长链非编码RNA PCA3对前列腺癌细胞LNCaP增殖和侵袭的影响及其机制的研究

目的 探讨长链非编码RNA PCA3对前列腺癌细胞LNCaP增殖和侵袭的影响并初步分析其机制。方法 将lncRNA PCA3抑制物转染前列腺癌细胞LNCaP,沉默细胞中lncRNA PCA3的表达,分为untreated组（对照组）、si-PCA3组（沉默PCA3）、miR-218 mimics组（转染miR-218模拟物）、si-PCA3+miR-218 inhibitor组（同时沉默PCA3和miR-218）,实时定量PCR检测各组LNCaP细胞lncRNA PCA3、miR-218和Runx2表达,双荧光素酶报告基因实验分别分析lncRNA PCA3和miR-218,miR-218和Runx2的靶向关系,采用CCK-8法检测各组LNCaP细胞增殖能力,Transwell实验检测各组LNCaP细胞侵袭能力,Western blot检测各组LNCaP细胞Runx2蛋白表达。结果 转染PCA3抑制物能够显著降低LNCaP细胞lncRNA PCA3和Runx2的表达,上调miR-218的表达（P<0.05）;转染miR-218模拟物,可以降低Runx2的表达（P<0.05）;同时抑制PCA3和miR-218表达后,Runx2表达无明显变化（P>0.05）,双荧光素酶实验表明lncRNA PCA3可以靶向调控miR-218,miR-218可以靶向调控Runx2。lncRNA PCA3表达抑制后,LNCaP细胞的增殖与侵袭能力显著降低（P<0.05）。结论 抑制lncRNA PCA3可以抑制前列腺癌细胞LNCaP的增殖和侵袭,其机制可能与调控miR-218/Runx2轴表达有关。     

过表达miR-136-5p对子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖、侵袭以及凋亡的影响

目的 探讨miR-136-5p和E2F1在子宫内膜癌中的表达以及过表达miR-136-5p对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响.方法 通过生物信息学网站分析TCGA数据库中子宫内膜癌miR-136-5p以及E2F1 mRNA和蛋白的表达.采用miR-136-5p模拟物转染子宫内膜癌HEC-1A细胞,设置空白组(未进行转染)、miR-136-5p阴性对照组(转染无义序列)、miR-136-5p模拟物转染组(转染miR-136-5p模拟物),采用CCK-8方法检测各组HEC-1A细胞的增殖能力,Transwell实验检测各组HEC-1A细胞的侵袭能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot检测HEC-1A细胞E2F1蛋白表达,应用Targetscan软件预测E2F1是否为miR-136-5p的靶基因,应用双荧光素酶报告基因实验验证.结果 生物信息学分析显示,与正常组相比,子宫内膜癌组织中miR-136-5p表达下调,E2F1的mRNA和蛋白表达上升.miR-136-5p模拟物转染组HEC-1A细胞中miR-136-5p表达上升,细胞增殖能力下降、侵袭能力下降,细胞凋亡率上升.miR-136-5p过表达组HEC-1A细胞中E2F1蛋白表达下降,生物信息学分析结果显示,E2F1是miR-136-5p的靶基因,双荧光素酶实验证实E2F1为miR-136-5p的靶基因.结论 过表达miR-136-5p可以抑制HEC-1A细胞增殖与侵袭,促进凋亡,其机制可能与调控E2F1的表达相关.     

长链非编码RNA MALAT1靶向miR-129对前列腺癌PC3细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA MALAT1对前列腺癌PC3细胞增殖和侵袭的影响,初步分析其机制.方法 将lncRNA MALAT1抑制物转染前列腺癌PC3细胞,分为untreated组(对照组)、si-NC组(阴性对照组)及si-MALAT1组(沉默MALAT1),实时定量PCR检测各组PC3细胞lncRNA MALAT1和miR-129的表达,双荧光素酶报告基因实验分析lncRNA MALAT1和miR-129的靶向关系,CCK-8方法检测各组PC3细胞增殖能力,Transwell实验检测各组PC3细胞侵袭能力.结果 转染MALAT1抑制物能够降低PC3细胞lncRNA MALAT1的表达,上调miR-129的表达(P＜0.05);双荧光素酶实验表明lncRNA MALAT1可以靶向调控miR-129.lncRNA MALAT1表达抑制后,PC3细胞的增殖与侵袭能力下降(P＜0.05).结论 沉默lncRNA MALAT1可以抑制前列腺癌细胞PC3的增殖和侵袭,其机制可能与调控miR-129表达有关.     

