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相似文献
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1.
目的 探讨树突状细胞 (DC)负载白血病细胞株U937冻融抗原 ,体外诱导细胞毒性T细胞 (CTL) ,使其对U937细胞产生特异性杀伤作用。方法 应用基因重组人白介素 4 (rhIL 4 )、基因重组人粒 /单细胞集落刺激因(rhGM CSF)联合培养体系自正常人骨髓单个核细胞诱导产生DC ,使其负载U937冻融抗原 ,致敏T淋巴细胞 ,产生CTL。观察负载U937冻融抗原的DC对所激发的T淋巴细胞表型及功能的影响及CTL对U937细胞的特异性杀伤活性。结果 负载U937冻融抗原后DC的CD1a表达率较培养前明显增高 (P <0 .0 1) ,CD86、CD11c、HLA DR表达也较培养前明显增高 (P <0 .0 1) ,而CD83、CD14与培养前相比无明显变化 (P >0 .0 5 )。且负载U937冻融抗原DC诱导的CTL中 ,CD3+ CD8+ T细胞比例较诱导前明显增高 (P <0 .0 1)。U937冻融抗原负载DC诱导CTL对U937细胞及K5 6 2细胞的杀伤率分别为 (6 6 .96± 6 .2 1) %和 (9.81± 4 .4 5 ) % ,两者有极显著性差异 (P <0 .0 0 1)。结论 经rhGM CSF、rhIL 4培养产生的DC为CD14 -CD1a+ 的DC ,能诱导CTL产生明显的特异性杀伤作用 ;负载U937冻融抗原DC诱导的CTL中的CD3+ CD8+ T细胞比例明显增高 ,提示CD8+ T细胞在抗肿瘤免疫中具有极其重要的作用。  相似文献   

2.
为建立一种有效诱导及克隆人类白细胞抗原(HLA)-抗原肽复合物特异性细胞毒性T细胞(CTL)的方法.用EB病毒转化的B淋巴母样细胞系细胞作为刺激细胞,采用长期混合淋巴细胞培养法诱导自身外周血T细胞库中抗原肽-HLA复合物特异性CTL增殖、分化,并用有限稀释法对之进行克隆.通过细胞毒实验证实获得的CD3+、CD8+T细胞克隆具有高度抗原特异性并受某些HLA型别的限制.  相似文献   

3.
赵素斌  李磊  赵国栋  付泽娴 《医学争鸣》2008,29(23):2170-2173
目的:研究胃癌患者外周血中CD4+CD25+T细胞(Treg细胞)对免疫效应细胞以及树突状抗原提呈细胞的抑制调节作用.方法:应用流式细胞术(FACS)测定实验组和对照组患者术前外周血中T淋巴细胞及Treg细胞含量的改变;对外周血中树突状细胞(DC细胞)进行体外培养活化,检测其表面分子CD80和CD83的表达情况;实验组利用免疫磁珠法在培养前去除Treg细胞,以胃癌BGC-823细胞作为靶细胞,效靶比=20:1,应用CCK-8试剂盒观察不同实验组激活的CTL的细胞毒杀伤反应的差异.结果:诱导辅助性T细胞(CD4+T)总数较健康对照组降低(t=2.847,P<0.01),Treg细胞含量高于健康对照组(t=7.431,P<0.01);表面分子CD80和CD83在胃癌患者外周血 DC表面表达较对照组F降(t=16.90,21.43,P<0.01);实验组CTL对胃癌细胞杀伤效率高于对照组(t=2.98,P<0.01).结论:Treg细胞对抑制荷瘤机体内自身抗肿瘤反应有密切关系.  相似文献   

