益母草药材生物检定方法的研究（I）—动物标准子宫模型建立和测定环境因素筛选

目的；研究益母草缩宫效应，建立动物标准子宫模型，优选影响益母草缩宫效应的环境因素。方法：通过比较益母草对小鼠、大鼠、家兔离体子宫的缩宫效应，确定益母草药材生物检定的标准子宫模型；运用正交试验，对影响益母草缩宫效应的主要环境因素进行筛选。结果：以动情前期大鼠离体子宫为标准子宫模型，益母草药材生物检定最佳环境条件为：子宫负荷1g，浴液温度32℃，每1000ml子宫蓄养液CaCl2和NaHCO3含量分别为0．06g和0．25g。结论：优选后的条件，益母草缩宫效应明显，检定误差较小。     

益母草药材生物检定方法的研究(Ⅱ)——缩宫素、益母草量效关系和检定适用效应模式的建立

目的:探明益母草检定适用剂量范围,建立效应模式。方法:在同一标准子宫模型上,通过建立缩宫素、益母草各自的剂量效应曲线,构建适用于平行线四点法的效应模式。结果:子宫肌收缩效应在20～85mm范围内,益母草与缩宫素的对数剂量和反应高度呈线性关系,且基本平行。结论:在上述模式内,采用平行线四点法,以缩宫素作标准品,对益母草进行生物检定,同一样品三次检定结果平均可信限率均小于20％。     

新鲜益母草缩宫作用的研究

目的 :考察比较不同生长时期采收的益母草以及同一批新鲜益母草和晒干益母草的缩宫效应。方法 :以大鼠离体子宫为标本 ,以子宫活动力为指标 ,观察样品的缩宫作用。结果 :研究发现 ,1相同剂量下 ,不同生长时期益母草的缩宫作用 :营养期 >花前期 >盛花期。 2相同剂量下 ,鲜益母草榨汁液的缩宫作用明显强于同一批次的干草煎煮液。结论 :新鲜的、叶片较多的营养期益母草的缩宫作用较强 ;传统的将益母草晒干和煎煮入药的方法可能造成其有效成分的损失 ;用新鲜的益母草取代传统的干草入药在药效上具有合理性     

新鲜益母草缩宫作用的研究

目的：考察比较不同生长时期采收的益母草以及同一批新鲜益母草和晒干益母草的缩宫效应。方法;以大鼠离体子宫为标本,以子宫活动力为指标,观察样品的缩宫作用。结果：研究发现,（1）相同剂量下,不同生长时期益母草的缩宫作用。营养期＞花前期＞盛花期。（2）相同剂量下,鲜益母草榨汁液的缩宫作用明显强于同一批次的干草煎煮液。结论：新鲜的,叶片较多的营养期益母草的缩宫作用较强,传统的将益母草晒干和煎煮入药的方法可能造成其有效成分的损失;用新鲜的益母草取代传统的干草入药在药效上具有合理性。     

筛选益母草注射液缩宫成分

目的采用大鼠离体子宫筛选益母草注射液(益母草)缩宫活性成分。方法从益母草注射液中分离到的3-羟基吡啶、N-异丁基缬氨酸及总氨基酸作用于大鼠成年雌性未孕和流产的离体子宫并绘制子宫收缩曲线,计算给药前后子宫收缩幅度、频率和活动力的变化。结果益母草注射液、3-羟基吡啶、N-异丁基缬氨酸和总氨基酸可明显升高大鼠离体子宫收缩活动力及收缩幅度的最大值、最小值、平均值(P0.05或P0.01)。结论益母草注射液中存在兴奋子宫的3个成分中以N-异丁基缬氨酸活性更好。     

第17卷第5期 2011年3月 中国实验方剂学杂志 Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol.17,No.5 Mar.,2011 四物汤及其组方药物对小鼠离体子宫收缩的影响

目的:分析评价四物汤及其组方药物对小鼠离体子宫平滑肌收缩的影响,探讨四物汤组方配伍特点。方法:采用小鼠离体子宫收缩痛经模型,观察该方及其组方药对离体子宫痛经模型小鼠子宫平滑肌平均肌张力、收缩幅度、收缩频率的抑制作用,计算抑制率。实验分为空白对照组,四物汤及其组方药给药组,每组6只,分两次平行进行,每次3只,单味药,药对及全方分别按生药量终浓度为0.5,1,2 g·L-1给药。结果:四物汤及其组方对缩宫素诱导的小鼠离体子宫平滑肌收缩幅度、收缩频率和平均肌张力有不同程度的抑制作用,其中,当归-熟地黄药对对离体子宫的收缩幅度抑制作用最强,抑制率为23.195%;当归-白芍药对对离体子宫的收缩频率和平均肌张力的抑制作用最强,抑制率分别为47.826%和14.998%。结论:当归和白芍在抑制缩宫素诱导的小鼠离体子宫收缩效应上是有重要贡献的药味,且两药合用能增强其作用;熟地黄与当归配伍在抑制离体子宫收缩效应上也有协同增效的作用。     

