两种全血基因组DNA提取法的比较

目的比较经典的酚／氯仿法和人全血基因组DNA小量快速提取试剂盒抽提法两种方法提取人全血基因组DNA的纯度及总量的差异。方法收集静脉血5毫升,共132人份。分别采用上述两种方法提取基因组DNA,用紫外分光光度仪及琼脂糖凝胶电泳检测其纯度和总量,采用统计学t检验,数据以均数±标准差（x±s）表示。结果经典的酚／氯仿法和人全血基因组DNA小量快速提取试剂盒抽提法两种方法提取基因组DNA纯度用0D260／OD280表示分别为：1．65＋0．12,1．86＋0．15。基因组DNA总量分别为28．3＋3．02,33．8＋3．24。结论从提取的基因组DNA纯度和总量来比较,人全血基因组DNA小量快速提取试剂盒抽提法抽提方法较好。     

一种碘化钾提取外周血基因组DNA的方法

目的　建立外周血基因组DNA 的快速提取方法。方法　用碘化钾直接从外周血中提取基因组DNA。结果　用该方法提取的DNA 为大分子量DNA;A260/A280为1.85,A260/A230为2.2;提取效率大于90% ;DNA 体外扩增结果良好。结论　该方法简便、快速、经济,可用于大量临床标本的研究。     

胰蛋白酶消化提取DNA

胰蛋白酶消化提取ＤＮＡ贺明伟，张白帆，郑艳珍，王光平，唐发清哺乳动物细胞ＤＮＡ的提取，一般是在含乙二胺四乙酸钠（ＥＤＴＡ）和十二烷基磺酸钠（ＳＤＳ）的反应缓冲液中，利用蛋白酶Ｋ消化降解蛋白质，随后用苯酚，氯仿相继处理来获得的［１］。上述试剂中蛋白酶Ｋ...     

石蜡包埋组织DNA的提取

多年存档的常规福尔马林固定石蜡包埋的病理标本,可用聚合酶链反应(PCR)技术进行回顾性研究或检测,但模板DNA的质量直接影响PCR的效果。本文以扩增c-Ki     

人血细胞DNA无酚提取法

目的 寻找最佳的从血液尤其是凝血中提取DNA的方法,减少实验和临床检测血液的用量.方法 静脉抽取30份健康体检者的血样,分别抗凝、不抗凝处理后,用经优化的不需要酶和有机溶剂的抽提程序提取DNA,通过电泳和PCR进行检测.结果 凝血和抗凝血的DNA产量分别是(40.2±8.86)mg DNA/L和(39.1±10.2)mg DNA/L;纯度分别为1.87±0.11和1.92± 0.12.所有样本的DNA分子质量都很高,从两者的DNA样本中能很容易地扩增出t-PA基因的第8内含子区ALU等位基因二态性,因此所提取的DNA是完整可靠的.结论 该方法能快速、简单、有效、无毒地从新鲜血液和凝血中提取DNA,适合于临床检测和分子生物学研究.     

QIAamp及Biomed粪便细菌基因组DNA提取试剂盒提取人肠道细菌基因组DNA质量的差异*

背景：有研究表明,不同试剂盒提取的粪便细菌基因组DNA质量有差别,选择一种操作简便、质量优良的粪便细菌基因组DNA提取试剂盒成为研究者们关注和急需解决的问题。 目的：比较QIAamp及Biomed粪便细菌基因组DNA提取试剂盒提取的人肠道细菌基因组DNA质量的差异。 方法：收集健康成年人新鲜粪便标本30例,用两种试剂盒分别提取细菌基因组DNA,检测其浓度、吸光度A260/280 nm值及提取率,设计乳酸菌属16S rDNA基因特异性引物,以各自所提DNA为模板,进行常规聚合酶链反应,凝胶电泳后比较条带数量、明暗度及密度,并进行实时荧光定量聚合酶链反应定量检测各自所含乳酸菌属的数量。 结果与结论：QIAamp试剂盒提取的正常人肠道细菌基因组DNA的浓度、提取率、表达量及乳酸菌属的数量均高于Biomed试剂盒(P < 0.05或P < 0.01)。说明QIAamp试剂盒提取的粪便细菌基因组DNA质量优于Biomed试剂盒。     

微量血提取DNA法在PPARγ基因突变研究中的应用

目的建立一种大样本外周血基因组DNA的提取方法.方法改良经典基因组DNA提取方法,用TritonX-100和Tris-HCl混合溶解红细胞.结果用该法提取的DNA,A260nm/A280nm均大于1.89, 含量大约300μg/ml,PCR扩增产物酶切结果良好.结论该方法简便、经济,可用于大样本的基因分析.     

