物理疗法联合重复经颅磁刺激对慢性脑缺血大鼠认知功能及突触可塑性的影响及机制

目的 探究物理疗法联合重复经颅磁刺激(rTMS)改善慢性脑缺血大鼠认知功能及突触可塑性的影响及作用机制。方法 40只SPF级SD大鼠，随机分为假手术组(Sham)、模型组(Model)、物理治疗组(PT)、rTMS组及PT联合rTMS组(PT+rTMS),每组8只。Morris水迷宫检测大鼠认知功能；HE染色观察大鼠海马区病理损伤，Nissl染色观察大鼠海马神经元损伤；Golgi-Cox染色观察大鼠海马CA1区神经元树突结构和生长情况；Western blot检测海马组织突触可塑性标志物突触素(SYN)、突触后密度蛋白-95(PSD-95)、生长相关蛋白-43(GAP-43)、糖原合成酶激酶-3(GSK-3β)、β-连环蛋白(β-catenin)、磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)、p-β-catenin蛋白表达。结果 与模型组相比，PT、rTMS及PT+rTMS均显著改善慢性脑缺血大鼠认知功能，改善大鼠海马病理损伤和神经元结构，增加海马区神经元数量，增加神经元树突分支数和树突棘密度，增加海马组织SYN、PSD-95、GAP-43蛋白表达；增加β-catenin、p-GSK-3β蛋...     

牛膝活性提取物对大鼠海马神经元生长的促进作用

目的:研究牛膝活性提取物(ABPPk)对体外培养的大鼠海马神经元生长的促进作用.方法:以体外原代培养的胎鼠海马神经元为模型,通过微管蛋白(β-tubulinⅢ)免疫荧光染色,采用Leica Qwin软件测量不同浓度ABPPk处理24 h对海马神经元突起延伸和突起分支的影响;通过突触结合蛋白(SYN)和突触后致密蛋白(PSD95)双标免疫荧光染色,采用LeicaQwin软件测量ABPPk(250 ng/ml)处理7d对海马神经元突触形成的影响;通过免疫印迹定量分析不同浓度ABPPk作用24 h对海马神经元生长相关蛋白(GAP-43)表达水平的影响,作用7d对PSD-95表达水平的影响,以及ABPPk(250 ng/ml)作用不同时间对磷酸化胞外信号调节激酶(ERK1/2)水平的调节.分析ABPPk对海马神经元的作用与ERK通路的关系.结果:ABPPk可有效促进海马神经元的突起延伸和突触形成,免疫印迹结果显示,ABPPk能显著增加海马神经元GAP-43和PSD-95蛋白表达,作用5 min即能显著上调ERK磷酸化水平,作用15 min ERK磷酸化水平达到峰值,PD98059可抑制该过程.结论:ABPPk能促进体外培养的海马神经元突起生长和突触形成,上调GAP-43和PSD-95蛋白水平,其作用可能与ERK通路的激活有关.     

圣愈汤上调microRNA-132表达调节缺血性中风小鼠突触功能改善神经元损伤

目的 探索圣愈汤对缺血性中风小鼠海马神经元突触功能的影响及其作用机制。方法 40只C57BL/6小鼠随机分为假手术组（sham）、模型组（model）、圣愈汤低剂量组（SYT-L）及圣愈汤高剂量组（SYT-H）,每组10只。采用中动脉栓塞法（MCAO）法复制缺血性中风小鼠模型;采用抓力测试与疲劳转棒测试观察小鼠行为学变化;HE染色观察小鼠海马组织结构变化;高尔基染色观察海马神经元树突棘密度;Western blot检测小鼠细胞骨架蛋白-95(PSD-95)及生长相关蛋白-43(GAP-43)表达情况;原位杂交及Real-time PCR检测小鼠海马microRNA-132表达。结果 与模型组相比,圣愈汤低、高剂量组小鼠抓力与转棒时间显著增加,小鼠海马组织结构改善,海马神经元树突棘密度显著增加,PSD-95及GAP-43表达显著增加,且小鼠海马内microRNA-132表达水平显著增加。结论 圣愈汤通过上调海马microRNA-132表达调节缺血性中风小鼠突触功能,继而改善神经元损伤。     

