EGCG对鼻咽癌细胞增殖抑制和凋亡诱导时NF-κB和caspase-3的表达变化

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate,EGCG）作用于鼻咽癌CNE-2细胞后,对转录因子NF-κB和凋亡效应酶caspase-3表达的影响,以及这两个基因的表达与鼻咽癌细胞凋亡和增殖的关联性。方法体外培养鼻咽癌细胞CNE-2,MTT法检测细胞增殖的抑制作用;Hoechst染色检测细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞周期的改变。RT-PCR检测NF-κB和caspase-3的表达。结果EGCG能明显的抑制鼻咽癌细胞增殖,诱导其凋亡,并表现为浓度依赖性：流式分析显示,EGCG干预鼻咽癌细胞CNE-2在48小时后,细胞被阻滞于G1期。80mg/L EGCG处理鼻咽癌细胞24小时和48小时后,均能下调NF-κB表达,上调caspase-3表达。结论EGCG可能通过抑制NF-κB和诱导caspase-3的表达来发挥其抗鼻咽癌细胞的生物学作用。     

肿节风对鼻咽癌裸鼠移植瘤凋亡和端粒酶活性的影响

目的:评价肿节风提取物诱导鼻咽癌裸鼠移植瘤细胞凋亡作用和抑制端粒酶活性的能力。方法:将移植人鼻咽癌CNE1、CNE2细胞的裸鼠随机分为肿节风组、环磷酰胺组和对照组,定期检测裸鼠的体重及肿瘤体积,给药一个疗程(30d)后解剖获取肿瘤组织,称量瘤体重量,计算抑瘤率。运用透射电镜观察瘤组织细胞超微结构的改变;免疫组织化学法检测瘤组织Bcl-2和Bax的表达;流式细胞仪进行细胞周期、细胞凋亡分析;TUNEL法检测细胞凋亡;TRAP-ELISA方法观察药物处理前后组织端粒酶活性的变化。结果:动物实验表明,肿节风对CNE1、CNE2移植瘤有明显的抑瘤作用,抑瘤率分别为40.8%和46.8%(与对照组比较P<0.01);且Bcl-2蛋白表达明显低于对照组(P<0.01),而Bax蛋白表达明显高于对照组(P<0.01);电镜下肿节风组瘤组织中可见较多典型的凋亡形态学改变;TUNEL法肿节风组凋亡指数明显高于对照组(P<0.01);流式细胞技术显示肿节风组G0/G1期细胞高于对照组(P<0.01),细胞阻滞在G0/G1期,凋亡率明显高于对照组(P<0.01);端粒酶活性检测中可见肿节风组比对照组端粒酶活性降低(P<0.01)。结论:肿节风在体内具有抑制鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的作用,其抑瘤作用机制与诱导凋亡有关,抑制端粒酶活性可能起部分作用。     

茶多酚对鼻咽癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及机制的研究

目的:探索茶多酚对鼻咽癌细胞株HONE1增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响,并研究相关的分子作用机制。方法:用不同浓度的茶多酚处理鼻咽癌HONE1细胞,分别用细胞计数法-8(CCK-8)法、荧光染色法、细胞划痕、Transwell侵袭实验、流式细胞术等方法,观察细胞生物学行为的变化;同时,检测茶多酚对鼻咽癌细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。结果:茶多酚能显著抑制鼻咽癌细胞HONE1的增殖,并呈浓度依赖性,而对正常鼻咽上皮细胞则无明显抑制作用;诱导HONE1细胞凋亡;茶多酚还有降低鼻咽癌细胞HONE1迁移和侵袭的能力,并明显减少鼻咽癌细胞内VEGF蛋白的表达。结论:茶多酚在体外能够抑制鼻咽癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,并降低鼻咽癌细胞体外迁移和侵袭能力。     

重组人内皮抑素对鼻咽癌细胞CNE2增殖及凋亡的影响

目的探讨重组人内皮抑素(rh-endostatin,rh-ES)对鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡的影响。方法分别以25、50、100、200、400μg/ml的rh-ES体外处理人鼻咽癌细胞株CNE2,同时设空白对照组和细胞对照组。利用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测不同浓度和时间rh-ES作用下的细胞增殖状态;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;透射电镜观察CNE2细胞超微结构的变化。结果①MTT检测显示rh-ES(25～400μg/ml)能抑制CNE2细胞的增殖,不同浓度的rh-ES对人鼻咽癌细胞株CNE2具有不同程度的生长抑制作用,且存在时间剂量效应,以400μg/ml rh-ES作用72 h后抑制效果最为显著,各浓度组相比差异具有统计学意义。②流式细胞仪检测结果发现与CNE2细胞对照组相比,rh-ES实验组处于细胞周期G0/G1期的细胞明显增多,细胞凋亡率增加(P<0.05)。③电镜观察,rh-ES实验组CNE2细胞出现凋亡特征,细胞和细胞器皱缩,核染色质边集碎裂,核膜消失。结论 rh-ES能显著抑制鼻咽癌细胞CNE2细胞的增殖,并具有时间-剂量依赖性,其主要机制可能为诱导细胞凋亡,调整细胞周期分布。     

