肝细胞癌及癌旁肝组织端粒酶活性的原位检查

端粒酶的激活与肝细胞癌（ＨＣＣ）的发生已受到人们的重视。既往检测ＨＣＣ端粒酶活性均采用端粒重复扩增分析法（ＴＲＡＰ）［１６］，但该法不能把端粒酶活性与组织细胞的形态结构结合起来观察。１９９７年Ｏｈｙａｓｈｉｋｉ等［７］在ＴＲＡＰ法的基础上利用原位ＰＣＲ检测了单层培养细胞和游离细胞的端粒酶活性。但该法存在许多问题，在冷冻切片上未获成功。我们对Ｏｈｙａｓｈｉｋｉ［７］的方法进行了改进，发展了端粒酶原位标记法（ＩＳＬＴ）并成功地在冷冻切片上原位检测了ＨＣＣ及其癌旁肝组织中端粒酶的活性。一、材料与方法…     

肝细胞癌及癌旁肝组织中bcl—2和p53蛋白表达与？…

目的：探讨ｂｃｌ－２和ｐ５３蛋白的表达与端粒酶活性的相关性及其与ＨＣＣ发生的关系。方法：利用端粒酶原位标记法显示端粒酶活性,采用Ｓ－Ｐ法免疫组化技术的检测ｂｃｌ－２和ｐ５３蛋白。结果：端粒酶在ＨＣＣ中的阳性率（９１．７％）显著高于癌旁肝组织（５８．３％）（Ｐ〈０．０５）,端粒酶活性强度与ＨＣＣ分化程度无关（Ｐ〉０．０５）;癌组织中ｂｃｌ－２和ｐ５３蛋白的阳性率均高于癌旁组织（Ｐ〈０．０１）;ＨＣＣ     

肝细胞癌中c-myc和c-fos表达及其意义

目的探讨c-myc和c-fos在肝细胞癌(HCC)中的表达及其意义。方法采用免疫组化方法检测分析10例正常肝组织及81例HCC癌旁肝组织和癌组织中c-myc和c-fos蛋白的表达。结果 (1)正常肝组织中c-fos和c-myc均无阳性表达;而在癌组织与癌旁组织则出现阳性表达,其中癌组织的阳性表达率分别为41.9%(34/81)和39.5%(32/81),癌旁组织则为14.8%(12/81)和18.5%(15/81),差异具有统计学意义(P0.05)。(2)c-myc和c-fos在癌组织中的表达与肿瘤分级及分化程度相关(P0.05),但与年龄、性别、肿瘤直径、是否伴有肝硬化及HBsAg阳性无关(P0.05)。结论 c-myc和c-fos的阳性表达与HCC的发生相关。     

原发性肝细胞癌中5种细胞周期蛋白的表达及其临床意义

目的探讨原发性肝细胞癌中5种细胞周期蛋白(cyclin)的表达及其与肝癌细胞的增殖状态、侵袭转移和乙型肝炎病毒(HBV)感染的相关性。方法应用Instrumedics公司生产的组织芯片制作仪,将273例原发性肝癌组织、144例癌旁肝组织和10例尸检非肝病死亡肝组织制成组织芯片,取样针直径2．0am,采用免疫组织化学方法分别检测了cyclin A、cyclin B、cyclin D1、cyclin D3及cyclin E在肝癌、癌旁肝及尸检肝组织的表达率,并分析了肝癌、癌旁肝组织中HBV感染与这5种cyclin表达间的相关性。结果共获得3个肝癌组织芯片蜡块,分别含136、143和148个位点。在273例肝癌组织标本中5种cyclin的阳性表达率分别为cyclin A 52．7％、cyclin B 45．4％、cyclin D1 35．9％、cyclin D3 44．3％和cyclin E 23．1％;在144例癌旁肝组织中分别为8．3％、5．6％、4．9％、6．3％和1．4％;10例尸检肝组织除1例cyclin D1阳性外,其余均为阴性。5种cyclin在肝癌组织中的阳性表达率均显著高于癌旁肝组织(P＜0．01);组织学分级为Ⅱ、Ⅲ级的肝癌组织5种cyclin的表达高于Ⅰ级(P＜0．05);除cyclinA外,伴有门静脉癌栓组的阳性率高于无癌栓组(P＜0．01);HBV感染与cyclin的表达无明显相关性(P＞0．05)。结论各个cyclin在肝癌细胞中呈不同程度的高表达,使癌细胞周期缩短,处于细胞增殖活跃状态,并有利于肝癌细胞的侵袭转移;未发现与HBV感染有关。     

