人白细胞干扰素的纯化与检定

<正> 白细胞干扰素(Interferon)是正常人白细胞在诱生剂的作用下产生的一种蛋白质。近年来在国外,干扰素的抗病毒效果已被肯定,其抗肿瘤的作用也出现了可喜的苗头,并引起了医学界和生物学界的广泛注意。 我们以生产冻干人血浆剩余的白细胞层为原料,再经进一步分离获得的白细胞为诱生细     

β-干扰素的特性与临床研究

目前认为干扰素是由特定的诱导物 (包括病毒与非病毒 )作用下 ,由细胞基因编码产生的一种或多种蛋白质 ,这种蛋白质并非直接作用于病毒 ,其活性又受另一组细胞基因组的调控 ,即干扰素作用于细胞时 ,又诱生另一类基因产物 (AVP)。由于这类基因产物 ,引起细胞具有广泛的抗病毒活性 ,抑制细胞分裂和肿瘤细胞增殖 ,以及细胞免疫系统功能的活性 ,这是一个系统 ,故称为干扰素系统 (IFNS)。基因研究表明 ,β -干扰素与α -干扰素有 80 %的序列相同 ,具有许多相似的生物学及生化特性 ,所以 ,在干扰素分类学上将 β -干扰素归属于Ⅰ型干扰素[1] ,…     

人脐血白细胞干扰素纯化研究

本文报告的人脐血IFN纯化系统包括两步,第一步为“粗提”,系采用KCNS-酒精法;第二步为“精提”,系采用蓝葡聚糖-Sepharose 4 B(BDS)柱层析法。结果表明:沉淀粗制IFN的最适条件是0.5MKCNS.pH4.0;析出IFN的最佳pH是5.5～7.2,KCNS盐析一次与两次结果大致相同;冰镇酒精保冷普通离心机离心,对酒精溶液中的IFN活性无明显影响。经第一步纯化,IFN回收70％左右,比活性约为10~6国际单位/mg蛋白;第二步回收40％以上,纯度达10~7国际单位/mg蛋白。 本实验为临床IFN的纯化提供了依据,对其他类型IFN的纯化也有参考意义。     

人白细胞干扰素的制备和纯化

本文研究了人白细胞干扰素的制备与纯化技术,并作了某些改进。①诱生干扰素方面,用去酚红Earle液低速离心去除剩余红细胞;用NDV-F株代替仙台病毒作诱生剂,粗制干扰素滴度平均达15,000单位/毫升。②KCNS-乙醇法纯化干扰素方面,省略粗制干扰素的酸处理步骤,乙醇溶解KCNS沉淀的干扰素时pH值控制在3.5～4.5,然后用pH5.0,5.6的酸性乙醇分级去除杂蛋白。本法可使干扰素提纯约600倍,比活性10~6位/毫克蛋白,回收率62％。本法也适用人脐血干扰素的纯化。     

人γ干扰素纯化方法的初步研究

近年的研究提示,γ干扰素较α、β干扰素有更强的免疫调节和抗肿瘤活性,因而值得重视。为开展γ干扰素各项基础理论和临床应用的研究,我们在美州商陆诱导健康人脾细胞产生高效价(>10~4u/ml)人γ干扰素的基础上,对人γ干扰素的纯化方法进行了探索,已取得下列初步结果。     

人脐血免疫学细胞的生物学特性

目的：由于脐血比骨髓含有更原始、更强的增殖、分化能力，能重建长期造血的干／祖细胞，这些细胞可在体外大量扩增，使脐血移植有望取代骨髓移植；方法：利用脐血中包含某些细胞，如CD8^ T细胞能在小鼠体内产生细胞因子或者CD34^ 细胞具有内在性增殖潜能或NOD／SCID基质是一种特别的环境来支持外源干细胞移植；结果：脐造血细胞作为基因治疗的理想靶细胞；结论：随着国际上对脐血免疫细胞的生物学特性与功能研究不断深入，进一步确证CBSCT的有效性及巨大应用价值。     

人结肠粘膜Mr40KD蛋白的提取、纯化及免疫学特性鉴定

目的 探索非特异性溃疡性结肠炎（UC）血清学诊断方法。方法 采用DE-52离子交换层析及CNBr-Sepharose4B亲和层析技术从人结肠粘膜组织中提取一种蛋白组分，经10%SDS-PAGE、IEF、CIE及Western bolt技术，对该蛋白分子量、人结肠40KD蛋白可能是UC的一种自身抗原，血清中ACA可以作为UC的一个特异性指标。     

