联合应用滤除白细胞和亚甲蓝光化学病毒灭活对新鲜血浆成分的影响

目的探讨联合应用滤除白细胞和亚甲蓝光化学病毒灭活处理后血浆主要成分的生物活性变化。方法应用去白细胞四联血袋采集全血分离制备成滤除白细胞的新鲜血浆10袋(100 ml/袋),加入1μmol/L亚甲蓝并放置2~6℃,光照度为30 000 Lux的可见光下左右摆动照射30 min。留取白细胞滤过前和亚甲蓝光照处理后新鲜血浆各5 ml,分别计数白细胞并检测血浆中部分凝血因子活性,血浆蛋白含量和补体水平变化。结果 2种方法处理后的新鲜血浆白细胞滤除率>99.91%,APTT,FⅧ∶C、FⅨ∶C水平与处理前比较t值分别为3.041、8.039、3.617,P<0.05。FⅧ∶C,FⅨ∶C回收率均>81%。PT,FⅡ∶C Fib较处理前无统计学意义,P>0.05。血浆白蛋白,IgG、IgM、IgA以及补体C3,C4水平较处理前变化不大。结论联合应用滤除白细胞和亚甲蓝光化学灭活病毒法对新鲜血浆处理前后的主要成分和生化指标影响不大。     

1年保存期内病毒灭活新鲜血浆中凝血因子的质量调查

目的 探讨亚甲蓝光化学法(MB-P)灭活处理新鲜血浆后对1年保存期内部分凝血因子活性的影响.方法 随机抽取30(人)份全血(400 ml/份),按照标准操作规程将每份制备成新鲜血浆和病毒灭活新鲜血浆(100ml/份),分成未灭活组和灭活组,分别检测保存0(制备期＜1个月检测)、6、8、10、12个月后的2组各自的FⅡ∶C、FⅤ:C、FⅦ∶C、FⅧ∶C、FⅨ∶C、FⅩ:C及Fg含量变化.结果 与未灭活组相比,灭活组除FⅦ∶C含量无明显变化外,其他6种凝血因子含量在保存期内均明显下降(尤其FⅧ∶C和Fg下降最为明显);0、6、8、10、12个月保存时间的FⅧ∶C含量(％)分别为灭活前58.7±20.1、59.6±34.0、52.0±35.3、57.5±34.7、54.1±31.2和灭活后45.8±13.9、49.3±23.5、44.6±21.7、49.7±22.9、43.9±20.7(均为P＜0.05),Fg含量(mg/dl)分别为灭活前225.3±72.3、277.9±64.2、272.3±74.9、262.6±70.8、287.55±83.0)和灭活后188.8±54.7、205.8±54.0、205.8±54.0、220.2±66.7、202.2±56.8(均为P＜0.05).保存0和12个月相比,FⅩ:C含量(％)分别为93.0±30.5 vs 83.1±18.0(P ＜0.05).结论 新鲜血浆经MB-P病毒灭活处理后,1年冰冻保存期内起7种凝血因子含量相对稳定;MBP对凝血因子活性造成了一定损伤(尤其是Fg和FⅧ:C),但除FⅧ∶C外,其他凝血因子含量在可接受的范围内.     

部分血浆凝血因子活性测定在急性冠脉综合征中的应用价值

目的观察急性冠脉综合征（ACS）患者部分凝血因子活性水平,探讨其在ACS发病中的意义。方法测定100例急性心肌梗死（AMI）和69例不稳定性心绞痛（UAP）患者急性期凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅹ、Ⅺ活性（FⅤ：C、FⅦ：C、FⅧ：C、FⅩ：C、FⅪ：C）,并与120例稳定性心绞痛（SAP）患者和80例健康对照组进行比较,分析这些因子活性水平与AMI和UAP急性期的关系。结果AMI和UAP患者急性期FⅤ：C、FⅦ：C、FⅧ：C、FⅩ：C、FⅪ：C水平明显高于SAP组和健康对照组（P〈0．05））;SAP组和健康对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论ACS患者急性期FⅤ：C、FⅦ：C、FⅧ：C、FⅩ：C、FⅪ：C水平明显升高,存在高凝状态。     

