蒿甲醚对人胶质瘤细胞系U251细胞凋亡的影响

目的研究蒿甲醚对体外培养的人胶质瘤细胞系U251细胞凋亡的影响并初步探讨其机制。方法不同浓度蒿甲醚（25、50、100、200、400、800μmol／L）作用U251胶质瘤细胞,四甲基偶氮唑盐法测定药物抑制率和半抑制浓度（IC50）;流式细胞术检测细胞周期的变化和细胞凋亡情况;Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡情况。结果蒿甲醚对U251细胞生长抑制率随药物浓度增加而显著增加（P〈O．05）,同时随药物作用时间延长而显著增加（P〈O．05）。药物作用24、48和72h,其IC50分别为849．28±25．89、518．93±32．83和172．99±6．06μmol／L,三者之间均差异显著（P〈0．05）。经400μmol／L蒿甲醚作用48h,Hochest33258荧光染色可观察到凋亡小体。经400μmol／L蒿甲醚作用24、48、72h,细胞凋亡率分别为（4．55±0．24）％、（12．82±1．88）％和（24．22±2．17）％,三者之间均差异显著（P〈0．05）;细胞周期分析显示,随着蒿甲醚作用时间的延长,G0/G1期细胞比例显著增加（P〈0．05）,S期和G2/M期细胞比例显著减少（P〈O．05）。结论蒿甲醚能抑制U251细胞生长,呈剂量和时间依赖性;其机制可能为将细胞阻滞在G0/G1期并诱导其凋亡。     

雷公藤红素对C6胶质瘤细胞凋亡及细胞周期阻滞的影响

目的 探讨雷公藤红素对体外C6胶质瘤细胞凋亡及细胞周期阻滞的影响及机制.方法 雷公藤红素处理体外培养的C6胶质瘤细胞,MTT法检测细胞增殖,Hochest33342染色荧光显微镜观察以及锇铀铅染色透射电镜观察胶质瘤细胞形态变化,流式细胞术分析细胞凋亡率及细胞周期改变.蛋白印迹分析检测凋亡相关蛋白及细胞周期调控蛋白的表达变化.结果 雷公藤红素对C6胶质瘤细胞的增殖抑制作用呈浓度和时间依赖性;2.56 μmol/L雷公藤红素处理C6胶质瘤细胞24h后,荧光显微镜、透射电镜下均可见凋亡形态学改变.流式细胞术检查显示,凋亡细胞比例由1.32％升高到19.34％;并且,处于G0/G1期的细胞比例由76.42％降低到54.52％,G2/M期细胞比例由9.29％升高到30.50％.蛋白印迹分析显示,雷公藤红素降低了Bcl -2及XIAP蛋白表达,促进了Bax及Caspase -3的表达以及PARP的剪切;雷公藤红素在诱导细胞周期调控蛋白p21、p27及cyclin B1蛋白表达增加的同时抑制了cdk2蛋白的表达.结论 雷公藤红素能够通过调节凋亡相关蛋白及细胞周期相关因子的表达影响C6胶质瘤细胞的凋亡及细胞周期阻滞.     

Celecoxib诱导C6胶质瘤细胞凋亡的研究

目的探讨Celecoxib(塞来昔布)诱导C6胶质瘤细胞凋亡的作用。方法应用吖啶橙、透射电镜和流式细胞仪(FCM)检测方法。结果通过吖啶橙及电镜检查发现Celecoxib 50μmol／L组细胞凋亡明显多于12．5μmol／L组，FCM检测Celecoxib 50μmol／L组细胞凋亡为15．32％，12．5μmol／L组凋亡为5．83％，不同浓度的Celecoxib对C6胶质瘤细胞有增殖抑制及诱导凋亡的作用，凋亡随药物浓度增加而升高。结论Celecoxib对C6胶质瘤细胞呈剂量依赖性抑制及诱导凋亡的作用．对胶质瘤治疗有重要意义。     

