普伐他汀对肿瘤坏死因子-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞syndecan-4蛋白表达的影响

目的 观察普伐他汀对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的离体大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和syndecan-4蛋白表达的影响.方法 体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,分别应用终浓度为20 ng/ml TNF-α、10 μmol/ml普伐他汀、20μmol/ml普伐他汀、20 ng/ml TNF-α+10 μmol/ml普伐他汀、20 ng/ml TNF-α+20 μmol/ml普伐他汀分别作用24 h,并设立相关对照组进行比较.采用MTS/PMS法确定VSMCs的增殖状态,利用Western blot蛋白免疫印迹法测定VSMCs中syndecan-4蛋白的表达.结果 (1)与对照组比较,TNF-α组能显著刺激大鼠VSMCS的增殖(P<0.05),而普伐他汀不同剂量组单独应用对大鼠VSMCs的增殖均无明显作用(P>0.05).TNF-α联合普伐他汀共同作用组与TNF-α组比较,VSMCs增殖均有显著减少(P<0.05).(2)Western blot蛋白免疫印迹法测定显示:与对照组比较,TNF-α组能显著刺激VSMCs的syndecan-4蛋白表达(P<0.05),而普伐他汀不同剂量组单独应用对VSMCs的syndecan-4蛋白表达均无明显影响(P>0.05).TNF-α联合普伐他汀共同作用组与TNE-α组比较,VSMCs的syndecan-4蛋白表达显著降低(P<0.05).结论 普伐他汀可明显抑制TNF-α诱导的VSMCs增殖及细胞syndecan-4蛋白的表达.     

阿司匹林对肿瘤坏死因子-α诱导的大鼠平滑肌细胞syndecan-4蛋白及p44/42丝裂原活化蛋白激酶表达的影响

目的观察阿司匹林(ASA)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的离体大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)syndecan-4蛋白及磷酸化p44/42丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)表达的影响。方法体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,分别用20 ng/mL TNF-α、1 mmol/L ASA、2 mmol/L ASA、20 ng/mL TNF-α+1 mmol/L ASA、20 ng/mL TNF-α+2 mmol/L ASA作用24 h,并设立相关对照组进行比较。采用MTS/PMS法确定VSMCs的增殖状态,Western blot蛋白免疫印迹法测定VSMCs中syndecan-4蛋白及磷酸化p44/42MAPK表达。结果 (1)与对照组比较,TNF-α组能显著刺激大鼠VSMCs的增殖(P<0.01),单独应用ASA对大鼠VSMCs的增殖无明显作用(P>0.05)。TNF-α联合ASA组与TNF-α组比较,联用能明显抑制TNF-α诱导的大鼠VSMCs增殖(P<0.01)。(2)与对照组比较,TNF-α组能显著刺激大鼠VSMCs中syndecan-4蛋白及磷酸化p44/42MAPK的表达(P<0.01),单独应用ASA对二者的表达无明显作用(P>0.05)。TNF-α联合ASA组与TNF-α组比较,联用可显著降低这两种蛋白的表达水平(P<0.05)。结论一定剂量的ASA可明显抑制TNF-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞syndecan-4蛋白及磷酸化p44/42MAPK蛋白的表达。     

