5-羟色胺对心肌细胞内游离钙浓度的影响

目的　观察 5 -羟色胺 (5 - HT)对新生大鼠心肌细胞内游离 Ca2 + 浓度的影响 ,并探讨其作用机制 .方法　培养 SD大鼠 (1～ 3d)心肌细胞 ,应用特异性 Ca2 +荧光指示剂 Fluo- 3/AM负载细胞 ,激光共聚焦显微镜检测游离 Ca2 + 浓度 .结果　 5 - HT在 10 - 6 ,10 - 5,10 - 4 m ol· L- 1 时均可升高心肌游离Ca2 + 浓度 ,且随剂量增加而加强 ;二氢吡啶类钙通道阻断剂lacidipine可部分拮抗 5 - HT的作用 ;心肌肌浆网内钙释放通道 ryanodine受体调节剂 ryanodine,在 10 - 5mol· L- 1 时也可部分拮抗 5 - HT的作用 ;用 EGTA络合细胞外液中游离Ca2 + ,5 - HT升高心肌游离 Ca2 + 作用明显减弱 ;此外 ,5 - HT二型受体 (5 - HT2 R)阻断剂赛庚定具有显著抑制 5 - HT升高心肌游离 Ca2 + 的作用 .结论　 5 - HT具有升高心肌游离 Ca2 + 的作用 ,其机制可能与细胞外 Ca2 +经 5 - HT2 R或二氢吡啶类钙通道进入细胞以及肌浆网内钙释放有关     

Cromakalim对培养心肌细胞内游离钙的影响

1材料和方法取生后24～48h的SD乳鼠心室肌，剪碎后经0．125％胰蛋白酶消化制成细胞是液，用含20％小牛血清的DMEM培养基稀释成106／ml，接种子Petri培养皿中，培养24～48h细胞贴壁生长，以D－Hank’s液冲洗培养皿3次，加入0．3mllμmol／LFuo－3－AM，避光置37°C1h，吸出梁液，以D－Hanks液再洗3次，加入1．omlD－Hank’s液后用于检测。Cromakalim对正常心肌细胞内游离钙的作用分《个组，每组观察8个培养血：Hank’s组，Cromill又分IX10二‘mol／L、IX10’mol／L及IX10‘mol／L3个实验组。Crom对A／R时心肌细胞内Ca’”的影…     

自发性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞内胞浆游离钙浓度及氯沙坦治疗后的变化

目的　观察自发性高血压大鼠 (SHR)和正常血压对照鼠 (WKY)主动脉平滑肌细胞 (SMC)内胞浆游离钙浓度 ([Ca2 + ] i)与氯沙坦治疗后的变化 ,探讨 [Ca2 + ] i 在氯沙坦降压中的作用。方法　治疗前组 :SHR ,10只 ;氯沙坦治疗组 :SHR ,7只 ;正常对照组 :WKY ,7只。其中氯沙坦治疗组饲氯沙坦 2 0mg/(kg·d) ,连续 6个月。上述 3组大鼠均检测鼠尾动脉收缩压 ,进行SMC培养 ,检测SMC培养细胞内 [Ca2 + ] i。结果　治疗前组SHR鼠尾动脉收缩压及SMC内[Ca2 + ] i显著高于WKY(P <0 0 0 1) ,经氯沙坦 6个月治疗后 ,SHR鼠尾动脉收缩压及SMC内 [Ca2 + ] i 显著下降 (P <0 0 1)。鼠尾动脉收缩压的下降幅度和SMC内 [Ca2 + ] i 的下降幅度呈正相关 (r =0 65 3 ,P <0 0 5 )。结论　SHR的SMC内存在钙代谢紊乱 ,氯沙坦通过纠正细胞内钙代谢异常而达到降压的目的。     

