壳聚糖/磷酸甘油复合自体间充质干细胞修复关节软骨缺损的实验研究

目的探讨壳聚糖/磷酸甘油(C/GP)复合自体间充质干细胞(MSCs)对兔关节软骨缺损的修复作用。方法选择3个月龄新西兰大耳白兔18只,双下肢髁关节面上共制作3个直径3mm、深3mm的全层软骨缺损,自左到右为:C/GP复合自体MSCs组(A组),C/GP组(B组),空白对照组(C组)。分别于术后4、8、12周各处死6只,应用大体观察、组织学观察及组织学评分评估缺损软骨的修复情况。结果A组术后12周,组织切片显示新生组织中可见大量类透明软骨细胞出现,修复组织和周围软骨整合良好。A组各个时间点组织学评分均高于其他2组(P<0.05)。结论C/GP复合自体MSCs可促进对兔关节软骨缺损的修复。     

自体红骨髓-骨膜碎片复合移植修复关节软骨缺损的形态学研究

[目的 ]观察自体红骨髓 骨膜碎片复合移植修复关节软骨缺损的形态学变化 .[方法 ]将自体红骨髓和骨膜碎片复合移植到 2 0例家兔膝关节股骨髌面上制作的 3 0mm× 6 0mm全层关节软骨缺损区 ,通过肉眼、光学显微镜、电子显微镜和图像分析等方法 ,观察不同时期缺损区修复组织的形态学变化 .[结果 ]术后第 4周缺损区修复组织细胞形态、分布及排列接近周围正常软骨组织 ,修复组织中单个软骨细胞平均面积达到正常水平 .[结论 ]自体红骨髓 骨膜碎片复合移植组织具有良好的成软骨能力 .     

自体红骨髓移植修复关节软骨缺损的实验观察

[目的 ]实验观察自体红骨髓移植修复关节软骨缺损的形态变化过程 .[方法 ]将自体新鲜红骨髓移植于 2 6例中国家兔膝关节股骨髌面制作的 3 0mm× 6 0mm全层关节软骨缺损区 ,通过肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察和图像分析等方法 ,观察不同时期修复组织的形态变化 .[结果 ]于术后第4周 ,自体新鲜红骨髓移植组修复组织细胞的形态、分布及排列接近正常软骨组织 ,其修复组织中单个细胞面积达到正常水平 .[结论 ]自体新鲜红骨髓具有良好的成软骨能力 ,成软骨的过程分为肉芽组织形成期、前软骨期和成熟软骨期 3个阶段 .     

兔关节囊自体游离移植形成软骨的实验研究

探讨兔髋关节囊移植化生软骨的可能性 ,为修复股骨头软骨缺损提供新材料。方法 :新西兰幼兔 2 4只 ,将其随机分成实验组 16只 ,取左髋关节囊 5mm× 5mm修复同侧股骨头软骨缺损 4mm× 4mm ;对照组 8只 ,仅造成左股骨头软骨缺损 4mm× 4mm。术后左髋进行持续被动活动 3周。这两组的右髋手术方法同实验组 ,术后让其自由活动 ,作为亚对照组。术后 6周及 12周处死动物 ,进行大体观察及组织学检查。结果 :实验组软骨形成率占 87.5 % (14/16 ) ,明显优于亚对照组的 2 9% (7/2 4) (χ2 =13 .0 99,P <0 .0 0 1) ,对照组无软骨形成。实验组及亚对照组 6周时 ,移植区表层可见滑膜细胞 ,深层为软骨细胞 ,12周时软骨细胞逐渐增多 ,对照组缺损区为纤维组织。结论 :兔髋关节囊移植可化生关节软骨 ,持续被动活动优于自由活动。关节囊游离移植在临床上的应用还需进一步研究。     

自体骨膜移植修复关节软骨缺损的实验观察

[目的 ]探寻修复关节软骨缺损的有效方法 ,实验观察自体骨膜移植修复关节软骨缺损的变化过程 .[方法 ]将自体骨膜移植于 2 4例中国家兔膝关节股骨髌面制作的 3 0mm× 6 0mm全层关节软骨缺损区 ,通过肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察和图像分析等方法 ,观察不同时期修复组织的形态变化 .[结果 ]自体骨膜于术后第 12周完全修复关节软骨缺损区 ,修复组织中细胞分布及排列接近周围正常软骨组织 ,整个细胞被胶原原纤维环绕 ,经方差分析示 ,实验组单个细胞面积与空白对照组的相比有显著性差异 .[结论 ]自体骨膜具有成软骨能力 ,其参与修复关节软骨缺损区的细胞有骨膜内未分化间充质细胞和骨原细胞     