肿瘤坏死因子α对人脐静脉内皮样细胞增殖及syndecan-4蛋白表达的影响

目的 观察肿瘤坏死因子α(TNF-α)对体外培养的人脐静脉内皮样细胞株ECV304增殖及syndecan-4蛋白表达的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮样细胞株ECV304,分别应用1、10、20、100 ng/ml的TNF-α作用24 h及36 h并设立对照组进行比较,采用MTS/PES法确定人脐静脉内皮样细胞的增殖状态.利用Western blotting蛋白免疫印迹法测定细胞syndecan-4蛋白的表达情况.结果 24 h各组细胞增殖率分别为对照组(1.956±0.214),TNF-α100 ng/ml组(2.154±0.250),TNF-α20 ng/ml组(2.26±0.151),TNF-α10 ng/ml组(2.118±0.205),TNF-α1 ng/ml组(2.106±0.136).统计分析显示低至1 ng/ml的TNF-α仍能明显刺激人脐静脉内皮样细胞的增殖(P＜0.05),其中以TNF-α 20 ng/ml组细胞增殖最显著P＜0.05).36 h各剂量组的细胞增殖率均明显低于24 h的细胞增殖率(P＜0.05).TNF-α对人脐静脉内皮样细胞的syndecan-4蛋白表达有显著的增强作用(P＜0.05).结论 TNF-α对体外培养的人脐静脉内皮样细胞的增殖及syndecan-4蛋白表达均有明显的促进作用,但随着时间的改变,这种作用有所变化.     

重组人白介素-10对TNF-α诱导的血管外膜成纤维细胞syndecan-4蛋白表达的影响

目的观察重组人白介素-10（IL-10）对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）刺激的血管外膜成纤维细胞（NIH／3T3细胞）增殖和syndecan-4蛋白表达的影响。方法采用体外培养的NIH／3T3细胞,分别应用终质量浓度为20ng／mL TNF-α、100ng／mL IL-10、200ng／mL IL-10、100ng／mL IL-10联用20ng／mL TNF-α、200ng／mL IL-10联用20ng／mL TNF-α作用24h,并设对照组进行比较,采用MTS／PMS法确定NIH／3T3细胞的增殖状态,利用Western blot蛋白免疫印迹法测定NIH／3T3细胞中syndecan-4蛋白的表达。结果（1）MTS／PMS法测定各组细胞增殖率统计分析显示：与对照组比较,TNF-α组能显著刺激NIH／3T3细胞的增殖（P〈0．001）,而IL-10不同剂量组单独应用对NIH／3T3细胞的增殖均无明显作用（P〉0．05）。IL-10联合TNF-α共同作用组与TNF—α组比较,NIH／3T3细胞增殖均显著减少（P〈0．01）。（2）Western blot蛋白免疫印迹法测定显示：与对照组比较,TNF—α组能显著刺激NIH／3T3细胞中的syndecan-4蛋白表达（P〈0．05）,而IL-10不同剂量组单独应用对NIH／3T3细胞的syndecan-4蛋白表达均无明显影响（P〉0．05）。IL-10联合TNF-α共同作用组与TNF-α组比较,NIH／3T3细胞的syndecan-4蛋白表达显著降低（P〈0．001）。结论IL—10可明显抑制TNF-α诱导的NIH／3T3细胞增殖及细胞syndecan-4蛋白的表达。     

肿瘤坏死因子-α对乳鼠心脏成纤维细胞增殖及syndecan-4蛋白表达的影响

目的观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对乳鼠心脏成纤维细胞增殖及syndecan-4蛋白表达的影响。方法采用胰酶消化法体外培养SD乳鼠的心脏成纤维细胞,分别用质量浓度为5、10、20、30 ng/mL TNF-α作用24 h,并设立空白对照组进行比较。采用MTS/PMS法检测TNF-α对心脏成纤维细胞增殖的影响;Western blot法检测TNF-α对心脏成纤维细胞syndecan-4蛋白表达的影响。结果与对照组比较,5、10 ng/mL TNF-α对心脏成纤维细胞增殖及细胞syndecan-4蛋白表达无明显影响(P>0.05);而20、30ng/mL TNF-α均能促进心脏成纤维细胞增殖及细胞syndecan-4蛋白的表达(P<0.05),但不存在剂量依赖性。结论一定剂量的TNF-α可以促进心脏成纤维细胞的增殖及细胞syndecan-4蛋白的表达。     

