传统培养法和PCR法在分枝杆菌菌种鉴定中的对比研究

目的:对结核分枝杆菌复合群菌种鉴定的传统方法与PCR法进行对比研究,为临床应用提供科学依据。方法:将临床确诊结核病患者的317份痰标本做罗氏培养,分别用传统培养法和PCR法进行鉴别菌种,随机抽出一部分进行测序(金标准),用金标进一步鉴定两种结果的可靠性。结果:传统培养法敏感度、特异度、符合率分别为55.68%、58.33%、54.00%,而PCR法检测的敏感度、特异度、符合率分别为98.86%、50.00%、93.00%,明显优于传统培养法,两者检测的总符合率为53.00%,检测结果间差异有显著性(x~2=918.64,P=0.00)。结论:传统培养法检测分支杆菌菌种的结果不符合临床检验要求,且所需时间长,而PCR法方便、快速,可以较准确地确定分支杆菌菌种。     

消毒灭菌物品的效果监测与分析

消毒灭菌物品的效果监测与分析四川省人民医院（６１００７２）刘象伟物品的消毒灭菌质量，直接涉及病人的生命安危，如果在医疗护理过程中，使用消毒灭菌不彻底的物品，将会造成严重的医院内感染。因此加强消毒灭菌物品的效果监测十分重要，也是为减少或防止院内感染的一...     

应用PCR技术快速鉴定结核分枝杆菌复合群菌种

目的 建立快速鉴定结核分枝杆菌复合群菌种的方法.方法 将7对结核分枝杆菌复合群各菌种特异性引物(Mtbc1-7)进行聚合酶链反应(PCR)扩增,通过对扩增产物的不同系带型进行分析,对已知标准株和96株临床分离株进行菌种鉴定.结果 用3株结核分枝杆菌复合群(MTBC)标准株,9株非分枝杆菌标准株以及27株非结核分枝杆菌的分枝杆菌(MOTT)对7对结核分枝杆菌复合群各菌种特异性引物进行特异性鉴定,结果证明引物Mtbc1能鉴定出分枝杆菌和非分枝杆菌;引物Mtbc2能鉴定出MOTT和MTBC;引物Mtbc3能鉴定出田鼠分枝杆菌;引物Mtbc4能从MTBC中识别出牛分枝杆菌和卡介苗;引物Mtbc5能鉴定出非洲分枝杆菌Ⅱ型和结核分枝杆菌;引物Mtbc6和引物Mtbc4结合能鉴定出卡介苗;引物Mtbc7和引物Mtbc5联合能鉴定出canettii分枝杆菌.96株临床分离株经7对引物扩增,扩增结果显示MOTT 20株,牛分枝杆菌1株,卡介苗1株,canettii分枝杆菌3株,田鼠分枝杆菌3株,非洲分枝杆菌Ⅰ型3株,caprae分枝杆菌1株,结核分枝杆菌或非洲分枝杆菌Ⅱ型64株.结论 应用PCR技术鉴定结核分枝杆菌复合群菌种结果准确可靠,且具有简便和快速等优点,有较大的分子流行病学应用价值.     

浅谈供应室消毒灭菌物品监测管理

供应室是医院的一个组成部分,它是向全院临床和各科提供各种无菌器材、敷料和其他无菌物品保障的重要科室,并负责各科医疗用品的回收、清洁、消毒、灭菌、保管、发放等工作,是无菌物品的供应中心,工作质量直接影响到医疗、护理质量.消毒灭菌效果监测是供应室工作的核心,是保证消毒灭菌质量、提高供应室科学化管理、有效杜绝医院感染发生的重要环节.我们于2006-2008年对两台预真空脉动灭菌器的各类灭菌物品进行消毒灭菌效果监测,取得了良好效果,介绍如下:     

供应室物品消毒灭菌效果的监测

医院供应室是向全院临床科室供应各种无菌器械、手术敷料和医疗用品的重要科室,担当着医疗用品的回收、清洗、消毒、灭菌、发放等项工作,其中消毒灭菌是供应室工作的中心环节,灭菌质量的好坏直接影响全院各项工作的正常运转.如果不注意灭菌质量的监测,使用不合格的消毒包,则会造成不良后果,还会引起医源性感染,所以做好对消毒灭菌物品的监测显得尤为重要.     

