钩吻素子对坐骨神经慢性束缚损伤模型大鼠脊髓3α-羟化类固醇脱氢酶表达的影响

目的观测在钩吻素子治疗CCI大鼠NPP过程中脊髓3α-HSD的表达动态变化规律。方法:在大鼠CCI诱导的NPP模型上,于术后第3天开始,皮下注射给予钩吻素子(0.28,1.4,7 mg·kg-1)连续7 d,以免疫组织化学方法,观测脊髓3α-HSD蛋白水平的动态变化;以Realtime-PCR法测定脊髓3α-HSD基因表达水平的动态变化。结果免疫组织化学方法显示,3α-HSD在脊髓灰质均有分布;与sham组相比,CCI组、钩吻素子(7,0.28 mg·kg-1)大鼠脊髓背角3α-HSD蛋白表达随术后时间延长有上升趋势,其中钩吻素子(7 mg·kg-1)治疗组和CCI组相比,术后第9天脊髓3α-HSD蛋白表达的升高具有显著性差异,并且持续至第13天(停药后4 d)。Realtime-PCR显示,治疗组大鼠3α-HSD mRNA表达随术后时间延长逐渐增强趋势。CCI大鼠钩吻素子(7 mg·kg-1)给药治疗后,术后第4天3α-HSD mRNA表达就有显著提高;术后第6天CCI组、钩吻素子(7,0.28 mg·kg-1)治疗组的3α-HSD mRNA表达均显著提高,但钩吻素子(7,0.28 mg·kg-1)治疗组与CCI组相比无显著差异;术后第9、13天,与Sham组相比,CCI组、钩吻素子(7,0.28 mg·kg-1)治疗组的3α-HSD mRNA表达均进一步显著提高,其中钩吻素子(7 mg·kg-1)治疗组与CCI组、钩吻素子(0.28 mg·kg-1)治疗组相比均有显著差异。结论钩吻素子抗NPP作用可能与上调脊髓3α-HSD酶表达有关。     

钩吻生物碱化合物体外抗消化系统肿瘤的活性

目的探讨钩吻生物碱化合物抗消化系统肿瘤的活性,并初步探索其构效关系。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT法）比色法,观察钩吻生物碱化合物对人肝肿瘤细胞HepG2、人胃癌细胞MGC80-3、人食管癌细胞TE-11和人结肠癌细胞SW480增殖的抑制作用。结果钩吻素子、钩吻素甲、钩吻素己和1-甲氧基钩吻碱对SW480细胞和MGC80-3细胞增殖具有显著的抑制作用,作用呈剂量依赖性,对SW480细胞半数抑制浓度（IC50）分别为0.45±0.10,0.76±0.28,0.52±0.22和1.41±0.06mmol·L^-1。对MGC80-3细胞IC50分别为0.82±0.19,1.20±0.33,1.14±0.23和1.22±0.11mmol·L^-1。钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素己对TE-11细胞和HepG2细胞的增殖也有一定的抑制作用,作用呈剂量依赖性,对TE-11细胞半数抑制浓度（IC50）分别为0.74±0.05,1.94±0.30和1.73±0.35mmol·L^-1。对细胞HepG2的IC50分别为1.26±0.32,1.82±0.35和1.79±0.54mmol·L^-1。结论钩吻生物碱化合物具有抗消化系统肿瘤活性,并存在一定的构效关系。     

钩吻生物碱化合物抗肿瘤效应及其诱导凋亡作用

目的研究钩吻生物碱化合物抗肿瘤效应及其诱导凋亡作用。方法①在小鼠H22肝癌细胞小鼠移植性肿瘤模型上观察钩吻生物碱化合物对H22小鼠实体瘤的抑制作用;②AO／EB荧光染色法观察凋亡细胞的形态学变化;流式细胞仪PI染色检测细胞周期变化及凋亡率。结果腹腔注射钩吻素子对H22小鼠实体瘤的抑瘤率为40．29％、36．57％、22．89％;钩吻素甲对小鼠H22实体瘤的生长具有一定的抑制作用,抑瘤率为28．91％、16．85％、9．68％;但1-甲氧基钩吻碱小鼠H22实体瘤没有明显的抑制作用。钩吻素子可诱导SW480细胞发生凋亡形态学改变．并且可使SW480细胞周期阻滞于s期,阻止细胞从s期至G2期转移,从而诱导其凋亡。结论钩吻生物碱化合物特别是钩吻素子具有较强的抗肿瘤活性并具有一定的构效关系,钩吻索子的抗肿瘤作用机制可能与阻滞肿瘤细胞周期和促进肿瘤细胞凋亡作用有关。     