逆转录酶抑制剂AZT对胶质瘤干细胞端粒酶活性和细胞增殖的影响

目的 探讨逆转录酶抑制剂3-叠氮-3-脱氧胸腺核苷(AZT)对脑胶质瘤干细胞增殖的影响及相关机制.方法 原代分离培养脑胶质瘤干细胞和脑胶质瘤细胞并鉴定,两种细胞同时设立为实验组(0.125 mot/L、0.250 mol/L、0.500 mol/L AZT)和对照组.MTT法检测AZT对两种细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的改变;端粒重复序列扩增技术-酶联免疫吸附试验(TRAP-ELISA)检测端粒酶活性的变化.结果 AZT对两组细胞的生长抑制呈浓度-时间依赖性(均P<0.05),在同一浓度和时间点,AZT对脑胶质瘤干细胞的生长抑制作用弱于脑胶质瘤细胞(均P<0.05).0.250 mol/L、0.500 mol/L AZT作用72 h后,脑胶质瘤干细胞的凋亡率分别为(4.21±1.53)%、(10.60±0.38)%,而脑胶质瘤细胞的凋亡率分别为(6.75±1.25)%,(14.30±2,59)%,明显高于胶质瘤干细胞(均P<0.05).AZT对两组细胞端粒酶活性的抑制呈浓度-时间依赖性(均P<0.05),且在同一浓度和时间点对脑胶质瘤细胞的作用明显强于脑胶质瘤干细胞(均P<0.05).结论 逆转录酶抑制剂AZT对脑胶质瘤干细胞和脑胶质瘤细胞均有明显的生长抑制作用,可能机制是通过抑制端粒酶活性、调控细胞周期和诱导细胞凋亡实现.脑胶质瘤干细胞的耐药性强于胶质瘤细胞,其机制有待进一步研究.     

姜黄素通过Fas/FasL信号通路调控胶质瘤细胞增殖和凋亡

目的 探讨姜黄素通过Fas/FasL信号通路对胶质瘤细胞的增殖及凋亡产生影响.方法 以人胶质细胞瘤U87细胞为研究对象,采用细胞毒性试验检测姜黄素对U87胶质瘤细胞的细胞毒性作用.四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、平板克隆实验(colony formation assay)观察姜黄素对胶质瘤增殖能力的影响;流式细胞术(FCM)及Caspase-3活性检测细胞凋亡;流式细胞术检测胶质瘤细胞周期;实时定量PCR、Western blot法检测细胞内Fas、FasL mRNA和蛋白的表达水平.结果 随着姜黄素浓度增加,胶质瘤细胞系的细胞毒性作用也增强(P＜0.05),24 h的IC50为14.28 μmol/L.流式细胞术检测姜黄素阻滞胶质瘤细胞周期于G舢压期.姜黄素作用胶质瘤后Fas和FasL在mRNA和蛋白表达水平上升(P＜0.05).姜黄索对胶质瘤细胞的增殖及细胞集落形成有抑制作用,并呈浓度和时间依赖性(P＜0.05).结论 姜黄素可能通过上调Fas/FasL通路抑制胶质瘤细胞增殖并促进凋亡.     

姜黄素诱导自噬抑制脑胶质瘤U87细胞增殖的研究

目的研究姜黄素对脑胶质瘤U87细胞增殖的抑制作用及机制。方法采用10、20、40、60、80μmol/L姜黄素分别处理U87细胞72h后,MTT法检测姜黄素对U87细胞增殖的影响。流式细胞术检测40μmol/L姜黄素处理前后U87细胞周期和凋亡变化。提取40μmol/L姜黄素处理前后不同时间点U87细胞总蛋白,Westernblot检测自噬相关蛋白LC3的表达。结果姜黄素呈剂量依赖性抑制U87细胞增殖(P0.05),半数抑制浓度(IC50)为42.44μmol/L。姜黄素诱导G2-M期细胞周期阻滞,实验组G2-M期细胞比例为(47.71±2.67)%,对照组为(17.96±0.88)%(P0.01);实验组细胞凋亡率为(3.93±0.82)%,对照组为(1.80±0.65)%,两组差异无统计学意义(P0.05)。姜黄素给药12、24、48h,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值分别为(0.89±0.004)、(0.93±0.01)、(1.09±0.02),高于对照组(0.76±0.04)(P0.05);3-MA能减弱姜黄素对U87细胞增殖的抑制作用。结论姜黄素通过诱导自噬抑制脑胶质瘤U87细胞的增殖。     

