沉默VEGF基因对腺样囊性癌细胞侵袭的影响

目的：利用RNAi技术沉默腺样囊性癌细胞株ACC-2中VEGF的表达,探讨其对肿瘤细胞侵袭能力的影响。方法：利用RNAi技术沉默VEGF表达,用Transwell侵袭实验检测细胞体外侵袭能力的变化。结果：与对照组比较,VEGF的siRNA能有效地抑制实验组ACC-2细胞的侵袭能力。结论：沉默VEGF减弱腺样囊性癌的侵袭能力。     

SGK1基因沉默对人乳腺癌细胞生长抑制作用

目的观察血清和糖皮质激素调节蛋白激酶1(SGK1)基因沉默对人乳腺癌细胞生长抑制作用,为探讨乳腺癌治疗靶点提供实验依据。方法采用RNA干扰技术,以pGenesil 3为载体,建立针对SGK1的短发卡RNAC(shRNA)干扰质粒pGen-3-siSGK1和阴性对照质粒pGen-3-control,转染人乳腺癌细胞系MDA-MB-231,经筛选得到稳定SGK1基因沉默的乳腺癌细胞模型;采用实时定量PCR法、免疫荧光法以及蛋白免疫印迹法,检测shRNA干扰组、阴性对照组及未转染组细胞中SGK1的表达;采用体外浸润实验、细胞迁移实验检测各组细胞的侵袭和转移能力,噻唑蓝比色法检测细胞体外生长能力。结果成功构建针对SGK1基因的shRNA干扰质粒,建立稳定的SGK1基因沉默乳腺癌细胞模型;模型细胞中SGK1蛋白表达量与对照组相比下降了60%(P<0.01);β-catenin与SGK1表达条带亮度均明显下降;PGen-3-siSGK1组SGK1 mRNA相对含量(RQ) 为0.35,低于其他2组(分别为0.96、1.00),与pGen-3-control组相比下降了65.5%,差异有统计学意义(P<0.05),高倍显微镜视野下,pGen-3-siSGK1组的穿膜细胞数为22个/HPF,其他2组分别为66、62个/HPF;pGen-3-siSGK1组的细胞迁移率为17.01%,其他2组分别为72.22%、68.47%;凝血酶不同浓度下pGen-3-siSGK1组细胞生长均受到抑制,生长速度缓慢,其中0.1、1.0 U/mL浓度下,细胞含量(吸光度)分别为0.10、0.05,远低于其他2组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论SGK1基因沉默可抑制SGK1基因表达,可使人乳腺癌细胞MDA-MB-231株的浸润能力、迁移能力下降,抑制乳腺癌细胞生长。     

降低胃癌细胞硫氧还蛋白5基因表达影响增殖及浸润的研究

目的探讨降低硫氧还蛋白5(EndoPDI)基因表达对于胃癌细胞增殖状态、细胞周期、凋亡等生物学特性及浸润转移能力的影响。方法 EndoPDI基因特异的核糖核酸干扰(RNAi)载体通过脂质体介导法转染人胃癌细胞系细胞(MKN45),筛选获得稳定转染的细胞系,经过免疫细胞化学、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法及蛋白免疫印记(Western-blot)法证实。使用生长曲线法、平板克隆形成实验、细胞迁徙实验等方法分析稳定转染株相关生物学特性的变化,每种检测实验均设立RNAi载体转染细胞组、点突变对照组和空白MKN45细胞组。结果稳定转染的EndoPDI RNAi细胞系经过免疫细胞化学法、RT-PCR法及Western blot法证实,表达抑制率可达70%左右。与对照组细胞相比,EndoPDI RNAi组细胞株生长减慢,各时间点细胞计数显著低于对照组(P0.05);流式细胞仪检测细胞周期显示,S期比例显著低于对照组,G0-G1期比例显著高于对照组(P0.05)。平板克隆形成实验结果显示,EndoPDI RNA i组克隆形成率显著低于对照组(P0.05);细胞迁徙实验结果提示,EndoPDI RNA i组穿膜率显著低于对照组(P0.05)。结论 EndoPDI基因可能具有促进细胞生长增殖作用,降低EndoPDI表达可减少处于分裂周期细胞比例、提高凋亡比例,降低EndoPDI基因表达可能对胃癌细胞的恶性生物学行为有抑制作用。     