普罗托品对大鼠血管平滑肌收缩反应及细胞内游离钙浓度的影响

目的探讨普罗托品(protopine, Pro)对大鼠血管平滑肌细胞内游离钙浓度的影响.方法采用无Ca2 -复Ca2 的实验法,间接观察Pro对大鼠血管平滑肌细胞内游离钙浓度([Ca2 ]i)的可能影响,再利用钙荧光指示剂Fura-2/AM负载的培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,直接观察在Pro存在下,对去甲肾上腺素(NA)和高钾所致的 [Ca2 ]i的升高的影响.结果在无钙Krebs液中,Pro 10、30、100 μmol/L对NA所致血管条的短暂收缩均有明显的浓度依赖性抑制作用,对复Ca2 后NA所诱发的持续收缩也呈剂量依赖性抑制作用.在Fura-2/AM负载血管平滑肌细胞的实验表明,Pro (50 μmol/L, 100 μmol/L) 对静息时的 [Ca2 ]i无明显影响;在有外钙存在条件下,Pro 50 μmol/L能明显降低NA所致[Ca2 ]i的升高,对KCl引起的 [Ca2 ]i 升高有降低趋势;当Pro的浓度增加到100 μmol/L时,对NA和KCl引起的 [Ca2 ]i升高均有明显的抑制作用.结论 Pro可能通过抑制Ca2 释放和(或)Ca2 内流来降低NA和高钾所致血管平滑肌[Ca2 ]i的升高,从而抑制血管平滑肌的收缩反应.     

TSH和Carbachol对甲状腺细胞内游离钙的动员作用

研究促甲状腺激素(TSH)和 Carbachol(Cch)对猪甲状腺细胞 Ca~(2+)的动员作用的结果表明,0.01～10mU/ml TSH 或10~(-5)～10~(-4)mol/L Cch 可引起甲状腺细胞[Ca~(2+)]急性升高.甲状腺细胞对 TSH 或 Cch 反应的敏感性在贴壁的单层细胞高于细胞悬液,在近汇合单层细胞高于汇合单层细胞。TSH 和 Cch 均能在无钙/EGTA 缓冲介质中刺激猪甲状腺细胞[Ca~(2+)]升高,提示此升高的[Ca~(2+)]源自细胞内储藏 Ca~(2+)的动员。     

细胞内游离钙影响细胞凋亡的研究进展

钙离子作为第二信使在细胞的各项生理活动中已得到广泛的研究 ,但胞内游离钙和细胞凋亡之间的关系尚未得到进一步阐明。在病理 (如肿瘤 )状态下的研究也仅多见于神经和血液系统疾病中。本文就细胞内游离钙与细胞凋亡的最新研究作一综述。1　细胞凋亡途径　　细胞凋亡最终涉及核酸内切酶 (ＤＮａｓｅ)和半胱氨酸蛋白酶 (Ｃａｓｐａｓｅｓ) ,前者彻底破坏细胞生命活动所必须的全部指令 ,后者导致细胞结构的全面解体。ＤＮａｓｅ的激活需要有凋亡相关基因激活 ,但和Ｃａｓｐａｓｅ的激活也密不可分。Ｃａｓｐａｓｅ的激活主要有两条途径[1 ] ,…     

糖基化终极产物对乳鼠心肌细胞胞内游离钙瞬间变化的影响

目的探讨糖基化终极产物(AGEs)刺激对体外培养乳鼠心肌细胞内游离钙的影响.方法应用荧光钙离子指示剂 Fluo-3/AM将体外培养3～5 d的乳鼠心肌细胞染色,激光共聚焦显微镜(LSCM)观察不同浓度AGEs(50、100、200μg/ml)对心肌细胞瞬时刺激后细胞内游离钙离子浓度的影响.结果与对照组相比,AGEs刺激可以迅速引起心肌细胞胞内游离钙浓度的升高,其恢复时程显著延长并呈剂量依赖性.结论AGEs可能通过改变心肌细胞内游离钙离子浓度对心肌细胞造成损伤.     