砷剂对胶质瘤细胞的促凋亡作用

目的 研究三氧化二砷(As2O3)对不同胶质瘤细胞系的作用以及机制.方法 应用MTT法观察As2O3对细胞生长的影响,并用透射电镜、Hoechst 33342/PI双染荧光和TUNEL观察C6胶质瘤细胞与9L胶质肉瘤细胞凋亡的形态变化;Annexin-v-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡率.结果 MTF法发现As2O3在0.5-8.0μmol/L的浓度均可显著抑制C6与9L胶质瘤细胞株的生长;透射电镜、Hoechst 33342/PI双染荧光和TUNEL观察均显示两种胶质瘤细胞发生了显著的凋亡形态改变;Annexin-v-FITC/PI法检测显示随As2O3浓度的增大和时间的延长,C6与9L胶质瘤细胞株的凋亡率明显上升,而在相同时间及浓度下9L胶质瘤细胞株凋亡率要小于C6胶质瘤细胞株.结论 As3O3可诱导C6和9L胶质瘤细胞株产生凋亡,并且其作用具有选择性.     

鸦胆子油乳对SKMG-4胶质瘤细胞抑制作用研究

目的探讨鸦胆子油乳注射液对人脑胶质瘤细胞增殖的影响及其作用机制。方法体外培养人脑胶质瘤细胞SKMG-4;利用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测鸦胆子油乳注射液对SKMG-4增殖的抑制作用;利用流式细胞术(FCM)分析药物处理前后SKMG-4的细胞周期变化;应用免疫组化检测药物处理前后bcl-2表达情况。结果 MTT比色法显示鸦胆子油乳注射液对SKMG-4细胞增殖的抑制作用呈剂量依赖性,当浓度为5 g/L时,对SKMG-4细胞增殖的抑制率达到72.1%±2.2%(P<0.05)。流式细胞仪分析显示,用5 g/L鸦胆子油乳注射液培养48 h,细胞周期中G1期细胞所占比例增高,S期所占比例降低。免疫组化显示随着鸦胆子油乳注射液作用剂量的增加,bcl-2基因的表达被明显抑制。结论中药鸦胆子油乳注射液能通过调控细胞周期,抑制bcl-2凋亡基因的表达抑制人脑胶质瘤细胞SKMG-4的增殖。     

抗栓中药血栓心脉宁片体外抗氧化损伤作用的FCM和ELISA研究

目的 探讨抗栓中药对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用. 方法 实验分为正常对照组、氧化损伤模型组及血栓心脉宁片给药组,以H2O2致HUVEC的氧化损伤模型为研究对象,加入抗栓中药血栓心脉宁片进行预先干预,采用甲基偶氮四唑蓝(MTT)法检测细胞活力,流式细胞术(FCM)检测细胞的生长周期,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活性. 结果 与正常对照组相比,氧化损伤模型组MTT检测结果显示HUVEC活力明显下降,FCM检测结果显示细胞生长周期阻滞在G0-G1期,且ELISA结果显示细胞上清液中NO含量及NOS含量及SOD活性显著降低,NO含量由31.95 μmol/L降低到24.82 μmol/L,NOS含量由3.13 μmol/L降低到2.58μmol/L,SOD活性由128.2 U/mL降低至109.17 U/mL,差异均具有统计学意义(P＜0.05),表明HUVEC氧化损伤明显.与氧化损伤模型组相比,血栓心脉宁片给药组细胞生长在G0-G1期没有出现阻滞作用,细胞上清液中NO、NOS含量及SOD活性均明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 FCM和ELISA研究结果表明抗栓中药血栓心脉宁片具有明显的抗HUVEC氧化损伤作用.     