UbcH10基因沉默对裸鼠移植性大肠癌抑制作用

目的 通过短发夹RNA(shRNA)干扰沉默UbcH10基因的表达,并观察其对裸鼠移植结直肠癌的抑制作用。方法 构建RNA干扰表达载体pGPU6/GFP/Neo/UbcH10-RNAi(pUbcH10-RNAi),建立UbcH10基因沉默细胞系HT-29/UbcH10-RNAi;采用蛋白印迹法(western blot)评价pUbcH10-RNAi对UbcH10基因表达的影响,观察移植结直肠癌裸鼠的肿瘤生长情况。结果 HT-29/UbcH10-RNAi细胞中UbcH10基因表达明显下调;与对照组比较HT-29/UbcH10-RNAi组肿瘤生长明显减慢,在接种肿瘤细胞12 d后隐约可见瘤体,36 d后断颈处死剥离瘤体重量仅是对照组肿瘤的40%左右。结论 短发夹RNA(shRNA)沉默UbcH10基因对裸鼠移植性大肠癌有抑制作用,提示抑制UbcH10基因表达可能是大肠癌治疗的潜在方法。     

黄芩素对胃癌细胞VEGF和HGF表达的影响

[目的]观察血小板型12-脂氧合酶(p12-LOX)在胃癌SGC-7901细胞中的表达及黄芩素(Baicalein,Bai)对胃癌SGC-7901细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和肝细胞生长因子((hepatocyte growth fact,HGF)表达的影响,并初步探讨作用机制。[方法]RT-PCR检测SGC-7901细胞中p12-LOXmRNA的表达及Bai对其VEGF mRNA表达的影响;ELISA法检测Bai对VEGF和HGF蛋白表达的影响。[结果]RT-PCR产物经琼脂糖电泳结果,可见一条337bp的p12-LOX基因扩增带和一条651bp的β-actin内参基因扩增带;Bai作用6h后VEGFmRNA表达明显低于对照组(除5μmol/L组),且随Bai浓度的增加,VEGF mRNA表达量逐渐降低;ELISA显示,不同浓度Bai作用SGC-7901细胞24h后,各实验组与对照组相比,HGF蛋白表达量均明显降低(除5μmol/L组),且与浓度相关;随着Bai浓度的增加,各实验组HGF表达量均明显下降。[结论]SGC-7901细胞中存在p12-LOX的表达;Bai可抑制SGC-7901细胞VEGF和HGF的表达,且呈一定的浓度依赖性。     

shRNA沉默VEGF—C基因对大肠癌淋巴管生成和淋巴结转移的影响

目的 观察RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术抑制大肠癌细胞株Lovo中VEGF-C基因的表达,探讨抑制shRNA-VEGF-C对人大肠癌细胞Lovo生物学特性的影响.方法 构建表达ShRNA-VEGF-C重组质粒转染Lovo细胞,72 h后用实时RT-PCR（real-time polymerase chain recation）检测VEGF-C mRNA表达;建立Lovo细胞皮下移植瘤裸鼠模型,注射shRNA-VEGF-C,动态观察肿瘤体积并于4周后处死裸鼠称取瘤重、计算局部淋巴结转移率,免疫组化法检测大肠癌组织微淋巴管密度（microlymphatic density,MLD）.结果 转染shRNA-VEGF-C后,Lovo细胞VEGF-C mRNA表达下调;体内实验结果显示,4周后shRNA-VEGF-C组移植瘤体积[（324.9±64.8）mm3]明显小于空质粒组[（553.5±90.1）mm3]和生理盐水对照组[（570.1±85.4）mm3]（P〈0.01）;shRNA-VEGF-C组瘤重[（3.01±0.55）g]也低于空质粒组[（4.65±0.65）g]和生理盐水对照组[（4.75±0.55）g]（P〈0.01）;shRNA-VEGF-C组微淋巴管密度LMVD（15.5±6.90）明显低于HK组（24.18±6.45）和生理盐水对照组（29.59±8.21）（P〈0.01）;shRNA-VEGF-C组局部淋巴结转移率（30.1%）明显低于空质粒组（50.2%）和生理盐水组（53.1%）.结论 shRNA-VEGF-C可影响VEGF-C诱导的淋巴管生成并抑制大肠癌淋巴结转移.     