肺心病患者细胞内游离钙-钙调蛋白活性的研究

目的：通过测定肺心病患者血小板内游离钙离子浓度和钙调蛋白活性,探讨和ＣａＭ活性变化在肺心病,缺氧性肺动脉高压形成机制中的作用。方法：用荧光指标剂Ｆｕｒａ－２／ＡＭ标记示踪法和磷酸二酯酶法测定１９例肺心病急性发作期患者和２０例健康者血小板（Ｃａ＾２＋）＾ｉ,ＣａＭ活性。     

三氧化二砷对人肺腺癌Anip973细胞内[Ca2+]i的影响

目的研究三氧化二砷(As2O3)对人肺腺癌Anip973细胞内游离[Ca2+]i的影响.方法培养人肺腺癌Anip973细胞,用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察As2O3对人肺腺癌Anip973细胞内游离[Ca2+]i的影响;用生长曲线法测药物对肿瘤细胞增殖的影响.结果①LSCM显示As2O3 作用后的人肺腺癌细胞Anip973细胞内[Ca2+]i显著升高(P<0.001).②As2O3 对人肺腺癌细胞株Anip973细胞内[Ca2+]i升高作用具有剂量依赖性.③As2O3 能明显抑制人肺腺癌Anip973细胞的增殖.结论 As2O3 可能是通过升高人肺腺癌细胞内[Ca2+]i 来启动细胞凋亡机制,诱导肺癌细胞凋亡,从而抑制其增殖.     

荧光定量法测量平滑肌细胞内钙离子浓度的探讨

目的 研究平滑肌细胞内Ca²⁺浓度的动力学变化,建立一种定量测量细胞内Ca²⁺浓度的方法。方法 分离肠系膜细动脉血管平滑肌(ASMC)细胞,用荧光探针Indo-1和激光扫描共聚焦显微成像技术测定单个平滑肌细胞Ca²⁺浓度的动力学变化;首先在37 ℃环境下标定Ca²⁺ 探针indo-1的解离常数Kd值,根据荧光-浓度换算公式将测量的荧光强度值换算成Ca²⁺ 浓度值。结果 激光扫描共聚焦显微成像技术测量的细胞荧光图像分析显示,平滑肌细胞[Ca²⁺]_i 在地塞米松的刺激下显著上升,有时会出现自发钙波的现象,并且细胞内出现钙超载的现象(细胞荧光图像呈现白色)。通过测量得到的Kd值结合荧光强度-浓度换算公式可准确地测量细胞内[Ca²⁺]_i。结论 荧光定量法结合共聚焦显微成像技术可以简易、快捷地监测细胞内钙离子的动力学变化,不失为一种定量测量细胞内钙离子的方法。     

乙醇对大鼠胃底5-羟色胺2B受体表达水平影响的研究

目的:检测口服乙醇后大鼠胃底5-羟色胺2B(5-HT2B)受体表达水平的变化,探讨乙醇对大鼠胃底收缩的影响。方法:提取实验处理组及对照组总RNA,用半定量RT-PCR法检测5-HT2B受体mRNA表达水平。扩增大鼠5-HT2B受体基因,扩增产物用琼脂糖凝胶电泳检测,并用GDS8000凝胶成像及分析系统分析电泳条带密度。结果:大鼠胃底5-HT2B受体表达水平在给予乙醇2h后增高,与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:乙醇可引起大鼠胃底5-HT2B受体表达水平增高。     

钙超载大肠系膜血管平滑肌细胞钙离子稳态调节的改变

目的 探讨钙超载模型大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）胞内是否存在钙离子（Ｃａ＾２＋）稳态调节异常。方法 以Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ作为Ｃａ＾２＋批示剂,应用激光扫描共聚焦显微镜技术,比较钙超载模型大鼠肠系膜ＶＳＭＣ（ＣａＯＭＶ）与正常Ｗｉｓｔａｒ大鼠肠系膜ＶＳＭＣ（ＷＭＶ）静息态的胞浆与核内游离Ｃａ＾２＋水平（〖Ｃａ＾２＋〗ｉ,〖Ｃａ＾２＋〗ｎ）,以及在多各药物刺激下Ｃａ＾２＋稳态调节的差异。结果 两种Ｖ     

镉对家兔离体胃平滑肌收缩活动的影响

目的 :探讨镉对离体胃平滑肌收缩活动的影响。方法 :本实验用不同剂量氯化镉溶液对离体胃肌条循环灌流 ,用张力换能器测定 ,二道生理记录仪描记肌条收缩活动指标。结果 :镉离子对肌条的主动张力 (PT)、基础张力 (RT)、主动张力最大收缩速率 (dT/dtmax)和主动张力最大舒张速率 ( -dT/dtmax)均有明显抑制作用 ,而且呈剂量效应关系。这些作用可被乙酰胆碱对抗。结论 :镉离子可直接引起胃平滑肌收缩力降低。     