4.
①目的 探讨具有较强免疫活性树突状细胞(DC)的制备及其鉴定。②方法 采用3M KCL提取法和弱酸洗脱法获得肺癌细胞GLC-82的可溶性抗原多肽,并定量抗原多肽浓度;用GLC-82细胞抗原多肽;中击致敏,从人外周血PBMC中用GM—CSF、IL-4和TNF—α体外诱导扩增并经鉴定的DC;利用负载GLC-82细胞抗原多肽的DC,刺激同种异体外周血T淋巴细胞活化增殖,诱导产生具有识别肺癌细胞抗原的特异性CTL;③结果 人体外周血PBMC体外经7天诱导出的DC,具有典型的树突状细胞特性,经GLC-82抗原致敏的DC诱导同种异体T淋巴细胞活化增殖产生CTL,高表达CD3^+、CD4^+、CD8^+,且随培养时间延长,CD3^+和CD8^+ T 细胞百分率增加,CD4^+/CD8^+比例下降,动态观察CTL增殖倍数迅速增加;④结论 利用3Mkcl单盐提取法制备肿瘤可溶性抗原,并以终浓度50ng,/mL冲击致敏,从外周血PBMC中分离、扩增、活化的DC,使其负载肿瘤抗原,体外诱导能产生特异性CTL。  相似文献   

5.
目的:携带癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)基因的重组人腺相关病毒(reconstructive human ade-no-association virus,rh-AAV)感染树突状细胞(dendritic cell,DC)诱导获得抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(cyto-toxic lymphocyte,CTL),体外检测其对CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞的杀伤效果。方法:分离供者外周血单个核细胞,以细胞因子白介素-4(interleukin-4,IL-4)、粒细胞-巨噬细胞克隆刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimu-lating factor,GM-CSF)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)诱导培养获得DC,细胞因子白介素-2(interleukin-2,IL-2),刺激培养获得T淋巴细胞。含CEA基因的rh-AAV感染培养DC,诱导成熟后将DC和T细胞混合培养获得CTL细胞。流式分选MCF-7和MA-MDB-231细胞系中CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞,MTT法检测CTL细胞对CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞的杀伤效果。结果:MCF-7和MDA-MB-231中CD44+/CD24-/low亚群比例分别为5.1%和76.3%。CEA基因转染DC诱导的CTL细胞对表达CEA抗原的MCF-7杀伤率为46.5%±15.0%,与未转染组相比,差异有统计学意义(P=0.009);对MCF-7细胞中分选的CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞的杀伤率为44.7%±28.2%,明显高于未转染组。对非乳腺癌干细胞杀伤率为50.6%±22.2%,与未转染组相比,差异有统计学意义(P=0.05)。在不表达CEA基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞,CEA转染诱导的CTL细胞对未分选细胞、分选的CD44+/CD24-/low亚群和非干细胞亚群的杀伤率与未转染的对照组相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:携带CEA基因rh-AAV转染DC诱导产生的抗原特异性CTL细胞可杀伤表达CEA的乳腺癌细胞,对CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞也具有一定的杀伤活性,提示免疫治疗可能是治疗乳腺癌干细胞潜在有效的手段。  相似文献   

6.
目的 探讨以腺相关病毒为载体,乳腺癌抗原BA46基因转染树突状细胞(DC)诱导特异细胞免疫的可行性.方法 取健康人外周血,采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(DC前体细胞),将细胞分为基冈转染组及对照组,基因转染组以重组腺相关病毒rAAV/BA46/Neo转染,对照组以293细胞裂解物冲击.两组细胞均采用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导DC前体细胞成熟.第7天,收集DC,取该DC与T细胞按比例混合,诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL),用3H-TdR掺入法检测DC刺激自体淋巴细胞增殖能力;以流式细胞仪分析CTL细胞中IFN-γ、IL-4、CD4、CD8、CD25、CD69的表达情况,同时取BA46阳性的乳腺癌细胞株Hs578T为靶细胞,采用51Cr释放法检测杀伤效率.结果 BA46基凶转染组DC具备较强的刺激淋巴细胞增殖的能力,所诱导的CTL高表达CD8、CD69和IFN-γ,对BA46阳性的靶细胞有较强的杀伤作用,该杀伤具有BA46抗原特异性和MHC限制性.结论 乳腺癌BA46基因转染DC成功诱导特异的细胞免疫.为基因修饰细胞治疗乳腺癌打下实验室基础.  相似文献   