凝血因子Ⅷ复合物的纯化

本文介绍一种制备高纯度凝血因子Ⅷ(FⅧ)复合物的方法。用新鲜冰冻血浆作为原始材料,收集冷沉淀,溶解后经氢氧化铝[Al(OH)_3]凝胶吸附、甘氨酸沉淀和氯化钠沉淀,得高纯 FⅧ。然后经 Sephacryl S-1000柱层析,收集富含 FⅧ促凝活性(FⅧ∶C)及 von Willebrand 因子(vWF)组分,得到进一步纯化的产品。层析后产品总蛋白含量为0.188mg/ml,FⅧ∶C 为15.43IU/ml,FⅧ相关抗原(FⅧR∶Ag)为9.85U/ml,vWF 的 Ristocetin 辅因子活性(FⅧR∶RCof)为24.2U/ml。火箭电泳测定未显示含有纤维蛋白原(Fibrinogen,Fg)、纤维结合蛋白(Fibronectin,Fn)和IgG 等杂蛋白。     

亚甲兰光化学法对FFP中凝血因子及总蛋白含量的影响

目的探讨亚甲蓝光化学法(MB-P)对新鲜冰冻血浆(FFP)中Fg、FⅡ∶C、FⅤ∶C、FⅧ∶C、FⅩ∶C、FⅫ∶C及总蛋白含量的影响,为制定病毒灭活血浆标准及其临床应用提供数据参考。方法随机抽取88份FFP分成灭活组(n=40)及过滤组(n=48),分别对2组样本处理前后的FⅡ∶C、FⅤ∶C、FⅧ∶C、FⅩ∶C、FⅫ∶C、Fg及总蛋白含量进行检测。结果灭活组FⅤ∶C、FⅧ∶C处理后含量显著低于灭活前(分别为t=3.40,P<0.01;t=2.57,P<0.01),但Fg、FⅡ∶C、FⅩ∶C、FⅫ∶C及总蛋白灭活前后的含量无明显差异(P>0.05),过滤组处理前后FⅤ∶C、FⅧ∶C无明显差异(P>0.05)。结论 MB-P对FFP中不稳定的凝血因子FⅤ∶C和FⅧ∶C含量有明显影响,均在可接受的范围内,对其他凝血因子及总蛋白的含量无影响。     

毛细管区带电泳用于血浆蛋白质混合物的分析

目的探索建立采用毛细管区带电泳(CZE)法分析血浆相关蛋白质的条件和方法。方法 1)以血浆COHN法组分Ⅳ(CFⅣ)抽提液为样品,代表蛋白质混合物,分别从波长、基本缓冲液、添加剂、PH、温度等方面,摸索CEZ分析蛋白质混合物的较优条件和方法;2)将摸索得到的较优条件下的CZE分析CFⅣ抽提液的结果,并与通过高效液相色谱(HPLC)法、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法及双向电泳(2-DE)法分析CFⅣ抽提液的结果比较;3)采用较优条件下的CZE法分析标准血浆、标准血浆经离子交换层析(IEC)的FⅧ粗提液等,考察该条件是否适用于血浆中的其他组分。结果 1)CZE法分析CFⅣ抽提液的较优条件为:20℃以214 nm紫外吸收波长,0.5 psi压力进样10 s,10 kV恒压分析50 min,缓冲体系为pH 9.0的0.04 mol/L硼酸硼砂、0.05%SDS、0.007 5%腐胺;2)采用此条件的CZE法分析CFⅣ得到14个蛋白峰、分析时间50 min,HPLC法分析得到10个蛋白峰、分析时间60 min,SDS-PAGE法分析得到11条蛋白条带、分析时间120 min,2-DE法分析得到14个蛋白点数(与CZE分析的蛋白峰数数量相同)、分析时间3 d;3)CZE法用于标准血浆、标准血浆经离子交换层析的FⅧ粗提液的分析可分别分辩出22和11个蛋白峰。结论以CZE法分析血浆相关蛋白混合物与现有分析方法比较,能达到较好的分析效果,经摸索确定的较优分析条件具有一定的通用性。     