Slit2蛋白对TNF-α诱导的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖迁移的影响

目的：观察Slit2蛋白对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖迁移的影响。方法采用川北医学院第二临床医学院实验室培养的大鼠VSMCs ,实验分两部分,第一部分：Slit2单独作用,分为正常对照组和实验组（Slit2蛋白浓度分别为：50、75、100、125、150 ng／mL）;第二部分：Slit2与TNF‐α共同作用,分为正常对照组、阳性对照组（含TNF‐α10 ng／mL）和实验组（TNF‐α10 ng／mL＋Slit250 ng／mL、TNF‐α10 ng／mL＋Slit275 ng／mL、TNF‐α10 ng／mL＋Slit2100 ng／mL、TNF‐α10 ng／mL＋Slit2125 ng／mL、TNF‐α10 ng／mL＋Slit2150 ng／mL）。分别采用CCK‐8及transwell小室法检测各组细胞的增殖及迁移能力。结果第一部分：实验组与对照组OD值及迁移细胞数目比较差异均无统计学意义（P＝0．516,P＝0．52）。第二部分：正常对照组与阳性对照组比较细胞迁移数目差异有统计学意义（P＝0．00）,实验组细胞迁移数较阳性对照组明显减少;CCK‐8结果显示实验组和阳性对照组与正常对照组OD值比较差异有统计学意义（P＜0．05）,而实验组与阳性对照组OD值比较差异无统计学意义（P＝0．173）。结论 Slit2对VSMCs增殖无影响,但能抑制TNF‐α诱导的VSMCs迁移。     

鱼腥草素衍生物对TNF-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞Syndecan-4表达的影响

目的观察一种鱼腥草素衍生物（houttuyfonate derivative,HD）对肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factorα,TNF-α）诱导的大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）增殖及Syndecan-4表达的影响。方法以终浓度分别为TNF-α20ng/mL、HD 4μg/mL、HD 8μg/mL、TNF-α20 ng/mL＋HD 4μg/mL及TNF-α20 ng/mL＋HD 8μg/mL对体外培养的VSMCs作用24 h,并设立相关对照组,用MTS/PMS法检测VSMCs的增殖,用Western blot蛋白免疫印迹法测定Syndecan-4的表达情况。结果与对照组相比,HD各剂量组单独应用对VSMCs的增殖无明显作用（P〉0.05）;HD 4μg/mL和8μg/mL可分别抑制TNF-α对VSMCs的增殖作用（P〈0.05）。Western blot测定显示：与对照组相比,HD各剂量组单独应用对Syndecan-4的表达无明显影响（P〉0.05）,HD 4μg/mL和8μg/mL均可抑制TNF-α刺激后Syndecan-4的表达（P〈0.05）。结论HD对TNF-α刺激后的VSMCs的增殖及Syndecan-4表达均有抑制作用。     

姜黄素对肿瘤坏死因子-α诱导的大鼠平滑肌细胞Syndecan-4蛋白及p44/42丝裂原活化蛋白激酶表达的影响

观察姜黄素对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导的离体大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和Syndecan-4蛋白及p44/42丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）表达的影响。方法分别用20 ng/ml TNF-α、20 μmol/L姜黄素、20 ng/ml TNF-α联合20 μmol/L姜黄素作用于体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞24 h,并设对照组进行比较。MTS/PMS法检测VSMCs的增殖状态,Westernblot蛋白免疫印迹法测定VSMCs中Syndecan-4蛋白及磷酸化p44/42MAPK的表达。结果（1）细胞增殖结果经统计分析,与对照组比较,TNF-α能显著刺激大鼠VSMCs的增殖（P<0.01）,而单独应用姜黄素对大鼠VSMCs增殖无明显作用（P>0.05）。TNF-α联合姜黄素组与 TNF-α组比较,大鼠 VSMCs 的增殖受到抑制（P<0.01）;（2）统计分析蛋白表达结果,与对照组比较,TNF-α组能显著上调大鼠 VSMCs 中 Syndecan-4 蛋白及磷酸化 p44/42MAPK 的表达（P<0.01）,而单独应用姜黄素对大鼠VSMCs中Syndecan-4蛋白及磷酸化p44/42MAPK的表达无明显作用（P>0.05）。与TNF-α组比较,TNF-α联合姜黄素组中大鼠VSMCs中Syndecan-4蛋白及磷酸化p44/42MAPK的表达显著下调（P<0.01）。结论 一定剂量的姜黄素可显著抑制TNF-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和Syndecan-4蛋白及磷酸化p44/42MAPK的表达。     