7.
[目的]研究树突状细胞(DC)在体外诱导抗前列腺癌的免疫作用.[方法]自前列腺癌患者外周血中分离CD34 干细胞,加入细胞因子(rhGM-CSF,rhTNF-α及rhIL-4)培养;以人前列腺癌细胞系LNCap细胞的肿瘤相关抗原(TAA)激活DC;DC诱导自体T淋巴细胞增殖、分化为细胞毒素性T细胞(CTL);检测CTL对LNCap细胞、HepG2细胞、LOVO细胞及HOS-8603细胞的细胞毒作用.[结果]前列腺癌患者外周血DC能够诱导自体T淋巴细胞增殖分化为CTL,该CTL对LNCap细胞有强大的杀伤力(杀伤率为89%±10%,),对HepG2细胞,LOVO细胞及HOS-8603细胞则无明显的细胞毒作用(杀伤率分别为10%±3%,8%±6%,6%±4%).[结论]前列腺癌患者外周血DC体外能够诱导高效而特异抗前列腺癌免疫.提示DC可能在治疗前列腺癌及预防前列腺癌术后复发和转移中发挥重要作用.  相似文献   

8.
①目的 探讨CD4+与CD25+调节性T细胞(Treg)在直肠癌过继免疫治疗中对免疫杀伤细胞的负性调节作用.②方法 利用流式细胞仪分别检测15例直肠癌患者和健康志愿者外周血中CD4+与CD25+调节性T细胞的含量;同时观察各实验组CTL对肿瘤细胞的杀伤效应.③结果 直肠癌患者外周血中CD4+与CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞总数的(11.12±0.57)%,显著高于健康对照组的(8.77±0.66)%(t=2.687,P=0.012);去除Tmg细胞后诱导产生的抗原特异性CTL对靶细胞的杀伤效率为(33.74±4.42)%,显著高于未去除Treg细胞的对照组CTL的杀伤效率(17.39±2.54)%(t=3.206,P=0.0034).④结论 直肠癌患者外周血中调节性T细胞含量明显增高,并且时肿瘤抗原诱导的CTL的免疫杀伤功能具有明显抑制作用.  相似文献   

9.
肿瘤抗原致敏DC诱导T淋巴细胞增殖及杀伤效率   总被引:1,自引:0,他引:1  
赵增仁  李勇  田延峰  张丽静  张峰  李芳 《医学争鸣》2008,29(12):1088-1091
目的:探讨胃癌细胞抗原致敏的树突状细胞(DC)诱导T淋巴细胞(T lymphocyte)增殖和杀伤胃癌细胞的效率.方法: 应用淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞,经重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素4(rhlL-4)和肿瘤坏死因子α(TNF-α),体外诱导培养获取成熟DC,流式细胞术检测DC表面CD83,CD80,CD86及HLA-DR表型;同时经重组人白细胞介素2(rhlL-2)诱导扩增T淋巴细胞,检测CD3,CD4,CD8及CD56表型.以人胃癌OCUM-2MD3细胞株冻融抗原致敏DC,然后刺激T淋巴细胞,得到肿瘤抗原特异的细胞毒性T淋巴细胞(CTL).MTT法检测致敏DC对T淋巴细胞增殖的影响和致敏DC活化的特异性CTL对胃癌细胞的体外杀伤效率.结果: 体外诱导人外周血单个核细胞,可获得大量形态典型、具备强烈刺激增殖能力、且高表达CD80,CD86的DC及高表达CD3的T淋巴细胞;MTT法检测结果发现胃癌细胞抗原致敏DC组刺激T淋巴细胞增殖指数显著高于未致敏DC组和对照组(P<0.01);流式细胞术检测结果发现胃癌细胞抗原致敏DC主要刺激T淋巴细胞增殖为CD8 的CTL(60.58±8.43)%,经胃癌细胞抗原致敏DC刺激后,对胃癌细胞的杀伤效应显著增加,致敏DC组对胃癌细胞杀伤活性(71.57±4.83)%,较未致敏DC组(12.53±1.62)%和单纯T淋巴细胞组(10.45±1.40)%作用更为显著(P<0.01),而且随着效靶比增加,其杀伤效应亦显著增加.结论: 胃癌细胞抗原致敏DC可显著刺激T淋巴细胞增殖为CD8 CTL,进而发挥其高效杀伤胃癌细胞的作用.  相似文献   