重组人促红细胞生成素对SCI大鼠Akt和p-Akt表达的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rHuEPO)对脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)大鼠Akt与p-Akt表达的影响。方法成年健康Wistar大鼠72只,雌雄不限,按随机数字表法分为假手术组、脊髓损伤组和重组人促红细胞生成素治疗组,参照Nystrom's压迫方法制作大鼠脊髓压迫损伤模型,按照存活时间再分为脊髓损伤6h,12h,24h,3d组。免疫组化和Western blot方法检测Akt、p-Akt在各组大鼠脊髓表达的变化。结果免疫组化和Westernblot结果发现,脊髓Akt、p-Akt蛋白阳性表达的平均光密度值SCI组低于假手术组(P<0.05),重组人促红细胞生成素治疗组显著高于SCI组(P<0.05)。结论 rHuEPO可通过上调Akt、p-Akt蛋白的表达参与脊髓损伤修复。     

抑制NgR信号通路对糖尿病大鼠学习记忆的改善作用

目的:探讨Nogo受体(NgR)信号通路在糖尿病大鼠学习记忆中的作用及其可能机制。方法:雄性SD大鼠随机分为对照组、糖尿病组、siNgR组、siRNA空白组。除对照组外,其余各组均腹腔注射链脲佐菌素(60 mg/kg)制备糖尿病模型。对照组、糖尿病组双侧海马CA1区注射病毒保存液10μl;siNgR组、siRNA空白组分别注射腺相关病毒包装的siNgR和病毒阴性对照液10μl。12周后水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力。免疫荧光检测NgR、突触素(SYP)蛋白表达。免疫印迹检测海马NgR、SYP、生长相关蛋白43(GAP-43)蛋白表达。结果:与对照组相比,糖尿病组海马NgR、GAP-43表达均增多,SYP表达减少,学习记忆能力明显下降。与糖尿病组相比,siNgR组NgR表达减少,GAP-43、SYP表达均增多,学习记忆能力明显改善。siRNA空白组与糖尿病组相比无明显变化。结论:抑制NgR信号通路可改善糖尿病大鼠学习记忆能力,其机制可能与GAP-43、SYP蛋白表达上调有关。     

microRNA-124通过调控PI3K/Akt2信号通路改善七氟醚诱导的新生大鼠神经缺陷

目的 探讨microRNA-124对七氟醚诱导新生大鼠神经缺陷的影响及可能机制。方法 40只SD大鼠随机分为对照组（CON）、七氟醚组（SEV）、Agomir NC+SEV组、miR-124 Agomir+SEV组,每组10只。Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力;双染法检测海马神经元凋亡情况;RT-qPCR方法检测大鼠BDNF、PI3K、Akt2 mRNA的表达;Western blot检测海马组织中BDNF、 PI3K、Akt2蛋白表达。结果 与CON组比较,SEV组逃避潜伏期延长,目标象限时间百分比缩短,穿越平台次数减少,海马组织中BDNF、 PI3K、Akt2蛋白表达降低（P<0.001）,海马神经元细胞凋亡增加;与SEV组比较,miR-124 Agomir+SEV组目标象限时间百分比延长（P<0.01）、逃避潜伏期缩短（P<0.05）,穿越平台次数增加（P<0.05）,海马组织中BDNF、PI3K、Akt2蛋白表达升高（P<0.01）,海马神经元细胞凋亡减少。结论 miR-124可能通过调控PI3K/Akt2信号通路改善七氟醚诱导的大鼠神经功能...     

重组人促红细胞生成素与骨髓间充质干细胞的迁移及黏附

背景：促红细胞生成素可促进内皮祖细胞的增殖分化并增强其黏附性。 目的：观察重组人促红细胞生成素干预对人骨髓间充质干细胞迁移和黏附能力及相关细胞信号传导通路的影响。 方法：体外培养人骨髓间充质干细胞,使用重组人促红细胞生成素干预第6代人骨髓间充质干细胞。分别用PI3K/Akt通路特异抑制剂Ly294002或p38MAPK通路特异激动剂anisomycin或ERK1/2通路特异抑制剂U0126预处理。 结果与结论：重组人促红细胞生成素可使人骨髓间充质干细胞的PI3K/Akt通路磷酸化水平升高,抑制p38MAPK通路磷酸化水平,对人骨髓间充质干细胞的ERK通路和总Akt、总p38MAPK水平无明显影响。重组人促红细胞生成素作用组中迁移细胞数目显著高于对照组(P < 0.01),黏附细胞数亦明显增加(P < 0.01),PI3K/AKT通路特异抑制剂Ly294002预处理后重组人促红细胞生成素对迁移能力的作用消失,p38MAPK通路特异激动剂anisomycin预处理对两种作用影响均不明显。提示重组人促红细胞生成素具有增强人骨髓间充质干细胞迁移和黏附能力的作用,其增强迁移能力的作用与激活人骨髓间充质干细胞的PI3K/Akt通路有关,但是它对黏附能力的作用与PI3K/Akt和p38MAPK通路均无关。     