去冷沉淀血浆与普通血浆临床应用价值的比较

目的探讨去冷沉淀血浆中部分有效成分的实际含量,为临床选择不同血浆输注提供实验室依据。方法采集23袋（200ml/袋）ACD-B血液保存液保存的血液,4h内分离制备新鲜冰冻血浆,各袋均留2份标本;1份同新鲜冰冻血浆一起置-35℃保存,于第3天速融后检测总蛋白、白蛋白、纤维蛋白原、凝血因子Ⅴ、Ⅷ、Ⅹ含量;1份置4℃保存21d后检测总蛋白、白蛋白、纤维蛋白原、凝血因子Ⅴ、Ⅷ、Ⅹ含量;新鲜冰冻血浆于第3天取出制备冷沉淀,留取去冷沉淀血浆标本1份检测总蛋白、白蛋白、纤维蛋白原、凝血因子Ⅴ、Ⅷ、Ⅹ含量。结果去冷沉淀血浆中的血浆蛋白和凝血因子均低于普通血浆（P〈0.001）。结论去冷沉淀血浆的使用价值有局限性,不能与普通血浆等同使用。     

FⅧ His99Arg突变导致血友病A的分子发病机制研究

目的 探讨1例临床出血表现与凝血因子Ⅷ活性(FⅧ:C)检测结果明显不符的血友病A患者表型、基因型诊断及其分子发病机制。方法 凝血、抗凝及纤溶相关指标检测,一步法及发色底物法检测FⅧ:C,ELISA法检测FⅧ的抗原(FⅧ:Ag)。活化部分凝血活酶时间(APTT)纠正实验筛查FⅧ抑制物;PCR扩增先证者F8基因的所有外显子及其侧翼序列,利用直接核苷酸测序法进行基因序列分析。针对先证者的基因突变位点,对其家系成员进行相应外显子基因检测;定点突变法构建B亚基缺失(760aa～1639aa)的人FⅧHis99Arg和His99Ala两种突变的表达质粒(pRC/RS Ⅴ-BDhFⅦcDNA),两种突变质粒分别瞬时转染HEK293T细胞,测定细胞上清液中的FⅧ:C和细胞上清液及裂解液中的FⅧ:Ag。结果 先证者APTT 延长,一步法及发色底物法检测的F Ⅷ:C均低于1.0％,血浆FⅧ:Ag为120.0％。APTT纠正试验阴性,其他凝血、抗凝及纤溶相关检测均未见异常。诊断为交叉反应阳性(CRM+)的血友病A。患者F8基因直接核苷酸测序发现3号外显子存在28828A→G突变,导致His99Arg氨基酸改变,其母亲该位点为杂合突变。体外表达研究结果显示细胞上清液中His99Arg突变蛋白FⅧ:Ag及FⅧ:C分别为野生型的180.0％及5.8％,His99Ala突变蛋白FⅧ:Ag及F Ⅷ:C分别为野生型的45.0％和20.0％。Western blot显示,His99Arg突变质粒表达上清液中FⅧ蛋白含量较野生型明显增高,而His99Ala突变质粒表达上清液FⅧ蛋白含量较野生型减少。提示His99Arg为CRM+血友病A突变而His99Ala为CRM-血友病A突变。结论 体外检测发现His99Arg和His99Ala两种FⅧ能够表达,但常规凝血检测Hi99Arg突变FⅧ基本无功能,而His99Ala凝血功能也降低。     