10.
目的 研究体外负载K562细胞冻融抗原的树突状细胞(DC)诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的特异性杀伤作用。方法 联合应用细胞因子从外周血单个核细胞(PBMC)诱导培养出DC,在体外负载K562细胞冻融抗原。采用乳酸脱氢酶释放法,对比K562冻融抗原致敏DC组、未致敏DC组、淋巴细胞组、前列腺癌PC3冻融抗原致敏DC组分别激活的CTL对K562细胞的杀伤作用。结果 培养出具有典型特征的DC;在效靶比为10:1及20:1时。K562冻融抗原致敏DC组诱导的CTL对K562细胞的杀伤率分别为55.9%土22.0%、90.2%+24.8%,均高于其他3组(p,0.05)。结论 K562细胞冻融抗原致敏DC可诱导激活CTL,具有明显杀伤K562细胞作用。并具有特异性。  相似文献   

11.
目的 比较两种抗原负载方式对树突状细胞(DCs)疫苗的影响.方法 抽取HLA表型为A11的健康志愿者外周血,分离单核细胞,体外培养.通过反复冻融LoVo细胞,提取肿瘤细胞裂解物或者使用含CEA片断的重组腺相关病毒转染未成熟DCs,诱导特异性细胞毒性T细胞.检测体外培养的DCs和CTL活性,并使用MTT法检测两组CTL对LoVo细胞的杀伤作用.结果 两种方式均可培养的成熟DCs,诱导的CTL细胞分泌IFN-γ有所增加;转染后DCs诱导特异性CTL可有效识别并杀伤HLA-A11阳性的LoVo细胞,腺相关病毒提呈抗原制备的DCs疫苗对LoVo细胞的杀伤作用明显高于肿瘤细胞裂解物的抗原负载方式.结论 两种抗原提呈方式均可培养出成熟的DCs,不明显改变DCs表型和刺激淋巴细胞增殖、分化功能,并可诱导自体CTL增殖.使用腺相关病毒转染DCs的方式明显优于肿瘤细胞裂解物的抗原负载方式.  相似文献   

12.
目的 探讨卵巢癌患者外周血中CD4+T细胞亚群:辅助T细胞(Th,包括Th1、Th2、Th17)及调节性T淋巴细胞(Treg)表达、平衡关系的变化,以及在卵巢癌发病机制中的作用.方法 流式细胞术检测30例卵巢癌疾病组及20例健康对照组外周血中Thl、Th2、Thl7、Treg表达占CD4+T细胞的百分率,并计算Th1/Th2、Th17/Treg的比值.结果 卵巢癌患者外周血中Th2、Th17及Treg亚群占CD4+T细胞的百分率明显高于健康对照组(P<0.05),而Th1百分率低于健康对照组(P<0.05),各亚群变化与临床分期相关,但与组织类型及细胞分化无关(P>0.05).卵巢癌组Th1/Th2比值降低,与对照组比较有统计学意义(P<0.05),卵巢癌患者存在Th2方向极化;卵巢癌组Treg/Th17比值升高,与对照组比较有统计学意义(P<0.05).结论 卵巢癌患者外周血中存在CD4+细胞亚群表达异常,存在Th1/Th2、Treg/Th17比值失衡,为卵巢癌临床免疫治疗提供理论支持.  相似文献   