钩吻素子对大鼠焦虑行为的影响

目的进一步明确钩吻素子是否具有抗焦虑作用。方法以大鼠高架十字迷宫实验为动物模型,评价钩吻素子单次皮下注射给药和连续皮下注射给药的抗焦虑活性及特点。结果钩吻素子能显著增加大鼠进入高架十字迷宫开臂次数和在开臂的停留时间百分率(P<0.05,P<0.01);钩吻素子在实验剂量下对大鼠自主运动活性无影响(P>0.05)。结论钩吻素子可能具有抗焦虑作用。     

钩吻生物碱成分的研究进展

目的对钩吻中生物碱成分的研究进展进行综述,为钩吻生物碱成分的进一步研究奠定基础。方法查阅国内外相关文献47篇,从其中化学成分的理化常数、结构式、提取分离方法、药理作用、毒性以及开发前景等方面对钩吻生物碱类成分的研究进展进行综述。结果与结论钩吻中含有生物碱成分44种,主要为吲哚类生物碱;主要提取分离方法为硅胶柱层析和重结晶;钩吻生物碱具有免疫调节、抗肿瘤、镇痛镇静等药理活性;钩吻中的毒性成分也为生物碱类成分,这给广大研究人员带来了严峻的挑战与机遇。     

钩吻中毒的机制、临床特点及处理

钩吻是毒性极强的外用中药,应用不当或误服可致中毒,有时还可致命。主要毒性成分是钩吻碱,以钩吻素子含量最高。钩吻中毒主要抑制延髓呼吸中枢,并抑制脑和脊髓的运动中枢。临床表现以呼吸系统、神经系统症状为主,可出现呼吸衰竭和呼吸肌麻痹,是钩吻中毒最常见的死因。目前尚无特效解毒剂,以对症支持治疗为主。洗胃时须注意监测呼吸情况,必要时先行气管插管再洗胃。     

钩吻生物碱的提取分离及结构鉴定

中草药钩吻中具有抗癌活性生物碱单体成分的提取分离,并测定其结构。方法：药材粉碎后用3%NaOH碱化后,晾干,用氯仿浸泡,回收氯仿提取液得浸膏。加酸溶解后,用氯仿萃取,碱化水层,再用氯仿萃取,得到钩吻总生物碱。然后经硅胶柱层析、反相ODS柱层析以及制备型HPLC层析分离纯化,并经理化性质和光谱学数据的测定鉴定单体化合物的结构。结果：共分离得到12个单体化合物,经测定紫外光谱、1H-NMR数据并与文献报道相比较,初步确定两个化合物的结构分别为gelsemine和koumine。结论：通过硅胶柱层析、ODS柱层析和HPLC相结合的方法可以达到分离钩吻总生物碱的目的。     

UPLC测定钩吻素子的含量及其水溶液稳定性

目的建立超高效液相色谱法测定钩吻素子的含量,并考察其水溶液在室温条件下的稳定性。方法采用Agilent Extend-C18(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱,以乙腈-0.2%正丁胺水溶液(30∶70)为流动相,流速0.5 m L·min?1,检测波长256 nm,测定3个批次钩吻素子的含量,并考察钩吻素子水溶液在室温条件下稳定性。结果钩吻素子分离度良好;在10.19~112.2μg·m L?1内线性关系良好(r=0.999 7),定量限为0.1μg·m L?1;平均回收率为100.4%(RSD=0.45%,n=9);3个批次钩吻素子平均含量为99.97%;钩吻素子水溶液室温条件下连续7 d稳定性良好。结论该方法简单易行、专属性强,准确可靠,适用于钩吻素子含量测定,且本品水溶液稳定性良好。     

