对碳青霉烯类抗生素敏感性降低的肺炎克雷伯菌耐药机理探讨

目的 研究临床分离的1株肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素敏感性降低的分子机制.方法 对临床分离的1株肺炎克雷伯菌,通过纸片扩散法(KB法)检测其对抗生素的敏感性;利用改良Hodge试验、乙二胺四乙酸(EDTA)协同试验对此菌株进行碳青霉烯酶表型确证;利用PCR及DNA序列分析,确定其基因型;通过质粒提取、质粒接合试验,对耐药基因进行定位.结果 药敏纸片法显示该菌株对碳青霉烯类抗生素敏感,其抑菌圈直径16～17 cm,提示分离的菌株可能产碳青霉烯酶,改良Hodge试验、EDTA协同试验确证产金属β-内酰胺酶(MBLs),PCR扩增和序列分析发现该菌携带MBLs基因blaIMP,药敏纸片法证实接合子对美罗培南的敏感性降低,IMP-4基因位于接合子约73 000 bp质粒上.结论 肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素敏感性降低的分子机理是携带MBLs基因的blaIMP.     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药机制研究

目的:探讨耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因及耐药特性.方法:对42株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌进行药敏试验、改良Hodge试验,并采用聚合酶链反应(PCR)方法检测细菌肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)基因.结果:42株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中,药敏试验结果显示耐药情况严重,仅对替加环素、阿米卡星、妥布霉素、复方新诺明较敏感.改良Hodge试验及KPC基因检测全部阳性,基因测序为KPC-2型.结论:KPC-2是引起肺炎克雷伯菌耐药的主要原因,应引起临床及实验室的关注.     

产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的耐药性检测及变迁

目的探讨产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的流行及耐药情况,为临床合理使用抗生素提供依据。方法采用BD Phoenix 100全自动细菌鉴定药敏系统及纸片扩散法测定病原菌的耐药性,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶和Etest MBL确认纸条法表型筛查金属-内酰胺酶。结果近3年临床肺炎克雷伯菌检出株数并无明显变化,但改良Hodge试验阳性株检出率逐年增加,金属-内酰胺酶阳性株检出率也逐年增加。耐碳青霉烯类菌株对大多数抗生素的耐药率较高且逐年上升,但对氨基糖甙类抗生素的敏感性尚可。结论产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的耐药情况日益严重,应加强院感的监测和预防。     

产KPC肺炎克雷伯菌检测方法构建与耐药机制

目的 探讨产肺炎克雷伯型碳青霉烯酶(KPC)肺炎克雷伯菌检测方法以及肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制、可能的治疗药物.方法 选取K-B法证实的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌36株纳入本研究,使用改良Hodge试验、Carba NP试验对菌株进行验证,随后采用PCR扩增、产物琼脂糖凝胶电泳实验,并对电泳阳性条带进行基因测序鉴定.结果 K-B法药敏试验显示36株耐碳氢烯类肺炎克雷伯菌,随后行Hodge验证,33株(91.7%)是产KPC肺炎克雷伯菌,对碳氢烯类耐药而对替加环素及米诺环素仍然敏感.对Hodge试验阳性33株再行Carba NP试验确证,其中27株(87.9%)阳性,6株(12.1%)阴性;对Hodge试验阳性33株行PCR扩增及电泳实验,共有27株出现目标条带(340 bp)提示阳性,与Carba NP试验结果相一致.对出现目标条带的27株肺炎克雷伯菌再进行KPC-2耐药基因PCR扩增产物测序,均为KPC-2型耐药基因.结论 K-B法药敏试验加随后改良Hodge试验验证对于筛查、发现KPC肺炎克雷伯菌具有较高的符合度,为发现KPC肺炎克雷伯菌有效筛查方法.K-B法药敏试验证实对KPC肺炎克雷伯菌,替加环素等可能是有效治疗的药物之一.Hodge试验检测的KPC肺炎克雷伯菌,存在12.1%(6/33)的假阳性率.Carba NP 试验及PCR扩增检测一致性好,具有确证产KPC肺炎克雷伯菌作用.随后的测序研究结果表明检测出的KPC肺炎克雷伯菌均为KPC-2,该型是引起肺炎克雷伯菌对碳青酶烯酶耐药的主要机制.     

