和蛋白表达水平,以未照射组为对照。采用二苯基四氮唑溴盐法分别检测2 Gy照射1、2、3、4、5 d后A₅₄₉细胞增殖能力变化,以未照射组为对照。结果 Pokemon mRNA的表达在2、4、6、8 Gy照射后早期呈降低趋势,但晚期呈升高趋势,大部分时间点差异有统计学意义(t=3.40~154.76,P=0.000~0.041);Pokemon 蛋白的表达较对照组均升高,且各剂量组均在照射后8 h达峰值,在大部分时间点实验组与对照组差异有统计学意义(t=4.18~89.64,P=0.000~0.039)。照射组细胞接种后第3~5天细胞增殖能力显著低于对照组(t=2.34~18.19,P=0.000~0.040)。结论 一定剂量X射线在特定条件下可诱导人肺癌A₅₄₉细胞Pokemon mRNA和蛋白表达升高,可能与A₅₄₉细胞辐射抗性有关。     

pEgr-TNFα基因联合放疗抑制食管癌细胞生长的实验研究

背景与目的研究pEgr-TNFα重组质粒在稳定转染的食管癌细胞中的辐射诱导表达,及其联合放射治疗抑制食管癌细胞生长的效果。材料与方法将脂质体包裹的pEgr-TNFα重组质粒,转染食管癌细胞系EC9706中,经G418筛选,获得稳定表达的细胞;采用ELISA方法检测0.075Gy和2Gy剂量X射线诱导后TNFα的表达;观察该工种剂量X射线照射后,EC9706细胞的增长情况。结果pEgr-TNFα重组质粒转染EC9706细胞,并获得稳定转染的细胞;大剂量X射线照射和低剂量X射线照射均可诱导TNFα表达增强,为对照组的6~6.3倍(P<0.01);稳定转染的细胞经0.075Gy和2Gy X射线照射,8d后细胞数明显低于未转染细胞组(P<0.01)和稳定转染的假照射组(P<0.01)。结论体外pEgr-TNFα基因-放射联合治疗有明显的抑制食管癌细胞生长的作用。     

X射线对肺癌细胞系p57kip2转录表达的影响

目的:研究X射线对肺癌细胞系NCI-H226和A549的印记基因p57kip2转录表达的影响。方法:对数生长期的肺癌细胞系NCI-H226和A549,分别予以2、4、8和12GyX射线照射,并于照射前和照射后6、12、24、36和48h分别提取RNA,采用RT-PCR技术检测各时相p57kip2mRNA的含量,分析不同剂量X射线照射后对其转录水平的影响。结果:两组肺癌细胞p57的转录表达在不同照射剂量和不同时间水平间差异有统计学意义,P<0·05,A549经过X射线照射后,p57kip2的mRNA含量明显升高,且与照射剂量呈线性依赖关系;NCI-H226虽然未见明显规律,但在X射线照射后的峰值mR-NA含量均明显升高。结论:X射线照射后能够上调肺癌细胞p57kip2的mRNA的表达,预示着p57可能参与了放射线所致细胞周期重新分布和细胞凋亡的过程,并且可能预测肺癌细胞的放射敏感性,但其表达与时间剂量的关系尚需要进一步研究。     

60Co-γ照射对肺癌A549细胞VEGF表达的影响

目的:探讨60Co -γ射线照射肺癌A549细胞后血管内皮生长因子(vascula endothelial growth factor ,VEGF)表达变化.方法:2 Gy剂量60 Co-γ射线照射肺癌A549细胞,以荧光定量PCR法检测照射后4、12、24、48、72 h VEGF mRNA表达改变, 以ELISA法检测各组培养液上清中VEGF蛋白表达量变化.结果:以对照组(未照射组)VEGF mRNA表达量为1,照射后4 h VEGF mRNA表达开始升高,12、24小时达到高峰(8.83±3.01,P＜0.05 ;14.67±7.18,P＜0.01),48-72 h随后降至接近对照组水平.ELISA检测培养液上清中VEGF蛋白表达量,在照射后4 h 降低,随后开始升高,24、48 h达到高峰(600.86±20.87,P＜0.05;594.75± 2.52,P＜0.05),72 h降至对照组水平.结论:2 Gy剂量60Co-γ射线照射肺癌A549细胞后早期VEGF表达升高,我们推测此时可能是联合抗VEGF药物抑制肺癌转移的最佳时机.     