长链非编码RNA HOTAIR对甲状腺癌TPC-1细胞增殖和侵袭的影响及机制的研究

目的 探讨长链非编码RNA HOTAIR对甲状腺癌TPC-1细胞增殖和侵袭的影响及可能机制.方法 体外培养甲状腺癌TPC-1细胞,转染lncRNA HOTAIR干扰序列,应用实时定量PCR检测lncRNA HOTAIR和miR-20b的表达,生物信息学和双荧光素酶报告基因实验分析lncRNA HOTAIR和miR-20b的靶向关系,MTT法检测各组TPC-1细胞增殖能力,Transwell实验检测各组TPC-1细胞的侵袭能力.结果 转染lncRNA HOTAIR干扰序列能够降低TPC-1细胞lncRNA HOTAIR的表达后,上调miR-20b的表达(P＜0.05);沉默lncRNA HOTAIR表达后,TPC-1细胞的增殖与侵袭能力下降(P＜0.05);生物信息学分析及双荧光素酶实验结果显示,lncRNA HOTAIR可以靶向调控miR-20b.结论 沉默lncRNA HOTAIR可以抑制甲状腺癌细胞TPC-1的增殖和侵袭,其机制可能与靶向调控miR-20b表达有关.     

LncRNA TUG1靶向miR-141-3p影响甲状腺癌细胞的增殖和侵袭

目的 检测LncRNA TUG1在甲状腺癌细胞中的表达,初步探讨LncRNA TUG1对甲状腺癌细胞增殖和侵袭的影响及机制。方法 采用qRT-PCR法检测甲状腺癌B-CPAP、TPC-1细胞株中LncRNA TUG1和miR-141-3p的表达水平,应用生物信息学预测lncRNA TUG1和miR-141-3p的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验进行验证。将lncRNA TUG1干扰序列转染TPC-1细胞,应用qRT-PCR法检测lncRNA TUG1和miR-141-3p的表达,MTT法检测各组TPC-1细胞增殖能力,Transwell实验检测各组TPC-1细胞的侵袭能力。结果 与正常甲状腺上皮细胞相比,BCPAP、TPC-1中LncRNA TUG1表达水平明显升高（P<0.05）,miR-141-3p表达水平明显下降（P<0.05）,生物信息学分析及双荧光素酶实验结果显示,lncRNA TUG1可以靶向调控miR-141-3p。转染TUG1干扰序列能够降低TPC-1细胞lncRNA TUG1的表达,上调miR-141-3p的表达（P<0.05）;沉默lncRNA T...     

长链非编码RNA NEAT1对人白血病HL-60细胞增殖和侵袭的影响

目的 探索长链非编码RNA NEAT1对白血病HL-60细胞增殖和侵袭的影响,并初步分析其机制。方法 体外培养人白血病HL-60细胞,将lncRNA NEAT1模拟物转染白血病HL-60细胞,高表达NEAT1后,MTT方法检测HL-60细胞增殖能力,Transwell实验检测HL-60细胞侵袭能力。实时定量PCR检测各组细胞NEAT1和miR-181a-5p的表达,双荧光素酶报告基因实验分析NEAT1和miR-181a-5p的靶向关系。结果 转染NEAT1模拟物后,HL-60细胞的增殖和侵袭能力下降（P<0.05）,HL-60细胞中NEAT1的表达升高,miR-181a-5p的表达下降（P<0.05）,双荧光素酶实验表明NEAT1是miR-181a-5p的靶基因。结论高表达lncRNA NEAT1使白血病细胞HL-60的增殖和侵袭能力下降,其机制可能与下调miR-181a-5p表达有关。     