兔自体骨髓间充质干细胞移植修复关节软骨缺损的研究

目的:研究将体外培养的兔骨髓间充质干细胞(MSCs)定向诱导分化为成骨细胞的方法, 探讨其作为组织工程化骨的种子细胞的可行性.方法:采用Percoll分离液,从兔的骨髓组织中分离骨髓间充质干细胞,用低糖型的DMEM( Dulbecco's modified Eagle's medium)培养液中添加成骨诱导剂地塞米松、β-甘油磷酸钠及抗坏血酸进行培养.诱导2周后钙-钴法染色检测碱性磷酸酶(ALP)表达, 诱导4周后VonKos-sa染色检测钙结节形成.结果:第3代兔MSCs呈典型的成骨细胞形态,诱导2周ALP染色阳性率达80%,诱导4周后VonKossa染色可见钙结节形成.结论:经过分离纯化后的兔骨髓基质细胞在体外培养条件下可以分化为成骨细胞.     

红骨髓-骨膜复合组织移植修复关节软骨缺损的实验观察

[目的 ]观察红骨髓 骨膜复合组织移植修复关节软骨缺损的形态变化过程 .[方法 ]在 2 4只家兔双侧膝关节制作 3 0mm× 6 0mm的全层关节软骨缺损区 ,随机分成红骨髓 骨膜复合移植组和单纯骨膜移植组 ,通过肉眼、光学显微镜及电子显微镜观察和图像分析方法 ,观察不同时期修复组织的形态变化 .[结果 ]红骨髓 骨膜复合移植组于术后第 8周、单纯骨膜移植组于术后第 12周修复组织细胞的形态、分布及排列接近正常软骨组织 ,单个修复细胞面积达到正常软骨细胞水平 .[结论 ]红骨髓 骨膜复合移植组和单纯骨膜移植组均能够修复关节软骨缺损 ,而红骨髓 骨膜复合移植组的修复时间明星短于单纯骨膜移植组     

负载TGF-β1微球的壳聚糖-丝素支架复合骨髓间充质干细胞修复兔关节软骨缺损的实验研究

目的研制负载转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)壳聚糖微球的壳聚糖-丝素支架复合骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外构建组织工程软骨,观察将其移植修复兔膝关节软骨缺损的效果。方法通过密度梯度离心法及贴壁培养法分离纯化MSCs,以抗兔CD14、CD44等单抗采用流式细胞仪进行MSCs表面抗原鉴定,获得纯化的MSCs。采用乳化交联法获得包裹TGF-β1壳聚糖缓释微球,并将该微球负载在冷冻干燥获得的壳聚糖-丝素支架上。将培养的MSCs种植到支架上,体外构建组织工程软骨,移植到兔关节软骨缺损处。移植空白支架的为实验对照组,移植体外构建的组织工程软骨为实验组。主要观察指标,流式检测的MSCs细胞表面标记情况,微球的形态,支架与细胞共培养后电镜下情况,支架移植后的兔关节修复情况及组织学检查。结果流式检测MSCs第4代及第9代细胞的CD14及CD44表面抗原的表达情况发现两代MSCs CD14表达基本呈阴性,CD44表达呈阳性,符合间充质干细胞的特性。扫描电镜观察所制备的微球基本呈球形,表面光滑,直径约为1μm,大小较均一,分散度好。细胞在壳聚糖-丝素三维支架上生长状态良好,电镜观察,可见支架孔隙内有细胞黏附生长。移植治疗后发现实验组修复明显好于对照组,实验组术后3个月实验组已经有较硬的类软骨组织填充修复,切片显示有软骨细胞规则排列,甲苯胺蓝染色为阳性,而对照组仅为纤维组织修复,切片显示为纤维组织或纤维软骨组织修复,软骨细胞排列紊乱,甲苯胺蓝染色阴性或弱阳性。结论负载TGF-β1壳聚糖微球的壳聚糖-丝素支架复合骨髓间充质干细胞体外复合培养后移植治疗修复兔膝关节软骨缺损,具有较好的疗效。     