获得性血友病A的临床分析与实验室检查

为了提高获得性血友病A（acquired hemophilia A）的诊断水平,对1例获得性血友病患者的临床表现、影象学、实验检查结果进行了分析。具体包括了解患者病史,复习静脉彩超记录和分析实验室检查结果。实验室检查项目有：活化部分凝血激酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）、凝血酶（TT）时间、血浆FⅧ：C、FⅨ：C、FⅪ：C和FⅫ：C。结果表明：APTT99．3秒,PT13秒,TT13．5秒,FⅧ：C2％、FⅨ：C7％、FⅪ：C9％、FⅫ：C21％。患者血浆加等量正常新鲜血浆不能使APTT延长完全纠正;患者血浆和等量正常新鲜血浆混合后于37℃温育情况下,APTT随温育时间延长而延长;患者血浆稀释10倍后加等量未稀释正常血浆重复测定结果显示：FⅧ：C6％、FⅨ：C75％、FⅪ：C95％、FⅫ：C123％。抑制物滴度测定表明：FⅧ抑制物〉32 Bethesda 单位／ml。获得性血友病A确诊后,经强的松、硫唑嘌呤治疗1月余,复查APTT为33．3秒、FⅧ：C为128％、FⅧ抑制物消失。结论：详细询问病史、分析影象学所见,进行APTT纠正试验、稀释试验和抑制物滴度测定,能减少获得性血友病的误诊和误治,免疫抑制治疗能消除FⅧ抑制物,恢复正常凝血功能。     

抗凝血因子ⅧC2区单克隆抗体的制备及功能研究

目的 制备并鉴定抗凝血因子Ⅷ(FⅧ)c2区单克隆抗体(单抗),研究其对FⅧ活性的影响.方法 体外表达rFⅧ C2区蛋白,免疫BALB/c小鼠制备鼠源性单抗.不同剂量的单抗与正常人新鲜混合血浆孵育后测定FⅧ活性及活化部分凝血活酶时间(APTT)等;ELISA法测定该单抗对rhFⅧ与血管性血友病因子(vWF)、磷脂酰丝氨酸(PS)及血小板结合实验的影响.结果 获得一株抗FⅧC2区单抗,命名为SZ-132.与血浆孵育后呈剂量依赖方式抑制FⅧ活性,APTT明显延长;抗体浓度超过25μg/ml时,FⅧ活性为0;该抗体能够抑制rhFⅧ-vWF、rhFⅧ-PS及rhFⅧ与血小板的结合.结论 SZ-132是一株特异性针对FⅧ C2区的抑制性单抗.     

炎症标志物及凝血因子与深静脉血栓形成的相关性研究

本研究分析下肢深静脉血栓形成（deep vein thrombosis,DVT）与c反应蛋白（C—reactiveprotein,CRP）,血浆纤维蛋白原（fibrinogen,Fg）、凝血因子Ⅷ（coagulation factorⅧ,FⅧ）和凝血因子Ⅸ（coagulation factorIX,FIX）之间的相关性,探讨炎症反应和凝血异常及其二者之间相互影响在下肢DVT中的作用和机制。采用免疫散射速率比浊法检测血浆CRP浓度,一期法测定FⅧ：C和FⅨ：C水平,凝血法检测血浆融合量,将上述指标进行病例组和对照组组间比较,并分析CRP与FⅧ：C、FⅨ：C及Fg之间的相关关系。结果表明：病例组CRP、Vg、FⅧ：C和FⅨ：C水平均显著高于对照组[CRP（2．67±0．91）：（0．14±0．08）mg／dl;Fg（4．73±1．36）：（2．79±0．66）g／L;FⅧ：C（126．71±28．10）：（81．35±20．77）％;FIX：c（81．01±23．60）：（70．71±11．3）％],P值均小于0．01。病例组CRP与Fg、FⅧ：C和FⅨ：C之间均具有相关关系,相关系数分别为0．432、0．571和0．544,P值均小于0．01。结论：炎症与DVT密切相关,血浆CRP水平升高可能是DVT发生的一个预测指标;血浆Fg、FⅧ：C和FⅨ：C水平升高是DVT的重要危险因素;炎症反应与凝血因子相互作用发挥促凝作用,是下肢DVT发生的可能发病机制之     

Morphine binding to human plasma proteins.

The interaction of (N-methyl-14C) morphine with purified human albumin and gamma globulin and with human plasma was studied by equilibrium dialysis. Morphine binds to albumin and, to a lesser extent, to gamma globulin, but probably does not bind to plasma lipoproteins. The per cent of drug bound to protein was dependent on protein concentration but independent of drug concentration in the therapeutic range of plasma morphine concentration. In this range, 34.0% to 37.5% of the drug is bound to human plasma, largely to the albumin fraction. This study is compared to an earlier one on the interaction of methadone with plasma proteins. It is likely that the lower lipid solubility of morphine compared to methadone is related to its decreased affinity for plasma proteins.     