微小RNA-181a-5p靶向PTEN对人白血病HL-60细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-181a-5p对白血病HL-60细胞增殖和侵袭的影响,并初步分析其机制。方法体外培养人白血病HL-60细胞,将miR-181a-5p抑制物转染白血病HL-60细胞,MTT法检测各组HL-60细胞的增殖能力,Transwell实验检测各组HL-60细胞的侵袭能力。实时定量PCR和Western blot检测各组细胞miR-181a-5p和PTEN的表达,双荧光素酶报告基因实验分析miR-181a-5p和PTEN的靶向关系。结果 MTT和Transwell实验结果显示,转染miR-181a-5p抑制物后,HL-60细胞的增殖和侵袭能力下降（P<0.05）,miR-181a-5p的表达下降,PTEN的表达上升（P<0.05）。双荧光素酶实验表明PTEN是miR-181a-5p的靶基因。结论 抑制miR-181a-5p使白血病细胞HL-60的增殖和侵袭能力下降,其机制可能与上调PTEN表达有关。     

长链非编码RNA ATB靶向miR-144对人黑色素瘤细胞A375增殖与侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA ATB对人黑色素瘤细胞A375增殖与侵袭的影响及可能机制。方法将A375细胞分为untreated组(对照组)、si-NC组(阴性对照组)与si-ATB组(实验组),转染小干扰RNA沉默A375细胞中lncRNA ATB的表达,实时定量PCR方法检测lncRNA ATB与miR-144的表达,双荧光素酶分析验证二者的靶向关系;MTT方法检测A375细胞增殖能力的变化,Tanswell实验检测A375细胞侵袭能力的变化。结果转染小干扰RNA能够显著降低A375细胞中lncRNAATB的表达水平,上调miR-144的表达水平(P0.01),荧光素实验表明lncRNA ATB直接靶向miR-144。沉默lncRNAATB后,A375细胞的增殖与侵袭能力显著降低(P0.01)。结论 lncRNA ATB通过靶向调控miR-144的表达促进人黑色素瘤细胞A375增殖与侵袭。     

长链非编码RNA H19对鼻咽癌HNE-1细胞增殖和侵袭的影响及可能机制

目的探讨长链非编码RNA H19(lncRNAH19)对鼻咽癌HNE-1细胞增殖和侵袭的影响以及可能机制。方法 qPCR检测鼻咽癌HNE-1细胞与正常鼻咽上皮细胞NP-69中lncRNA H19与miR-107的表达。CCK-8法检测HNE-1细胞增殖能力的变化,Transwell实验检测HNE-1细胞侵袭能力的变化;采用双荧光素酶报告分析验证lncRNA H19与miR-107的靶向关系。结果与正常鼻咽上皮细胞NP-69相比,lncRNA H19在鼻咽癌HNE-1细胞中的表达水平显著升高,miR-107表达水平显著降低。lncRNA H19-siRNA转染后,HNE-1细胞中lncRNA H19的表达水平降低,miR-107表达水平显著升高,HNE-1细胞的增殖与侵袭能力显著降低。双荧光素酶报告分析结果证实,miR-107是lncRNA H19的下游靶点。结论 lncRNA H19通过靶向调控miR-107调控鼻咽癌HNE-1细胞的增殖与侵袭能力。     