16s～23s rDNA间隔区序列RFLP分析在分枝杆菌分类鉴定中的应用

目的：通过对分枝杆菌１６ｓ～２３ｓｒＤＮＡ间隔区序列ＤＮＡ ＰＣＲ扩增和限制性酶切分析，评价其在分枝杆菌分类鉴定中的价值。方法：对２１种分枝杆菌和９种亲缘关系较远的非分枝杆菌和４种亲缘关系较近的非分枝杆菌的１６ｓ～２３ｓ ｒＤＮＡ间隔区序列ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增并对扩增产物进行限制性内切酶ＨａｅШ．Ｍｓｐ ｉ消化反应，分析不同菌种扩增 段及其限制性片段长度多态性的差异。结果：ＰＣＲ扩增结果显示：分枝     

基因芯片快速鉴定分枝杆菌菌种方法的建立

目的：利用基因芯片技术,建立一种能快速、准确鉴定分枝杆菌菌种的方法,并验证其临床应用价值。方法根据23种分枝杆菌基因序列设计特异性探针并制作基因芯片,通过PCR‐反向点杂交鉴定23种分枝杆菌标准菌株、9种非分枝杆菌和103株分枝杆菌临床分离株的菌种。结果应用基因芯片技术检测23种分枝杆菌标准菌株和9种非分枝杆菌菌株,特异性为100％。103株临床分离株经鉴定87株为结核杆菌复合群（MTC）;16株为非结核分枝杆菌（NTM）,其中脓肿分枝杆菌5株、胞内分枝杆菌3株、鸟分枝杆菌3株、偶发分枝杆菌2株,以及堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌、戈登分枝杆菌各1株。103株临床分离株鉴定结果与测序法完全一致,该方法最低检出限为103copy／mL。结论采用基因芯片技术能快速鉴定分枝杆菌菌种,并区分MTC和NTM,具有简便快速及准确性、特异性、灵敏度高的优点。     

PCR方法鉴定结核分枝杆菌临床分离株

目的:用3对引物PCR扩增的方法对结核分枝杆菌临床分离株进行菌种鉴定.方法:将3对特征性的结核分枝杆菌标记基因:MPT40基因、α抗原基因和IS6100插入序列,分别放入PCR体系中,在各自的退火温度下进行PCR扩增,通过对扩增产物的不同带型进行分析,对结核分枝杆菌临床分离株进行菌种鉴定.结果:用3对引物PCR扩增的方法可将各种类型的结核分枝杆菌以及结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌鉴别开.结论:3对引物PCR扩增的方法是一种有效的结核分枝杆菌菌种鉴定的方法,可用于结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌以及各种类型的结核分枝杆菌的区分.     

谈供应室消毒灭菌物品监测管理的做法

供应室是向全院临床科室供应各种无菌器械，手术敷料和医疗用品的重要科室，并负责各科医疗用品的回收、清洗、消毒、灭菌、保管、发放等工作。其中消毒灭菌的效果监测是供应室工作的核心，是预防和降低医院感染发生的重要环节。我室自2002年由下排气高压蒸气灭菌器更换为手控脉动真空压力灭菌器以来，取得良好效果，介绍如下。     

Identification of Streptococcus species and Haemophilus influenzae by direct sequencing of PCR products from 16S-23SrDNA intergenic spacer regions

目的：利用16S-23SrRNA间区的特征建立一种简单、快速的细菌分类方法。方法：以化脓性链球菌16SrRNA的3'端和23SrRNA的5'端的保守区中合成3对引物,PCR扩增16S-23SrDNAISRs,纯化后直接测序,在GenBank上查找对应细菌的ISRs序列。用DNAMAN软件进行系统进货分析。结果：链球菌属为单拷贝16S-23SrRNAISRs片段,编码1个tRNA^Ala基因。流感嗜血杆菌各生物型出现2个大小相似的ISRs片段。与GenBank上的资料比较,7株链球菌归属5个种,流感嗜血杆菌均为b型。结论：ISRs作为细菌分类新的目标基因具有属、种、型和株特异性与灵敏性。     