双氢青蒿素诱导鼻咽癌CNE-2细胞凋亡及其机制

目的:探讨双氢青蒿素(DHA)对鼻咽癌CNE-2细胞的生长抑制作用及其机制。方法:以体外培养的CNE-2细胞为研究对象,分别采用CCK-8法观察不同浓度和时间DHA对CNE-2细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪Annexin V-FITC法检测CNE-2细胞的凋亡率,caspase-3活性检测法检测不同浓度DHA处理后CNE-2细胞中caspase-3的活性变化。结果:CCK-8法显示,与对照组相比,随DHA浓度的增加,CNE-2细胞的增殖显著抑制(P<0.05);流式细胞仪Annexin V-FITC法,结果显示DHA诱导CNE-2细胞凋亡具有浓度依赖性;caspase-3活性检测法显示,与对照组相比,随DHA浓度的增加,caspase-3的活性显著提高(P<0.05)。结论:DHA能有效抑制CNE-2细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能是能上调CNE-2细胞中caspase-3的活性。     

Genistein对人鼻咽癌细胞系CNE抑制增殖和促进凋亡的作用及机制探讨

目的:研究genistein对人鼻咽癌细胞系CNE抑制增殖和促进凋亡的作用,探讨其抗癌作用的机制。方法:应用MTT检测不同浓度genistein在不同时间对鼻咽癌细胞系CNE的生长抑制作用;透视电镜下观察鼻咽癌细胞演变过程、凋亡细胞及凋亡小体,应用流式细胞仪分析细胞周期及凋亡率。结果:Genistein可明显抑制CNE细胞的增殖,并且这种抑制作用呈时间及浓度依赖性,随浓度的增加时间的延长抑制作用逐渐增强,尤以200μmol/L组最明显;Genistein诱导鼻咽癌细胞的早期凋亡率随浓度的增加而增强,200μmol/L时为49.9%;FCM分析发现genistein阻断CNE细胞生长于细胞周期的G2/M期;电镜观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征。结论:Genistein对鼻咽癌细胞系CNE的生长有明显的呈时间及浓度依赖性的抑制作用,其阻断细胞的生长主要在细胞周期的G2/M期,并且具有明显诱导CNE细胞凋亡的作用。     

线粒体参与荛花酚诱导人鼻咽癌CNE细胞凋亡机制

目的探讨荛花酚诱导人鼻咽癌CNE细胞(简称CNE细胞)凋亡的效应,初步探索其与线粒体相互作用的机制。方法以不同浓度的荛花酚作用于CNE细胞,MTT检测分析荛花酚对细胞增殖的影响,Annexin V/PI双标后流式细胞仪检测凋亡情况,Western blot检测凋亡相关蛋白(caspase-3、caspase-9、PARP、细胞色素C、Bax、Bcl-2)的表达。JC-1染色检测线粒体膜电位,DCFH-DA染色检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成。结果荛花酚以时间和剂量依赖性方式抑制CNE细胞的增殖,荛花酚处理诱导CNE细胞发生明显凋亡,Bax/Bcl-2比值增加,细胞色素C从线粒体释放到胞浆,caspase-3和caspase-9活化,PARP发生剪切。荛花酚还可诱导CNE细胞线粒体膜电位下降,线粒体膜通透转运孔(PTP)开放,ROS含量升高。结论荛花酚可显著诱导CNE细胞的凋亡,机理与影响线粒体功能密切相关。     