lncRNA GAS5通过miR-26a靶向调控JAK1/STAT3信号通路对子宫内膜样癌细胞凋亡及侵袭的影响

目的 探讨lncRNA GAS5通过miR-26a靶向调控JAK1/STAT3信号通路对子宫内膜样癌（EC）细胞凋亡及侵袭的影响。方法 选取2018年4月—2021年5月经我院首次确诊并进行广泛性子宫切除及腹膜后淋巴结清扫术治疗的新鲜无菌EC患者癌灶及相对癌旁组织（距离肿瘤5 cm外）共45对。使用定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测EC患者癌灶及相对癌旁组织、人子宫内膜癌细胞系ISK（高分化）、HEC-1-B（中分化）、人EC细胞系KLE（低分化）、子宫内膜腺上皮细胞（正常细胞）中lncRNA GAS5的表达。依据转染不同分为NC组（阴性对照质粒）、lncRNA GAS5组（转染lncRNA GAS5过表达质粒）、anti-miR-26a组（转染miR-26a干扰质粒）、lncRNA GAS5+miR-26a组（转染lncRNA GAS5过表达质粒+miR-26a过表达质粒）。使用EdU实验、AnneinV-FITC/PI双染流式细胞术检测各组细胞的凋亡、细胞活力和增殖能力;使用荧光素酶报告基因分析荧光素酶活性;通过qRT-PCR和Western blot分析各组细胞中lncRNA...     

Comprehensive sequence analysis of HLA-DQA1 and -DQB1 alleles and characterization of DRB1-QAP-DQA1-DQB1 haplotypes

It is well known that both chain and β chain of HLA-DQ are highly polymorphic. However the polymorphisms outside the hypervariable region were not fully examined so far. To further clarify the polymorphisms in DQ genes, we determined the nucleotide sequences of full length cDNA, spanning from the leader sequence to the stop codon, from 15 DQA1 alleles and 15 DQB1 alleles. We identified several new DQ alleles which had identical exon 2 sequence and were different in other exons. On the basis of the sequence analyses, a comprehensive PCR-based oligotyping system for DQA1 gene was established. We then characterized DRB1-QAP(DQA1 promoter)-DQA1-DQB1 haplotypes of B-lymphoblastoid cell lines homozygous for HLA and healthy unrelated Japanese and Norwegian populations. It was revealed that DQA1 alleles, which were identical in exon 2 but different in other exons, showed close linkage disequilibrium with diferent characteristic DRB1, QAP and DQB1 alleles. These results suggest that DR-DQ haplotypes have been generated in the early stage of molecular evolution.     

Initial Changes of Rat Leukemia Induced by 1-Ethyl-1-Nitrosourea and 1-Butyl-1-Nitrosourea

The initial histological changes of leukemia were investigated in rats to which 1-ethyl- 1-nitrosourea and 1 butyl 1 nitrosourea were orally administered. The appearance of orthochromatic erythroblasts in the peripheral blood was used as the index of the initial stage of leukemia. The rat leukemia progressed from solitary lesions to scattered and further diffuse lesions. These leukemias are thought to begin as one, or only a few nodular foci, mainly in the bone marrow and partly in the spleen. Acta Pathol Jpn 42: 158–165, 1992.     

Initial changes of rat leukemia induced by 1-ethyl-1-nitrosourea and 1-butyl-1-nitrosourea.

The initial histological changes of leukemia were investigated in rats to which 1-ethyl-1-nitrosourea and 1-butyl-1-nitrosourea were orally administered. The appearance of orthochromatic erythroblasts in the peripheral blood was used as the index of the initial stage of leukemia. The rat leukemia progressed from solitary lesions to scattered and further diffuse lesions. These leukemias are thought to begin as one, or only a few nodular foci, mainly in the bone marrow and partly in the spleen.     