13.
目的:比较验证重组腺相关病毒负载PSA基因转染方式与LNCaP细胞裂解物诱导方式对产生树突状细胞(DCs)疫苗的的影响.方法:抽取HLA表型为A2的健康志愿者外周血,分离单核细胞,体外培养.通过反复冻融LNCaP细胞、提取肿瘤细胞裂解物以及使用含PSA片段的重组腺相关病毒转染未成熟DCs,诱导特异性细胞毒性T细胞(CTL).检测体外培养的DCs和CTL活性,并使用MTT法检测两组CTL对LNCaP细胞的杀伤作用,同时使用腺相关病毒转染组诱导的CTL对LNCaP和DU145两种前列腺癌细胞进行杀伤实验检测.结果:两种方式均可培养成熟的DCs,诱导激活CTL并分泌IFN-γ,而腺相关病毒转染的DCs成熟度和CTL诱导率均高于细胞裂解物组;腺相关病毒转染组诱导的CTL对LNCaP细胞的杀伤率显著高于细胞裂解物组诱导的CTL;腺相关病毒转染组诱导的CTL对LNCaP细胞有特异性杀伤作用.结论:两种抗原递呈方式均可培养出成熟的DCs,并可诱导自体CTL增殖;而使用重组腺相关病毒转染PSA至DCs的方式明显优于肿瘤细胞裂解物的抗原负载方式,具有高效特异性.  相似文献   

14.
目的 从肺癌患者外周血诱导扩增的树突状细胞。观察其形态、表型、抗原递呈功能和对LAK细胞抗肿瘤作用的影响。方法 肺癌患者外周血单个核细胞经GM-CSF、IL-4诱导扩增成为树突状细胞,FACS检测其表型,MLR测定其抗原递呈能力及对LAK细胞增殖的影响。TAA冲击的DC与LAK细胞混合培养诱导的CTL,用MTT法测定其细胞毒,结果 肺癌患乾外周血诱导的树突状细胞具有典型的形态、表型特征和激发MLR的能力,TAA冲击的DC能显著地提高LAK细胞的增殖能力和增强对靶抗原细胞的细胞毒效应。结论 从肺癌患者外周血中可获得典型的树突状细胞,经TAA冲击的DC能从LAK细胞中诱导出特异性CTL细胞,以该DC为基础的疫苗联合LAK细胞,可能在肺癌生物治疗中发挥重要的作用。  相似文献   

15.
目的:检测前列腺癌患者及对照者外周血单个核细胞前列腺特异性抗原(PSA)mRNA表达,并探讨其临床意义。方法:选择39例前列腺癌患者,12例健康体检者作为对照,取5 mL静脉血,肝素抗凝,Ficoll密度梯度离心分离外周血单个核细胞,RT-PCR检测PSA mRNA表达。结果:①39例前列腺癌患者外周血单个核细胞PSA mRNA表达阳性检出率66.7%(26/39),其中血清PSA>20.0 μg·L-1者23例,PSA mRNA表达阳性检出率87.9%(20/23);血清PSA≤20.0 μg·L-1者16例,PSA mRNA表达阳性检出率37.5%(6/16)。对照组未见阳性表达。②16例血清PSA≤20.0 μg·L-1的前列腺癌患者PSA mRNA阳性表达的Gleason评分为:1~4分0/3,5~7分1/8,8~10分5/5,6例阳性者均为中、低分化癌。 结论:外周血单个核细胞PSA mRNA的检测在血清PSA>20.0 μg·L-1的前列腺癌患者中具有较高的敏感度,是一种可靠的检测方法。血清PSA≤20.0 μg·L-1的前列腺癌患者外周血单个核细胞PSA mRNA的检测可以预示微转移的发生。  相似文献   