海南发现4株产NDM-1多重耐药的肺炎克雷伯菌

目的分离和鉴定海南地区临床上发现的耐碳青霉烯类药物的肺炎克雷伯菌携带新德里金属β-内酰胺酶-1（NDM-1）基因的细菌。方法使用法国梅里埃API20E生化鉴定条和VITEK2全自动细菌鉴定仪及其配套的GNS试剂,鉴定出临床上耐亚胺培南和美洛培南的肺炎克雷伯菌;并经改良Hodge试验和亚胺培南,亚胺培南＋EDTA纸片法协同试验检测产金属酶类碳青霉烯酶,对目的菌株进行NDM-1耐药基因PCR特异性扩增,扩增后产物进行琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定;同时将目的菌株进行质粒接合转移试验分析其耐药机制,并对接合前后的药敏结果进行比较分析。结果从13株耐亚胺培南或美洛培南的肺炎克雷伯菌中,经亚胺培南,亚胺培南＋EDTA纸片法协同试验检出4株阳性,确定为产金属酶类碳青霉烯酶细菌。该4株产金属酶的肺炎克雷伯菌的改良Hodge试验均为阴性,NDM-1基因PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和测序分析,确认此4株目标菌株均为携带NDM-1的耐药基因的耐药菌株;这4株接合子E．coli J53（NDM-1）对所有β-内酰胺类药物的MIC值较受体菌E．coli J53耐药性均有很大提高,经PCR扩增其接合子NDM-1基因片段分析证实4株接合子均接合成功。结论海南发现的4株耐碳青霉烯酶类的肺炎克雷伯菌为携带blaNDM-1基因,且其NDM-1耐药基因可通过质粒在不同菌株之间传递。     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药率及同源性分析

目的分析耐碳氢酶烯肺炎克雷伯菌的耐药基因及流行病学特征。方法收集2018年1-8月临床分离出的14株耐碳氢酶烯类肺炎克雷伯菌,使用VITEK Compact微生物系统进行菌株鉴定和药敏试验,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶,PCR试验检测耐药基因,肠杆菌科基因间重复序列聚合酶链反应（ERIC-PCR）分析菌株同源性。结果14株耐碳氢酶烯类肺炎克雷伯菌对青霉素类、碳青霉烯类、氨曲南和头孢菌素类等抗菌药物表现出较高的耐药性。11株肺炎克雷伯菌的碳青霉烯酶表型阳性,PCR检测发现12株肺炎克雷伯菌KPC-2基因阳性,14株肺炎克雷伯菌根据ERIC-PCR结果分成3型,其中A型为主,集中在ICU病房和神经外科。结论耐碳氢酶烯类肺炎克雷伯菌表现为严重的多重耐药性,以产生KPC酶和A型为主。     