组织蛋白酶B促进肿瘤坏死因子α诱导的血管平滑肌细胞凋亡

目的 以肿瘤坏死因子α/放线菌素(TNF-α/act D)诱导细胞凋亡作为一种血管平滑肌细胞损伤模型,探讨组织蛋白酶B在TNF-α/act D诱导血管平滑肌细胞凋亡中的作用.方法 通过脂质体转染人主动脉平滑肌细胞株pcDNA3.1-组织蛋白酶B和pSilencer 2.1-组织蛋白酶B质粒,经过筛选鉴定建立组织蛋白酶B过表达组与基因沉默组,以TNF-α/act D诱导人主动脉平滑肌细胞凋亡,分别从细胞活性分析,形态学观察及凋亡蛋白检测细胞凋亡情况,并在组织蛋白酶B过表达细胞中加入组织蛋白酶抑制剂(E64d)和组织蛋白酶B特异性抑制剂(CA-074ME),观察细胞活性改变.结果 噻唑蓝分析正常培养条件下组织蛋白酶B过表达组、基因沉默组细胞活性和对照组无明显差别;经TNF-α/act D诱导后细胞活性明显降低,与对照组(14.60%±1.34%)比较,过表达组(9.98%±1.04%)明显下降,加入E64d、CA-074ME组(18.23%±1.05%,17.40%±1.03%)较过表达组活性增加;基因沉默组(21.30%±2.37%)活性增加;吖啶橙/溴化乙啶染色分析得到相似结果;Western印迹Bcl-2蛋白表达,基因沉默组显著高于对照组,而过表达组水平明显低于对照组,E64d、CA-074ME组的水平均明显高于过表达组.Bax蛋白表达在各组间差异无统计学意义.结论 过表达组织蛋白酶B能够促进TNF-α诱导的血管平滑肌细胞凋亡,而组织蛋白酶B基因沉默以及加入组织蛋白酶抑制剂可以抑制TNF-α诱导的血管平滑肌细胞凋亡.

Abstract：

Objective To establish the cathepsin B over-expression group and cathepsin B genesilencing group so as to investigate whether cathepsin B was capable of promoting the apoptosis of VSMC (vascular smooth muscle cell) induced by TNF-α/act D.Methods Human aortic smooth muscle cell (HA-VSMC) was transfected with pcDNA3.1-cathepsin B and pSilencer2.1-cathepsin B plasmids by lipofection to establish the over-expression and gene-silencing groups.Through TNF-α induced apoptosis,the cell viability was observed by MTT assay,morphological observation and assays of apoptotic proteins as indicators of apoptosis.Results The cathepsin B over-expression and gene-silencing group were successfully established.MTT assay showed no significant difference between the transfected cell and blank control.After the intervention of TNF-α,the HA-VSMC viability decreased significantly.As compared with control group,the over-expression group significantly decreased (9.98% ± 1.04 % vs 14.60% ± 1.34% ).As compared with the over-expression group,the E64d and CA-074ME groups (18.23% ± 1.05%,17.40% ± 1.03% ) increased significantly while the silent group ( 21.30% ± 2.37% ) significantly increased.The analysis of acridine orange/ethidium bromide staining showed similar results.Western blot showed the Bcl-2 protein were significantly higher in the silent group than that in the control group.And the over-expression group was significantly lower than the control group.The E64d and CA-074ME groups were significantly higher than that in the over-expression group.But the Bax protein level had no significant difference among all groups.Conclusion The over-expression of cathepsin B promotes TNF-α-induced VSMC apoptosis while Cathepsin B gene silencing and the addition of cathepsin inhibitor in over-expression group inhibit the TNF-α induced VSMC apoptosis.     