（60）Co γ射线诱导人淋巴细胞GDF15 mRNA表达水平的变化

目的：研究电离辐射诱导正常人外周血永生化淋巴细胞株中生长分化因子15（GDF15）mRNA表达水平的变化,以期为采用基因表达指标估算电离辐射吸收剂量提供科学依据。方法：用60Coγ射线照射指数增长期的人淋巴细胞株,采用不同剂量（0～15Gy）照射,于照射后不同时间点（0～72h）收集细胞提取RNA,用实时荧光定量PCR测定GDF15 mRNA表达水平的变化。结果：除照射后12h外,其它各时间点淋巴细胞株中,照射后细胞GDF15 mRNA的表达水平均随照射剂量的增加而升高,至某一剂量达高峰后开始下降;照射后12h细胞GDF15基因表达水平在各照射剂量点均显著高于对照（0Gy）组,拟合剂量效应曲线为y=1.0469x＋0.5278（R2=0.9457,P〈0.05）。在不同时间点,各照射剂量组基因表达的变化规律不同。8Gy照射后,GDF15表达总体上调,照射后12h达最高。结论：电离辐射诱导的GDF15 mRNA表达水平升高与辐照剂量和时间有一定的关系。     

X线照射后对乳腺癌细胞凋亡的影响及CDKN1A表达的变化

目的探讨乳腺癌细胞系（MCF-7）X线照射后CDKN1A基因（p21）表达变化及其对细胞凋亡的影响。方法用流式细胞方法检测MCF-7细胞在接受不同剂量X射线照射后CDKN1A基因表达的改变和用RNAi技术抑制CDKN1A基因表达并检测细胞凋亡的变化。结果MCF-7细胞在接受不同剂量（1、2和4 Gy） X射线照射后CDKN1A蛋白表达有不同程度升高,其中 4 Gy照射后升高水平最明显（P<0.05）。在接受4 Gy剂量照射后,CDKN1A蛋白水平在8、12、24、48、72 h 均有不同程度增加,其中24 h时较对照组升高3倍(P<0.05)。抑制CDKN1A基因表达后MCF-7细胞凋亡率增加183.9%（P<0.05）。结论乳腺癌细胞在接受4 Gy照射后24 h的CDKN1A表达水平增加最为明显,抑制CDKN1A基因表达可促进细胞凋亡。     

A549细胞经2、4 Gy X线照射后miR-505表达变化的实验研究

目的:初步探讨2、4 Gy X射线照射后人肺腺癌A549细胞miR-505体内、外表达的变化及意义.方法:2、4 Gy X射线分别照射体外培养的A549细胞,以实时定量PCR(RT-qPCR)法检测A549细胞中miR-505表达水平.分别将0、2与4 Gy X射线照射后的A549细胞经尾静脉注射裸鼠制备裸鼠肺转移动物模型,检测裸鼠肺组织及血清中miR-505的表达水平.统计分析采用SPSS 19.0软件.结果:2 Gy X射线照射A549细胞后1、2、12、及24 h,miR-505表达均显著升高(升高倍数分别为:3.09、1.82、2.19及1.24倍,P<0.01);4 Gy X射线照射A549细胞后1、2、12 h,miR-505表达亦均显著升高(升高倍数分别为:2.99、2.06、1.86倍,P<0.01).0、2、4 Gy X线照射组裸鼠肺组织中均可检测到miR-505表达显著升高(升高倍数分别为:9.28、16.55及6.84倍,P<0.05);miR-505在血清中表达水平0 Gy和2 Gy组分别为5.33和3.78,与对照组相比显著升高(P<0.05).结论:2、4 Gy X射线照射可增加A549细胞miR-505的体内、外表达水平,可能与增强A549细胞体内、外侵袭转移能力相关.     

不同时间点电离辐射对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因影响的实验研究

目的 探讨不同时间点电离辐射对胶质瘤c6细胞垂体瘤转化基因(PTTG)表达的影响.方法 胶质瘤C6细胞用2 Gy剂量X射线照射,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测照射前、照射后4 h、8 h、12 h、24 h、48 h、72 hPTrG mRNA的表达,采用免疫细胞化学检测FITG蛋白表达.结果 FITG mRNA及其蛋白的表达水平在X射线照射后4 h即开始下降,12 h下降最明显,24 h开始回升,72 h恢复正常.结论 电离辐射可以显著影响胶质瘤细胞PTTG的转录和翻译;机体内存在对电离辐射导致的PTTG损伤的修复系统.     