石蜡包埋组织基因组DNA提取的条件优化

DNA提取是分子生物学研究的基础工作.在进行回顾性实验研究时,病理科保存的大量石蜡包埋组织(paraffin-embedded tissues, PETs)系分子生物学研究材料的可靠来源,但从福尔马林固定的PETs中提取高质量的DNA仍存在一定难度.PETs在制作过程中受到多种理化因素影响,造成DNA降解严重,使得PCR扩增结果不稳定.如何避免DNA分子损失,保持DNA相对完整和纯度是亟待解决的难题.本研究通过比较不同脱蜡方法和抽提方法所得DNA的质量,旨在找到一种安全有效的PETs中提取DNA的方法.     

一种新的DNA提取方法TLS法

从不同组织、细胞或外周血中制备高分子ＤＮＡ，是进行分子水平研究的先决条件。ＤＮＡ以核蛋白形式存在于细胞核中，制备ＤＮＡ的原则是既要将蛋白质、脂质、多糖及小分子杂质分离干净，又要得到高分子量ＤＮＡ。近年来采用蛋白酶Ｋ水解的方法，使这一问题得到较好的解决...     

改进TRIZOL法提取基因组DNA

目的建立一种在提取总RNA的同时又能制备基因组DNA的方法。方法利用TR IZOL法收集水相沉淀总RNA后余下的中间层和有机相,合并去除蛋白质,再提取基因组DNA。通过紫外分光光度法和电泳法予以鉴定,并以之为模板进行PCR扩增鉴定。结果提取的基因组DNA纯度和浓度俱佳,用于PCR扩增效果良好。结论改进的TR IZOL法可以更加充分地利用实验材料,且可靠易行。     

正交试验优化实现毛细管中的快速高效DNA提取

目的利用正交试验优化毛细管DNA提取的实验条件,并对优化后的毛细管DNA提取法进行考察。方法结合液滴与磁珠控制方法,在聚四氟乙烯毛细管中依次完成进样、DNA结合、洗涤以及洗脱等过程,建立毛细管DNA提取法。对照方法采用传统煮沸裂解法。采用正交试验考察血液乙型肝炎病毒（HBVDNA）提取的实验条件,包括结合时间、洗脱时间与洗脱温度等对DNA提取效果的影响。考察毛细管DNA提取法的DNA提取效果与重现性,分析提取的DNA定量（Ct值）与原始样品浓度的相关性。比较毛细管DNA提取法与对照方法提取DNA定量结果及耗时。结果正交试验提示毛细管DNA提取法的最佳实验条件为磁珠DNA结合时间5min,洗脱温度60℃,洗脱时间1min。荧光定量PCR显示,毛细管DNA提取法DNA提取效果较好,回收DNA定量具有良好的重现性,提取的DNA定量与原始样品浓度呈正相关（r=0．9999,P〈0．01）。配对t检验显示,毛细管DNA提取法的回收DNA定量显著高于对照方法（t=-4．263,P〈0．001）。采用优化的实验条件,整个毛细管DNA提取操作在23min内完成,而对照方法耗时45min以上。结论利用正交试验实现了毛细管DNA提取实验参数的优化,建立了一种快速、高效的DNA提取方法。     

小环DNA

在细胞中广泛存在长度在０．１～２μ的多分散共价闭环ＤＮＡ分子，称为小环ＤＮＡ或ｐｌａｓｍｉｄ－ｌｉｋｅ ＤＮＡ，可能是核ＤＮＡ或线粒体ＤＮＡ的产物，它可以通过膜系统进行基因漂移，在细胞各部之间信息交流，特别是在核遗传系统与线粒体遗传系统的相互调解、细胞突变、衰老和其它分子病过程中可能起到非常重要的作用。     

尿液DNA提取方法与PCR扩增产物的比较

尿液ＤＮＡ提取方法与ＰＣＲ扩增产物的比较肖莎，郭琳琅，区士欢聚合酶链反应（ＰＣＲ）是近年来建立的一种快速、敏感、特异的体外ＤＮＡ扩增技术。能否获得完整、满意的ＤＮＡ是ＰＣＲ分析的最主要的基本步骤。我们在实际工作中对尿液中的巨细胞病毒ＤＮＡ（ＣＭＶ－Ｄ...     

