Scorpions-ARMS法检测非小细胞肺癌患者外周血EGFR基因突变及其临床预测价值的研究

目的应用蝎形扩增阻滞突变系统（Scorpions—ARMS）检测非小细胞肺癌患者外周血EGFR基因突变及其临床预测价值的研究。方法应用蝎型扩增阻滞突变系统（Scorpions—ARMS）检测非小细胞肺癌外周血中EGFR基因第18、19、20及21外显子突变,统计分析EGFR基因突变的相关因素。结果50例非小细胞肺癌患者中,EGFR基因的突变率为30％（15／50）。结果EGFR基因的突变率47．4％（女性）明显高于19．4％（男性）。非吸烟患者EGFR突变率45．5％高于吸烟患者17．9％,差异有统计学意义（P=0．035）。在非小细胞肺癌患者中,腺癌患者EGFR突变率40．6％明显高于非腺癌患者11．1％,差异有统计学意义（P=0．029）。结论Scorpions—ARMS是检测血清游离DNA中EGFR基因突变的可靠有效方法。     

基于临床病理特征富集初治NSCLC患者EGFR基因突变的相关研究

目的分析初治非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者肺原发灶EGFR（epidermal growth factor receptor,EGFR）基因突变状态与临床病理特征的相关性,为临床EGFR—TKIs（tyrosine kinase inhibitors,TKIs）用药提供依据。方法收集第三军医大学附属大坪医院应用增殖阻遏突变系统（amplification refractory mutation system,ARMs）进行EGFR突变分析253例初治非小细胞肺癌患者的性别、年龄、吸烟史、KPS（Karnofsky performance status,KPS）评分、组织病理类型、TNM临床分期以及伴有脑转移患者的脑转移灶数量、确诊肺癌至诊断脑转移时间（brain metastasis time from diagnosis of lungcancer,BMT）和颅外转移状况等临床病理资料,应用x。检验分析EGFR突变状态与各临床病理特征的关系。结果253例初治NSCLC患者,EGFR基因敏感型突变率42．3％（107／253）,其中EGFR基因第19、21外显子突变比例分别为70．1％（75／107）、39．1％（32／107）,而EGFR基因20外显子TKIs耐药型突变率0．8％（2／253）。女性、无吸烟史、腺癌的肺原发灶EGFR基因敏感型突变率明显高于男性、有吸烟史、非腺癌患者,分别为70．2％（66／94）VS25．8％（41／61）、60．9％（81／133）VS18．1％（19／105）和50．0％（103／206）vs8．5％（4／47）,两者有显著性差异（P〈O．05）。结论初治NSCLC患者肺原发灶存在较高（42．3％）EGFR基因敏感型突变,其中女性、腺癌、无吸烟史NSCLC患者EGFR基因敏感突变显著多见。     

DNA直接测序技术检测EGFR基因及突变分析

目的：探讨非小细胞肺癌（NSCI,C）患者表皮生长因子受体（EGFR）基因突变的情况及EGFR-TKI的治疗效果。方法：从94例晚期NSCLC患者的肿瘤组织中提取DNA,采用DNA直接测序技术检测EGFR基因18、19、20、21外显子的突变情况。对EGFR基因突变可评估患者采用TKI口服治疗（吉非替尼250mg／d、厄洛替尼150mg／d）,评价客观有效率（RR）、疾病控制率（DCR）及无疾病进展时间。结果：94例患者中39例（41．5％）存在EGFR基因突变,其中27例外显子19突变．2例外显子20突变,9例外显子21突变、1例外显子18突变。女性患者突变率显著高于男性（56．1％vs30．2％．P〈0．05）;腺癌患者突变率高于非腺癌患者（48％／）815．8％,P〈0．05）;不吸烟者突变率显著高于吸烟者（50．8％vs20．7％,P〈0．05）。16例患者口服TKI后部分缓解5例、疾病稳定7例、疾病进展PD4例,客观有效率为31．2％,疾病控制率为75．0％,截至随访结束,仍有14例患者生存,无疾病进展时间为（11．3l±4．44）个月,1年生存率为43．8％,、结论：DNA直接测序检测晚期NSCLC患者EGFR基因突变具有高度敏感性,以EGFR基因突变结果为依据,应用TKI治疗晚期NSCL C疗效明显。     