钩吻素子在大鼠肝微粒体中的酶促反应动力学研究

目的建立体外实验法研究钩吻素子在大鼠肝微粒体中的酶促反应动力学。方法以钩吻碱甲标准品为内标,采用液质连用(UPLC/MS)的方法测定钩吻素子在体外代谢30min后剩余钩吻素子的含量。UPLC采用BEH C18色谱柱(2.1×50mm,1.7μm),流动相为0.1%甲醇酸-0.1%甲醇水(20∶80),流速为0.3mL·min-1,进样量为1μL,柱温为40℃,MS采用正离子、多反应监测(MRM)模式监测,离子监控通道m/z307.1>69.76(钩吻素子),m/z 323.1>69.76(钩吻碱甲),毛细管电压2.8kV,锥孔电压35V,离子源温度110℃,脱溶剂温度300℃,锥孔气(N2)流速50L·h-1,脱溶剂气(N2)流速450L·h-1。用Linewrave-Burk作图分析数据,计算酶促动力学参数。结果钩吻素子在0.5～30uM范围内线性良好Y=0.1544X+0.0593,r=0.9939结论此方法简单、快速、可靠,适用于钩吻素子的体外代谢研究。     

注射用钩吻素子脂质体对离体蛙坐骨神经干动作电位的影响

目的应用电生理方法观察注射用钩吻素子脂质体对于蛙离体坐骨神经干动作电位的影响。方法采用薄膜分散法制备注射用钩吻素子脂质体,制备蛙离体坐骨神经干,将其分为任氏液组(C组)和注射用钩吻素子脂质体组(K组),分别用任氏液、注射用钩吻素子脂质体处理蛙离体坐骨神经干。使用BL-420F生物机能实验系统引导神经干复合动作电位,测定神经干复合动作电位的振幅、传导速度以及持续时间。结果任氏液组神经干复合动作电位的振幅、持续时间和传导速度各观察时点比较均无变化(P>0. 05);注射用钩吻素子脂质体可使蛙坐骨神经干复合动作电位的振幅变小、传导速度变慢(P <0. 05),进而使坐骨神经干动作电位消失。结论注射用钩吻素子脂质体能阻滞蛙离体坐骨神经干复合动作电位的传导,这可能是其发挥局部麻醉效应的电生理学基础。     

钩吻素子抗焦虑作用及其对海马区神经甾体水平的影响

目的：进一步明确钩吻素子的抗焦虑作用并探讨其对大鼠海马区神经甾体水平的影响。方法以地西泮为阳性对照药,大鼠高架十字迷宫为动物模型,评价钩吻素子的抗焦虑活性及特点;采用固相萃取结合高效液相色谱-质谱联用技术测定大鼠海马区中神经甾体的含量。结果与空白对照组相比,钩吻素子不影响大鼠在高架十字迷宫中的总入臂次数（ P＞0.05）,并且能显著增加大鼠进入开臂次数和在开臂的停留时间百分率（P＜0.01）。钩吻素子处理组大鼠海马区孕烯醇酮和别孕烯醇酮含量较空白对照组显著增高（P＜0.05）。结论钩吻素子具有抗焦虑作用,其作用机制可能与提高海马区神经甾体孕烯醇酮和别孕烯醇酮水平有关。     