亚甲蓝/光化学法灭活病毒对血浆成分的影响

背景：对血液进行病毒灭活是保障安全输血的措施之一,亚甲蓝/光化学法灭活人血浆中病毒的效果已被证实,但其对血浆成分影响的报道很少。目的：观察亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆对血液成分结构和功能的影响。方法：随机选择40份采血后6h内400mL全血制备的新鲜血浆称质量留样,然后与亚甲蓝病毒灭活过滤器无菌连接,亚甲蓝的终浓度在0.9～1.3μmol/L。将加入亚甲蓝的血浆置入4℃病毒灭活箱的搁架上,摆动频率60次/min,利用32000～38000Lx光照强度的可见光4℃照射35min,将光照后的血浆通过病毒灭活过滤器滤除亚甲蓝和残余白细胞,混匀后留样10mL,立即置于-80℃冰箱冻存。检测照射前后样品的血浆量、亚甲蓝浓度、FⅧ∶C、FⅤ∶C、VWF、Fib含量的变化。结果与结论：血浆病毒灭活后血浆容量、FⅧ∶C、FⅤ∶C、VWF、Fib的回收率分别为（96.39±1.73）%、（82.55±9.25）%、（81.03±15.27）%、（93.25±6.17）%、（81.61±14.25）%。亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒对血浆中大多数成分的影响不明显,可以满足临床安全输血的需求。     

全血室温放置过夜对血浆制品质量的影响

目的探讨全血室温放置过夜制备的24h冰冻血浆(FP24)质量。方法选取12份自愿捐献的400ml新鲜全血放置室温,将每份全血(采集6相似文献   

全血手工制备浓缩血小板后的血浆再制备冷沉淀的质量评价

目的评价室温新鲜全血白膜法制备浓缩血小板后的血浆再制备冷沉淀的质量。方法实验组为24例,新鲜全血(400 mL)置室温于<8 h用白膜法制备浓缩血小板后所得的血浆,冰冻保存。对照组1为12例,常规制备新鲜冰冻血浆,冰冻保存。对照组2为12例,新鲜冰冻单采血浆,血浆单采完毕分装为200 mL/袋并立即冰冻保存。3组血浆按常规制备冷沉淀,评价其质量:外观、凝血因子FⅧ及Fib的含量;血细胞残留量。结果 3组冷沉淀外观均正常;WBC含量在3组间无统计学意义。与对照组1比较:实验组凝血因子FⅧ(81.76±34.07)IU较低,Fib(202.63±48.58)mg及Plt(7.81±5.81)×109均较高。与对照组2比较:实验组凝血因子FⅧ含量相当,Fib(202.63±48.58)mg较高、Plt(7.81±5.81)×109较低。结论全血来源的制备浓缩血小板后的冰冻血浆还可以用于冷沉淀的制备,其质量符合国家标准。     

2种方法制备冷沉淀的质量分析

目的通过对冷藏融化法和水浴融化法制备冷沉淀的质量分析,选择合适的制备冷沉淀的方法。方法随机抽取2006年前后采用冷藏融化法和水浴融化法制备的冷沉淀各60份;利用血凝仪检测冷沉淀中FⅧ和Fg的含量,并计算FⅧ和Fg的合格率。结果冷藏融化法和水浴融化法的FⅧ含量(IU/袋)分别为:70.30±23.68,161.62±39.45;FⅧ合格率分别为:43.33%(26/60),93.33%(56/60),两者比较均有统计学差异(P<0.001)。Fg的含量(mg/袋)分别为:222.72±63.75,228.12±66.83;Fg合格率分别为:88.33%(53/60),91.67%(55/60),两者比较均无统计学差异(P>0.05)。结论水浴融化法制备冷沉淀简便、快速,Ⅷ合格率高,明显优于冷藏融化法,值得推广应用。     

Non-enzymic glycation of individual plasma proteins in normoglycemic and hyperglycemic patients

