仙芪眩宁颗粒对豚鼠耳蜗膜迷路积水AQP2表达的影响

[目的] 观察仙芪眩宁颗粒对耳蜗膜迷路积水豚鼠模型水通道蛋白2（AQP2）表达的影响并探讨其治疗梅尼尔病的作用机制。[方法] 50只健康豚鼠随机平均分为5组：正常对照组、模型组、低、中、高剂量治疗组,除对照组外均采取腹腔注射醋酸去氨加压素构建膜迷路积水豚鼠模型,3个治疗组按豚鼠体质量胃饲,药物剂量分别为6.1、12.2、24.4 g/kg。听性脑干反应（ABR）检测豚鼠听功能;膜迷路积水程度通过耳蜗切片苏木精-伊红（HE）染色,计算中阶面积与中阶和前庭阶面积和的比值R;采用免疫组织化学和蛋白印迹（Western Blot）法检测豚鼠耳蜗AQP2表达水平。[结果] 模型组听力受损ABR阈值升高,各治疗组ABR阈值与对照组相近（P>0.05）;耳蜗切片模型组R值高于对照组（P<0.01）,而各治疗组R值与对照组相比未见统计学差异（P>0.05）;扫描电镜结果显示模型组出现毛细胞损伤,治疗组趋于正常;免疫组织化学法显示模型组内耳AQP2表达水平高于对照组和各治疗组（P<0.01）;Western blot结果显示模型组、低剂量治疗组AQP2表达高于对照组,而其在高剂量治疗组的表达低于对照组（P<0.01）。[结论] 仙芪眩宁颗粒可减轻豚鼠膜迷路积水程度,其机制可能与AQP2表达的下调有关。     

《金匮要略》泽泻汤超临界萃取物对膜迷路积水模型影响的研究

目的:研究泽泻汤超临界萃取物对膜迷路积水豚鼠模型的影响。方法:采用醋酸去氨加压素复制膜迷路积水模型,以豚鼠颞骨切片耳蜗蜗管面积和蜗管加前庭阶面积之和之比值以及耳蜗及肾的水通道蛋白-2的免疫组化表达为药效学的主要指标,研究泽泻汤超临界萃取物对膜迷路积水豚鼠模型的作用。结果:模型组与正常对照组比较有非常显著性差异(P0.01);模型组与泽泻汤超临界萃取液治疗组比较有非常显著性差异(P0.01)。水通道蛋白-2免疫组化表达实验组较模型组减弱。结论:泽泻汤超临界萃取物对膜迷路积水模型有较好作用,且机制可能为抑制其内耳及肾脏水通道蛋白-2的表达。     

《金匮》泽泻汤对梅尼埃病豚鼠模型膜迷路积水的影响

目的：本文探讨《金匮》泽泻汤水煎液对梅尼埃病模型膜迷路积水的影响,为,临床治疗本病提高药效学依据。方法：采用腹腔注射醋酸去氨加压素法复制梅尼埃病豚鼠膜迷路积水模型,以颞骨切片蜗管面积与蜗管面积和前庭阶面积之和的比值等为指标,研究《金匮》泽泻汤对其的影响。结果：泽泻汤高剂量组、中剂量组与模型组比较,有显著性差异（P〈0．05）;泽泻汤低剂量组与模型组比较无显著性差异（P〉0．05）;泽泻汤中剂量组与低剂量组比较,有显著性差异（P〈0．05）。结论：《金匮》泽泻汤具有显著的减轻膜迷路积水的程度,证实了本方治疗梅尼埃病的有效性。     