siRNA沉默人类血红素敏感基因1对膀胱癌T24细胞的影响

目的 观察人类血红素敏感基因1(HRG-1)在膀胱正常组织和膀胱肿瘤组织中的表达情况,通过siRNA干扰技术抑制HRG-1在膀胱癌T24细胞的表达水平,观察其生长增殖的变化.方法 应用免疫组化SP法检测85例膀胱肿瘤(膀胱乳头状瘤25例,低级别膀胱癌30例,高级别膀胱癌30例)和20例膀胱正常组织石蜡标本中HRG-1表达情况,并进行相关临床病理分析.设计针对HRG-1基因的siRNA,转染膀胱癌T24细胞,应用免疫印迹法和RT-PCR分析HRG-1 siRNA的表达,MTT和流式细胞术(FCM)检测其增殖凋亡的变化.结果 正常膀胱组织和膀胱癌组织中HRG-1的表达水平比较差异有统计学意义(P＜0.05);HRG-1的阳性表达与膀胱肿瘤病例分级、临床分期相关(P＜0.05);转染siRNA后,HRG-1表达水平下降,MTT和FCM检测发现,细胞增殖曲线受到抑制,HRG-1-siRNA转染组与空载体转染组及未转染组比较,细胞凋亡比例增加,差异均具有统计学意义(P＜0.01).结论 siRNA-HRG-1处理T24细胞后,细胞的增殖受到抑制,同时凋亡比例增加,提示HRG-1基因可能参与了膀胱癌的发病.     

Livin靶向RNA干扰对人胃癌细胞SGC7901细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨Livin靶向RNA干扰对SGC7901细胞株生物学特性的影响,探索胃癌基因治疗的新途径。方法设计和构建Livin特异性的siRNA真核表达载体,转染SGC7901细胞,应用RT-PCR分析LivinmRNA的表达情况,采用MTT法检测细胞的生长状况,通过流式细胞仪进行细胞凋亡的检测。结果构建真核表达载体p-siRNA1并转染SGC7901细胞后,RT-PCR结果显示2条Livin siRNA真核表达质粒均能有效抑制Livin mRNA的转录表达,干扰组细胞与未转染组细胞比较,生长受到明显抑制,凋亡率明显增加。结论成功构建了Livin干扰真核表达载体,siRNA重组体能有效抑制人胃癌细胞Livin mRNA表达,并抑制胃癌细胞生长,促进其凋亡。     

RNA沉默Slug基因对人乳腺癌细胞株MCF-7侵袭及血管生成的影响

目的:研究Slug-shRNA-1干扰Slug基因对MCF-7侵袭潜力及诱导血管内皮细胞形成管腔能力的影响。方法:通过体外侵袭模型,测定MCF-7通过Slug-shRNA-1作用于Slug基因后穿透Matrigel的潜力;应用MCF-7与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)双室联合培养技术,观察MCF-7通过Slug-shRNA-1作用于Slug基因后诱导HUVEC形成管腔能力的影响。结果:siRNA-Slug作用于Slug基因后能明显降低MCF-7穿透Matrigel的能力(P<0.05),抑制MCF-7诱导HUVEC形成管腔样结构的能力(P<0.05)。结论:Slug-shRNA-1作用于Slug基因后能明显降低MCF-7的侵袭潜力,抑制MCF-7诱导管腔形成能力。     