早期非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变分布

目的探索早期非小细胞肺癌（NSCLC）表皮生长因子受体（EGFR）基因突变状况。方法以上海市胸科医院2003年6月1日--2011年6月1日期间早期NSCLC患者为研究对象,收集NSCLC根治术后原发灶标本,采用PCR扩增和直接测序方法检测EGFR突变;EGFR敏感突变和非敏感突变患者之间临床病理特征比较采用x。检验。采用Logistic回归法分析EGFR敏感突变与临床病理特征的相关性。结果共入组165例NSCLC患者,其中EGFR野生型93例（56．36％,93／165）,EGFR突变72例（43．64％,72／165）,敏感突变56例（19del33例和21L858R23例）,占总人群33．94％（56／165）,占所有突变77．78％（56／72）;单因素分析发现,腺癌、不吸烟、原发灶直径〈5cm和EGFR荧光原位杂交（FISH）扩增阳性患者突变概率较高;Logistic回归分析显示,病理类型及原发灶大小是早期NSCLC患者EGFR敏感突变的独立预测因子,腺癌、肿瘤直径〈5cm患者的EGFR突变概率分别是非腺癌、肿块直径≥5cm患者的4．435倍（95％CI1．209～16．273,P：0．025）、4．343倍（95％CI1．393～13．540,P=0．011）。结论在早期NSCLC患者中,腺癌、不吸烟、原发灶直径〈5em和EGFRFISH扩增阳性患者的敏感突变概率高;病理类型及肿瘤大小是早期NSCLC患者EGFR敏感突变的独立预测因子。     

血浆P16基因突变对非小细胞肺癌发生和发展及预后的意义

目的研究非小细胞肺癌（NSCLC）患者血浆P16基因突变对NSCLC发生、发展争预后估计的意义。方法应用聚合酶链反应（PCR）扩增P16基因第2外显子，并用单链构象多态性分析（SSCP）产物突变情况，再与各生物参数进行相关研究。结果10例健康人血浆中没有测到P16基因第2外显子突变；32例NSCLC患者血浆中有14例（43．75％）测到这种突变，其中，鳞癌、腺癌及腺鳞癌中突变率分别为57．1％（8／14），37．5％（6／16）和0（0／2），鳞癌中P16基因的突变率明显高于腺癌和腺鳞癌（P〈0，05）。TNM分期Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ期NSCLC患者血浆P16基因突变率分别为25．0％（1／4），33．3％（3／9），50．0％（5／10）争55．5％（5／9），Ⅲ，Ⅳ期明显高于Ⅰ，Ⅱ期（P〈0．05）。结论血浆循环核酸P16基因突变在NSCLC中有较高的检出率，并与肿瘤的临床分期和病理类型有关，血浆P16基因突变对NSCLC的诊断以及转移的预测具有重要价值。     

肺癌表皮生长因子受体基因测序分析

目的：探讨中国人肺癌患者表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor,EGFR）基因突变状态。方法用基因测序的方法检测了416例肺癌肿瘤细胞标本EGFR基因第18、19、21外显子,并检测了其中11例EGFR第20外显子区域。23例肺癌患者血液标本作为对照。结果416例肿瘤标本中共发现118例（28.37%）EGFR基因突变,其中19外显子缺失突变占46.09%,21外显子点突变占42.19%,并发现了4例EGFR第20外显子区域突变（4/11）。23例肺癌患者血液标本均未发现突变。肺腺癌的突变率为32.52%,比鳞癌（12.96%）（P=0.004）、其他类型癌（13.89%）（P=0.021）增高,差异有统计学意义。EGFR基因突变在女性患者中（36.72%）所占比例比男性患者高（22.18%）（P=0.001）。结论女性、肺腺癌患者EGFR突变率高,提示可能在表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂的治疗中获益。     