姜黄素对肿瘤坏死因子-α诱导的大鼠平滑肌细胞Syndecan-4蛋白及磷酸化p44/42丝裂原活化蛋白激酶表达的影响

目的观察姜黄素对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的离体大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)Syndecan-4蛋白及p44/42丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)表达的影响。方法分别用20 ng/ml TNF-α、20μmol/L姜黄素、20 ng/ml TNF-α联合20μmol/L姜黄素作用于体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞24 h,MTS/PMS法检测VSMCs的增殖状态,Western blot蛋白免疫印迹法分别测定VSMCs中Syndecan-4蛋白及磷酸化p44/42MAPK的表达。结果(1)统计分析表明,与对照组比较,TNF-α能显著刺激大鼠VSMCs的增殖(P<0.01),单独应用姜黄素对大鼠VSMCs增殖无显著作用(P>0.05)。与TNF-α组比较,姜黄素能显著抑制TNF-α所诱导的大鼠VSMCs的增殖(P<0.01);(2)统计分析表明,与对照组比较,TNF-α组能显著刺激大鼠VSMCs中Syndecan-4蛋白及磷酸化p44/42MAPK的表达(P<0.01),TNF-α的这一作用能被姜黄素所抑制(P<0.01),单独应用姜黄素对大鼠VSMCs中Syndecan-4蛋白及磷酸化p44/42MAPK的表达无显著作用(P>0.05)。结论一定剂量的姜黄素可显著抑制TNF-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和Syndecan-4蛋白及磷酸化p44/42MAPK的表达。     

肿瘤坏死因子-α对滋养细胞增殖及功能的影响

[目的]探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对滋养细胞增殖、凋亡及绒毛膜促性腺激素(HCG)分泌调节的影响.[方法] 建立人早期妊娠滋养细胞体外培养体系,检测不同浓度TNF-α作用下滋养细胞增值状态及HCG的浓度.[结果] TNF-α在低浓度时促进滋养细胞的增殖活性,在高浓度时则抑制其增殖活性; TNF-α浓度为10 ng/mL、100 ng/mL 可使滋养细胞凋亡,其凋亡率随TNF-α浓度升高而增加(P<0.05);在0～100 ng/mL浓度TNF-α范围内,滋养细胞分泌HCG水平随TNF-a浓度的增加而升高.[结论] TNF-α可影响滋养细胞增殖与凋亡;且具有促进滋养细胞分泌HCG的功能.     

血管舒缓素对PDGF诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨了血管舒缓素对血小板趋化生长因子（ＰＤＧＦ）诱导培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法 取ＳＤ大鼠胸主动脉平滑肌细胞进行培养,传至５代后,分组观察ＰＤＧＦ、ＰＤＧＦ＋血管舒缓素组、ＰＤＧＦ＋血管舒缓素＋缓激肽受体拮抗剂组等。干预因素作用于血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）,对＾３Ｈ－胸腺嘧啶（＾３Ｈ－ＴｄＲ）的掺入及原癌基因ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ的表达的影响。结果 １．ＰＤＧＦ可促进ＶＳＭＣ     