汞作业工人血浆差异表达microRNA研究

目的筛选汞作业工人接汞早期血浆特异性microRNA(miRNA)分子。方法将研究对象分为汞吸收组和对照组,每组10人。先使用miRNA微阵列芯片分析两组miRNA表达谱,再对候选差异miRNA进行Real-Time PCR验证。结果在10个符合候选条件的microRNA中,最终选出2个miRNA:hsa-miR-16(P0.001)、hsa-miR-451a(P0.05),其在汞吸收组中相较于对照组显著下调,结果与芯片分析一致。结论 miR-16和miR-451a可能成为汞作业工人早期特异性分子标志物,并且可能在表观遗传水平上参与了汞在人体内的毒作用过程,但需要进一步探讨研究miRNA改变与汞暴露的因果关系。     

胃癌细胞侵袭与转移相关基因的研究进展

胃癌是我国发病率与死亡率最高的消化道肿瘤。侵袭和转移是恶性肿瘤最重要的生物学行为,是患者术后复发和死亡的最主要原因。因此,研究影响胃癌侵袭和转移的相关因子,寻求能准确判断胃癌侵袭转移潜能的分子生物学因子,具有十分重要的意义。本文重点阐述原癌基因-1(fos related antigen-1,Fra-1)、细胞外信号调节激酶(extracellular regulated rotein kinases,ERK)、尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase plasminogen activator,uPA)、尿激酶型纤溶酶原激活物受体(urokinase plasminogen activator receptor,uPAR)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制剂-3(tissue inhibitor of metalloproteinase-3,TIMP-3)等胃癌侵袭转移相关因子在侵袭转移过程中的作用。     

EGFL7基因沉默对裸鼠胃癌血管生成的影响

目的 探讨类表皮生长因子域7（EGFL7）基因沉默对胃癌裸鼠模型瘤内血管生成的影响.方法 构建EGFL7短发夹状RNA表达质粒并转染SGC-7901细胞（psh EGFL7组）,以空质粒转染为对照组.观察两组皮下种植瘤生长曲线及体积.免疫组织化学法检测抗-CD34、血管内皮生长因子（VEGF）、血小板反应蛋白（TSP1）表达;RT-PCR检测MMP-2和TIMP2表达.结果 psh EGFL7组种植瘤体积为（1.86±0.65）cm^3,微血管密度（MVD）为20.84±6.38,分级为1～2级,对照组体积为（4.86±1.15）cm^3,MVD为39.48±9.01,分级为3～4级,两组种植瘤体积、MVD和分级的差异有统计学意义（P＜0.05）.EGFL7组TSP1蛋白阳性表达,而VEGF蛋白为弱阳性或阴性表达,MMP-2 mRNA表达下调,而TIMP2 mRNA表达上调,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 EGFL7基因沉默可降低胃癌种植瘤血管生成,与调节MMP-2/TIMP2表达,影响VEGF/TSP1平衡有关.     

EGFL7基因沉默对裸鼠胃癌血管生成的影响

Objective To investigate the effect of short hairpin RNA (shRNA) targeting at epidermal growth factor-1 ike domain 7 ( EGFL7 ) gene on angiogenesis of stomach carcinoma and its mechanism in nude mice.Methods shRNA targeting at EGFL7 gene was constructed and transfected into SGC-7901 cells (pshEGFL7 group), meanwhile, the cells transfected with vector plasmids were used as control group.Positive clones were selected and the transplanted tumor animal models were constructed in nude mice, and the growth and volume of tumors were observed.After 8 weeks, EGFL7 mRNA and protein in transplanted tumor tissues were detected.Moreover, Anti-CD34, VEGF and TSP1 were stained by the immuno- chemistry method, and MMP-2 and TIMP2 mRNA were detected by RT-PCR.Results EGFL7 mRNA was significantly down regulated in pshEGFL7 group.In psh EGFL7 group, the tumor volume was 1.86 ± 0.65 cm3,MVD was 20.84 ± 6.38, while in control group, the tumor volume was 4.86 ± 1.15 cm3, MVD was 39.48±9.01.In EGFL7 group, TSP1 protein presented positive, and VEGF protein presented weakly positive or negative.The expression of MMP-2 mRNA decreased, TIMP2 mRNA increased in pshEGFL7 group, and it was significantly different compared with control group( P ＜0.01 ).Conclusion RNA interference targeting at EGFL7 gene can balance TSP1/VEGF, through regulating the expression of MMP-2/TIMP2 to impair angiogenesis of stomach cancer in nude mice.     