散结镇痛片对小鼠实验性痛经模型的影响

目的:观察散结镇痛片对小鼠实验性痛经模型的影响。方法:制备正常小鼠离体子宫和催产素所致小鼠离体子宫收缩模型,以及雌激素与缩宫素联用引起小鼠扭体反应模型,观察散结镇痛片对其影响。结果:散结镇痛片6.4 mg.mL-1以上对小鼠离体子宫自发收缩具有显著抑制作用;1.6 mg.mL-1以上对缩宫素引起的小鼠离体子宫收缩具有抑制作用,并具有量效关系;0.32～1.28 g.kg-1能够显著降低缩宫素引起的小鼠扭体反应次数,具有量效关系。结论:散结镇痛片对小鼠离体和在体痛经模型具有良好的治疗作用,对抗子宫平滑肌收缩而导致的组织缺血可能是其抗痛经作用的机制之一。     

青附颗粒解痉止痛作用研究

目的:研究青附颗粒对原发性痛经的影响。方法:用雌激素和缩宫素复制大、小鼠痛经模型,观察青附颗粒对大、小鼠痛经模型的影响;用肌动描记技术记录子宫环的收缩曲线,研究青附颗粒对离体小鼠子宫自发收缩及催产素致小鼠子宫强直收缩的影响。结果:青附颗粒4.8 g/kg、2.4 g/kg能明显减少小鼠的扭体次数,2.4 g/kg、1.2 g/kg能明显减少大鼠的扭体次数;青附颗粒2.00 mg/ml、1.00 mg/ml、0.50 mg/ml显著抑制离体小鼠子宫自发性及缩宫素诱发的离体小鼠子宫收缩的强度、频率。结论:青附颗粒有解痉止痛作用。     

温经化瘀合剂药效学研究

目的：观察温经化瘀合剂(当归、川芎、香附、益母草等)治疗痛经、月经不调等作用。方法：对小鼠子宫、卵巢进行重量测定，二甲苯致小鼠耳肿胀法，缩宫素诱发大鼠痛经模型和前列腺素E1诱发小鼠痛经模型法，对大鼠离体子宫收缩活动的影响。结果：温经化瘀合剂能明显增加小鼠子宫重量，减轻二甲苯引起的小鼠耳肿胀度，减少缩宫素所致大鼠扭体反应次数和前列腺素E1所致小鼠扭体反应次数，既能使正常大鼠离体子宫收缩，又能对抗缩宫素对大鼠离体子宫的收缩作用。结论：温经化瘀合剂具有镇痛、抗炎作用，对子宫有双向调节作用。     

基于大鼠离体子宫活动的益母草注射液缩宫活性部位筛选

目的探讨益母草注射液(A2)缩宫活性部位。方法建立正常大鼠离体子宫模型,采用累积加药的方式,依次分别给予从益母草注射液总生物碱分离提取的部位B1(主含水苏碱)、B2(主含水苏碱、胡芦巴碱)、B3(主含胡芦巴碱、胆碱)、B4(主含胡芦巴碱、胆碱、总氨基酸),用十六道生理记录分析系统记录子宫收缩曲线,观察给药前后子宫收缩活动力、幅度和频率的变化。结果A2、B1、B2、B4可明显升高大鼠离体子宫收缩活力、最大值、最小值和平均值;B3明显降低上述指标(P0.05或P0.01),并可缓解缩宫素导致的痉挛。结论 A2中存在兴奋子宫的活性部位B1、B2、B4和舒张子宫的部位B3。     

乳癖消颗粒各提取部位对缩宫素致小鼠离体子宫痉挛收缩的影响

目的探讨乳癖消颗各提取部位对缩宫素所致小鼠离体子宫痉挛收缩的影响。方法利用小鼠离体子宫痛经模型,通过BL-420生物机能实验系统记录小鼠离体子宫平滑肌的活动,以子宫收缩的幅度、频率以及活力为指标,评价乳癖消颗粒各提取部位对缩宫素所致小鼠离体子宫痉挛收缩的影响。结果乳癖消颗粒各提取部位对缩宫素所致小鼠离体子宫痉挛收缩幅度的抑制作用顺序为:水溶性部位正丁醇部位石油醚部位乙酸乙酯部位;对频率以及活力的抑制作用顺序为:水溶性部位正丁醇部位乙酸乙酯部位石油醚部位;并呈剂量依赖性。结论乳癖消颗粒各提取部位都能显著抑制缩宫素所致离体子宫的痉挛收缩,其中,水溶性部位抑制作用最明显,为开发乳癖消颗粒的抗痛经新适应症的研究提供了实验依据。     