泽泻汤对梅尼埃病豚鼠模型膜迷路积水的治疗作用及其机制研究

目的：本文探讨泽泻汤对梅尼埃病豚鼠模型膜迷路积水的治疗作用及其机制研究,为临床使用本方提供实验依据,并揭示其可能的作用机制。方法：采用腹腔注射醋酸去氨加压素法复制梅尼埃病膜迷路积水模型,以颞骨切片蜗管面积与蜗管面积和前庭阶面积之和的比值、耳蜗的免疫组化AQP-2的表达强度等为指标,研究泽泻汤对其影响。结果：泽泻汤组与模型组的蜗管面积与总面积的比值比较,有显著性差异（P＜0.01）;免疫组化中AQP-2在泽泻汤组耳蜗表达强度较模型组明显降低。结论：《金匮要略》中的泽泻汤具有显著的减轻膜迷路积水程度的作用,证实了本方治疗梅尼埃病的有效性;并揭示了本方治疗梅尼埃病的作用机制可能是通过直接抑制内耳血管纹、螺旋韧带的AQP-2表达,借助抑制内耳中的AVP-V2R-cAMP途径,从而有利于减轻耳蜗积水。     

苓桂术甘汤对梅尼埃病豚鼠耳蜗AQP4蛋白表达的影响

目的基于"病痰饮者,当以温药和之"理论用经典方苓桂术甘汤治疗豚鼠梅尼埃病模型,以AQP4蛋白作为实验指标,观察膜迷路积水情况,探讨梅尼埃病可能的发生机制。方法将30只成年健康红目豚鼠随机分为空白组(10只)、模型组(10只)、苓桂组(10只),除空白组外,其余两组豚鼠均腹腔注射醋酸去氨加压素,进行造模,6μg·kg~(-1)·d~(-1),连续注射10 d。造模成功后,苓桂组豚鼠每日予苓桂术甘汤2.79 g/kg灌胃,空白组、模型组则以1 mL生理盐水灌胃,7 d后取材。选则HE染色法来观察各组豚鼠耳蜗积水情况,免疫组化法观察AQP4蛋白在各组豚鼠耳蜗的表达;Western Blot观察AQP4蛋白在各组豚鼠耳蜗的表达水平;探讨苓桂术甘汤治疗梅尼埃病可能发生的机制。结果与空白组比较,AQP4蛋白在模型组表达上调,模型组与空白组比较具有显著性差异(P<0.01);苓桂组表达含量较模型组表达下调,苓桂组与模型组比较具有显著性差异(P<0.01)。结论 AQP4蛋白表达的上调可能是导致豚鼠膜迷路积水的原因之一。苓桂术甘汤可下调豚鼠耳蜗组织中AQP4蛋白的表达。     

泽泻汤抗膜迷路积水有效组分群筛选的研究

目的观察《金匮》泽泻汤各组分群的抗膜迷路积水作用,筛选出抗膜迷路积水的有效组分群。方法从白术中提取出组分A、B,从泽泻中提取出组分C、D,后将各组分进行配伍,组成A+C、A+D、B+C、B+D、A+B+C、A+B+D、A+C+D、B+C+D、A+B+C+D的组分群。将豚鼠分为空白组、模型组、泽泻汤组及各相应组分群组共12组,除空白组外,采用腹腔注射去氨加压素的方法复制豚鼠膜迷路积水模型。观察各组豚鼠膜迷路积水的变化情况。结果统计软件分析可知模型组与各组比较,有显著差异的是空白组,有差异的是泽泻汤组、B+D组、A+B+C组、A+B+D组、A+C+D组、A+B+C+D组。结论有抗膜迷路积水作用的组分群为B+D、A+B+C、A+B+D、A+C+D、A+B+C+D。且模型复制较为成功。     

电针对膜迷路积水模型豚鼠耳蜗形态及水通道蛋白表达的影响

目的:探讨电针治疗梅尼埃病的可能调节机制.方法:将40只豚鼠随机分为空白组、模型组、药物组和电针组,每组10只.除空白组外,其余3组采用腹腔注射醛固酮方法造膜迷路积水模型.空白组、模型组采取与电针组相同的固定,不予治疗;药物组予氢氯噻嗪溶液5 mg/kg灌胃,每日1次,连续治疗10 d;电针组予“百会”“听宫”电针治疗,每日1次,连续治疗10d.采用比浊法检测各组豚鼠血清离子浓度,HE染色法观察耳蜗积水程度,免疫组化染色法检测耳蜗水通道蛋白1(AQP1)表达的情况.结果:①空白组未出现膜迷路积水;模型组出现中、重度膜迷路积水;电针组和药物组出现轻度膜迷路积水.②电针组K+、Ca2+浓度高于模型组及药物组(均P＜0.01);Na+浓度低于模型组(P＜0.01),高于药物组(P＜0.01);Cl-浓度高于药物组(P＜0.01),但与模型组比较差异无统计意义(P＞0.05).③模型组AQP1表达面积比值较空白组降低(P＜0.01);电针组AQP1表达面积比值较模型组升高(P＜0.01),较药物组降低,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论:电针可减轻豚鼠膜迷路积水,其作用机制可能与上调耳蜗AQP1的表达有关,并受离子浓度变化的影响.     