X射线对血管平滑肌细胞粘着斑激酶的影响

目的 探讨X射线对血管平滑肌细胞抑制作用的信号传导机制。方法 建立体外培养的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）模型,给予2－20Gy（分别为2、5、10、20Gy）单次X射线照射,采用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）技术,在mRNA水平观察X射线对VSMC粘着斑激酶（FAK）的影响。结果 2－20Gy单次X射线照射下调FAK mRNA表达。照射后48h,2、5、10、15、20Gy各照射组FAK mRNA表达均明显低于对照组,除20Gy与15Gy剂量组之间差异无显著性意义外,各组FAKmRNA表达差异均有极显著性意义（F＝364．21,P＜0．01）。同一剂量15Gy照射后6、24、48、72h照射组FAK mRNA表达均低于同时间点对照组,差异有显著性意义（分别为t=4．07,P＝0．01;t＝7．48,P＝0．02;t＝9．10,P＝0．00;t＝12．93,P＝0．00）,照射后45min、12h两组FAKmRNA表达差异无显著性意义（分别为t=2.18,P=0.10;t=1.46,P=0.22)。结论 放射可能通过在转录水平下调FAK的基因表达,使VSMC增殖受到抑制,诱导VSMC凋亡。其下调作用呈剂量相关性和时间相关性。     

辐射对巨噬细胞系RAW264.7基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的观察不同剂量γ-射线(0、5、10、20 Gy)照射小鼠巨噬细胞系RAW264.7后对基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响。方法应用不同剂量γ-射线(0、5、10、20 Gy)照射体外培养的巨噬细胞系RAW264.7,照射6、12、24、48 h后,实时荧光定量聚合酶链反应法(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测MMP-9 mRNA表达,选择MMP-9 mRNA表达最强的照射剂量;在照射细胞6、12、24、48 h后采用免疫印迹法(Westernblotting)检测MMP-9蛋白表达,并于照射前1 h加入地塞米松1μmol,检测MMP-9蛋白表达。结果60Coγ-射线(5、10、20 Gy)照射RAW264.7细胞系6、12、24、48 h后MMP-9 mRNA表达均明显增强(P<0.05),24 h达高峰,10 Gy增强最明显。与对照组相比,10 Gy照射细胞6、24、48 h后MMP-9蛋白表达明显增强(P<0.05),以24 h最明显(P<0.01);照射前1 h加入1μmol的地塞米松,10 Gy照射24 h后检测MMP-9蛋白表达,与未加地塞米松组相比,MMP-9蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论γ-射线照射巨噬细胞系RAW264.7,可显著增强MMP-9 mRNA及其蛋白表达;地塞米松可有效抑制电离辐射诱导的MMP-9蛋白表达,MMP-9可能参与了放射性肺损伤的发展。     

60Coγ射线诱导正常人淋巴母细胞XPCmRNA表达的剂量相关性研究

目的：研究正常人淋巴母细胞AHH-1电离辐射作用后XPC mRNA表达的剂量效应关系,探索建立一种基于基因表达变化的新型辐射生物剂量分子标志物的可能性。方法：剂量为1、2、4、6、8和10Gy的60Coγ线照射AHH-1细胞后4、10、24 h收集细胞,应用实时荧光定量PCR技术对XPC mRNA表达水平进行相对定量检测。结果：在0～10 Gy的γ射线照射后4 h,AHH-1细胞中XPC mRNA表达水平就显著增加,并达到第1个高峰,维持至10 h左右或有所降低,随后继续上升,持续时间可达24 h。在0～8 Gy剂量范围内辐射诱导XPC mRNA表达丰度随照射剂量的升高而上调,具有显著的剂量依赖性。结论：正常人淋巴母细胞XPC mRNA表达水平与电离辐射之间具有良好的剂量效应和时间效应关系,有成为新的辐射生物剂量计的潜力。     

X线照射对人结直肠癌细胞株SW480中Kiss-1基因表达的影响

目的探讨X线照射对体外培养人结直肠癌细胞株SW480中肿瘤转移抑制基因Kiss-1表达的影响。方法应用SYBRGreen实时定量PCR检测、相对定量法分析不同剂量X线照射后24、48 h SW480中Kiss-1 mRNA的表达水平。结果与对照组相比,照射后24 h,各照射组Kiss-1 mRNA表达的差异均无统计学意义(P>0.05);照射后48 h,2、4、6 Gy组Kiss-1 mRNA表达上调(P<0.05),8 Gy组Kiss-1 mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 X线照射不会导致结直肠癌细胞Kiss-1基因表达下调,放疗可能不会增加结直肠癌转移的风险。     