钩吻根脂溶性化学成分的分离与鉴定

目的对钩吻根脂溶性部位的化学成分进行研究。方法通过乙醇回流提取、溶剂分步萃取得到钩吻根粗提物,利用硅胶柱、ODS柱、Sephadex LH-20、Toyopearl HW-40F等多种色谱柱进行分离纯化,利用NMR等现代波谱技术对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果分离得到10个化合物,分别鉴定为钩吻素子(koumine,1)、钩吻绿碱(gelsevirine,2)、胡蔓藤碱乙(humantenine,3)、钩吻内酰胺(gelsemamide,4)、12β-羟基-孕甾-4,16-二烯-3,20-二酮(12β-hydroxy-pregna-4,16-diene-3,20-dione,5)、正三十一烷醇(n-hentriacontyl alcohol,6)、十四碳酸甲酯(methyl myristate,7)、6,7-二甲氧基香豆素(6,7-dimethoxycoumarin,8)、3,4,5-三甲氧基苯甲醇(3,4,5-trimethoxybenzyl alcohol,9)、5-甲基间苯二酚(5-methylresorcinol,10)。结论化合物6-10为首次从胡蔓藤属中分离得到。     

钩吻中非生物碱不同组分体内、外抗肿瘤作用比较研究

目的:探讨钩吻非生物碱不同分离组分的体内、外抗肿瘤作用以及与毒性的关系。方法:采用四甲基偶氮唑盐法分析确定各组分对肿瘤细胞的体外增殖抑制作用,通过对小鼠进行体内急性毒性实验、对H22瘤的抑制作用及对免疫指标的影响实验,综合评价钩吻非生物碱各组分的抗肿瘤作用。结果:钩吻非生物碱成分体外活性高于生物碱成分,钩吻非生物碱组分2对小鼠肝癌H22生长具有明显的抑制作用,胸腺指数明显高于未用药荷瘤组,其它各组分对肿瘤生长无明显影响,毒性大的组分未显示出抗肿瘤作用。结论:钩吻非生物碱具有一定的抗肿瘤作用,对免疫功能有增强作用,其体内、外抗肿瘤作用与毒性无明显相关性。     

不同发酵天数赤芝钩吻的毒性及镇痛作用研究

目的 比较2批不同发酵天数钩吻的急性毒性及镇痛药效。方法 采用改良寇氏法测定发酵14天、21天钩吻半数致死量(LD₅₀),并获取2批不同发酵钩吻的最大安全给药剂量为药效学浓度。采用醋酸扭体法测定不同发酵钩吻对醋酸所致小鼠扭体反应疼痛阈值的影响,ELISA法检测各组小鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平。结果 发酵14、21天的赤芝钩吻的LD₅₀分别为10.91 g·kg^-1、15.4 g·kg^-1;2批发酵钩吻对醋酸扭体镇痛模型的镇痛率分别为74%、79%,发酵钩吻显著降低血清炎症因子含量,且批次之间无显著差异。结论 2批不同发酵天数赤芝钩吻毒性降低,并具有显著的镇痛作用,2批次之间镇痛药效无显著差异。     

钩吻素子和钩吻素甲的分离鉴定

钩吻为马钱科Loganiaceae植物断肠草（胡蔓藤）GelsemiumelegansBenth的根、叶[1]。其毒性大，以外用为主，能祛风、消肿、拔毒、杀虫和止痒[2]。近20年来，不少单位以口服钩吻粉或总碱来治疗胃癌、食道癌等。在镇痛方面也取得显著效果[3]。为了研究钩吻中多种生物碱，笔者用氯仿热提法[4]从福建长泰生长的约吻根中提取生物总碱，并用柱层析分离得到两种生物碱晶体,经光谱（IR、Ms）确定为已知生物碱钩吻素子（Koumine）和钩吻素甲（Gelsemine）。这两种生物碱是首次从福建长泰的钩吻中提取分离出来。1仪器：Kofler显微镜熔点测定仪，岛…     

钩吻中毒的应急检验方法研究与思考

目的 探讨钩吻中毒的应急检验方法。方法 选取导致2022年3月广东普宁市鸡矢藤煲汤中毒事件的涉案样品为研究对象,采用性状、显微、薄层色谱和液相色谱-质谱鉴别等检验方法鉴定致毒中草药。结果 样品外皮具深纵沟及横裂隙,截面具放射状纹理,含有石细胞和草酸钙簇晶,提示其为钩吻。涉案样品与钩吻对照药材及钩吻素子、钩吻素甲对照品在薄层色谱相应位置显相同颜色的斑点,并在液相色谱-质谱中检测到涉案样品含有钩吻素子和钩吻素甲。结论 本次中毒事件是由于误食混入鸡矢藤药材的钩吻而导致。基于长期从事有毒中草药中毒应急检验的经验,总结钩吻等有毒中草药中毒应急检验的常用方法,对有毒中草药监管和应急检验工作提出思考与建议,加强精准识别和快速筛查方法的研究等,为误用有毒中草药中毒应急检验提供参考,以期进一步避免钩吻等剧毒中草药中毒事件的发生。     