艾灸听宫对大鼠膜迷路积水的影响

目的:观察艾灸听宫对膜迷路积水模型大鼠耳蜗形态、血浆血管加压素(arginine vasopressin,AVP)浓度及耳蜗水通道蛋白2(aquaporin2,AQP2)表达的影响,探讨艾灸听宫对膜迷路积水的可能调节机制。方法:将28只Wistar大鼠随机分为空白对照组,模型对照组,托伐普坦组及艾灸听宫组,每组7只。除外空白对照组,其余各组均采用腹腔注射AVP的方法复制膜迷路积水模型。空白对照组与模型对照组采取与艾灸听宫组相同的固定,不予治疗;托伐普坦组予托伐普坦溶液5 mg/kg灌胃;艾灸听宫组于听宫穴施灸20 min。各治疗组均每日治疗1次,连续治疗10 d。干预结束后,行HE染色法观察大鼠耳蜗积水程度,计算蜗管横截面积与蜗管加前庭阶横截面积之和的比值(R值);放免法检测血浆AVP浓度;免疫组化法检测耳蜗血管纹AQP2蛋白的表达水平。结果:(1)模型对照组出现膜迷路积水,前庭膜向前庭阶方向不同程度的隆起扩张,R值较空白对照组增加(P<0.01);托伐普坦组与艾灸听宫组前庭膜隆起程度均较模型对照组不同程度的减轻,R值均较模型对照组降低(P<0.01,P<0.05);艾灸听宫组R值与托伐普坦组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)模型对照组大鼠血浆AVP浓度较空白对照组升高(P<0.01);托伐普坦组与艾灸听宫组血浆AVP浓度均较模型对照组降低(均P<0.05);艾灸听宫组血浆AVP浓度与托伐普坦组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(3)模型对照组耳蜗血管纹AQP2表达水平较空白对照组升高(P<0.01);托伐普坦组与艾灸听宫组AQP2表达水平均较模型对照组降低(均P<0.01);艾灸听宫组AQP2表达水平与托伐普坦组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:艾灸听宫可减轻大鼠膜迷路积水,其作用机制可能与对AVP-AQP2系统的调节有关。     

建立标准梅尼埃病膜迷路积水豚鼠模型方法实验研究

目的：研究建立一种操作方法简单、稳定可靠、重现性高的豚鼠膜迷路积水模型。方法：采用腹腔注射醋酸去氨加压素不同给药时间和剂量诱导豚鼠膜迷路积水,以颞骨切片蜗管面积与蜗管面积和前庭阶面积之和的比值等为指标,比较不同给药时间和剂量造模方法对指标的影响。结果：不同造模方法均可诱发膜迷路积水,以先注射醋酸去氨加压素4μg／kg,连续注射7d后,将剂量加大为6μg／kg,继续注射3d的造模方法最佳。结论：此法优于现有的其他建立膜迷路积水的方法,推荐优先选用。     