厄贝沙坦对放射诱导小肠黏膜上皮细胞分泌IL-6和PAI-1的影响

[目的]分析血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂厄贝沙坦(Irbesartan)对X射线照射大鼠空肠上皮细胞(IEC-6)诱导纤溶酶原抑制物-1(PAI-1)、白介素-6(IL-6)mRNA表达和IEC-6增殖活性的影响。[方法]用RT-PCR证实IEC-6表达血管紧张素转换酶1受体(AT1受体)mRNA和AT2受体mRNA。用RT-PCR观察10Gy X射线照射IEC-6细胞前后PAI-1、IL-6mRNA的表达情况,同时观察照射+厄贝沙坦对IEC-6细胞PAI-1、IL-6mRNA表达的影响。采用MTT法观察对细胞增殖活性的影响。[结果]RT-PCR检测结果显示10Gy X射线照射48h后IEC-6细胞中PAI-1、IL-6mRNA表达明显升高[0.16∶0.76、0.20∶0.75(F=3.60,P=0.010)],10GyX射线+厄贝沙坦48h后明显降低[0.69∶0.46、0.77∶0.53(F=3.80,P=0.010)]。MTT结果显示10GyX射线照射会抑制IEC-6细胞的增殖,1、10、50μmol/L厄贝沙坦均促进IEC-6细胞照射后的增殖[0.38∶0.52、0.53、0.54(F=2.50,P=0.005)]。[结论]X射线照射IEC-6细胞后炎症因子IL-6、PAI-1mRNA表达升高。厄贝沙坦降低了IL-6、PAI-1mRNA的高表达,并促进了肠上皮细胞的增殖。     

^60Co—γ照射对肺癌A549细胞VEGF表达的影响

目的：探讨^60Co-γ射线照射肺癌A549细胞后血管内皮生长因子（vascula endothelial growth factor,VEGF）表达变化。方法：2Gy剂量^60Co-γ射线照射肺癌A549细胞,以荧光定量PCR法检测照射后4、12、24、48、72h VEGF mRNA表达改变,以ELISA法检测各组培养液上清中VEGF蛋白表达量变化。结果：以对照组（未照射组）VEGF mRNA表达量为1,照射后4h VEGF mRNA表达开始升高,12、24小时达到高峰（8．83±3．01,P〈0．05;14．67±7．18,P〈0．01）,48—72h随后降至接近对照组水平。ELISA检测培养液上清中VEGF蛋白表达量,在照射后4h降低,随后开始升高,24、48h达到高峰（600．86±20．87,P〈0．05;594．75±2．52,P〈0．05）,72h降至对照组水平。结论：2Gy剂量^60Co-γ射线照射肺癌A549细胞后早期VEGF表达升高,我们推测此时可能是联合抗VEGF药物抑制肺癌转移的最佳时机。     

MCF7细胞照射后耐药基因MDR1和LRP表达的观察

目的:探讨X 射线照射后MCF7 细胞系多药耐药基因MDR1及其糖蛋白(P-gp),以及肺耐药蛋白LRP基因及LRP蛋白水平变化.方法:对MCF7细胞进行X射线照射,照射2 Gy/d,共照射4 d,总剂量8 Gy.利用RT-PCR法检测照射前后的MDR1和LRP基因表达变化;用蛋白质印迹法检测照射前后P-gp和LRP蛋白质水平表达的变化.结果:MCF7细胞照射前MDR1和LRP基因的半定量值分别为0.23±0.01和0.17±0.01,射线照射后半定量值分别为0.35±0.04和0.21±0.01,比照射前显著升高,P＜0.05.P-gp和LRP蛋白照射前半定量值分别为0.42±0.07、0.85±0.07,射线照射后半定量值分别为1.93±0.27、1.30±0.02,比照射前显著升高,P＜0.05.结论:MCF7 细胞X射线照射后耐药基因MDR1、LRP及其P-gp、LRP 蛋白表达显著增强.     

X射线照射对人脐静脉内皮细胞焦亡的影响

目的：探讨X射线照射对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）焦亡的影响。方法：单次10 Gy X射线照射HUVEC细胞,采用ELISA法检测照射后0~72 h HUVEC分泌细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-18的浓度,Western blot法检测照射后6~48 h HUVEC内Caspase-1的活化水平,采用透射电子显微镜检测照射后72 h HUVEC形态的变化。采用流式细胞术检测单次10 Gy以及多次小剂量（2.5 Gy/d,连续4 d）照射后HUVEC焦亡率的变化。结果：10 Gy X射线照射后0~72 h HUVEC中IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-18浓度与对照组（0 Gy组）相比均明显升高（P<0.05）。10 Gy X射线照射后6~48 h细胞内Caspase-1活化水平升高（P<0.05）,细胞呈现体积增大肿胀状态。单次10 Gy照射组和多次小剂量照射组细胞焦亡率均明显高于空白对照组（P<0.01）;此外,单次10 Gy照射组细胞焦亡率较多次小剂量照射组细胞升高约1倍（P<0.01）。结论：X射线照射可引起人脐静脉内皮细胞HUVEC焦亡;在总剂量相同情况下,单次大剂量照射引起的HUVEC焦亡水平明显高于多次小剂量照射。     