不同方法提取基因组DNA的比较

目的通过对不同方法的比较建立一种遗传工程鼠基因组DNA鉴定提取最简单快速的方法。方法以大鼠和小鼠的鼠尾及脚趾为实验材料,采用酚氯仿、煮沸法、涡旋离心法提取基因组DNA;通过琼脂糖凝胶的方法检验DNA质量,通过对时间的统计分析比较3种方法提取DNA的速率。利用PCR技术检测DNA的扩增效果。结果煮沸法、涡旋离心法和酚氯仿提取的DNA比较,电泳条带均较弱。涡旋离心法所耗费的时间最短,煮沸法次之,酚氯仿法耗时最长。除了煮沸法外,涡旋离心法和酚氯仿方法提取的DNA在用于PCR检测时都能得到清晰的目的条带。结论在使用PCR进行基因型初步鉴定时,涡旋离心法是三种方法中最简单快速的首选方法。     

介绍一种简便,实用的提取滴虫DNA方法

介绍一种简便、实用的提取滴虫ＤＮＡ方法吴杰，陆晓林，刘忠湘本文所报道的方法适用于提取滴虫的ＤＮＡ，经反复试验结果稳定。所获ＤＮＡ的质和量均较高，可用于ＤＮＡ多态性，构建ＤＮＡ文库等研究。方法①离心收集无菌培养４８ｈ的阴道毛滴虫，ＰＢＳ（ＰＨ７．４，４...     

一种从石蜡包埋组织中快速提取DNA的方法

目的建立从甲醛固定石蜡包埋组织中高效、快速提取基因组DNA的方法。方法将一片10μm厚石蜡包埋大肠癌组织切片直接浸入150μl消化液中,56℃孵育0.5h、1h和2h,灭活蛋白酶K后离心取上清即为DNA提取物。琼脂糖凝胶电泳检测所提取DNA的片段分布,紫外分光光度法测定DNA的产量及纯度。以提取的DNA为模板,PCR扩增不同长度产物片段并进行产物的直接测序以评价提取方法。结果该提取方法能够获得较长片段的基因组DNA,从一片10μm厚石蜡切片中即可获得大约60μg的DNA,在0.5h消化条件下获取的模板DNA,即可实现对152bp、293bp、392bp和541bp等4种不同片段的100%扩增,1h消化组的PCR产物可直接用于DNA测序。结论建立了一种简单、快速地从甲醛固定石蜡包埋组织中提取DNA的方法,只需一步消化即可获得满足普通PCR及测序需要的基因组DNA。     

用于分子生物学中DNA快速提取技术的研究

本文建立了应用碘化钾快速提取DNA的方法，提取55份外周血及14份骨髓标本，用紫外分光光度计检测其纯度和浓度，并用于一系列分子试验加以验证获得满意效果。     

几种线粒体DNA提取方法的比较

目的将提取线粒体DNA的碱变性法、Triton法、改进高盐沉淀法加以比较,以得到最方便快速提取线粒体DNA的方法.方法采用健康成年雄性Wistar大鼠,取回肠上皮细胞样本18份,每份含3×10?6细胞,每6份分别用碱变性法、Triton法、改进高盐沉淀法提取线粒体DNA,紫外分光光度法定量.再用琼脂糖凝胶电泳和线粒体ATPase6亚基基因PCR扩增产物鉴定所提取的线粒体DNA.结果3种方法提取线粒体DNA量差别明显改进高盐沉淀法量最多,为(1.26±0.23)μg;碱变性法次之,为(0.52±0.18)μg;Triton法为(0.31±0.16)μg.A260/A280均大于1.7.说明改进高盐沉淀法提取线粒体DNA具有操作简单,产量多的优点.将改进高盐沉淀法提取线粒体DNA用于PCR扩增,测定出了线粒体DNAATPase8亚基基因序列,说明该法所提取mtDNA可用于mtDNA测序.讨论和结论线粒体在细胞凋亡,衰老及程序化死亡中发挥重要作用.已在多种疾病中发现mtDNA突变.对线粒体疾病的分子遗传机理的研究可以进一步阐明这些疾病的病因,并为治疗提供理论指导.胡义德、Tamura和Palva等用碱变性法提取了人血白细胞、心肌等组织中mtDNA;戴纪刚等建立的Triton法先除去细胞核,再分离提取胞浆中mtDNA.而高盐沉淀法通过SDS(十二烷基硫酸钠)破坏细胞膜、核膜,使蛋白质变性,从而游离出核酸,EDTA抑制细胞中DNA酶的活性,蛋白酶K进一步将蛋白质降解成小肽,加入饱和乙酸钠后,绝大部分线性大分子量DNA和蛋白质在SDS作用下变性形成沉淀,环状mtDNA仍为自然状态,通过高速离心,即可得到mtDNA.3种方法各有优缺点碱变性法操作时间较短,要求条件比较严格,不易重复;Triton法通过核质分离提取mtDNA操作时间短,但产量低,易降解.而高盐沉淀法操作简单,易重复,产量多,可依需用量扩大反应体系,使mtDNA质量得以容易控制.