氟西汀对抑郁大鼠治疗的作用机制

目的:观察氟西汀对抑郁大鼠治疗的作用机制。方法:选取30只成年雄性SD大鼠,按照随机数字表随机分为正常组、模型组、氟西汀组,每组10只。采用慢性温和不可预见性应激刺激(Chronic unpredictable mild stress,CUMS)合并孤养法建立大鼠抑郁模型,在CUMS刺激4W后氟西汀组灌胃给予氟西汀(10mg·kg-1)2W;正常组及模型组同时灌胃等体积的生理盐水。通过体重变化、蔗糖水消耗和旷场实验对大鼠进行行为学检测,HE染色观察海马神经元形态及数目改变;蛋白印迹和RT-PCR测定海马组织突触素(Synaptophysin,SYP)和突触后密致蛋白-95(Postsynaptic density-95protein,PSD-95)白及mRNA的表达水平。结果:与正常组相比,模型组4个时间点(7d,14d,21d,28d)行为学评分升高(P0.05)。与模型组比较,氟西汀组4个时间点行为学评分明显降低(P0.05)。HE结果显示,模型组海马神经元排列紊乱,细胞层变薄;Western blot结果显示,与正常组相比,模型组的SYP蛋白表达显著下降,PSD-95的蛋白水平显著升高;RT-PCR结果显示,模型组大鼠海马PSD-95mRNA表达显著升高,SYP mRNA表达较正常组显著降低(P0.05)。结论:氟西汀可明显促进CUMS大鼠神经元突触重塑,其机制可能与上调CUMS大鼠海马组织中SYP的表达,抑制PSD-95表达相关。     

右美托咪定激活PI3K/Akt信号通路对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨右美托咪定在大鼠脑缺血再灌注损伤的作用及可能机制。方法 采用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型,随机将大鼠分为假手术组（Sham组）、模型组（MCAO/R组）和右美托咪定处理组（Dex组）;于术后24h对各组大鼠进行神经功能评分和组织病理学的检测;采用TUNEL染色法检测脑细胞的凋亡;采用ELISA检测IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10的水平;Western blot方法检测PI3K和p-Akt的表达。结果 与MCAO/R组相比,DEX能够显著提高脑缺血再灌注大鼠的神经功能评分,改善组织病理学损伤,显著降低脑细胞的凋亡,显著抑制IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平,促进IL-10的释放,显著上调脑缺血再灌注大鼠脑组织PI3K和p-Akt等蛋白的表达（P<0.05）。结论 右美托咪定改善脑缺血再灌注损伤与激活PI3K/Akt信号通路相关。     

重组人生长停滞特异性蛋白6预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注PI3K/AKT的影响

目的研究生长停滞特异性蛋白6(Gas 6)对Wistar大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响,探讨其与PI3K/Akt通路的关系。方法线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,将大鼠随机分成4组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、Gas6预处理组(Gas6组)、Gas6预处理联合PI3K抑制剂Wortmannin组(Gas6+W组)。按Zea-Longa 5分制法测定各组神经功能评分,干湿重法测定脑组织含水量、TTC染色测定脑梗死面积、Western-blot法检测脑组织p-Akt的蛋白表达。结果 I/R组较Sham组神经功能缺损、脑含水量和梗死区均增加,p-Akt表达上调;Gas6组较I/R组,神经功能缺血损伤、脑含水量和梗死面积显著减少,p-Akt表达进一步上调;而给与PI3K抑制剂后,Gas6+W组与Gas6组比较,神经功能缺损、脑含水量和梗死面积显著增加,p-Akt的表达显著下调。结论 Gas6对于大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,可能与激活PI3K/Akt信号通路相关。