三氧化二砷对人脑SHG-44胶质瘤细胞作用的体外实验研究

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对人脑SHG-44胶质瘤细胞株的增殖抑制及诱导凋亡机制.方法 将不同浓度的As2O3与体外培养的SHG-44胶质瘤细胞相互作用后,采用MTT比色法检测As2O3对胶质瘤细胞的增殖抑制;倒置显微镜、荧光显微镜下观察吉姆萨及Hochest33258染色后细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪检测细胞凋亡及对SHG-44胶质瘤细胞周期影响.结果 MTT比色法检测到As2O3对SHG-44胶质瘤细胞增殖具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性和时间依赖性;倒置显微镜及荧光显微镜下可观察到给药组细胞生长密度低以及出现细胞凋亡的特征性改变;流式细胞仪检测到给药组细胞凋亡比率明显高于空白对照组(P＜0.05),并具有剂量依赖性及时间依赖性,同时将胶质瘤细胞阻滞在S期,抑制了细胞周期的进程.结论 As2O3对SHG-44胶质瘤细胞增殖具有明显的抑制作用、可诱导SHG-44胶质瘤细胞的凋亡,并抑制细胞周期进程.     

铜绿假单胞菌制剂对大鼠C6胶质瘤细胞作用的体外机制研究

[摘要] 目的 初步探讨铜绿假单胞菌制剂（PA-MSHA）对体外培养的大鼠C6胶质瘤细胞的增殖抑制机制。方法 体外培养大鼠C6胶质瘤细胞, MTT比色法测定不同时间、不同浓度PA-MSHA对C6胶质瘤细胞的增殖抑制率。Hochest 33258染色,荧光显微镜下检测细胞凋亡,流式细胞仪检测PA-MSHA对C6细胞周期的影响。结果MTT比色法结果提示,细胞生长抑制率与药物作用时间和剂量正相关。24小时和48小时IC50值分别为(5.80±1.79)× 108cfu/ml和(3.90±2.14) × 108cfu/ml。Hochest33258染色可见明显的细胞凋亡形态学改变,流式细胞仪检测,药物作用组可见典型的亚二倍体峰即凋亡峰（AP）,且随浓度加大S期比例明显增多。 结论 铜绿假单胞菌(PA-MSHA)制剂对体外培养的C6胶质瘤细胞具有增殖抑制作用,且呈时间剂量依赖性。其机制可能与诱导细胞凋亡及S期阻滞有关。     

声动力疗法对C6胶质瘤细胞的生物效应研究

目的探讨声动力化学疗法（SDT）治疗脑胶质瘤的可能性：方法采用四唑盐比色法，即MTT法测定C6胶质瘤细胞托SDT组、超声组、血啉甲醚（HMME）组、对照四组6h的抑瘤率，流式细胞学（FCM）检测四组6h的凋亡率，透射电镜观察四组6h亚细胞结构的变化。结果SDT组抑瘤率为77．61％、凋亡率为38．34％，显著增高；超声组也有一定的抑瘤率、凋亡率：HMME组抑瘤率、凋亡率与对照组无明显差别.透射电镜观察对照组、HMME组C6细胞无明显变化，超声组部分细胞呈早期凋亡表现，SDT组细胞呈现凋亡或坏死状态。结论SDT能显著杀伤体外C6胶质瘤细胞，并诱导其凋亡。     

白藜芦醇抑制SHG-44胶质瘤细胞生长实验研究

目的探讨白藜芦醇(Res)在体外诱导脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡并抑制其生长的作用。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测量不同剂量的Res作用6h、24h和48h后对SHG-44胶质瘤细胞增殖的影响。HE染色、Hoechst33342荧光染色观察细胞形态改变,DNAladder检测细胞DNA裂解情况,流式细胞仪用异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V(AnnexinV-FITC)和碘化丙啶(PI)双染检测凋亡率,并测定细胞周期的改变。结果Res明显抑制SHG-44细胞的生长和增殖(P<0.01),呈浓度及时间依赖性反应;Res所致的SHG-44胶质瘤细胞凋亡为浓度依赖关系,随着浓度的增高,凋亡更明显。此凋亡细胞周期主要发生G1期比例升高,S、G2期比例降低。结论Res明显抑制SHG-44细胞生长并诱导其发生凋亡和细胞周期改变,为Res用于治疗脑胶质细胞瘤提供了实验依据。     