EGFL7基因沉默对裸鼠胃癌血管生成的影响

Objective To investigate the effect of short hairpin RNA (shRNA) targeting at epidermal growth factor-1 ike domain 7 ( EGFL7 ) gene on angiogenesis of stomach carcinoma and its mechanism in nude mice.Methods shRNA targeting at EGFL7 gene was constructed and transfected into SGC-7901 cells (pshEGFL7 group), meanwhile, the cells transfected with vector plasmids were used as control group.Positive clones were selected and the transplanted tumor animal models were constructed in nude mice, and the growth and volume of tumors were observed.After 8 weeks, EGFL7 mRNA and protein in transplanted tumor tissues were detected.Moreover, Anti-CD34, VEGF and TSP1 were stained by the immuno- chemistry method, and MMP-2 and TIMP2 mRNA were detected by RT-PCR.Results EGFL7 mRNA was significantly down regulated in pshEGFL7 group.In psh EGFL7 group, the tumor volume was 1.86 ± 0.65 cm3,MVD was 20.84 ± 6.38, while in control group, the tumor volume was 4.86 ± 1.15 cm3, MVD was 39.48±9.01.In EGFL7 group, TSP1 protein presented positive, and VEGF protein presented weakly positive or negative.The expression of MMP-2 mRNA decreased, TIMP2 mRNA increased in pshEGFL7 group, and it was significantly different compared with control group( P ＜0.01 ).Conclusion RNA interference targeting at EGFL7 gene can balance TSP1/VEGF, through regulating the expression of MMP-2/TIMP2 to impair angiogenesis of stomach cancer in nude mice.     

siRNA对胰腺癌细胞c-Src表达的影响

目的 应用小干扰RNA(siRNA)干扰胰腺癌PANC-1细胞的c-Src表达,为后续试验做准备.方法 将c-Src siRNA,经LipofectamineTM2000脂质体转染胰腺癌PANC-1细胞后,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹技术(Western blot)分别检测c-Src基因mRNA和c-Src蛋白表达的变化.结果 转染后胰腺癌PANC-1细胞的c-Src的mRNA与蛋白表达明显减少.结论 运用RNA干扰技术,可以有效地干扰胰腺癌PANC-1细胞c-Src的表达.     

二甲双胍联合阿帕替尼对胃癌细胞的增殖抑制作用

目的 探讨二甲双胍联合阿帕替尼对胃癌BGC823细胞系的增殖抑制作用及其可能的机制。方法 MTT法检测不同浓度二甲双胍（0～30 mmol/L)、不同浓度阿帕替尼（0～60 μmol/L）及两药联合应用处理BGC823细胞24、48、72 h的增殖抑制率,结晶紫染色法检测细胞集落形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡,western blot检测细胞中血管内皮生长因子信号通路及凋亡相关蛋白VEGFR2、PI3K、p - AKT、AKT、Bax、Bcl - 2表达水平。结果 二甲双胍和阿帕替尼单独处理BGC823后,细胞增殖抑制率均增加（P＜0.05）,联合用药产生协同作用（CI＜1）,二甲双胍和阿帕替尼单独及联合应用均能抑制细胞集落形成并使总凋亡比例增加（P＜0.05）。与对照组和单药组相比,联合用药可明显下调细胞中VEGFR2、PI3K、p - AKT、AKT、Bcl - 2蛋白的表达水平,上调Bax蛋白表达水平（P＜0.05）。结论 二甲双胍联合阿帕替尼具有协同抑制胃癌BGC823细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用,其机制可能与抑制VEGF信号通路有关。     