桃红四物汤用于原发性痛经的整合效应评价研究

目的:评价桃红四物汤及各分离部位对热板致小鼠疼痛,醋酸致小鼠扭体反应,小鼠痛经模型及离体子宫收缩的影响,探讨效应部位群的物质基础。方法:采用大孔树脂分离制备各部位样品(TH-1～TH-15);整体动物实验,采用热板致小鼠疼痛的模型,观察样品对小鼠痛阈值的影响;采用醋酸致小鼠扭体反应的模型,观察样品对小鼠扭体反应的影响;采用小鼠痛经模型,观察样品对小鼠扭体反应,子宫匀浆中钙离子和NO的影响。离体器官实验,采用缩宫素诱导的小鼠离体子宫收缩模型,观察样品对离体子宫收缩指标的影响。用HPLC-DAD法对效应部位群进行含量测定。结果:整合生物效应评价表明,桃红四物汤效应部位除整方水煎液(TH-2)和醇沉上清部位(TH-4)外,TH-9,TH-10和TH-11是主要的效应部位群,对其主要效应成分进行分析,化合物类型包括单萜苷类、苯酞类、有机酸类等。结论:桃红四物汤用于痛经的主要效应部位群为TH-9,TH-10和TH-11,是水溶性小分子部位经大孔树脂吸附醇梯度洗脱得到的30%～50%活性部分,与TH-10,TH-11比较,TH-9的效应较强,这可能与其所含的化合物类型和含量密切相关。     

益母草与马齿苋配伍对小鼠离体子宫收缩的影响

目的:观察益母草与马齿苋配伍对小鼠离体子宫平滑肌收缩性能的影响。方法:雌性小鼠实验前3d,每天皮下注射苯甲酸雌二醇0.2mL/只。实验时颈椎脱臼处死小白鼠,剖宫取出子宫置于与压力换能器相连的麦氏浴槽中,持续供氧,记录正常收缩曲线,然后加入益母草与马齿苋配伍药物或含药血清,记录加药后的子宫收缩曲线。结果:加药或含药血清后的子宫平滑肌肌张力与对照组相比明显增加,表明益母草与马齿苋配伍能增加子宫平滑肌收缩力,加强子宫的收缩能力。结论:益母草与马齿苋配伍直接给药或含药血清均能增加小鼠离体子宫平滑肌的张力,促进子宫收缩,有利于止血。     

二色补血草对大鼠离体子宫活动影响的实验研究

目的:观察二色补血草对大鼠离体子宫活动的影响。方法:实验前2d,皮下注射己烯雌酚催情大鼠,处死动物,摘取子宫,于麦氏浴槽中用台氏液灌流,温度31℃士0.3℃,用多道生理信号采集系统记录仪记录给药前后收缩曲线,计算给药前后子宫收缩的强度差、频率差、子宫活动力差,并进行统计学处理。结果:1对正常大鼠离体子宫活动的影响:二色补血草组用药后子宫活动力增值大于空白对照组(P<0.05),其中大、中剂量组的活动力增值明显大于宫血宁组(P<0.05)。2对缩宫素所致大鼠离体子宫的影响:宫血宁组用药后子宫收缩的强度增值大于空白对照组(P<0.05),而二色补血草组用药后子宫收缩强度增值明显低于宫血宁组及空白对照组(P<0.05)。结论:二色补血草对正常离体子宫具有兴奋作用,而对缩宫素引起的大鼠离体子宫强直收缩具有抑制作用,即二色补血草对大鼠离体子宫因其所处的功能状态不同,可产生不同的药理作用。     

傅氏生化汤与芎姜合剂缩宫效应的血清药动学研究

目的：比较傅氏生化汤、芎姜合剂缩宫作用的药动学参数、时-效关系和量-效关系。方法：应用血清药理学方法，按照离体子宫实验法测定含药血清对正常小鼠离体子宫肌活动力的影响。结果：两个处方达到缩宫药峰时间不同，量-效关系有差别，但在各药峰时间灌胃给药血清的缩宫作用相近。结论：由傅氏生化汤衍生的芎姜合剂具有与生化汤相似的缩宫作用。     