PCR-SSCP快速检测耐多药结核分枝杆菌

目的:了解本地区结核病耐药基因突变情况,探讨PCR-SSCP作为新的分子药敏试验方法在临床的应用价值。方法:通过提取耐INH、RFP、SM的肺结核患者痰中结核分枝杆菌DNA,进行PCR-SSCP分析,检测结核分枝杆菌rpoB、katG、rpsL基因是否存在突变,并与传统L-J药敏实验对照。结果:30株耐多药株中,耐RPF、INH、SM基因突变阳性率为90%(27/30)、63%(19/30)、53%(16/30)。3个基因联合突变共8株(26.7%),2个基因联合突变共18株(60%),即26株(86.7%)。单基因突变共2株,2株无基因突变。结论:通过PCR-SSCP方法可检测出绝大部分耐多药结核病的耐药基因,rpoB、katG、rpsL基因突变与本地区结核杆菌对RFP、INH、SM耐药性有关。与传统L-J药敏实验对比,PCR-SSCP是一种敏感、快速的指导临床用药的先进检测方法。     

基层卫生院消毒供应管理现状与改进方案

目的了解基层卫生院消毒供应管理现状,分析存在的问题,提出持续改进方案。方法按照消毒供应室管理规范,对全县21家基层卫生院进行调查,并综合分析其环境管理、人员管理、无菌包管理及消毒灭菌监测等环节存在的问题,提出改进方案。结果消毒供应工作存在领导对其重要性认识不足、无独立科室、无专业人员、无菌物品管理质量不合格、医务人员缺乏医院感染相关知识等不安全医疗隐患。结论对基层卫生院的消毒供应质量管理刻不容缓,只有这样才能有效控制医院感染的发生和传播,保证医疗安全。     

补体C3基因敲除小鼠基因型鉴定的PCR条件优化

目的对补体C3基因敲除小鼠基因型鉴定的PCR反应体系及扩增程序进行优化,检测PCR优化体系的适用性和灵敏性。方法通过改进引物设计、改变PCR反应过程中Mg2＋浓度、引物浓度、退火温度、模板DNA浓度及反应循环次数,分析比较PCR扩增效果。结果优化后的补体C3基因敲除小鼠基因型鉴定的PCR反应体系中,Mg2＋浓度在2-4mmol/L,引物浓度在0.025-0.4μmol/L,循环次数在30-45次之间均能扩增得到清晰均一的特异性条带;同时,引物退火温度在55.5℃-69.6℃范围内均适用;优化后PCR体系能够检测的最低DNA浓度为1.41ng/μl,即模板DNA在反应体系中的总量为约2.82ng.结论已经建立的优化后的PCR基因扩增体系特异性高且稳定可靠。     

慢性乙型肝炎患者病毒复制与肝纤维化五项联合检测的临床应用

目的探讨慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒(HBV)DNA复制与肝纤维化五项指标:透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原N端肽(PⅢPN)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、层粘连蛋白(LN)、甘胆酸(CG)联合检测的临床意义。方法选取2018年7月至2019年9月在汉川市人民医院确诊的慢性乙型肝炎患者109例为研究对象,选取40例健康体检者为对照组,按HBV DNA的载量,将研究对象分为低载量组(104copy/mL)39例,中载量组[(104～106)copy/mL]33例,高载量组(106copy/mL)37例,对照组(500 copy/mL)40例。分别检测HBV DNA和肝纤维化五项,采用SPSS 19.0统计学软件对数据进行统计分析。结果低载量组和中载量组肝纤五项检测结果与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05);高载量组肝纤五项检测结果与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。随着HBV DNA载量的增加,肝纤五项各检测指标的数值也在增加。肝纤五项(HA、PⅢPN、CⅣ、LN、CG)的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.556、0.763、0.742、0.420、0.695,其中PⅢPN的AUC最大,表明PⅢPN比其他指标对肝脏疾病的诊断准确率最高;LN的AUC最小,0.5,表明其单独诊断的准确率低。结论 HBV DNA载量与血清肝纤维化五项指标联合检测是慢性乙型肝炎患者病情监测的一个良好指标,临床应及时关注慢性乙型肝炎患者病毒复制与肝纤维化水平,延缓肝硬化的发生。     