肝细胞癌组织中HBx基因蛋白表达与凋亡关系

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)发生的主要病因之一，HHx基因具有癌基因的特性，其表达产物HBx蛋白具有转录激活子功能，在HCC的发生发展中起着重要的作用。研究HBx蛋白的表达及其对细胞凋亡的调节有助于阐述HCC的发生发展机制。笔者利用S-P免疫组化方法和原位脱氧     

ras p21在肝癌及癌旁肝组织中的表达

ｒａｓｐ２１在肝癌及癌旁肝组织中的表达＊１李伟２王学春１张金池近几年的研究表明，ｒａｓｐ２１的表达水平与多种恶性肿瘤的转移、恶性程度密切相关。我们应用免疫组化法研究了肝癌及癌旁肝组织中ｒａｓｐ２１的表达，以探讨ｒａｓｐ２１与肝癌发生及恶性程度的关系。...     

肝细胞癌及癌旁肝组织中bcl-2和p53蛋白表达与端粒酶活性的相关性研究

目的：探讨ｂｃｌ２ 和ｐ５３ 蛋白的表达与端粒酶活性的相关性及其与 Ｈ Ｃ Ｃ 发生的关系。方法：利用端粒酶原位标记法显示端粒酶活性,采用 Ｓ Ｐ 法免疫组化技术检测ｂｃｌ２ 和ｐ５３ 蛋白。结果：端粒酶在 Ｈ Ｃ Ｃ 中的阳性率（９１７ ％ ） 显著高于癌旁肝组织（５８３ ％ ）（ Ｐ＜ ００５） ,端粒酶活性强度与 Ｈ Ｃ Ｃ 分化程度无关（ Ｐ＞ ００５） ;癌组织中ｂｃｌ２ 和ｐ５３ 蛋白的阳性率均高于癌旁组织（ Ｐ＜ ００１） ; Ｈ Ｃ Ｃ 和癌旁组织中端粒酶活性程度随ｂｃｌ２ 蛋白表达增强而升高,并呈明显正相关,但与ｐ５３ 蛋白表达强度无明显相关性。结论：ｂｃｌ２ 蛋白的过度表达可能是端粒酶激活的重要途径之一,ｂｃｌ２ 蛋白过度表达可能通过激活端粒酶使肝细胞恶性转化导致 Ｈ Ｃ Ｃ 发生,而ｐ５３ 基因突变可能对端粒酶的激活无直接影响。     

肝细胞癌及癌旁组织HCVRNA原位杂交和HBsAg免疫组织化学研究

肝细胞癌及癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ原位杂交和ＨＢｓＡｇ免疫组织化学研究冯德云程瑞雪颜亚晖沈明一、材料与方法１标本：５０例肝细胞癌（ＨＣＣ）标本均为我校附属医院１９９５年１月至１９９６年６月外科手术切除标本；组织均取得癌和癌旁成分。所有标本经１０％中性福...     

肝细胞癌中EMS1蛋白的表达

目的 探讨EMS1蛋白表达与肝癌发生、发展及临床病理特征的关系.方法 采用免疫组化SP法,对78例肝癌组织、其中68例附癌旁肝组织和8例正常肝组织中EMS1蛋白表达进行检测.结果 EMS1蛋白表达定位于细胞的胞质,着色呈黄色至棕黄色.肝癌中阳性表达率89.69%,高于癌旁及正常肝组织30.26%(P＜0.001);无肝硬化肝癌阳性表达率73.91%,低于伴有肝硬化95.56% (P＜0.05);伴静脉内癌栓组94.12%与无静脉内癌栓组70.59%差异有显著性 (P＜0.05);随着组织分级的增高(分化程度的降低),阳性表达率明显增高,其差异有显著性 (P＜0.05);而与性别、年龄、肿瘤大小无关.结论 EMS1蛋白高表达与肝癌发生、肝硬化、静脉内癌栓及组织学分级相关.     