肺炎克雷伯菌介导致碳青霉烯类耐药的基因检测研究

目的：分析碳青霉烯类耐药型肺炎克雷伯菌的耐药性及耐药基因型。方法分离碳青霉烯类耐药型肺炎克雷伯菌14株,分别采用E-test实验、改良的Hodge试验、脉冲场琼脂糖凝胶电泳分型及多位点序列分型测定其耐药性、耐药基因型及主要流行序列型。结果14株碳青霉烯类耐药型肺炎克雷伯菌对常用碳青霉烯类抗生素亚胺培南和美罗培南呈中高度耐药,最低抑菌浓度（MIC）分别为8～64 mg/L、16～128 mg/L;对常见头孢类抗生素头孢哌酮、头孢西丁、头孢他啶和头孢吡肟均呈高度耐药,MIC 32～256 mg/L;对喹诺酮类药物环丙沙星呈中度耐药,MIC 3～32 mg/L;对氨基糖苷类抗生素阿米卡星不稳定,MIC〈0.12～256 mg/L。本组碳青霉烯类耐药型肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶表型检测均为阳性,基因型属KPC-2;脉冲电泳分型显示A克隆2株、B克隆9株、C克隆3株,多位点序列分型显示ST119株、ST154株、ST4391株,分型结果基本一致。结论碳青霉烯类耐药型肺炎克雷伯菌对部分其他种类的抗生素亦有较强耐药性,KPC-2型碳青霉烯酶是本院肺炎克雷伯菌产生青霉烯类耐药性的主要原因,主要流行克隆型和序列型分别为B型、ST11型。     

某院肺炎克雷伯菌产质粒AmpC酶基因型及耐药性研究

目的调查该院临床分离肺炎克雷伯菌产质粒AmpC酶表型和基因型携带情况及其对常用抗生素的耐药性,为临床合理用药提供参考。方法采用Vitek2-compact全自动细菌鉴定药敏系统对临床分离菌株进行鉴定及药物敏感试验,采用头孢西丁三维试验检测AmpC酶表型,采用多重PCR方法检测AmpC基因并经DNA测序确定其基因型别。结果 2010年7月至2011年6月共分离到116株肺炎克雷伯菌,产AmpC酶肺炎克雷伯菌占18.1%(21/116)。产AmpC酶肺炎克雷伯菌多重耐药情况严重,对氨基糖甙类、喹诺酮类及大多数头孢菌素类抗菌药物的耐药率在57.1%～100%,对加酶抑制剂复合药氨苄西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸、头孢哌酮/舒巴坦及哌拉西林/他唑巴坦的耐药率分别为90.5%、85.7%、42.9%、38.1%,所有菌株对碳青霉烯类抗生素亚安培南和美罗培南仍全部敏感。产AmpC酶菌株对头孢西丁、第3代头孢菌素及氨苄西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸等抗生素的耐药率明显高于不产酶株(P<0.05)。21株产酶菌株均携带DHA-1型AmpC酶基因。结论该院肺炎克雷伯菌产AmpC酶株检出率较高,产酶菌株多重耐药情况严重。临床应根据药敏结果合理选用抗菌药物,以减少耐药菌株的产生。     

新疆乌鲁木齐地区产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的检测及耐药性分析

目的 了解新疆乌鲁木齐地区产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的检出率及其耐药情况,指导临床合理选择抗菌药物.方法 菌株鉴定采用VITEK TWO全自动微生物分析仪,K-B纸片扩散法进行药敏试验,ESBLs采用双纸片增效法,对一年来新疆医科大学第一附属医院肺炎克雷伯菌的耐药谱进行回顾性调查.结果 共检出391株肺炎克雷伯菌,经确认试验,产ESBLs菌株167株,其阳性率为42.71%.产ESBLs肺炎克雷伯菌对青霉素类药物耐药率最高,对氨苄西林的耐药率高达100.00%;对亚胺培南的耐药率最低,对美洛培南及哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦也显示出较高的敏感性;对氨基糖苷类、氟喹诺酮类、磺胺类等药物具有较高的多重耐药性.结论 肺炎克雷伯菌产ESBLs阳性率及多重耐药率高,对大多数抗菌药物耐药且呈多重耐药,亚胺培南、β-内酰胺酶抑制剂复合物可用于控制肺炎克雷伯菌引起的感染.     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药基因分析