利用荧光定量RT-PCR和PCR方法检测结核分枝杆菌复合群

目的 建立一种新的检测结核分枝杆菌复合群的荧光定量试验方法 （R/P分析）,探讨R/P分析检测临床标本中结核分枝杆菌复合群的应用价值.方法 根据结核分枝杆菌复合群基因保守序列设计引物和探针构建质粒标准品.运用R/P分析检测54例确诊结核病人临床样本,检测的结果 同时与培养法、荧光定量PCR法进行比较.结果 不同临床标本用R/P分析诊断结核病,其敏感性高于荧光定量PCR法和培养法,阳性检出率分别为96.3%、83.3%和55.6%.结论 R/P方法 是一种快速、特异的直接检测方法,它可以区分结核分枝杆菌复合群的死菌与活菌,因此可以更好的指导医生进行治疗,更准确地做出公共卫生决策.     

LC-MS/MS法检查中药制剂及保健食品中非法添加的16种镇静催眠药物

目的:建立准确、灵敏的LC-MS/MS方法甄别中药制剂及保健食品中可能添加的16种化学镇静催眠药物,以打击中药制剂及保健食品中非法添加化学药物现象。方法和结果:采用Waters Sunfire C18色谱柱,梯度洗脱:流动相A为20mmol/L醋酸铵溶液,流动相B为甲醇,检测波长为230 nm,流速为1 mL/min(分流比为4∶1)。选择正负离子全扫描方式检测临床常用的16种镇静催眠药物。利用质谱解析软件研究上述药物的质谱裂解规律,通过比较样品峰与对照品峰的一级质谱、二级质谱质荷比,确定样品中是否掺杂了化学药物。LC-MS/MS方法测定上述化学物质的最小检出量为1~40 ng。结论:该方法简便、快捷,灵敏度、准确性均可满足定性检查的要求。     

微性状鉴别法鉴别中药红花及其掺伪品

目的 对中药材市场中红花及其掺伪品进行鉴别.方法 采用微性状鉴定法对红花及其掺伪品进行观察鉴别.结果 红花与其伪品、掺伪品存在明显区别,红花花冠颜色和微性状特征可确定是否为正品;花丝与花药颜色及水浸后的花冠颜色可区别是否提取有效成分;红花花冠表面附着物的特征可以区别是否掺杂增加质量,花粉粒颜色为红色即可认定为染色红花.结论 微性状鉴别法可准确区分红花正品与掺伪品,并可作为中药鉴别参考方法.     

NME1重组腺病毒构建及表达鉴定

目的：应用 AdEasyTM 腺病毒载体系统构建含人 NME1基因的重组腺病毒,检测 NME1基因在肺癌细胞的表达。方法从人肝脏标本克隆带有 KpnⅠ,XhoⅠ双酶切位点的 NME1cDNA,利用细菌体内同源重组法将 NME1正向连接至腺病毒载体上,测序鉴定正确后,于 QBI-293A 细胞中包装扩增,TCID 50法检测重组腺病毒滴度,重组腺病毒转染至肺癌细胞 GLC-82,检测 NME1在细胞内表达。结果肝脏组织克隆出470bp 条带,测序与 NME1编码序列相符,测得重组腺病毒滴度为10^10 TCID 50/ mL ,免疫实验显示 NME1在 GLC-82细胞成功表达。结论成功构建含人 NME1基因的重组腺病毒并转染肺癌细胞,检测到 NME1在肺癌细胞中正常表达。     

天仙子及其混伪品的微性状鉴别

目的对天仙子及其混伪品进行鉴别。方法查阅文献,在明确天仙子及其混伪品种类的基础上,应用中药微性状鉴定法对其进行鉴别研究。结果天仙子及其混伪品呈现不同的微性状特征,在性状、大小、色泽、表面光滑程度、表面附属物等方面有较明显的区别。结论利用中药微性状鉴定法可以对天仙子及其混伪品进行鉴别。