细支气管肺泡癌患者EGFR基因突变的研究

目的探讨表皮生长因子受体（EGFR）基因酪氨酸激酶域体细胞在细支气管肺泡癌（BAC）患者中突变的相关因素。方法分析和检测本院37例细支气管肺泡癌石蜡包埋标本EGFR基因突变状况,采用PCR技术进行EGFR基因18、19、20和21外显子突变分析。结果37例BAC患者中有18例（48．6％）酪氨酸激酶域存在体细胞突变,其中3例（8．1％）为18外显子替代突变,5例（13．5％）为19外显子突变,7例（18．9％）为20外显子替代突变,8例（21．6％）为21外显子替代突变。结论EGFR基因与BAC密切相关。     

中国北方地区非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体基因突变的研究

目的研究中国北方地区非小细胞肺癌(NSCLC)患者肺癌组织表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的情况。方法采用PCR扩增和基因测序,检测93例NSCLC患者癌组织EGFR基因外显子19和21的突变情况,并分析其突变与临床特征的关系。结果93例组织标本中共检测到21例EGFR突变(22.6%),其中16例发生在外显子19的缺失突变,5例发生在外显子21的错义突变。男性与女性,吸烟者与非吸烟者,不同病理分型的NSCLC患者基因突变率间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论中国北方地区NSCLC患者癌组织的EGFR基因在腺癌、女性、非吸烟者中突变率高,这类患者更适宜靶向药物的治疗。     

EGFR19、21外显子突变丰度与NSCLC患者临床特征及吉非替尼疗效的关系

目的 研究表皮生长因子受体(EGFR)基因19、21外显子突变丰度与非小细胞肺癌（NSCLC）患者临床病理特征及吉非替尼疗效的关系。方法 收集2013年10月～2016年11月在本院采用吉非替尼治疗的94例NSCLC患者,采用下一代测序(NGS)法检测血液中EGFR19、21外显子突变情况及突变丰度,统计患者临床病理特征及无进展生存期（PFS）和总生存率（OS）,分析EGFR19、21外显子突变丰度与患者临床病理特征及PFS、OS的关系。结果 94例患者检测EGFR19外显子突变59例（62.77％）,EGFR21外显子突变35例（37.23％）,其中突变高丰度48例,突变低丰度46例;EGFR19、21外显子突变丰度与患者性别、年龄、吸烟史、TNM分期等无关（P＞0.05）,与病理类型、组织分化程度有关（P＜0.05）; 高丰度组疾病控制率89.58％高于低丰度组63.04％（P＜0.05）;高丰度组中位PFS（15.98±3.24）个月高于低丰度组（12.06±2.87）个月（P＜0.05）;高丰度组OS 64.58％高于低丰度组OS 39.13％（P＜0.05）。结论 NSCLC患者EGFR基因突变丰度的高低与患者临床病理类型及组织分化程度有关。与低丰度患者相比,EGFR基因突变高丰度的NSCLC患者具有较高的吉非替尼疗效,PFS和OS明显延长。     

嘉兴地区102例非小细胞肺癌组织标本EGFR基因突变与临床分析

目的观察嘉兴地区非小细胞肺癌（NSCLC）中生长因子受体（EGFR）基因突变与临床特点相关性。方法采用探针扩增阻滞突变系统（ARMS）检测102例手术后组织标本的EGFR基因突变情况。结果102例NSCLC组织中EGFR突变率为50.98%,外显子19、21突变率为67.31%。男性和女性的突变率分别为33.33%和64.91%,吸烟与不吸烟患者的EGFR基因突变率分别为37.50%、59.68%,中高度分化和低分化患者的EGFR基因突变率分别为59.02%、39.02%,腺癌和鳞癌中的突变率分别为59.04%、6.25%,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。＞60岁患者与≤60岁患者的EGFR基因突变率分别为44.93%、63.64%,术后临床分期Ⅰ+Ⅱ和Ⅲ期的EGFR基因突变率分别为49.32%、55.17%,淋巴转移和无淋巴结转移者的突变率分别为43.90%、55.74%（均P＞0.05）。结论EGFR基因突变与性别、吸烟、腺癌、分化程度有关。     