CD、Flt-1基因对原代培养的恶性胶质瘤细胞VEGF表达及生长的影响

目的研究CD、Flt-1基因对恶性胶质瘤细胞VEGF表达及生长的抑制作用。方法 CD、FLT-1基因共表达质粒pEGFP-C1-CD-Flt-1转染恶性胶质瘤细胞,ELISA法检测培养液上清中VEGF含量,实时定量PCR及免疫组化检测细胞VEGFmRNA及蛋白的表达,通过MTT法和流式细胞术观察其对细胞活性的影响。结果转染72h后实验组细胞VEGFmRNA及蛋白水平显著降低,培养液中VEGF含量降低,细胞活性受到抑制,流式细胞术发现实验组细胞的G1期细胞比例明显高于对照组,细胞出现凋亡。结论重组质粒pEGFPC1-CD-Flt-1,其体外可抑制恶性胶质瘤细胞VEGFmRNA及蛋白的表达,抑制细胞活性、诱导细胞凋亡。     

尼莫司汀缓释微球对C6胶质瘤细胞的毒性作用

目的考察BCNU-PLGA缓释微球浸出液对肿瘤细胞的毒性作用。方法以含不同载药量及不同释放时间（4h、1、2、3、7、14d）的BCNU-PLGA-MS浸提液作用于培养的C6胶质瘤细胞，以流式细胞仪检测细胞的凋亡和细胞周期的变化。并观察凋亡细胞的电镜形态学变化。结果缓释微球可以引起明显的细胞坏死和凋亡，不同载药量缓释微球引起的细胞死亡率由（5.35±1.99）%上升到（20.15±2.96）%，晚期凋亡率由（4.25±1.11）%上升到（32.33±2.62）%，细胞早期凋亡率由（6.44±0.57）%上升到（21.82±3.04）%，G0G1期细胞上升，S期细胞比例降低，增殖指数呈现降低的趋势。电镜下可见典型的凋亡形态特征。结论BCNU-PLGA缓释微球可以抑制C6胶质瘤细胞的增殖，随释放时间延长细胞生长抑制率逐渐上升。     

盐酸小檗碱诱导人脑胶质瘤细胞U251凋亡及其与HERG钾离子通道的表达相关研究

目的探讨盐酸小檗碱(ber)诱导人脑胶质瘤细胞U251凋亡及其与HERG钾离子通道表达相关性。方法使用不同浓度的ber处理人胶质瘤细胞U251,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)染色法测定细胞增值率,Hoechst33258荧光染色法观察细胞形态学改变,流式细胞术测定细胞凋亡率,分别采用实时荧光定量PCR与Western Blotting检测HERG钾通道的RNA及蛋白的表达情况。结果 MTT法检测显示细胞抑制率呈浓度与时间依赖性,且随药物浓度增加而增大(P0.05),其24 h的半数抑制浓度(IC50))是(8.78±0.20)μmol/l;Hoechst33258荧光染色法检测表明处理组出现典型的凋亡特征;且流式细胞术检测结果表明随着ber的剂量增加U251细胞的早期凋亡率及晚期凋亡率逐渐增大(P0.05);RT-PCR与Western Bloting检测结果显示ber处理后U251细胞的HERG钾通道的RNA含量及蛋白的表达均上调,且随着药物浓度的增高而增高。结论在体外ber可诱导人胶质瘤细胞系U251的凋亡,并可能通过上调HERG蛋白的表达抑制U251增殖。     

舒林酸抑制胶质瘤细胞株C6增殖的实验研究

目的观察非甾体类抗炎药舒林酸对胶质瘤C6细胞增殖的影响，并探讨其作用机制。方法采用四氮唑蓝（MTT）比色法观察舒林酸对C6细胞增殖的影响，采用流式细胞仪检测舒林酸对C6细胞凋亡和细胞周期分布的影响。结果舒林酸可抑制C6细胞增殖，可诱导细胞凋亡和G0/G1期阻滞，且呈现明显的时间和剂量依赖性（P〈0．05）。结论舒林酸可抑制C6细胞增殖，其机制涉及影响细胞周期和诱导细胞凋亡方面。