海带多糖和茶多酚对鼻咽癌细胞HONE1和CNE2增殖的影响

目的:观察海带多糖(LJP)和茶多酚(TP)单独及联合应用对鼻咽癌(NPC)细胞HONE1和CNE2增殖的影响,了解LJP对体内移植瘤的抑制作用,探讨其抗癌机制。方法:以NPC细胞HONE1和CNE2为研究对象,绘制两者生长曲线,计算倍增时间确定对数生长期细胞,采用MTT检测LJP和TP单独及联合应用对两组细胞的增殖抑制率,运用Annexin V加PI双染法检测LJP对HONE1细胞凋亡的影响;以人NPC细胞株HONE1建立裸鼠皮下移植瘤模型及行体内抑瘤实验。结果:LJP和TP均对两组细胞有增殖抑制作用,LJP和TP联合应用对两组实验细胞抑制作用均高于两者单独应用的效果,且这种作用呈浓度依赖关系。流式细胞仪检测结果显示,LJP具有诱导HONE1细胞凋亡的作用,凋亡率随着LJP浓度的增加而增高,320mg/L的凋亡率为(49.51±1.89)%(P<0.01)。体内实验中,25.0mg/kg LJP组、50.0mg/kg LJP组的抑瘤率分别为33.7%(P<0.05)和47.0%(P<0.01),具有明显抑制移植瘤的作用,而12.5mg/kg LJP组的抑瘤率仅为16.4%(P>0.05)。结论:LJP和TP对鼻咽癌细胞HONE1和CNE2增殖均有抑制作用,两者联合应用更具有显著效果,LJP作用机制可能是通过诱导癌细胞凋亡而实现的。     

miR-30c对鼻咽癌CNE-1细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的 观察miR-30c对鼻咽癌CNE-1细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法 过表达miR-30c质粒载体转染CNE-1细胞,同时设立空质粒载体转染阴性对照组和无处理的空白对照组。荧光定量PCR检测miR-30c表达水平,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。结果 鼻咽癌组织中miR-30c的表达量为0.23±0.05,显著低于癌旁非肿瘤鼻咽组织的0.37±0.08（P <0.01）。过表达miR-30c组表达量（0.46±0.12）显著高于空白对照组（0.17±0.03）和阴性对照组（0.18±0.04）（P 均<0.01）。在24、48、72小时过表达miR-30c组OD值显著低于空白对照组和阴性对照组（P 均<0.01）。过表达miR-30c组G1期细胞比例（90.36±10.23）% 显著高于空白对照组（74.46±9.14）%和阴性对照组（75.25±9.23）%（P <0.01）。过表达miR-30c组凋亡细胞比例（31.06±5.12）%显著高于空白对照组（3.18±0.72）%和阴性对照组（3.56±0.78）%（P <0.01）。结论 过表达miR-30可以现在抑制鼻咽癌细胞增殖、细胞周期以及诱导细胞凋亡。     

葫芦素B对喉癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的:体内外观察葫芦素B对人喉癌细胞系Hep-2的抑制增殖和诱导凋亡作用并探讨其作用机制,为临床应用提供实验依据.方法:用0.1、1.0、10.0和100.0 μmol/L的葫芦素B作用于Hep-2细胞24、48和72 h, MTT法检测细胞增殖.用0.1、1.0和10.0 μmol/L的葫芦素B作用于Hep-2细胞24 h或10 μmol/L葫芦素B作用8、12和24 h,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,荧光显微镜观察细胞凋亡.Western blot检测p-STAT3、cyclin B1和Bcl-2的蛋白表达.建立喉癌裸鼠移植瘤模型,观察葫芦素B的体内抑瘤作用.结果:MTT结果显示葫芦素B对Hep-2 细胞的增殖抑制作用具有明显的剂量和时间依赖性;流式细胞仪检测发现随着葫芦素B浓度增高或作用时间延长,处于G2/M期细胞的比例逐渐升高,同时伴有G0/G1期细胞减少,细胞凋亡率逐渐升高,经统计学分析,各实验组之间及其与对照组之间的均差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);荧光显微镜观察可见典型细胞凋亡;Western blot检测显示葫芦素B可剂量依赖性抑制p-STAT3、cyclin B1和Bcl-2的蛋白表达.体内实验发现低、中、高剂量组的抑瘤率分别是32.43%、43.24%和70.27%.结论:葫芦素B通过抑制STAT3活化,抑制cyclin B1和Bcl-2的蛋白表达,引起喉癌细胞G2/M期阻滞、增殖抑制和凋亡,发挥对喉癌的抗癌效应.     