非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变检测及其与临床病理特征的关系

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）表皮生长因子受体（EGFR）基因突变情况及其与临床病理的关系。方法对2010年1月—2014年1月来该院诊治的159份非小细胞肺癌手术切除标本进行分析,实验中采用基因测序方法对标本中的EGFR基因突变情况进行检测,分析其与临床病理的关系。结果 159例样本中,EGFR基因突变检出率12.6%（20/159）,突变主要集中在19号外显子的缺失和21号外显子的点突变。女性患者基因突变检出率明显高于男性患者（P﹤0.01）。腺癌及细支气管肺泡癌患者基因突变检出率明显高于其他组织学分型（P﹤0.01）。高分化患者基因突变检出率高于中-低分化检出率（P〈0.05）。EGFR基因突变与年龄及淋巴结转移与否无关（P〉0.05）。结论非小细胞肺癌患者EGFR基因突变与性别、组织学分型及分化程度密切相关。     

激光显微切割技术富集肿瘤细胞在基因突变检测中的意义

目的 探讨激光显微切割技术富集肿瘤细胞对检测非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）基因突变检测的影响以及其临床病理学意义.方法 采用激光显微切割技术富集49例NSCLC患者的石蜡包埋样本的肿瘤细胞,采用PCR技术对EGFR基因第18、19、20、21号外显子片段进行扩增后直接测序,分析其结果并比较其与常规肿瘤组织筛选后进行EGFR基因突变检测结果的异同.结果 49例NSCLC样本中21例（42.9％）存在EGFR基因突变,包括第19号外显子13例,第21号外显子8例,没有发现两者同时突变的样本.分析外显子突变情况发现,利用激光显微切割技术富集的样本检测突变率42.9％（21/49）,高于利用常规筛选后的突变率34.7％（17/49）,两种方法的差异有统计学意义（P=0.045 5＜0.05）.且比较两种方法,可以发现前者检测得到的突变峰峰高明显高于后者.结论 利用激光显微切割技术富集肿瘤细胞能有效去除间质细胞对肿瘤细胞的基因组干扰,更能体现肿瘤细胞基因组状态,有效提高EGFR基因突变检测检出率,有利于患者靶向治疗的临床筛选.     

非小细胞肺癌患者EGFR、K-ras基因突变与厄洛替尼治疗的相关性研究

目的 研究非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体（EGFR）、K-r基因位点突变与厄洛替尼靶向治疗效果的关系.方法 采用PCR、测序等方法检测入选40例患者EGFR、K-ras基因突变情况,确诊入选病例给予厄洛替尼治疗,评价治疗效果与基因突变位点之间的关系.结果 疗效好组22例患者中,18外显子突变11例,19外显子突变11例,20外显子突变4例,无K-ras突变;疗效差组18例患者中,18外显子突变2例,19外显子突变1例,20外显子突变10例,K-ras突变8例.疗效好组和疗效差组在EGFR基因18、19、20外显子和K-r基因突变数量上比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 对厄洛替尼有效组EGFR突变主要集中在18、19外显子上,并无K-ms突变;而无效组的EGFR突变主要集中在20外显子上,并伴有明显的K-ras突变,提示临床非小细胞肺癌厄洛替尼治疗时应关注EGFR、K-ras基因突变的具体情况.     

肺腺癌组织中EGFR-19和21外显子突变状况分析

目的:探讨原发性肺腺癌中表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)突变情况,以及与临床特点之间的关系。方法:收集2009年6月至2010年8月符合入组条件的87例石蜡包埋组织,提取DNA后,采用实时荧光定量PCR技术扩增并进行EGFR-19和21外显子突变检测。结果:87例肺腺癌组织,共检测到32例标本有EGFR基因突变,突变率为36.8%;亚组分析发现EGFR突变与性别相关,男性和女性的突变率分别是24.4%和47.8%(P=0.036);与年龄,吸烟史和临床分期无关。19外显子突变女性多于男性,突变率分别是32.6%和12.2%(P=0.024);21外显子突变无性别差异,女性和男性突变率分别是15.2%和14.6%(P=0.939)。结论:EGFR突变与肺腺癌患者的临床特征相关,女性突变率高于男性,尤以19外显子突变显著。     