目的分析耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药情况及其耐药基因,为该菌感染的治疗和预防提供参考。方法收集临床分离非重复耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌50株,采用VITEK-2 compact全自动微生物鉴定药敏分析仪进行常规药敏试验,改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)检测碳青霉烯酶,乙二胺四乙酸(EDTA)协同法检测金属酶,PCR扩增和基因测序技术检测其耐药基因。结果药敏结果显示,肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类、青霉素类、头孢菌素类及氨曲南等抗生素的耐药率高达80%以上。50株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌中,mCIM试验结果阳性37株,其中EDTA协同试验阳性有3株。PCR结果显示,37株mCIM试验阳性耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌中,检测出33株KPC-2型耐药基因,未检测出IMP、VIM、NDM-1、OXA-48等耐药基因。结论耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌对常用抗生素表现出高水平耐药,耐药机制主要为产碳青霉烯酶,耐药基因型主要以KPC-2型为主。     

碳青霉烯耐药克雷伯菌耐药机制研究

目的:探讨天津医科大学第二医院分离得到的碳青霉烯耐药克雷伯菌的耐药机制。方法:2013-2014年度临床微生物实验室分离到36株碳青霉烯耐药克雷伯菌,改良Hodge试验、EDTA协同试验及 PCR法检测碳青霉烯酶耐药基因,PCR法检测ESBLs及Ampc酶耐药基因,PCR、实时荧光定量PCR（RT-PCR）法检测外膜蛋白基因Ompk35及Ompk36存在及表达情况。结果:9株改良Hodge试验阳性,EDTA协同试验均阴性,碳青霉烯酶耐药基因均阴性;36株碳青霉烯耐药克雷伯菌至少存在1种β内酰胺酶耐药基因;外膜蛋白基因无缺失,33株存在外膜蛋白表达量下降。结论: 分离的碳青霉烯耐药克雷伯菌耐药机制可能为ESBLs及Ampc酶表达合并外膜蛋白表达下降。     

238株肺炎克雷伯菌的临床分布和耐药分析

目的了解各种临床标本中肺炎克雷伯菌的临床分布特点和一般性耐药情况。方法收集2011年9月安徽省32家医院报送的肺炎克雷伯杆菌,药敏试验采用琼脂稀释法,结果依据CLSI 2010年推荐的标准进行判读。结果肺炎克雷伯菌主要来自痰标本,占76.05%;主要分布于ICU和呼吸内科,明显多于其他病房。药敏结果显示,肺炎克雷伯菌对2、3代头孢菌素表现出较高的耐药性,耐药率在28.2%~68.5%;对4代头孢菌素头孢吡肟比较敏感,耐药率为28.2%;对喹诺酮类的敏感率在70%左右;氨基糖苷类中的阿米卡星耐药率较低,为19.7%,而庆大霉素为70.6%;加酶抑制剂的抗菌药物比不加酶抑制剂的耐药率低很多;拉氧头孢、美罗培南和亚胺培南对该菌的敏感性最高。结论肺炎克雷伯菌临床分离株数多,耐药率较高,应加强临床使用抗菌药物的管理,预防和减少多重耐药菌株的产生。     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药基因检测及其同源性分析

目的研究六安市人民医院耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（CRKP）的耐药基因及同源性。方法收集2018年4-6月分离自临床标本的肺炎克雷伯菌40株,用法国梅里埃VITEK 2 COMPACT全自动细菌鉴定药敏仪进行鉴定和药敏。采用改良Hodge试验（MHT）和改良碳青霉烯灭活试验（mCIM）对40株菌进行碳青霉烯酶表型的筛选,采用PCR方法检测其是否携带已知的主要碳青霉烯耐药基因KPC、OXA-48、NDM-1。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）对其进行同源性分析。结果40株CRKP多分离自ICU病房（占55%）,以呼吸道来源标本为主（占80%）,对常用抗生素头孢菌素类、氨基糖苷类以及大环内酯类的耐药率均在80.0%以上。MHT和mCIM试验中有33株菌二者均为阳性,2株菌均为阴性,剩下5株MHT试验阳性而mCIM试验结果为阴性。32株菌携带KPC基因,未检出OXA-48及NDM-1基因。同源性分析结果显示40株CRKP分为7个型别,其中A型34株（占85%）,B、C、D、E、F及G型各1株（各占2.5%）。结论分离的CRKP以携带KPC-2基因为主,共有7个型别,以A型为主,为有效治疗和预防CRKP感染提供了参考依据。     