蛋白激酶CK2α特异性小干扰RNA对喉癌细胞生长的抑制作用

目的探讨蛋白激酶CK2α特异性小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）对人喉癌细胞系Hep-2增殖和凋亡的影响。方法构建蛋白激酶CK2α特异性siRNA表达质粒psiRNA-hHlneo-CK2及非特异性表达质粒psiRNA-hH1 neo-cont，分别用脂质体转染法转染Hep-2细胞。采用逆转录聚合酶链反应、Western Blot技术检测转染后蛋白激酶CK2αmRNA和蛋白表达，采用四甲基偶氮唑蓝法检测转染后Hep-2细胞的增殖情况，流式细胞术检测转染后对Hep-2细胞凋亡的影响。结果转染psiRNA-hH1 neo-CK2载体后，Hep-2细胞蛋白激酶CK2α mRNA和蛋白表达均较非特异干扰组和空白组明显下降（P〈0．05），Hep-2细胞生长缓慢（P〈0．05），其细胞周期出现明显亚二倍体峰（P〈0．05）。结论蛋白激酶CK2α特异性siRNA表达载体可以下调Hep-2细胞蛋白激酶CK2α的表达，抑制细胞增殖并诱导其凋亡。     

内质网应激在老年大鼠耳蜗细胞凋亡中的作用

目的探讨内质网应激在老年大鼠耳蜗细胞凋亡中的作用,从而进一步探索老年性聋的发病机制。方法Wistar大鼠24只,其中12只为对照组(3～4月龄),12只为自然衰老组(22～24月龄);比色法测定内耳组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD),丙二醛(malondialchehyche,MDA)水平;ABR检测听力学改变;免疫组化及western blot检测GRP78/BiP和Caspase-12蛋白的表达。结果老年大鼠听力下降;内耳组织SOD活性降低,MDA升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);耳蜗切片中及western blot结果可见GRP78的表达与对照组相比差异无统计学意义(P<0.05);caspase-12的表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论内质网凋亡途径是老年大鼠老年性聋的发生机制之一。     

喉鳞状细胞癌中PTEN和Caspase-3的表达及临床意义

目的 :研究抑癌基因PTEN和半胱氨酸蛋白酶Caspase 3在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义。 方法 :应用免疫组织化学SP法检测 2 0例正常喉组织、6 0例声带不典型增生、2 89例喉癌组织中PTEN ,Caspase 3的表达。结果 :正常喉组织、声带不典型增生、喉癌组织中PTEN阳性表达率分别为 10 0 .0 %、86 .7%、5 8.8% ,三者之间差异具有统计学意义 (均 P <0 .0 5 ) ;Caspase 3阳性表达率分别为 85 .0 %、6 1.7%、4 8.1% ,三者之间差异具有统计学意义 (均P <0 .0 5 )。另外 ,Caspase 3与PTEN在喉癌中的表达具有正相关性 (P <0 .0 1)。结论 :喉鳞状细胞癌中抑癌基因PTEN ,Caspase 3的表达异常可能与喉癌的发生、发展有关。     

喉癌手术切缘中Survivin和Caspase-3及p53的表达意义及相关性研究

目的:研究Survivin、Caspase-3及p53在喉鳞状细胞癌手术切缘中的表达意义及相关性.方法:116例患者术后按肿瘤复发情况分成4组,分别为:复发≤1年组,＞1～3年组,＞3～＜5年组,≥5年组(包括5年后无复发),应用免疫组织化学方法检测手术切缘Survivin、Caspase-3及p53的表达情况.结果:Survivin在4组中的表达分别为92.9%、85.0%、50.0%及21.1%(P＜0.01)Caspase-3在4组中的表达分别为50.0%、50.0%、66.7%及89.5%(P＜0.01);p53在4组中的表达分别为57.1%、37.5%、45.8%及18.4%(P＜0.05);Survivin、Caspase-3及p53在4组的表达均有统计学意义.结论:喉癌手术切缘中Survivin、Caspase-3及p53的表达在喉鳞状细胞癌的发生、发展中可能起重要作用,并对喉鳞状细胞癌的早期诊断和预后判断有意义.     

Fhit在鼻腔鼻窦恶性肿瘤中表达的研究

目的：研究Fhit基因在鼻腔鼻窦恶性肿瘤中的表达及临床意义,探讨其相关性。方法：采用免疫组织化学SP法检测48例原发性鼻腔鼻窦恶性肿瘤组织、29例癌旁正常组织及21例良性病变组织中Fhit基因的表达;采用碘化丙啶（PI）及苏木精一伊红染色检测肿瘤细胞自发性凋亡情况。结果：48例中,26例（54．17％）Fhit表达减少或缺失,22例（45．83％）表达正常。Fhit表达的平均A值与凋亡指数（AI）成正相关（r=0.379,P〈0.01）。Fhit表达正常者预后显著好于表达减少或缺失者（P〈O.05）。结论：Fhit基因失活与鼻腔鼻窦恶性肿瘤的发生、预后相关,可能是该肿瘤的抑癌基因,其抑癌作用可能通过促进细胞凋亡实现,Fhit基因表达减弱有可能成为鼻腔鼻窦恶性肿瘤新的预后指标。     