FHIT和P16蛋白在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的研究FHIT和P16基因蛋白在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其意义。方法使用组织芯片和免疫组织化学SP法检测FHIT和P16基因蛋白在60例非小细胞肺癌组织中的表达情况。结果非小细胞肺癌中FHIT和P16蛋白表达阳性率差异无统计学意义（P〉0．05）。FHIT的表达阳性率在肺鳞癌中为37．93％（11／29）,在肺腺癌中为70．96％（22／31）（P〈0．05）;P16的表达阳性率在肺鳞癌中为31．03％（9／29）,在肺腺癌中为70．96％（22／31）（P〈0．05）。FHIT蛋白表达与肺癌淋巴结转移有关（P〈0．05）。结论尚不能认为非小细胞肺癌中FHIT和P16蛋白表达相互关联。FHIT和P16在肺鳞癌发生中起了重大作用。FHIT可作为预测非小细胞肺癌有无淋巴结转移的指标。     

盐酸埃克替尼治疗晚期非小细胞肺癌的临床观察

目的评价盐酸埃克替尼治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的疗效及不良反应,并观察治疗前的EGFR基因检测情况。方法对2011年12月-2013年12月口服盐酸埃克替尼治疗的90例晚期NSCLC患者的临床资料进行回顾性分析。EGFR基因检测采用ARMS法。结果盐酸埃克替尼治疗肺癌患者EGFR基因检测率为48.9%。盐酸埃克替尼一线、二线治疗组的EGFR基因检测率分别为79.5%、30.0%（P〈0.05）。可评价疗效的89例患者中,完全缓解（CR）0例,部分缓解（PR）31例（34.8%）,疾病稳定（SD）38例（42.7%）,疾病进展（PD）20例（22.5%）。客观缓解率（ORR）为34.8%,疾病控制率（DCR）为77.5%。89例患者中位无进展生存期（PFS）为6.7个月（0.6-17.8个月）,中位总生存时间（OS）为8.2个月（1.1-31个月）。主要不良反应为皮肤毒性和胃肠道毒性,经对症处理后能耐受。结论盐酸埃克替尼治疗晚期NSCLC具有明显的疗效以及良好的安全性,化疗可能降低EGFR基因突变的阳性率。现阶段肺癌患者EGFR基因突变的检测率较低,临床工作中应加强基因检测。     

性别与非小细胞肺癌患者吉非替尼疗效之间的关系

目的探讨非小细胞肺癌患者EGFR基因突变及吉非替尼疗效的男女差异。方法收集从2002年至2005年期间在广东省人民医院接受手术的135例非小细胞肺癌患者的肿瘤标本,立即置于液氮中,然后保存于-80℃,采用Trizol法提取组织DNA后,巢式PCR扩增EGFR基因的18、19、21外显子,纯化PCR产物后,对DNA的正义链和反义链进行测序,结合患者的临床资料以及服用吉非替尼患者的疗效进行分析。结果135例患者中EGFR基因突变的患者有29例（21．5％）,男性和女性的突变率分别为19．1％和26．8％（P=0．364）;20例接受吉非替尼治疗的患者中男性和女性疾病控制率分别为76．9％（10／13）和100％（7／7）（P=0．521）,男性和女性中位疾病进展时间差异无统计学意义（分别为9个月和14个月,P=1）。结论对于非小细胞肺癌患者,性别与EGFR突变以及吉非替尼治疗的疗效和预后之间无明显关系。     

Super-ARMS法检测EGFR突变在NSCLC的临床应用

目的:探讨Super-ARMS法检测体液EGFR突变在晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者治疗中的应用。方法:收集天津医科大学肿瘤医院自2019年4月1日—2019年12月30日161例NSCLC患者的血液、脑脊液、心包积液标本,采用Super-ARMS法对EGFR基因片段进行检测,根据突变结果对EGFR突变类型分析判断。结果:161例NSCLC患者标本中,86例（53.4％）EGFR突变阳性。19号外显子（19-del）缺失、21号外显子（L858R）基因点突变及T790M点突变最常见。S768I有5例（3.1%）;G719X突变4例（2.5％）;L861Q有1例（0.6%）;不同性别、是否吸烟者之间突变差异均无统计学意义（均P>0.05）;在年龄、是否存在EGFR-TKIs治疗史间差异均有统计学意义（均P<0.05）。EGFR基因突变率在女性、不吸烟患者中较高。结论:NSCLC患者EGFR突变率较高。Super-ARMS法可用于体液EGFR突变检测,其结果较准确,且可同时检测多种突变及并存突变。