河北以岭医院6种重点监测耐药菌的分布特点及耐药分析

目的 分析河北以岭医院2018—2020年6种重点监测耐药菌的分布特点及耐药性,为临床控制感染及规范用药提供理论依据。方法 回顾性分析2018—2020年住院患者分离的6种重要耐药菌,包括耐碳青霉烯类大肠埃希菌（CREC）、耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）、耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌 （CRPAE）、耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌（CRAB）、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）和耐万古霉素肠球菌（VRE）的分布情况及耐药特点;并采用改良碳青霉烯灭活（mCIM）试验和EDTA改良碳青霉烯灭活（eCIM）试验进行93株耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌（CRE）菌株的酶型检测。结果 连续3年共检出CREC 9株、CRKP 253株、CRAB 252株、CRPAE 227株、MRSA 99株、VRE 9株。主要集中在重症监护室、肺病科、神经外科等科室;主要检出标本类型为呼吸道标本,其次为尿液标本、分泌物标本等。mCIM和eCIM试验结果显示,86株CRKP菌株中,mCIM阳性81株;mCIM和eCIM同时阳性即金属酶阳性菌株15株（17.4%）;mCIM阳性和eCIM阴性即丝氨酸酶阳性菌株66株（76.7%）;7株CREC菌株中mCIM和eCIM全部阳性。结论 临床耐药菌株日益增多,尤其是CRE和CRPAE菌株,使临床抗感染治疗面临严峻的挑战,应积极采取有效防控措施,加强耐药菌感染的预防和控制,提高诊疗能力建设,遏制耐药菌的流行播散。     

老年社区获得性肺炎病原学、药敏及抗生素滥用状况分析

目的分析老年社区获得性肺炎病原体分布及抗菌药物耐药状况,探讨滥用抗生素对社区获得性肺炎病原体分布的影响。方法随机选取湖北省黄梅县第二人民医院内科2008年6月至2013年5月内科收治的218例符合入选条件的老年患者进行病原学检查和药敏试验。将病史中有滥用抗生素病史的142例患者设为滥用抗生素组,将正规用抗生素的76例患者设为正规治疗组,比较两组细菌培养阳性率和非典型病原体培养阳性率的差异性。结果218例患者中147例病原学检查阳性,其中细菌阳性115例,占52．8％,非典型病原体32例,占14．7％。细菌和非典型病原体混合感染6例,均为肺炎支原体与细菌混合感染。有4种细菌的阳性率比较高,分别为流感嗜血杆菌34例,占15．6％,肺炎链球菌31例,占14．2％,肺炎克雷伯菌29例,占13．3％,大肠埃希菌9例,占4．1％。流感嗜血杆菌对复方新诺明的耐药率达64．7％,对哌拉西林的耐药率达44．1％,对氨苄西林＋舒巴坦的耐药率达38．2％。肺炎链球菌对氨苄西林＋舒巴坦的耐药率达67．7％,肺炎克雷伯菌对氨苄西林＋舒巴坦的耐药率达61．3％,大肠埃希菌对哌拉西林的耐药率达33．3％。病原菌对氨苄话林＋舒巴坦、氨曲南、四环索、复方新诺明、哌拉西林、头孢他啶的耐药率高于其他抗菌药。218例患者有滥用抗生素病史者达65．1％,滥用抗生素组和正规治疗组比较,细菌培养阳性率和非典型病原体培养阳性率差异均有统计学意义（P〈O．05）。结论老年社区获得性肺炎感染以流感嗜血杆菌、肺炎链球茵、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌和支原体为主,这些高发病原体对常用的抗生素已产生了较高的耐药性,这可能与长期滥用抗生素有关,为了防止耐药菌株的产生,要求临床医生在工作中合理运用抗生素,并对病原体的分布和耐药性进行动态监测。     