香菇对培养中胃癌细胞生长影响的初步观察

应用细胞培养技术,观察了香菇Cr-02,Cr-59,465对人胃癌803细胞株增殖抑制的作用。结果表明:不同浓度香菇对癌细胞生长影响不同,高浓度时三个品种的香菇在试管中均具有一定程度的抑制癌细胞生长的作用,平均抑制率以Cr-02香菇效果较好,而中低浓度时Cr-59和菇465似有促进癌细胞生长倾向。     

RhoC基因对宫颈癌细胞粘附和侵袭能力的影响

目的:研究RhoC对宫颈癌细胞粘附、侵袭和迁移能力的影响。方法:以宫颈癌SiHa细胞株为研究对象,转入RhoC小干扰RNA抑制其表达,通过体外粘附实验、侵袭实验和迁移试验比较SiHa细胞粘附率、侵袭能力和迁移能力的变化。结果:转入RhoC小干扰RNA后,RhoC蛋白的表达明显下调,对细胞外基质的粘附率明显下降(P<0.01),体外侵袭能力和迁移能力明显下降,侵袭抑制率和迁移抑制率分别为(19.94±6.06)%和(19.16±5.26)%。结论:RhoC能明显促进宫颈癌的转移。     

米非司酮对子宫肌瘤中血管内皮生长因子表达及微血管密度的影响

目的 :探讨子宫肌瘤中血管内皮生长因子 ( VEGF)和微血管密度 ( MVD)的关系及米非司酮治疗子宫肌瘤的机制。方法 :将 40例有症状的子宫肌瘤患者随机分成两组 ,试验组 2 0例 ,于月经周期的分泌早期给予米非司酮治疗 ,剂量为每天 2 5 mg;对照组 2 0例未给任何治疗 ,采用免疫组化的方法对子宫肌瘤中血管内皮生长因子和微血管密度进行半定量的分析。结果 :血管内皮生长因子及微血管密度在子宫肌瘤中有显著的正相关性 ( r=0 .869,P<0 .0 1)。治疗组较对照组血管内皮生长因子及微血管密度均有明显下降 ( P<0 .0 5及 P<0 .0 1)。结论 :子宫肌瘤中血管内皮生长因子与其血管生成关系密切 ,米非司酮通过抑制子宫肌瘤中血管内皮生长因子的表达 ,从而减少肌瘤血液供应 ,抑制其生长 ,改善其临床症状     

共轭亚油酸对人胃腺癌细胞侵袭能力的影响及其作用机制

研究c9,t11-共轭亚油酸 (CLA)对人胃腺癌细胞 (SGC 790 1)侵袭能力的影响 ,探讨其抑制肿瘤转移的可能机理。用 0、2 5、5 0、10 0和 2 0 0 μmol LCLA处理细胞 2 4h后 ,分别用重组基底膜侵袭实验评价癌细胞侵袭能力 ;PAGE底物酶谱方法检测Ⅳ型胶原酶活性 ;RT PCR方法检测SGC 790 1细胞TIMP 1和TIMP 2mR NA表达。研究结果表明 :c9,t11 CLA处理后 ,SGC 790 1细胞侵袭重组基底膜的能力下降、SGC 790 1细胞培养上清中的Ⅳ型胶原酶活性降低、SGC 790 1细胞中TIMP 1和TIMP 2mRNA的表达增加。因此 ,c9,t11 CLA抑制SGC 790 1细胞侵袭重组基底膜 ,并且c9,t11 CLA的抗侵袭活性与降低肿瘤细胞培养上清中Ⅳ型胶原酶活性和诱导肿瘤细胞TIMP 1和TIMP 2mRNA的表达等有关