负载TGF-β1微球的壳聚糖-丝素支架复合骨髓间充质干细胞修复兔关节软骨缺损的实验研究

目的研制负载转化生长因子β1（transforming growth factor—β1,TGF—B。）壳聚糖微球的壳聚糖-丝素支架复合骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）体外构建组织工程软骨,观察将其移植修复兔膝关节软骨缺损的效果。方法通过密度梯度离心法及贴壁培养法分离纯化MSCs,以抗兔CD14、CD44等单抗采用流式细胞仪进行MSCs表面抗原鉴定,获得纯化的MSCs。采用乳化交联法获得包裹TGF—B,壳聚糖缓释微球,并将该微球负载在冷冻干燥获得的壳聚糖一丝素支架上。将培养的MSCs种植到支架上,体外构建组织工程软骨,移植到兔关节软骨缺损处。移植空白支架的为实验对照组,移植体外构建的组织工程软骨为实验组。主要观察指标,流式检测的MSCs细胞表面标记情况,微球的形态,支架与细胞共培养后电镜下情况,支架移植后的兔关节修复情况及组织学检查。结果流式检测MSCs第4代及第9代细胞的CD14及CD44表面抗原的表达情况发现两代MSCsCD14表达基本呈阴性,CD44表达呈阳性,符合间充质干细胞的特性。扫描电镜观察所制备的微球基本呈球形,表面光滑,直径约为1μm,大小较均一,分散度好。细胞在壳聚糖-丝素三维支架上生长状态良好,电镜观察,可见支架孔隙内有细胞黏附生长。移植治疗后发现实验组修复明显好于对照组,实验组术后3个月实验组已经有较硬的类软骨组织填充修复,切片显示有软骨细胞规则排列,甲苯胺蓝染色为阳性,而对照组仅为纤维组织修复,切片显示为纤维组织或纤维软骨组织修复,软骨细胞排列紊乱,甲苯胺蓝染色阴性或弱阳性。结论负载TGF—β1壳聚糖微球的壳聚糖-丝素支架复合骨髓间充质干细胞体外复合培养后移植治疗修复兔膝关节软骨缺损,具有较好的疗效。     

兔膝关节软骨缺损修复的初步研究

目的　通过髓腔细胞的分化、生长及应用生长因子 ,修复穿透软骨下骨的关节软骨损伤。方法　采用胶原凝胶与髓腔细胞相混 ,植入兔膝关节实验性软骨缺损区 ,并加入少量细胞生长因子 ,观察软骨缺损修复情况。结果　胶原凝胶移植后的修复组织为透明软骨样组织 ,表面光滑 ,基底部骨小梁形成良好 ,且与碱性成纤维细胞生长因子相混合后 ,其修复组织生长似乎更好一些 ;而单纯钻孔组的修复则是不完全的 ,形成以纤维组织为主的修复组织。结论　关节软骨下髓腔内的间叶细胞在胶原凝胶载体支架的保护下 ,关节腔内特定的局部微环境使其向软骨细胞转化 ,形成修复组织     

关节软骨损伤再生修复的组织学研究

目的:制作不同程度关节软骨损伤的动物模型,对关节软骨损伤后软骨再生修复的组织学及超微结构进行系统研究。方法:选用 1 岁龄健康Leghorn鸡 20 只,随机分四组。甲组:切取左侧髋臼3×4mm全层软骨,再植回原处固定;乙组:切除左侧髋臼 3×4mm全层软骨;丙组:切除左侧髋臼6×8mm全层软骨;丁组:切除左侧全部髋臼软骨。健康右侧髋臼为对照组。饲养 7 个月,一次宰杀,行肉眼、光镜、电镜观察。结果:甲组髋臼软骨损伤处完全修复;乙组软骨缺损区为纤维软骨再生修复;丙组与丁组髋臼软骨缺损区主要被纤维组织充填。结论:我们认为关节软骨再生修复能力有限,关节软骨再生修复程度与关节软骨损伤程度、有无关节软骨缺损以及关节软骨缺损程度密切相关。     

关节软骨的实验MRI研究

目的　研究胶原纤维对关节软骨ＭＲＩ表现的影响。方法　１５ 只新鲜牛髌骨标本行各向异性多序列ＭＲＩ扫描。５ 只标本行部分容积效应ＭＲＩ扫描。结果　正常牛髌骨的关节软骨主体ＭＲ 表现由表及里的高、低、高信号的平行三层结构及一层恒定存在的软骨下低信号带。偏振光显微镜对照研究证实各层的胶原纤维排列方向不同，与ＭＲＩ分层表现密切相关。结论　正常关节软骨ＭＲＩ分层表现强烈受胶原纤维重振光性及胶原纤维与主磁场相对排列方向的影响。     