49例儿童肺炎克雷伯杆菌肺炎耐药性分析

目的探讨儿童肺炎克雷伯杆菌肺炎的临床特征及该菌产生超广谱β-内酰胺酶（ESBLS）的耐药特点,为临床合理使用抗生素提供依据。方法对2007年1月～2009年1月在我院儿科住院确诊为肺炎克雷伯杆菌肺炎49例患儿的临床特征及药敏结果进行分析。结果婴幼儿,尤其是1岁以内儿童因免疫功能低下易患肺炎克雷伯杆菌肺炎,其临床表现以发热、咳嗽、咳痰气促为主不具特征性,X线表现不典型。49例患儿中,34例ESBLS检测阴性的克雷伯杆菌对多种抗生素较为敏感,但15例ESBLS检测阳性的肺炎克雷伯杆菌对多种抗生素具有交叉耐药性,对含酶的头孢菌素和碳青霉烯类抗生素敏感率较高。结论儿童肺炎克雷伯杆菌肺炎临床表现不具有特征性,疾病进展快,诊断靠病原菌检测并结合临床表现和X线检查,治疗应根据药敏测定,合理选择有效抗生素。     

小儿细菌性肺炎超广谱β-内酰胺酶的临床探讨

目的了解产超广谱β一内酰胺酶（ESBLs）株在小儿细菌性肺炎中的发生率及对抗生素的耐药情况。方法收集2005年1月～2008年12月我院儿科住院的174例患儿痰标本进行细菌培养,药敏试验采用手工K-B纸片扩散法,超广谱β一内酰胺酶（ESBLs）检验判定ESBL。结果 2005～2008年肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的ESBLs的总发生率为35.8%和49.5%,且逐年上升。ESBLs的发生率在重症肺炎中的发生率明显高于轻症肺炎。产ESBLs株对西林、头孢菌素类抗生素呈高度耐药状态,头孢菌素β一内酰胺酶抑制剂,对产ESBLs株仍有较强的抗菌效果,对亚胺培南、美罗培南耐药株未发现。结论小儿细菌性肺炎中产ESBLs菌株已相当高,重症细菌性肺炎更为显著,治疗ESBLs引起的感染以碳青霉烯类最佳。临床上要合理使用抗生紊,避免滥用第3代头孢菌素,以有效控制产ESBLs细菌的产生。     

近三年同期几种常见致病菌的耐药性变迁分析

目的分析佛山市第一人民医院2011-2013年第三季度临床分离的几种常见病原菌的耐药性变迁情况,为临床合理用药提供参考依据。方法采用法国梅里埃VITEK-Compact全自动微生物分析仪对分离菌进行鉴定及药敏试验,多耐药菌采用纸片扩散法,对所得数据采用WHONET 5.4软件进行统计分析。结果近三年同期分离的菌株以革兰阴性杆菌为主,肠杆菌分别是大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,非发酵菌分别是铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌,革兰阳性球菌以葡萄球菌、肠球菌为主;肠杆菌科中,对碳青酶烯类抗生素几乎没有耐药情况,铜绿假单胞菌对喹诺酮类及氨基糖苷类抗生素耐药率最低,鲍曼不动杆菌除对喹诺酮类耐药率稍低外,对其他所有抗菌药物均明显耐药,除万古霉素、利奈唑胺、呋喃妥因和替加环素外,葡萄球菌及肠球菌对其余抗菌药物均高度耐药。结论常见致病菌均存在耐药情况,细菌耐药加大了临床治疗难度。应定期进行耐药性监测,了解细菌耐药性的动态变化,为临床用药提供指导。