哇巴因对大鼠血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响

目的探讨哇巴因对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）内Ca2+浓度的影响。方法用组织
块贴壁法进行大鼠胸主动脉VSMCs原代培养,用免疫组织化学方法进行细胞鉴定,采用放射自显影术检测哇巴因对大鼠胸主动
脉VSMCs的结合能力,采用Fluo 3-AM（钙离子荧光探针）法研究哇巴因在短时间内对VSMCs细胞内Ca2+浓度的影响,探讨不同
浓度的钠泵α2亚单位截断性片段的拮抗作用。结果（1）放射自显影术检测结果显示,哇巴因与VSMCs间有一定的结合能力。
在0.1~100 nmol/L浓度范围,随着哇巴因浓度的增加,VSMCs与哇巴因的结合能力增加;（2）Fluo 3-AM检测VSMCs内Ca2+浓度
结果显示：不同浓度的哇巴因在短时间内能够引起VSMCs内Ca2+浓度的变化。在0~3200 nmol/L浓度范围,细胞内Ca2+离子浓
度会随着哇巴因浓度的增加呈现出逐渐升高的趋势;（3）不同浓度的钠泵α2亚单位截断性片段可以拮抗哇巴因引起的VSMCs内
Ca2+浓度的升高作用。结论哇巴因引起的细胞内高钙是高哇巴因高血压发生的细胞学基础,钠泵α2亚单位截断性片段可以拮
抗哇巴因引起的VSMCs内Ca2+浓度的升高作用,为进一步探讨哇巴因的作用机制结高血压的治疗提供了实验依据。
     

慢性低氧钙激活氯通道在大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨慢性低氧时钙激活氯通道（ClCa）在大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖中的作用。方法将PASMCs分别置于常氧及慢性低氧下,采用形态学、流式细胞术、免疫细胞化学法,观察ClCa阻滞剂尼氟灭酸（NFA）和indaryloxyacetic acid（IAA-94）对PASMCs增殖的影响。结果慢性低氧：①PASMCs呈合成表型,而常氧为收缩表型,NFA和IAA-94干预后呈合成表型的PASMCs向收缩型转变;②S＋G2M期细胞所占比例增高,NFA和IAA-94干预后减低,且G0G1期细胞所占比例增加（P〈0.01）;③PCNA表达阳性率增高,NFA和IAA-94干预后降低（P〈0.01）;④c-fos和c-jun蛋白阳性染色A增高,NFA和IAA-94干预后降低（P〈0.01）。结论慢性低氧引起细胞表型改变,可促进细胞增殖,而抑制ClCa的活性可抑制细胞的增殖,提示ClCa参与了低氧PASMCs的增殖。     

大鼠膀胱平滑肌细胞自发性钙瞬变及其机制研究

目的观察大鼠离体活膀胱肌条铺片中平滑肌细胞自发性钙瞬变,并探讨平滑肌细胞自发性钙瞬变产生的机制。方法制作大鼠离体膀胱肌条铺片,生理液灌流保持肌条铺片活性。采用Fluo-4负载肌条铺片,激光共聚焦显微镜法观察其中平滑肌细胞自发性钙瞬变,并观察尼莫地平(Nimodipine)、2-氨基乙基二苯硼酸盐(2-aminoethoxydiphenylbo-rate,2-APB)、雷诺丁(Ryanodine)、毒胡萝卜素(Thapsigargin)对平滑肌细胞自发性钙瞬变的影响,探讨平滑肌细胞自发性钙瞬变产生的机制。结果可见大鼠离体活膀胱肌条铺片中平滑肌细胞产生节律性自发性钙瞬变,自发性钙瞬变幅度(F/F0)和频率分别为(2.20±0.13)和(10.31±2.74)次/min。L型钙离子通道阻断剂Nimodipine能完全抑制平滑肌细胞的自发性钙瞬变,2-APB、Ryanodine可将钙瞬变幅度分别降低至(1.98±0.14)、(1.81±0.11),而相应的钙瞬变频率则被减少为(8.18±1.97)(P<0.05,n=18)、(7.59±2.16)次/min(P<0.01,n=17)。Thapsigargin可抑制平滑...     