重组人干扰素α2b表达与分离纯化研究

目的从湿菌体中分离纯化重组人干扰素α2b。方法采用(NH4)2SO4盐析-H3PO4处理-CM32离子交换层析-DE52离子交换层析-SephadexG100凝胶层析等非亲和层析纯化方法。结果回收率约为30%,HPLC检验纯度达96%,每毫克蛋白比活力达1.66×108IU。结论分离纯化系统令人满意,回收率较高。     

重组γ干扰素的表达与纯化

目的 探讨γ干扰素在大肠杆菌中的表达及纯化方法,为下一步批量生产提供实验依据。方法 应用ＤＮＡ重组技术把中国人淋巴细胞ｍＲＮＡ反转录产物ＩＦＮ－γｃＤＮＡ克隆到析核表达质料ｐＢＶ２２０上,构建出ｐＢＶＩＦＮ高效表达载体,转化大肠杆菌ｐｌｙｓｓ。通过温度诱导,高效表达ＩＦＮ－γ ｃＤＮＡ。然后,经过包涵体溶解、复性、浓缩及ＤＥＡＥ离子交换层析,使γ干扰素纯化。结果 ＩＦＮ－γ ｃＤＮＡ表达水平占菌体     

人扁桃体干扰素的研究 Ⅲ.人扁桃体α干扰素的某些理化性质与生物学特性

干扰素是1957年由Isaacs和Lindenmann发现的,20多年来国内外学者对干扰素进行了广泛的研究。干扰素具有抗病毒繁殖和抗肿瘤生长以及免疫调节等多种生物学活性,对某些病毒性感染和恶性肿瘤有一定疗效,但     

人脐血干扰素的纯化及其治疗病毒性角膜炎的体会

用硫氰酸钾盐析法二次纯化人脐血干扰索,获得部分纯化干扰素(P-IFN)。抗病毒活性比粗制干扰素提高50倍左右,比活性为10~5单位毫克蛋白~(-1)。回收率约为37％,在纯化过程中损失较多。为了减少损失,除在操作过程中注意保冷外,并采取勤换透析液、缩短透析时间,用纤维素微孔滤膜代替蔡氏滤器,作了一些小的改进。经上进方法处理的P-IFN,效价无明显影响。用低浓度(1～3×10~4单位毫升~(-1))的P-IFN,局部注射球结膜下或浅眶内,治疗疱疹性角膜炎28例,治愈好转率为92.9％,尤以上皮型疗效最佳,治愈率为100％。此种方法具有疗效高、反应小、干扰素用量少等优点,有利于推广。     

人血小板TGFβ的提取纯化及鉴定

目的 建立一种快速、简单、实用的从人血小板提纯化生长因子β（ＴＧＦβ）的方法。方法 改良的白膜回浆法提取人血小板,酸醇抽撮裂解法提取血小板中的ＴＧＦβ及２次凝胶过柱法纯化ＴＧＦ－β。所有提取及纯化步骤均在酸性条件下进行以防止管壁对ＴＧＦβ的吸附和生物活性的影响;使用了易挥发的溶媒和缓冲液便于冻干时去除。结果：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ 泳及薄层分析显示纯化后的ＴＧＦβ纯度达到８９．３８％,在ＥＧＦ参与下１０     

人脑脊液中β—微量蛋白的纯化

β－微量蛋白（β－ｔｒａｃｅ）是存在于脑脊液（ＣＳＦ）中的一种微量蛋白，其功能和来源尚未明了。主要问题是其纯化问题未解决。β－微量蛋白经常与ＩｇＧ的Ｋａｐｐａ和ｌａｍｂｄａ轻链混杂，纯化时很难将它们分开。本研究用Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ７５和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ１５０柱层析，结合Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ亲和层析，去除ＩｇＧ轻链，得到纯粹的β－微量蛋白。     

纯化人白细胞干扰素治疗带状疱疹48例疗效观察

作者采取对照观察纯化人白细胞干扰素（IFN－α）肌肉注射治疗带状疱疹的疗效。治疗组25例注射IFN－α，每日1次，每次100万U，连用10日为一疗程。对照组23例注射维生素B12，每次0．5mg。结果，IFN－α组痊愈18例，显效5例，有效2例，痊愈率75％，总显效率95％，对照组痊愈8例，显效5例，有效7例，无效3例，痊愈率34．78％，总显效率56．52％，治疗组总显效率显著高于对照组，P＜0．05，两组均未见显著副作用。     