肝细胞癌和肝硬变中bcl—2蛋白表达与细胞凋亡的关

研究肝细胞癌和肝硬变中ｂｃｌ－２蛋白表达与细胞凋亡的关系。方法，应用原位脱氧核糖酸末端转移酶标记法和Ｓ－Ｐ免疫组化技术检测２８例肝硬变和３５例肝细胞癌组织中凋亡细胞的分布、密度及ｂｃｌ－２蛋白的表达。     

硒、碘对大鼠海马神经细胞原癌基因c-fos、c-jun表达的影响

目的 探讨硒、碘对培养大鼠海马神经细胞原癌基因c-fos、c-jun表达的影响。方法 以无血清培养大鼠民神经细胞为实验对象,培养液中加入不同浓度的碘,硒,用盖玻片培养法。在培养的1,3,5,7和10d时对海马神经细胞进行c-fos、c-jun的mRNA原位分子杂交和蛋白产物的免疫组织化学SABC法染色,对杂交信号和免疫阳性产物进行计算机图像分析。结果 硒可明显促进海马神经细胞原癌基因c-fos、c-jun mRNA及其蛋白的表达。硒、碘合用的促进作用最明显,尤其是c-jun mRNA表达。结论 碘和硒可通过促进海马神经细胞即刻早期基因c-fos、c-jun表达,特别是c-jun表达,进而影响神经功能发育。     

肝细胞癌和肝硬变中bcl-2蛋白表达与细胞凋亡的关系

目的：研究肝细胞癌和肝硬变中ｂｃｌ－２蛋白表达与细胞凋亡的关系。方法：应用原位脱氧核糖核酸末端转移酶标记法和Ｓ－Ｐ免疫组化技术检测２８例肝硬变和３５例肝细胞癌组织中凋亡细胞的分布、密度及ｂｃｌ－２蛋白的表达。结果：肝细胞癌组织中凋亡细胞密度显著低于肝硬变，且随其恶性程度的增高呈逐渐降低趋势；凋亡细胞在肝硬变中多分布于假小叶周边区域。ｂｃｌ－２蛋白在肝细胞癌组织中的表达强度明显高于肝硬变，但表达的阳性率差异不明显。结论：ｂｃｌ－２通过其表达产物调控肝硬变和肝细胞癌中的细胞凋亡，在肝细胞癌发生中起重要作用，但ｂｃｌ－２蛋白并非细胞凋亡的唯一调控因素     

膀胱癌中p53、c—myc和bcl—2的表达及意义

目的：研究癌基因和抗癌基因蛋白产物在膀胱移行细胞癌组织中异常表达与病理分级,临床分期间关系。方法：应用免疫组化S－P法检测96例膀胱移行细胞癌中p53,c-myc和bcl-2的表达水平。结果：96例膀胱移行细胞癌中p53,c-myc和bcl-2的阳性表达率分别为60．4％,68．8％和81．3％,结果表明,p53,c-myc和bcl-2异常表达与膀胱移行细胞癌的分级和分期间差异有统计学意义。结论：p53,c-myc和bcl-2表达在膀胱癌的发生发展中起重要作用。在膀胱癌变过程中,有多种癌基因的变化。     

6种癌基因蛋白产物在甲状腺癌中的表达及意义

目的；探讨甲状腺癌癌变的机理，方法：应用免疫组化Ｓ－Ｐ法于石蜡切片对４３例甲状腺癌，１７例腺瘤，１９例瘤旁甲状腺组织进行了ｃ－ｅｒＢ－２，ｐ２１，ｐ５３，Ｂｃｌ－２，ｃ－ｍｙｃ，ｐ１６癌基因产物的检测。结果：癌组织中均有不同程度，１种或１种以上基因产物表达与腺瘤及瘤旁组织间均存在高度显著性差异（Ｐ〈０．０１），ｃ－ｅｒｂＢ－２，ｐ２１表达随癌组织分化程度增高而增高，ｐ５３表达随癌组织分化程度增高而     

c—erbB—2表达及DNA含量与乳腺癌组织学类型的相关性研究

目的：了解乳腺癌组织学类型与ｃ－ｅｒｂＢ－２表达和ＤＮＡ异倍体的关系。方法：用免疫组化法（ＬＳＡＢ），经典的Ｆｅｕｌｇｅｎ染色法及图像分析技术对８４例乳腺癌，２２例乳腺良性病变进行ｃ－ｅｒｂＢ－２免疫组化及ＤＮＡ含量检测。结果：（１）乳腺良性病变全部为整倍体，ｃ－ｅｒｂＢ－２表达阴性。乳腺癌异倍体７０．２％，ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性表达率为３３％。（２）浸润性导管癌ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性表达率（４１．６％）、异倍体比例（７７％）均高于特殊类型浸润癌（９．６％和５４．８％）。而Ｐａｇｅｔ病阳性表达率和异倍体比例最高（分别为１００％和８０％）。（３）浸润性导管癌ｃ－ｅｒｂＢ－２表达率随合并导管原位癌成分或合并明显坏死而增高（Ｐ＜０．０５）。粉刺型占优势，其表达率高于非粉刺型（Ｐ＜０．０５）。（４）ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性肿瘤异倍体高于ｃ－ｅｒｂＢ－２阴性肿瘤异倍体（Ｐ＜０．０５）。结论：ｃ－ｅｒｂＢ－２激活和异倍体的出现主要与导管上皮细胞异型增生有关。可作为乳腺癌一个特殊亚群的诊断依据     