不同频率电针对内淋巴积水豚鼠耳蜗形态及血浆cAMP、AQP2的影响

目的 观察不同频率电针刺激百会穴和听宫穴对梅尼埃病内淋巴积水(EH)模型豚鼠耳蜗积水程度、耳蜗螺旋神经节超微结构及血浆环磷酸腺苷(cAMP)、水通道蛋白2(AQP2)浓度变化的影响,探究电针治疗EH的适宜频率,并分析其关键起效机制,为临床运用针灸治疗梅尼埃病提供实验基础。方法 将健康雄性豚鼠随机分为空白组、模型组、针刺组、2 Hz电针组、100 Hz电针组,其中每组8只用于检测耳蜗积水程度、血浆c AMP、AQP2浓度变化;另外每组5只用于检测耳蜗螺旋神经节超微结构变化。采用腹腔注射醋酸去氨加压素(DDAVP)制作EH模型。2 Hz电针组造模后采用频率为2 Hz的电针刺激百会穴及一侧听宫穴,留针20 min,每日1次,连续10 d;100 Hz电针组选用频率100 Hz的电针,其余操作同2 Hz电针组。针刺组予针刺百会及一侧听宫穴,但不通电。5组豚鼠均于干预结束后检测耳蜗积水程度,并计算中阶面积/(中阶面积+前庭阶面积)占比,检测血浆c AMP、AQP2浓度,检测耳蜗螺旋神经节超微结构变化。结果 与空白组比较,模型组豚鼠耳蜗积水程度增加,螺旋神经节细胞变性损伤,耳蜗中阶面积/(中阶面积...     

不同频率电针对膜迷路积水豚鼠耳蜗形态及血浆AVP的影响

目的观察不同频率电针对膜迷路积水豚鼠耳蜗形态及血浆血管加压素(AVP)浓度变化的影响,优选出电针治疗膜迷路积水适宜参数,初步探讨电针治疗梅尼埃病可能机制。方法健康雄性豚鼠40只随机分为空白组、模型组、电针组(据不同频率分为3个亚组),每组8只。除空白组,其余各组均通过腹腔注射醋酸去氨加压素建立膜迷路积水模型。空白组不予干预;模型组造模后采取与电针组相同固定方式;电针组各个亚组取百会和听宫穴,分别采用2 Hz、15 Hz、2/15 Hz3种不同频率进行治疗。干预结束后检测耳蜗积水程度,并计算R值,检测血浆AVP浓度。结果与空白组比较,模型组豚鼠耳蜗R值增加(P0.01);与模型组比较,各电针组豚鼠耳蜗R值均降低(P0.05);各电针组比较,2/15 Hz电针组较2 Hz电针组、15 Hz电针组降低,差异有统计学意义(P0.05);2 Hz电针组、15 Hz电针组比较差异无统计学意义(P0.05)。与空白组比较,模型组豚鼠血浆AVP浓度增加(P0.01);与模型组比较,各电针组豚鼠血浆AVP浓度均降低(P0.05);各电针组比较,2/15 Hz电针组较2 Hz电针组、15 Hz电针组降低,差异有统计学意义(P0.05);2 Hz电针组、15 Hz电针组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论电针治疗能减轻豚鼠膜迷路积水,其中2/15 Hz电针效果最佳,其作用机制可能与下调血浆AVP的表达有关。     

苓桂术甘汤合泽泻汤对痰饮型耳石症复位后残余头晕及复发的作用研究

目的：探讨苓桂术甘汤合泽泻汤对痰饮型耳石症复位后残余头晕及复发的作用。方法：将144例痰饮型耳石症复位后残余头晕患者按随机数字表分为A组、B组、C组和D组,4组均服用甲磺酸倍他司汀片,B组、C组、D组分别予以苓桂术甘汤、泽泻汤、苓桂术甘汤合泽泻汤治疗,均治疗3周。比较4组治疗前后头晕症状、总有效率、前庭症状指数（VSI）、Berg平衡量表（BBS）评分、不良反应;统计耳石症复发率。结果：治疗前4组眩晕障碍量表（DHI）各维度评分和总分差异无统计学意义（P>0.05）,治疗后4组DHI各维度评分和总分均低于治疗前（P<0.05）,且治疗后D组DHI各维度评分和总分均低于其余3组,B组和C组均低于A组（P<0.05）;4组总有效率差异有统计学意义（P<0.05）,D组总有效率高于A组（P<0.01）;治疗后4组VSI评分均下降（P<0.05）,且D组低于其余3组（P<0.05）,B组、C组低于A组（P<0.05）;治疗后4组BBS评分均升高（P<0.05）,且D组高于其余3组（P<0.05）,B组、C组高于A组（P<0.05...     