普伐他汀对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察普伐他汀对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的影响,以探讨他汀类药可能的非调脂抗动脉粥样硬化作用。方法：组织贴块法培养的大鼠VSMCs随机分为对照（正常VSMCs）组、AngⅡ（10^-6moL／L）模型组、普伐他汀高剂量（10^-5mol／L＋AngⅡ10^-6mol／L）、中剂量（10^-6mol／L＋AxeⅡ10^-6mol／L）、低剂量（10^-7mol／L＋AngⅡ10-6mol／L）组、溶剂（体积分数0．1％的DMSO＋AngⅡ10^-6moL／L）组,分别测定活细胞数量和细胞周期中各期细胞构成比。观察普伐他汀对VSMCs增殖和迁移的影响。结果：AngⅡ（10^-6mol／L）作用24h能使活细胞数量明显增加,并使VSMCs的G0／G1期细胞减少。细胞增殖指数增大。与AngⅡ模型组比,普伐他汀组活细胞数减少,G0／G1期的细胞构成比增加,细胞增殖指数减少。结论：AngⅡ对VSMCs有促增殖作用,能被普伐他汀所拮抗。     

虫草多糖对大鼠肝星状细胞核因子-κB活性和肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的探讨虫草多糖对大鼠肝星状细胞的作用机制.方法分离大鼠肝星状细胞,采用不同浓度的虫草多糖处理后,分别应用MTT法、凝胶迁移率法、ELISA法和Northern blot检测大鼠肝星状细胞的增殖、核因子κB(NF-κB)活性和肿瘤坏死因子-α蛋白和mRNA的表达.结果虫草多糖对大鼠肝星状细胞生长具有较强的抑制作用.虫草多糖可明显抑制大鼠肝星状细胞核因子κB活性和下调肿瘤坏死因子-α蛋白和mRNA的表达,并且呈剂量依赖性.结论虫草多糖对大鼠HSC增殖具有很强的抑制作用,可能与抑制NF-κB活性和下调肿瘤坏死因子-α表达有关.     

环孢素A对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察环孢素A（CsA)对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响，以探讨钙调神经磷酸酶（CaN)依赖的信号通路在血管平滑肌细胞增殖中的作用。方法；以体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞为模型，实验分为三组：（1）AngⅡ组，（2）CsA AngⅡ组，（3）对照组。检测细胞增殖活度（MTT法），增殖细胞核抗原（PCNA）表达（免疫组化定量技术），细胞数目（直接计数法）的变化。结果：AngⅡ组血管平滑肌细胞增殖活度（吸光度表示），PCNA表达水平（光密度值表示）和细胞数目明显高于对照组（P＜0．01或P＜0．05），CsA＋AngⅡ组血管平滑肌细胞增殖活度，PCNA表达水平和细胞数目较AngⅡ组明显降低，差异显著（P＜0．01或P＜0．05）。结论：环孢素A可显著阻滞血管紧张素Ⅱ刺激的血管平滑肌细胞增殖，这种作用可能通过抑制CaN活性，阻断CaN介导的信号传导通路所致。     

重组海葵溶细胞素对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察重组海葵溶细胞素(Src)对离体大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响。方法体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VCMC),应用不同浓度的Src分别进行刺激VCMC并设立对照进行比较,采用非放射性的MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。结果各组的细胞增殖率分别为对照组:0.802±0.055;Src100μg/ml组:0.115±0.014;Src10μg/ml组:0.213±0.016;Src1μg/ml组:0.335±0.097,Src100ng/ml组:0.663±0.060;Src10ng/ml组:0.678±0.129;Src1ng/ml组:0.738±0.072。统计分析显示100ng/ml以上浓度的Src能明显抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖(P<0.05),并呈现剂量依赖性(P<0.05)。结论重组海葵溶细胞素Src对大鼠血管平滑肌细胞增殖有一定的抑制作用。     

rhIL-10对肿瘤坏死因子-α诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响

目的 观察重组人白细胞介素-10(rhIL—10)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的成纤维细胞增殖的影响。方法 体外培养NIH／3T3细胞，应用rhIL-10与TNF-α共同作用并设立对照进行比较，采用MTS／PES法确定NIH／3T3细胞的增殖状态。应用流式细胞仪测定细胞周期。结果 TNF-α对NIH／3T3细胞增殖具有明显的刺激作用。rhIL-10单独应用对NIH／3T3细胞生长没有影响。在TNF-α刺激下，一定剂量的rhIL-10可抑制NIH／3T3细胞的增殖。rhIL-10可使TNF-α作用下的NIH／3T3细胞大部分处于G0／G1期。结论 rhIL-10能明显抑制由TNF-α刺激的成纤维细胞增殖。     