Human skeletal muscle cell differentiation is associated with changes in myogenic markers and enhanced insulin‐mediated MAPK and PKB phosphorylation

Aim: We hypothesized that myogenic differentiation of HSMC would yield a more insulin responsive phenotype. Methods: We assessed expression of several proteins involved in insulin action or myogenesis during differentiation of primary human skeletal muscle cultures (HSMC). Results: Differentiation increased creatine kinase activity and expression of desmin and myocyte enhancer factor (MEF)2C. No change in expression was observed for big mitogen‐activated protein kinase (BMK1/ERK5), MEF2A, insulin receptor (IR), hexokinase II, and IR substrates 1 and 2, while expression of glycogen synthase, extracellular signal‐regulated kinase 1 and 2 (ERK1/2 MAP kinase) and the insulin responsive aminopeptidase increased after differentiation. In contrast to protein kinase B (PKB)a, expression of (PKB)b increased, with differentiation. Both basal and insulin‐stimulated PI 3‐kinase activity increased with differentiation. Insulin‐mediated phosphorylation of PKB and ERK1/2 MAP kinase increased after differentiation. Conclusion: Components of the insulin‐signalling machinery are expressed in myoblast and myotube HSMC; however, insulin responsiveness to PKB and ERK MAP kinase phosphorylation increases with differentiation.     

高血脂对大鼠脑缺血再灌注损伤后大脑皮质p38丝裂原活化蛋白激酶表达的影响

目的:检测高血脂对脑缺血再灌注损伤后缺血侧大脑皮质p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)表达的影响。方法:喂食高脂饲料建立高血脂动物模型,随后线栓法建立脑缺血再灌注模型。Zea-Longa神经行为学评分法记录大鼠神经行为改变,TTC染色检测脑梗死灶体积,免疫组织化学及免疫印迹检测大脑皮质p38MAPK表达水平。结果:高血脂脑缺血再灌注后神经行为损伤加重,且梗死灶体积较单纯脑缺血再灌注明显扩大。与假手术组比较,单纯脑缺血再灌注组和高血脂脑缺血再灌注组大脑皮质p38MAPK表达明显增加,再灌注2 h时其表达量即开始增高,再灌注24 h时达高峰,而后又降低。相同再灌注时间点,与单纯脑缺血再灌注组比较,高血脂脑缺血再灌注组p38MAPK表达增高。结论:高血脂脑缺血再灌注损伤中,高血脂可上调大脑皮质p38MAPK表达,促进细胞凋亡的发生及加重炎症反应,进而加重缺血再灌注损伤。     

c-erbB-2、VEGF和组织蛋白酶D在胃癌中的表达及其相关性

目的：探讨癌基因c-erbB-2、血管内皮生长因子（VEGF）和组织蛋白酶D（Cath-D)在胃癌中的表达及其与胃癌生物学行为的关系。方法：采用免疫组织化学（S－P）法，检测了102例胃癌手术标本中c-erbB-2、VEGF及Cath-D的表达，同时观察了网状纤维分布与c-erbB-2、Cath-D之间的关系，并将检测结果与跟踪随访资料进行了综合分析。结果：102例胃癌组织中c-erbB-2表达阳性率为38.24%（39／102），与胃癌浸润深度（P＜0.05）、淋巴结转移（P＜0.05）密切相关；VEGF表达阳性率为50％（51／102），与胃癌浸润深度（P＜0.01）、生长方式（P＜0.01）、淋巴结转移（P＜0.01）密切相关；Cath-D表达阳性率为81.37%(83/102)，与胃癌浸润深度（P＜0.05）、生长方式（P＜0.05）、淋巴结转移（P＜0.05）及脉管内有无癌栓（P＜0.05）有关。对生存期分析显示：Cath-D、VEGF、c-erbB-2阳性患者预后差，5年生存率低于阴性表达患者。结论：c-erbB-2、VEGF及Cath-D与胃癌的生长、浸润、转移、预后有密切关系，可作为判断胃癌生物学行为和预后的重要指标。