Diabetic patients in poor glycemic control show increased glycation of total plasma proteins, but little is yet known about the relative extents to which the various individual proteins are glycated. Thus, we studied the non-enzymic glycation of several major plasma proteins and plasma protein fractions in normal and diabetic patients. In vivo glycation for most plasma proteins was very low in non-diabetic patients, only gamma globulin showing more than 5% glycation. In diabetic plasmas, glycation was much greater, immunoglobulins again showing the greatest proportion, followed in descending order by albumin, complement C3, fibrinogen, transferrin, haptoglobin, and alpha-1-antitrypsin. When plasma proteins were glycated in vitro, this order was IgG greater than complement C3 greater than albumin greater than transferrin greater than haptoglobin greater than alpha-1-antitrypsin. In general, proteins with the longest biological half-lives, such as IgG and albumin, showed the greatest in vivo glycation. On the other hand, proteins with high intrinsic glycability, such as complement C3, showed moderate glycation, despite a short half-life. Except for albumin, more basic proteins showed greater glycation than acidic proteins, but there was poor correlation between mole percent lysine and glycation. Evidently the relative extents of glycation of different plasma proteins are a complex function of integrated glucose concentrations over time and of the half-life and chemical characteristics of each protein.     

单采与手工制备的新鲜冰冻血浆的质量比较

目的探讨单采和手工新鲜冰冻血浆(FFP)的质量差异。方法运用常规检验方法测定单采和手工FFP(各20份)的凝血因子(Fib及FⅧ)、部分生化指标(TP、LDH、K+、Na+及Cl-)、游离血红蛋白(FHb)及pH,并进行对比分析。结果 2种冰冻血浆FHb、K+、Na+、Cl-及Plt含量差异具统计学意义,其他检测指标在两者间差异不具统计学意义,单采FFPFⅧ活性比手工FFP略高。结论单采与手工FFP具有相同的质量,单采FFP的凝血因子活性略优于手工FFP。     

多器官功能不全综合征患者血浆中VWF、FⅧ和ATⅢ变化的临床意义

目的:研究多器官功能不全综合征(MODS)患者血管性血友病因子(VWF)、Ⅷ因子(FⅧ)和抗凝血酶-Ⅲ(AT-Ⅲ)的变化,并探讨其临床意义。方法:40例MODS患者被列为观察对象。测定血浆VWF、ⅧF和AT-Ⅲ水平,同时计算患者的急性生理和慢性健康评分(APACHEⅡ)。20例健康者为正常对照。结果:MODS组血浆VWF和FⅧ水平明显高于正常对照组,AT-Ⅲ水平低于正常对照,P<0.01;MODS组中,死亡组血浆VWF和FⅧ水平明显高于生存组,差异有统计学意义,P值分别为P<0.01和P<0.05。MODS患者血浆VWF和FⅧ与APACHEⅡ评分呈正相关,r分别为0.716和0.705,AT-Ⅲ与APACHEⅡ评分呈负相关,r=-0.752,P<0.01。结论:VWF、FⅧ和AT-Ⅲ在MODS的发病过程中起着重要的作用,并与MODS患者病情严重程度相关,可以作为反映MODS患者预后的指标。     

白细胞滤除对不同时间制备的血浆质量的影响

目的评价白细胞滤除对不同时间制备的血浆质量的影响。方法将24例400ml全血(4℃)采集6h内用无菌接驳机一分为二,1份6h内过滤去白再制备血浆(对照组,新鲜血浆,FP),另1份置4℃过夜(18～24h)后过滤去白再制备血浆(实验组,24h血浆,P24)。2组均于滤前滤后留取血浆标本,并立即置-30℃保存。3d后于37℃解冻后进行体外质量评估:观察外观、检测主要不稳定凝血因子(FⅤ、FⅦ、FⅧ)及Fib,以及主要生化指标含量。结果过滤处理对FP和P24均无明显影响;与滤后FP比较,滤后P24的FⅧ含量显著偏低,其他凝血因子含量差异不具统计学意义,生化指标中K+、LDH及FHb差异具统计学意义,其他指标差异不具统计学意义。结论除FⅧ外,白细胞滤除对FP24质量无显著影响。