白杨素提高肿瘤坏死因子-α诱导肝癌细胞HepG2凋亡能力的研究

目的 研究白杨素提高肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导肝癌细胞 HepG2 凋亡的能力,并对其分子机制进行初步探讨。方法 白杨素以不同浓度 (10、20、40 μmol/L) 单独或联合 TNF-α(10 ng/mL) 处理 HepG2 细胞后,于普通及荧光倒置显微镜下观察细胞形态变化,获得细胞死亡的定性资料;流式细胞术检测 sub-G1 峰,分析峰值变化规律,获得细胞死亡的定量资料;并以 Western blotting 方法检测凋亡标志蛋白 caspase-3、caspase-8 和 PARP 原蛋白和相应的裂解产物的变化情况及凋亡抑制蛋白 Bcl-xL、cIAPs、xIAP、cFLIP 的时间-效应变化规律。结果 形态学观察可发现白杨素联合 TNF-α处理 HepG2 细胞后,与对照组比较细胞出现明显的死亡数量增加,而单独白杨素组、TNF-α组与对照组比较则未观察到明显的细胞减少 (P＞0.05);流式细胞术分析 sub-G1 的定量资料也支持这一结果,联合处理组 sub-G1 值随着白杨素剂量增加而增大,最高达到 (27.84±0.54)%,与对照组比较有显著差异 (P＜0.05),Hochest 33342 荧光染色在联合处理组可观察到明显的核固缩细胞增加;Western blotting 检测到凋亡标志蛋白 caspase-3、caspase-8 和 PARP 原蛋白减少、相应的活化裂解片段出现;全 caspase 酶抑制剂 z-VAD-fmk 可有效抑制联合处理组 HepG2 细胞死亡、sub-G1 峰消失比值减少,阻止凋亡标志蛋白 caspase-3、caspase-8 和 PARP 的活化降解;TNF-α 引起的凋亡抑制蛋白 cFLIP-1 表达量增加,随联合处理时间延长而明显下调,与对照组比较有明显差异,Bcl-xL、xIAP 等其他凋亡抑制蛋白没有明显改变。结论 白杨素能够有效提高 TNF-α诱导 HepG2 细胞凋亡的能力,NF-κB 调节的凋亡抑制蛋白 cFLIP-1 表达减少是其重要的分子机制。     

青蒿素对骨关节炎大鼠肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的探讨青蒿素对骨关节炎大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法 32只骨关节炎模型大鼠随机分为对照组和青蒿素高剂量组、中剂量组、低剂量组,每组各8只,对照组给予生理盐水20 mL灌胃,每日1次,青蒿素高、中、低剂量组分别给予青蒿素400、300、200 mg.kg-1(均溶于20 mL生理盐水)灌胃,每日1次,连续7周,实验结束后右心房取血,放射免疫法检测血清TNF-α水平,反转录聚合酶链式反应、蛋白质印迹检测关节软骨组织中TNF-α的表达。结果青蒿素低、中、高剂量组血清TNF-α水平均较对照组下调(P<0.05),低剂量组水平高于中、高剂量组(P<0.05),中剂量组水平高于高剂量组(P<0.05);低剂量组组织mRNA水平与中剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05),高剂量组的组织mRNA水平低于低、中剂量组和对照组(P<0.05);组织TNF-α蛋白水平中剂量组与高剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05),但均低于对照组和低剂量组(P<0.05)。结论青蒿素可降低关节炎大鼠TNF-α的表达,有效控制炎症反应进程。