FoxO1 基因对Jurkat 细胞FoxO1-KLF2-S1P1 通路的调节作用

目的:通过构建FoxO1 表达和干扰慢病毒载体,建立细胞内FoxO1-KLF2-S1P1 信号通路调控研究模型,观察FoxO1 过表达、干扰表达在Jurkat 细胞内对其下游分子表达及功能的影响。方法:构建FoxO1 表达和干扰表达慢病毒载体,分别感染Jurkat 细胞,采用荧光定量PCR、Western blot 和流式细胞术检测S1P1、CD62L、CCR7、CD69 mRNA 水平和蛋白分子的表达。结果:FoxO1 过表达组于感染后120 h FoxO1、KLF2、S1P1 和CD62L mRNA 水平显著增高(P<0.05),FoxO1、FoxO1-p 和KLF2 胞浆蛋白水平增高,S1P1+细胞和CD62L+ 细胞比率增高(P<0.05),CCR7+ 细胞和CD69+ 细胞未见显著改变(P>0.05)。FoxO1 干扰组于转染后120 h FoxO1、KLF2、S1P1 和CD62L mRNA 水平降低(P<0.05),FoxO1、FoxO1-p 和KLF2 胞浆蛋白水平低于对照组,S1P1+细胞百分比增多(P<0.05) ,但S1P1+细胞和CD62L+细胞在72 h 时减少(P<0.05)。结论:FoxO1 表达和干扰慢病毒载体转染Jurkat 细胞并调节KLF2、S1P1 和CD62L 等分子的表达,为开展细胞内FoxO1-KLF2-S1P1 信号通路调控和细胞相关功能的研究打下了基础。     

韩国人CYP450 1A1、CYP450 2E1和GSTM1、GSTT1、GSTP1基因座遗传多态性分析

目的 调查代谢相关的CYP4501A1、CYP4502E1和GSTM1、GSIT1、GSTP1基因座在韩国人群中的遗传多态性分布状况。方法 采用多重聚合酶链式反应、聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术，分析300名韩国健康大学生的CYP1A1基因3′端限制性内切酶Msp Ⅰ位点、CYP2E1基因5′端转录调节区Pst Ⅰ位点和GSTM1、GSTT1缺失与存在、GSTP1基因第5外显子BsmA Ⅰ位点的基因型，计算基因型和基因频率。结果 CYP1A1基因型频率为ml／ml型39．7％、ml／m2型49．7％、m2／m2型10．7％，基因频率为ml 0．645、m2 0．355。CYP2E1基因型频率为cl／cl型66．7％、cl／c2型30％、c2／c2型3．3％，基因频率为C1 0．818、C2 0．182。GSTM1基因缺失型频率为53．3％。GSTT1基因缺失型频率为54．7％。GSTP1基因型频率为Ile／Ile型62％、Ile／Val型34．3％、VaL／Val型3．7％，基因频率为Ile 0．792、Val 0．208。基因分布符合Hardy-Weirtberg平衡定律。结论 韩国人CYP1A1、CYP2E1、GSTM1、GSTT1基因分布与我国人群较为相近，半数以上人缺乏GSTM1和GSTT1基因，纯合缺失型频率超过印度人的3倍。     

Differential regulation of CYP1A1 and CYP1B1 expression in resveratrol-treated human medulloblastoma cells

Resveratrol induces differentiation and Fas-independent apoptosis of medulloblastoma cells by a largely unknown mechanism. CYP1A1 and 1B1 are involved in resveratrol-mediated tumor suppression but their expression in medulloblastoma cells and their relevance to anti-medulloblastoma activity of resveratrol have not been described. The statuses of CYP1A1 and 1B1 in UW228-3 medulloblastoma cells without and with resveratrol treatments were elucidated in this study with ethoxyresorufin O-deethylation assay, followed by RT-PCR, immunocytochemical staining and Western blot hybridization. CYP1A1/1B1 enzymatic activity was low in UW228-3 cells but became several folds higher upon resveratrol treatments. CYP1A1 was undetectable and CYP1B1 was expressed in normally cultured cells. Accompanied by the increased fraction of apoptosis, enhanced CYP1A1 and downregulated CYP1B1 were observed in resveratrol-treated cells in time- and dose-related fashions. Our results demonstrate for the first time that in the medulloblastoma cell system, CYP1A1 upregulation is paralleled with resveratrol-induced differentiation and apoptosis, while CYP1B1 may not be an essential element in metabolic activation of resveratrol in those cells. CYP1A1 and 1B1 are resveratrol response genes and potential chemosensitive markers of medulloblastoma cells.