镉对家兔血管平滑肌收缩活动的影响

目的 :探讨镉对家兔血管平滑肌收缩活动的影响。方法 :制备离体家兔胸主动脉血管平滑肌条 ,按累积浓度法于灌流液中依次加入 10mmol/L、2 0mmol/L、4 0mmol/L和 80mmol/LKCl溶液 ,每个浓度点肌条达最大收缩反应后 ,再分别按累积浓度加入CdCl2 2× 10 -7mol/L、2× 10 -5mol/L、2× 10 -3 mol/L ,测量计算每个浓度下肌条最大收缩百分比 ,绘制量 效曲线。在KCl2× 10 -5mmol/L条件下 ,分别给予不同浓度CdCl2 使血管平滑肌条产生最大舒张效应 ,再按累积浓度法加入 0 .5mmol/L、1.0mmol/L和 2 .0mmol/LCaCl2 溶液进行干预 ,测量每个浓度下肌条长度。结果 :Cd2 + 能舒张已为高K+ 收缩的主动脉条 ,使KCl的量 效曲线非平行右移 ,最大效应降低 ;而且可被CaCl2所拮抗 ,2 .0mmol/LCaCl2 浓度组肌条长度与干预前比较明显缩短 (P <0 .0 5 )。结论 :镉可抑制家兔血管平滑肌的收缩活动 ,其扩血管机制可能与阻断钙通道作用有关 ,也可能是Cd2 + 对血管平滑肌细胞的作用部位不同所致 ,或与动物的种属、实验方法、药物剂量有关。     

硫化氢联合阿托伐他汀钙对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 观察硫化氢联合阿托伐他汀钙对血管平滑肌细胞凋亡的影响.方法 培养兔血管平滑肌细胞（VSMCs）3～8代,分为对照组、硫化氢组、阿托伐他汀钙组以及硫化氢联合阿托伐他汀钙组（简称联合干预组）,共4组,分别给予相应干预,TUNEL法检测VSMCs的凋亡情况.结果 VSMCs凋亡率：与对照组相比,硫化氢组、阿托伐他汀钙组以及联合干预组VSMCs的凋亡率均增加（P＜0.01）;与硫化氢组相比,联合干预组VSMCs凋亡率增加（P＜0.01）,阿托伐他汀钙组VSMCs凋亡率减少（P＜0.01）.结论 硫化氢、阿托伐他汀钙以及两者联合均可促进VSMCs的凋亡,其中以两者联合效果最为明显,硫化氢的作用强于阿托伐他汀钙.     

小檗碱对急性分离成年大鼠心室肌细胞内游离钙离子浓度的影响

目的　研究小檗碱对急性分离大鼠心室肌细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ] i)的影响。方法　采用酶解法分离单个大鼠心肌细胞 ,用钙敏感的荧光指示剂Fluo 3/AM染色 ,以荧光强度 (FI)来代表 [Ca2 + ] i,应用激光扫描共聚焦显微镜实时监测FI的变化。结果　在静息状态下 ,小檗碱 (3～ 1 0 0 μmol/L)对 [Ca2 + ] i 无影响。 3～ 1 0 0 μmol/L小檗碱对KCl 60mmol/L介导的钙内流也无影响。但小檗碱 (30和 1 0 0 μmol/L)对caffeine 1 0mmol/L引起的钙动员有明显促进作用 (P <0 .0 1 )。结论　小檗碱对于KCl通过电压依赖性钙通道 (VDC)介导的 [Ca2 + ] i 升高无影响 ;但小檗碱 (30和 1 0 0 μmol/L)可能通过影响RyRs而促进肌浆网 (SR)内钙外流 ,也可能对SR钙摄取 ,钙的跨膜转运及Na+ Ca2 + 交换有抑制作用