人脑脊液中β-微量蛋白的纯化

β-微量蛋白（β-trace）是存在于脑脊液（CSF）中的一种微量蛋白，其功能和来源尚未明了。主要问题是其纯化问题未解决。β-微量蛋白经常与IgG的Kappa和lambda轻链混杂，纯化时很难将它们分开。本研究用SephadexG75及SephadexG150柱层析，结合ProteinG－Sepharose4FastFlow亲和层析，去除IgG轻链，得到纯粹的β-微量蛋白。     

人β-微管蛋白2C蛋白的原核表达与纯化

目的构建体外原核表达和纯化人β-微管蛋白2C(TubB2C)蛋白。方法通过聚合酶链反应(PCR)扩增出人TubB2C基因完整开放读码框架(ORF),并插入pGEX-6P-1载体中构建pGEX-TubB2C重组质粒。经大肠杆菌BL21转化后,用异丙醇-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导谷胱甘肽S转移酶(GST)-TubB2C融合蛋白表达,用免疫印迹(W estern b lot)分析鉴定表达的GST-TubB2C蛋白,并在非变性条件下利用G lutath ione Sepharose 4B纯化GST-TubB2C蛋白。结果酶切分析和DNA测序表明TubB2C cDNA完整ORF以正确的阅读框架插入pGEX-6P-1载体;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示表达的GST-TubB2C蛋白相对分子量约为78 000,W estern b lot结果显示该融合蛋白可被抗GST抗体特异性识别。纯化后的GST-TubB2C蛋白纯度约90%。结论TubB2C蛋白可在体外大量表达和纯化。     

沙眼衣原体MIP蛋白的原核表达、纯化及免疫学特性鉴定

目的 采用pGEX-6p载体原核表达沙眼衣原体(Ct)巨噬细胞感染增强因子(MIP),进一步纯化后免疫小鼠,评价该蛋白作为Ct疫苗候选抗原的可行性。方法聚合酶链反应技术从Ct D型基因组扩增MIP编码基因,构建pGEX-6p-1/MIP重组质粒并转化大肠杆菌,IPTG诱导重组菌表达GST-MIP融合蛋白,PreScission蛋白酶切除GST标签后免疫Balb/c小鼠,ELISA法检测MIP的免疫学特性。结果MIP编码基因正确插入pGEX-6p-1载体,核苷酸序列与GenBank登陆的Ct D型MIP基因完全一致;重组融合蛋白在E.coli中稳定高效表达,酶切后纯度达90％以上;MIP蛋白具有良好的免疫原性,诱导小鼠产生高滴度特异性IgG型抗体,亚型以IgG2a为主;MIP免疫组小鼠脾淋巴细胞受MIP蛋白刺激,分泌高水平IFN-γ。结论重组表达的Ct MIP 蛋白具有良好的免疫原性,能诱导小鼠产生高特异性的体液及细胞免疫应答,可进一步探讨其作为Ct亚单位疫苗的可行性。     

纯化的干扰素也可引起副作用

加《医学邮报》第18卷第7期(1982年)报道伦敦消息:通过新的单克隆抗体技术生产的高纯度的人体干扰素,似乎也会出现如近几年来用于抗癌和抗病毒临床试验的粗制干扰素那样有一些有害的副作用。英格兰米德尔塞克斯的诺思威克·派克医院临床研究中心的斯科特(Geoffrey Scott)     

人卵巢癌细胞特异CTL系的免疫学特性初步研究

目的 探讨人卵巢癌细胞体外刺激、诱导的肿瘤特异细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对靶细胞的杀伤活性。方法 应用建株的人卵巢癌细胞（OVA－319），在体外定期刺激、诱导肿瘤患者外周血淋巴细胞，经微量淋巴细胞毒试验和流式细胞术分别测定扩增的淋巴细胞组织相容性白细胞抗原（HLA）Ⅰ类分子表型和膜表面免疫标志物，并通过4－甲基偶氮唑盐（MTT）法分析其对肿瘤细胞的杀伤活性。结果 经卵巢癌细胞刺激、诱导3周后扩增的淋巴细胞主要为T细胞抗原受体（TCR）－α、β及CD8阳性的CTL，具有明显特异性杀伤肿瘤细胞的作用，并发现经OVA－319细胞刺激、诱导后不同个体的卵巢癌患者CTL的杀伤活性与效靶细胞的HLA－A、B位点相同数成正比。结论 肿瘤细胞体外激活的CTL具有特异杀伤靶细胞作用，提示CTL特异杀伤作用与刺激细胞、靶细胞及本身CTL表型的HLA－A、B位点密切联系。