16.
目的:了解携带不同HBV抗原基因片段的重组腺相关病毒(rAAV‐HBV‐S、C、E、X)转染慢性乙型肝炎患者来源的树突状细胞(DC)诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的效应。方法采用携带不同HBV抗原基因片段的rAAV‐HBV‐S、C、E、X转染慢性乙型肝炎患者外周血中分离出的单核细胞,并在GM‐CSF、IL‐4和TNF‐α作用下继续培养7 d获得成熟的DC。通过观察DC的状态和流式细胞仪(FACS)检测各段 HBV转染后DC分化抗原(CD)的表达,评价其成熟与功能。将同一个体的DC与T细胞混合培养制备CTL ,通过四甲基偶氮唑盐(MTS)细胞杀伤实验研究被激活的CTL对HBV感染的靶细胞HepG2.2.15特异性的细胞毒作用。结果不同 HBV 抗原基因 rAAV‐HBV‐S、C、E、X 转染DC后 CD14、CD80、CD83、CD86的表型表达中, CD80、CD83差异有统计学意义(P<0.05);rAAV/HBV‐X转染的DC其CD80表达最高,rAAV/HBV‐S转染的DC其CD83表达最高。转染不同 HBV 抗原基因片段 rAAV(S、C、E、X)的 DC 诱导的 CTL 对 MHC‐Ⅰ类抗原阳性且有 HBV 的靶细胞(HepG2.2.15)的特异性杀伤效率显著高于对无 HBV的靶细胞(HepG2)的非特异性杀伤效应(P<0.01),但不同rAAV‐HBV组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 rAAV‐HBV‐S、C、E、X转染DC均可诱导CTL引起M HC‐Ⅰ依赖的特异性细胞毒效应。  相似文献   

17.
目的:探讨寻树突状态细胞(DC)体外培养的理想来源。方法:通过贴壁的方法分离脐带血、造血动员后的外周血及正常人外周血中DC的前体细胞,体外采用细胞因子诱导,并对其进行形态学的观察和细胞表型检测;同时比较了不同来源的DC的增殖、分泌IL-12的能力及激发同种异体T细胞和脐带血幼雅T细胞(naive Tcells)的作用,结果:经过造血动员后的外周血产生的DC数量和纯度均较高,而且能经体外细胞因子诱导为功能性DC。结论:造血动员后的外周血是较理想的DC来源。  相似文献   

18.
目的探讨2型重组腺相关病毒(rAAV2)能否有效转染重型β-地中海贫血患者造血细胞,通过体外途径基因治疗地中海贫血。方法 6只BALB/c裸小鼠分为转染组(n=4)和未转染组(n=2),经X射线照射后,分别移植入经rAAV2β-珠蛋白病毒转染(MOI=50)或未转染的β41-42/β654杂合子型重型β-地中海贫血流产胎儿造血细胞,转染后第28天和第70天分别处死rAAV2转染小鼠(n=2)和未转染受体小鼠(n=1)。采用RT-PCR、等位基因特异性PCR(ASPCR)法检测rAAV2介导的人β-珠蛋白基因在小鼠骨髓中的表达,并以高压液相色谱法量化分析受体小鼠外周血中人β-珠蛋白肽链的水平。结果①RT-PCR于所有受体小鼠样本中均可检测到人β-actin和人β-珠蛋白基因的表达。②ASPCR检测中,β41-42突变基因稳定表达于所有受体小鼠,β654突变基因仅在移植后第70天受体小鼠样本中被检测到;移植后第28天,rAAV2转染及未转染小鼠体内均可检测到主要来自于β654突变基因的正常β-珠蛋白基因表达;但至移植后第70天,仅rAAV2转染小鼠骨髓样本中仍可检测到rAAV2-β-globin载体介导的正常β-...  相似文献   

19.
目的探讨肿瘤细胞RNA和趋化因子CXCL10基因共同修饰的树突状细胞(DC)瘤苗对小鼠抗肿瘤免疫反应的诱导作用。方法将小鼠RM 1前列腺癌细胞RNA加载小鼠骨髓来源的DC后,通过脂质体转染法将CXCL10基因导入DC,制备前列腺癌瘤苗;体内外实验检测该瘤苗诱导的抗前列腺癌免疫治疗作用。结果转染CXCL10基因的DC上清对淋巴细胞有较强的趋化作用;DC瘤苗所诱导的特异性效应细胞(CTL)对RM 1细胞具有特异性杀伤作用;经DC瘤苗治疗的荷瘤小鼠模型瘤体生长减慢,存活期延长;该瘤苗还具有明显的免疫保护作用。结论构建的前列腺癌DC瘤苗能够有效诱导抗肿瘤免疫反应和免疫保护功能。  相似文献   

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