Eotaxin基因和趋化因子受体3在变应性鼻炎大鼠模型鼻腔黏膜和骨髓中的表达及意义

目的：探讨Eotaxin（嗜酸粒细胞趋化因子）基因和趋化因子受体3（CCR3）在变应性鼻炎（AR）大鼠模型鼻腔黏膜和骨髓中的表达及其意义。方法：采用6～8周龄雄性SD大鼠20只,随机分成实验组（AR组）和对照组,每组10只,以卵清蛋白致敏激发制成AR模型,瑞特染色计数骨髓涂片和外周血涂片中白细胞比例,免疫组织化学技术检测骨髓中CCR3的表达;制备大鼠鼻腔黏膜组织病理标本,苏木精-伊红染色,原位分子杂交方法检测鼻腔黏膜中Eotaxin mRNA的表达,免疫组织化学技术检测Eotaxin在鼻腔黏膜中的表达。结果：AR组骨髓涂片中嗜酸粒细胞比例显著高于对照组（P〈0．01）,AR组外周血涂片中嗜酸粒细胞比例显著高于对照组（P〈0．01）;与对照组比较,AR组大鼠鼻腔黏膜中Eotaxin阳性细胞数与EotaxinmRNA表达明显增强（P〈0．01）,且二者呈正相关性（r=0．804,P〈0．01）。AR组Eotaxin的表达与鼻腔黏膜嗜酸粒细胞的数量呈显著正相关（r=0．795,P〈0．01）。AR组骨髓涂片中CCR3阳性细胞比例显著高于对照组（P〈0．01）,AR组骨髓涂片中CCR3阳性细胞比例和外周血嗜酸粒细胞比例呈显著正相关（r=0．736,P〈0．05）。结论：AR组中Eotaxin和CCR3表达增强,为嗜酸粒细胞从骨髓快速募集到鼻腔黏膜提供了可能。     

内耳免疫反应中细胞凋亡及Caspase-3动态表达的研究

目的:研究内耳免疫反应过程中是否存在细胞凋亡,以及细胞凋亡是否与Caspase3信号转导有关。方法:选用雌性白色豚鼠45只,随机分为实验组29只,对照组16只,以钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)全身免疫后,实验组以相同抗原进行内耳免疫,对照组内耳注射等量的磷酸盐缓冲生理盐水(PBS),分别在内耳免疫术后1、3、5、7d和14d后处死动物,于免疫前及处死前行双侧听性脑干反应(ABR)测试。取内耳免疫侧耳蜗做石蜡切片。通过DNA末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测内耳凋亡细胞,免疫组织化学检测内耳Caspase3的表达。结果:实验组豚鼠内耳免疫前、后反应阈比较有统计学意义(P<0.05或P<0.01);对照组给药前、后比较反应阈无明显变化。实验组豚鼠内耳均存在TUNEL染色阳性细胞,并且TUNEL染色阳性细胞具有凋亡细胞的典型形态学特征,而对照组仅在支持细胞、血管纹和螺旋神经节细胞中发现极少数TUNEL染色阳性细胞。Caspase3免疫组织化学染色实验组内耳从内耳免疫后5d开始出现阳性表达,而对照组表达阴性。结论:内耳免疫反应可以诱导细胞凋亡的发生;内耳免疫反应诱导细胞凋亡的发生中有Caspase3的激活。     

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征上气道开大肌凋亡现象研究

目的:观察阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者腭帆张肌中Bax、Bcl-2的表达水平,探讨OSAHS患者上气道开大肌肌纤维是否存在凋亡现象。方法:选取30例OSAHS患者作为实验组,10例已排除OSAHS的慢性扁桃体炎患者作为对照组。采用免疫组织化学Elivison二步法和计算机图像分析系统检测两组腭帆张肌中Bax、Bcl-2的表达水平并进行对比分析。结果:①实验组Bax的表达水平和Bax/Bcl-2的比值明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);②Bax的表达水平与呼吸紊乱指数呈正相关(r=0.697,P<0.01)。结论:OSAHS患者上气道开大肌存在凋亡现象,且病情越重凋亡的程度也越严重。