归附痛经颗粒的抗痛经作用

目的:研究归附痛经颗粒的抗痛经作用。方法:用己烯雌酚和缩宫素制造小鼠痛经模型,观察归附痛经颗粒对小鼠痛经模型的影响;用肌动描记技术记录子宫环的收缩曲线,研究归附痛经颗粒对离体大、小鼠子宫收缩的影响。结果:归附痛经颗粒能明显减少雌激素和缩宫素诱发的痛经模型小鼠的扭体次数;抑制离体大鼠和小鼠子宫自发性收缩,抑制缩宫素诱发的离体大鼠子宫的强直收缩。结论:归附痛经颗粒有明显的抗痛经作用。     

四物益母汤对正常和缩宫素处理大鼠离体子宫活动力的影响

目的观察四物益母汤对大鼠离体子宫活动力的影响。方法采用大鼠离体子宫灌流的实验方法，观察四物益母汤对正常和缩宫素处理的离体子宫活动力、频率和振幅的影响。结果四物益母汤能增加正常大鼠离体子宫的活动力及振幅（P〈0．05），但对缩宫素引起的子宫平滑肌过度兴奋具有抑制作用（P〈0．05）。结论四物益母汤对大鼠离体子宫平滑肌有双向作用，可使正常的离体子宫平滑肌的活动力及振幅增加，使过度兴奋的子宫平滑肌抑制。     

满药赤雹果水提取物治疗原发性痛经的实验研究

目的 观察赤雹果水提取物(WEFT)对缩宫素诱发小鼠原发性痛经模型及离体大鼠子宫平滑肌兴奋性的影响,为临床用其治疗原发性痛经提供实验依据.方法 采用缩宫素制备小鼠原发性痛经模型,以小鼠扭体反应潜伏期和扭体次数为指标,观察WEFT对缩宫素诱发原发的痛反应的影响;以离体子宫平滑肌收缩幅度和频率为指标,观察WEFT对缩宫素诱发大鼠离体子宫平滑肌兴奋性的影响,借以评价WEFT对原发性痛经治疗作用.结果 ①WEFT 2.0 g/kg,1.0 g/kg组小鼠扭体反应的潜伏期(7.23±1.62)min,(6.49±1.81)min 显著延长,与空白对照组(4.32±1.13) min比较差异显著 (P＜0.05或P＜0.01);扭体反应次数(14.3±3.46)次/30 min,17.4±3.53)次/30 min,与空白对照组(32.3±5.64)次/30 min比较差异显著 (P＜0.01).②在大鼠离体子宫实验中,WEFT的终浓度在0.1～1.6 mg/ml范围内可剂量依赖性的抑制缩宫素诱发的大鼠离体子宫的兴奋性,显著降低离体子宫的收缩的幅度,减少收缩频率,与对照组比较差异有显著意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 WEFT对缩宫素诱发小鼠原发性痛经模型的痛反应和大鼠离体子宫平滑肌兴奋性有显著的抑制作用,提示WEFT对原发性痛经有显著的治疗作用.     

基于药效实验的当归痛经宁复方提取工艺优选

目的：通过药效实验筛选当归痛经宁复方的提取工艺。方法：通过镇痛实验（小鼠扭体法）、对实验性小鼠痛经模型的影响、对未孕小鼠离体子宫平滑肌自发活动的影响及对缩宫素所致雌性小鼠离体子宫剧烈收缩的影响等四项实验,对水提醇沉、醇提、部分超临界CO2萃取部分渗漉等3种工艺的提取效果进行比较、筛选。结果：当归痛经宁复方3种不同提取工艺对醋酸或缩宫素所致的小鼠扭体反应、对正常小鼠离体子宫平滑肌和由缩宫素所致的离体子宫平滑肌的收缩频率、收缩幅度、活动力及曲线下面积均有明显抑制作用（P〈0.05）,其中采用部分超临界CO2萃取部分渗漉工艺的提取物抑制作用最为显著（P〈0.05）。结论：经药效筛选,选择部分药材超临界萃取部分药材渗漉为当归痛经宁复方的提取工艺。     

芎姜复方不同提取部位的宫缩效应研究

目的分析芎姜复方不同提取部位的缩宫作用。方法运用血清药理学方法,按照离体子宫实验法测定正常小鼠离体子宫肌活动力。结果醇提物缩宫作用显著,而挥发油、水提醇沉物具抗子宫收缩作用;醇提物中氯仿提取物的缩宫作用明显优于其他提取物。结论同一处方的不同提取部位及不同组分具有不同的药效。