耳石复位法配合苓桂术甘汤合泽泻汤治疗良性阵发性位置性眩晕疗效初探

1 病因病机 良性阵发性位置性眩晕(BPPV)是一种以由于头部位置改变而引起短暂性阵发性眩晕和眼震为特点的疾病,通常眩晕持续时间仅为数秒,是最常见的前庭周围性眩晕.BPPV的确切病因和发病机制不明.目前一般认为有两类:一类为特发性(原发性)BPPV,另一类为症状性(继发性)BPPV.特发性BPPV发病有多种学说,多数倾向嵴顶结石症学说和管结石症学说.近年来,也有观点认为前庭神经元退变从而使耳石器失去对半规管感受器的抑制作用是BPPV主要的病理机制.BPPV属于中医学"眩晕病"范畴,仲景称之为"眩"、"冒".张仲景所论述的眩晕多与阳气有关.如阳虚水泛,阳气被郁,阴竭阳脱,清阳不升等.     

肾气虚模型大鼠肾脏AQP2mRNA表达的研究

目的：观察肾气虚模型大鼠肾脏水通道蛋白2（AQP2）表达的情况。方法：将SD大鼠20只随机分为模型组和对照组，用RT—PCR方法检测肾脏AQP2mRNA的表达。结果：肾气虚模型大鼠肾脏AQP2mRNA的表达较对照组减少（P〈0．01）。结论：肾气虚模型大鼠肾脏AQP2mRNA的表达减少，从而导致肾脏AQP2表达减少，引起尿量增多。本实验为中医学“肾主水”理论提供了实验依据。     

实验性肺气虚对大鼠肾组织AQP2的表达影响

目的：观察肺气虚模型大鼠肾组织AQP2表达的影响，以及血浆中内皮素（endohlin，ET）水平的变化。方法：大鼠20只随机分为模型组和对照组，应用放射免疫方法测定血中ET含量；应用Western blot方法测定AQP2蛋白含量的变化。结果：肺气虚模型组肾组织AQP1表达高于正常组；模型组血浆ET明显升高，与对照组比较，差异性显著（P〈0．05）。结论：肺气虚模型大鼠肾组织AQP2表达增强，内皮素可能促进肾组织AQP2袁达。本实验结果为中医学肺肾相关理论提供了实验依据。     

基于“行津液、运膏脂”理论探讨泽泻汤对高脂血症大鼠PI3K/AKT/FoxO1/AQP9途径的影响及分子机制

目的 基于“行津液、运膏脂”理论,以PI3K/AKT/Foxo1/AOP9调节脂质代谢为切入点,探讨泽泻汤防治血脂异常的分子机制。方法 将75只健康SD大鼠随机分为正常对照组﹑高脂血症组﹑泽泻汤低剂量组﹑泽泻汤中剂量组以及泽泻汤高剂量组,每组15只。模型组采用高脂饲料喂养复制高脂血症动物模型,造模4周后评价模型建立情况;造模成功后给药组连续给药30d,观察各组小鼠一般情况变化,使用全自动生物化学分析仪检测血清中TC﹑TG﹑LDL-C﹑HDL-C含量;油红O染色观察各组大鼠肝脏脂质沉积;HE染色观察各组大鼠肝脏组织脂质沉积情况;免疫组化观察大鼠肝脏AQP9表达情况;试剂盒检测甘油三酯﹑甘油﹑Na⁺和K⁺表达水平;RT-qPCR法检测肝脏PI3K、AKT、FoxO1、AQP9、MTP、ApoB mRNA水平;Western-blot法检测肝脏PI3K、AKT、FoxO1、AQP9、MTP、ApoB蛋白表达。结果 给药结束后与正常对照组相比,高脂血症组TG、TC、LDL-C水平均显著升高,HDL-C水平显著下降;肝小叶出现大量脂肪滴;免疫组化AQP...     