大孔吸附树脂分离纯化钩吻总生物碱的研究

目的:研究用大孔吸附树脂分离纯化钩吻总生物碱中主要成分的方法和工艺条件。方法:采用不同型号的HPD系列大孔吸附树脂对钩吻总生物碱进行提取纯化,以高效液相色谱法检测钩吻总生物碱中主要成分的峰面积为指标,考察最佳工艺和参数条件。结果:HPD-500、HPD-600、HPD-800型大孔吸附树脂对钩吻总生物碱提取效果好,并得到HPD-800的最佳工艺和参数条件。结论:采用HPD-800型大孔吸附树脂及不同浓度乙醇洗脱的方法,可用于钩吻总生物碱的提取纯化。     

榕产钩吻的生药学研究

目的研究榕产钩吻的生药学特征,建立其生药学鉴别方法与鉴别特征。方法采用植物形态鉴定、显微特征鉴定、理化性质鉴定等手段对榕产的钩吻进行生药学研究。结果榕产钩吻生药学鉴别特征主要有无毛、茎长、叶断面齐、淡黄色花漏斗状聚伞花序、味特异等性状特征,木质部宽广、含大量石细胞等显微特征,以及含有生物碱、紫外灯下呈现鲜亮的天蓝色荧光等理化性质特征,可与相近植物相区别。结论确立了榕产钩吻生药学鉴别方法与鉴别特征。     

常绿钩吻碱抑制人神经胶质瘤U251细胞增殖的体内外作用特征

常绿钩吻碱(sempervirine,SPV)是从钩吻中分离得到的一种育亨宾型生物碱,本研究探讨了常绿钩吻碱抑制人神经胶质瘤细胞体内外增殖的作用特征。以0~16μmol·L^-1不同浓度常绿钩吻碱处理人神经胶质瘤U251细胞24、48和72 h,分别用MTT法和集落形成实验检测细胞增殖,Hoechst细胞核染色和Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡,Western blot法检测PI3K、AKT、p-AKT、Bax、Bcl-2、caspase-3和cleaved caspase-3蛋白。采用体内裸鼠移植神经胶质瘤模型,观察常绿钩吻碱抗神经胶质瘤的体内作用,所有动物实验操作均严格遵守福建医科大学生物医学伦理委员会相关规定。结果显示,常绿钩吻碱在1~8μmol·L^-1能显著抑制U251细胞的增殖和集落形成,引起细胞核固缩,促进细胞凋亡,蛋白检测表明,其促进caspase-3的切割活化,下调Bcl-2/Bax值和PI3K蛋白的表达,抑制AKT的磷酸化;裸鼠移植瘤实验结果表明,剂量4和8 mg·kg^-1·day^-1常绿钩吻碱干预能抑制体内神经胶质瘤的生长,肿瘤重量分别减少了44.76%和61.26%。本研究在体内外水平表明,常绿钩吻碱能明显抑制神经胶质瘤的增殖,为其抗神经胶质瘤的研究开发奠定基础。     

闽产钩吻根总生物碱半数致死量的实验研究

目的 研究闽产钩吻根总生物碱对小鼠的半数致死量(LD50),为药理实验和临床安全合理用药提供依据.方法 将闽产钩吻根粉碎后用95％乙醇提取,减压下回收乙醇,加2％盐酸溶解后用氯仿萃取,浓氨水碱化水层,再用氯仿萃取,得到钩吻根总生物碱.根据预试验结果将40只小鼠分成4组,每组10只,按照5.5mg·kg-1、4.4mg·...