电离辐射对人外周血线粒体编码基因mRNA表达的影响

目的： 观察γ射线对人外周血线粒体编码基因mRNA表达水平的影响,探讨线粒体编码基因用于辐射生物剂量估算的可行性。方法：用不同剂量水平 (0~5 Gy)的60Co γ射线照射3名正常人离体外周血样本,照射6 h后,提取总RNA,应用实时荧光定量PCR技术检测ND1,ND6,细胞色素C氧化酶亚基 (cytochrome C oxidase subunit,COX)I、II、III,三磷酸腺苷酶6 (adenosine triphosphatase,ATPase6),三磷酸腺苷酶8(adenosine triphosphatase,ATPase8) mRNA表达水平的变化,采用Origin 7.5拟合照射剂量与基因表达水平的剂量-效应关系曲线。结果：γ射线照射人外周血后,线粒体编码基因COXI及 ATPase6的相对表达水平在0~5 Gy剂量范围内表达先增加,3 Gy剂量点之后显现下降趋势,对这两个基因在0~3 Gy剂量范围内分别进行拟合,得到COXI 剂量-效应关系方程为Y=0.625 9+0.256 1D (r2=0.916 3,P<0.01); ATPase6基因表达剂量-效应关系方程为Y=0.218 9+ 0.806 0 D (r2=0.912 6,P<0.01),其他5个基因的相对表达水平与照射剂量间不存在明显的剂量-效应关系 (P>0.05)。结论：γ射线对人外周血线粒体编码基因COXI 及 ATPase6的mRNA表达水平具有明显的影响,这两个基因的表达水平与γ射线的照射剂量存在线性关系,有望用于辐射生物剂量的估算。     

POLH mRNA作为辐射损伤分子生物标志物的可行性研究

目的:研究受γ射线照射后人外周血中POLH mRNA的表达变化,为确立POLH mRNA作为新的辐射损伤分子生物标志物提供实验依据。方法:采取3名健康成人的外周血,利用⁶⁰Co γ放射源分别对其进行0.5、1、2、4、6、10 Gy照射,在照射后2、4、8、12和24 h收集各个剂量组受试者全血,提取总RNA,利用TaqMan探针实时定量PCR法,检测POLH mRNA的相对表达量。另收集30名不同年龄段(男女各占一半)的健康人外周血作为本底组,检测POLH mRNA在不同个体间的表达差异。结果:照射后2 h,仅10 Gy照射组POLH mRNA表达增加,其余各照射组无显著变化;照射后4、8、12和24 h,在0~2 Gy范围内,POLH mRNA表达量随照射剂量的增加而增加,呈现明显的剂量依赖效应,大于2 Gy照射后增加趋势接近饱和。照射后4~12 h随时间的增加表达量也不断增加,于12 h达到峰值。在对健康人群本底表达水平的分析中发现,POLH mRNA表达水平不受性别、年龄影响,在不同个体间相对均一,波动范围小。结论:POLH mRNA可由为辐射诱导表达,在一定时间和剂量范围内呈现明显的剂量依赖关系,且在不同个体之间本底表达水平相对均一,具备作为辐射损伤分子生物标志物的潜力。     

X射线照射诱导鼻咽癌细胞hMSH2的表达

目的研究X射线照射对鼻咽癌CNE-1细胞错配修复基因hMSH2表达的影响,探讨放射损伤后肿瘤细胞的DNA修复机制。方法应用逆转录-PCR(RT-PCR)、免疫细胞化学及蛋白免疫印迹(Western blot)方法,检测X射线照射后对照组和实验组(照射总剂量分别为0Gy和10Gy)细胞中hM-SH2基因mRNA及蛋白表达。结果实验组细胞hMSH2基因mRNA及蛋白表达在照射终止后逐渐上调,其表达较对照组显著增强(P<0.01)。结论X射线照射可诱导鼻咽癌细胞hMSH2的表达,有助于放射损伤后肿瘤细胞DNA修复,这可能是肿瘤放疗敏感性降低的原因之一。