泽泻汤对血管平滑肌细胞迁移及相关因子MMP-2和MMP-9表达的影响

目的:观察泽泻汤对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)的迁移作用及其相关因子MMP-2、MM-9表达的影响。方法:通过体外ox-LDL(50mg/L)诱导VSMCs,建立VSMCs迁移的动脉粥样硬化(AS)细胞模型,采用20%泽泻汤含药血清干预后,采用划痕实验测定VSMCs迁移,采用Western blot检测MMP-2、MMP-9蛋白表达情况。结果:VSMCs在ox-LDL的刺激下,其迁移能力与对照组比较有明显提升;加入泽泻汤含药血清后,细胞迁移距离变短,其迁移能力受到抑制。ox-LDL组MMP-2、MMP-9蛋白表达较对照组明显增强,而泽泻汤血清干预后MMP-2、MMP-9蛋白表达较ox-LDL组则明显受到抑制。结论:泽泻汤可抑制ox-LDL诱导的VSMCs迁移和MMP-2、MMP-9蛋白表达,提示泽泻汤抑制VSMCs迁移的作用机制可能与影响MMP-2和MMP-9的表达有关。     

补肾活血汤对慢性心衰大鼠心功能及AQP-2的影响

目的:探讨补肾活血汤对慢性心衰大鼠的疗效及心肾靶向功能的作用机制。方法:采用32周龄以上自发性高血压大鼠(SHR)为慢性心衰大鼠,分为补肾活血汤高、中、低剂量组(5.7,2.85,1.43 g.kg-1),卡托普利组0.05 g.kg-1、模型对照组,Wistar大鼠为正常对照组,予以相应药物干预,8周后检测超声心动指标及肾脏组织水通道蛋白2(AQP-2)的水平。结果:补肾活血汤可延缓心衰大鼠的左室重构进程,左室后壁厚度(LVAWT)由2.93 mm降至2.72 mm、左室舒张末期内径(LVEDD)由7.65 mm降至7.57 mm、左室收缩末期内径(LVESD)由3.87 mm降至3.68 mm、短轴缩短率(LVFS)由0.44提高至0.48、左室射血分数(LVEF由0.42提高至0.47),药物高、中、低剂量组较模型组有统计学意义(P<0.05);可降低心衰大鼠肾脏组织AQP-2的表达,平均由2.1%降至1.63%(P<0.05),其作用均与药物浓度呈正相关。结论:补肾活血汤可改善慢性心衰大鼠的心功能,并通过降低肾脏组织AQP-2的水平,从而发挥利水改善心室重构的作用。     

益心泰颗粒对慢性心力衰竭兔肾髓质AQP2蛋白及mRNA表达的影响

目的探讨益心泰颗粒对慢性心力衰竭兔肾髓质AQP2蛋白及mRNA的影响。方法采用阿霉素耳缘静脉注射建立慢性心衰兔模型,将造模成功的家兔分为模型组、益心泰低（2.1 g/kg）、中（4.2 g/kg）、高剂量（8.4 g/kg）组和呋塞米组（2 mg/kg）,另设正常对照组;模型组和正常对照组灌胃同等体积的生理盐水,1次/天,共干预4周。观察尿量、观察肾髓质病理形态学变化,并检测肾髓质AQP2 mRNA及其蛋白表达量。结果与正常对照组比较,模型组尿量减少（P<0.01）,肾髓质AQP2蛋白及mRNA表达显著增加（P<0.01）。与模型组比较,各给药组尿量增加（P<0.01）,肾髓质AQP2蛋白及mRNA表达降低（P<0.01）。与益心泰低剂量组比较,益心泰中、高剂量组尿量增加（P<0.01）,AQP2 mRNA表达明显降低（P<0.01）,益心泰高剂量组AQP2蛋白表达明显降低（P<0.01）。肾髓质病理变化以模型组最为明显,各给药组均有不同程度的减轻,以益心泰中、高剂量组较为明显。结论益心泰颗粒可能通过下调肾髓质AQP2 mRNA及其蛋白表达水平,增加尿量,发挥利水,从而改善慢性心力衰竭。