深低温同种异体关节软骨帽移植的实验研究

目的　观察经深低温冷冻保存的同种异体关节软骨帽移植修复关节软骨缺损(ArticularCartilage,AC)的 实验效果。方法　取成年新西兰大白兔36只,其中12只作为关节软骨帽供体,另24只兔作为关节软骨帽受体, 将受体动物随机分为A、B两组,严格无菌条件下A组12只肱骨头行深低温冷冻软骨帽移植,B组12只肱骨头行 新鲜软骨帽移植。术后常规抗感染3d,两组分别于6、12周取肱骨头作相关观察与检测。结果　术后6周大体观 察,光镜,电境A、B两组无明显区别,移植物无明显移位,表面光滑、有光泽。软骨细胞形态基本正常,细胞核形态 基本正常。S 100(β亚链)蛋白免疫组化染色无差异。12周时,A、B两组移植物外形良好,移植物表面颜色为乳白 色,中心负重区可见明显塌陷。移植软骨有退行性改变。在电镜观察上,两个时间点上均无统计学差异(P> 0.05)。　结论　(1)大块软骨组织中的软骨细胞在经过深低温冷冻处理后,仍可保持较好的生物活性,可以用于 长期库存和移植使用。(2)大块深低温冷冻保存和新鲜同种异体软骨移植的近期效果良好,但远期效果有待进一 步研究。     

骨形态发生蛋白/碱性成纤维细胞生长因子复合材料修复关节软骨缺损的实验研究

目的探讨骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growthfactor,bFGF)复合材料在关节软骨缺损修复过程中的作用,为内源性修复关节软骨缺损提供实验基础。方法选用兔作为实验动物造成双侧股骨髁间窝全层软骨缺损,分别采用不同的材料(rhBMP2/PVP组、bFGF/PVP组、rhBMP2/bFGF/PVP组、PVP组)进行缺损修复,光镜及电镜下观察修复效果。结果术后8周rhBMP2/bFGF/PVP组软骨缺损已基本修复,12周时软骨修复更加光滑、完整。其余组软骨缺损修复效果不如rhBMP2/bFGF/PVP组。结论BMP具有诱导形成软骨的活性,与bFGF的复合物能增强软骨细胞增生,较单独应用BMP效果好,是生物学修复关节软骨缺损的良好材料。     

碱性成纤维细胞生长因子对兔关节软骨全层缺损的修复作用

目的：利用注射型活性材料碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）修复兔关节软骨缺损，观察其治疗效果。方法：实验尝试在兔的膝关节软骨缺损区应用碱性成纤维细胞生长因子，分别于10周，14周，18周处死，观察大体和形态学特征，组织学评分。结果：A组于10、14周时，软骨缺损被白色半透明坚硬组织平滑修复，富有光泽，与正常软骨边界清楚，18周时修复组织与正常软骨边界模糊，质地坚硬，表面平滑光润。对照组于10、14、18周时均未见软骨修复。组织学评分A组明显优于对照组。结论：碱性成纤维细胞生长因子可以有效修复兔关节软骨的缺损，为组织工程化软骨的临床应用提供理论基础。     

中药柚皮苷结合兔骨髓间充质干细胞治疗兔膝关节软骨缺损实验研究

目的：研究中药柚皮苷结合兔骨髓间充质干细胞对兔关节软骨缺损修复的影响,评价修复效果。方法：取兔骨髓间充质干细胞进行体外增殖,植入到兔膝关节软骨缺损,并以中药柚皮苷汤灌胃,并设立单纯柚皮苷汤组、单纯骨髓间充质干细胞组、单纯关节缺损组、复合应用组。于第8周后对修复组织进行形态学观察及组织学检查。结果：术后8周,在形态学观察及组织学检查上,单纯柚皮苷汤组、单纯骨髓间充质干细胞组均取得了一定的修复效果,但是复合组的缺损修复优于其他各组,差异有统计学意义。结论：兔骨髓间充质干细胞及口服中药柚皮苷汤均能修复兔膝关节软骨缺损,复合应用能促进软骨的修复,且提高修复质量。     

实验兔膝关节软骨的高场强磁共振成像

目的：探讨实验兔膝关节软骨的高场强MRI正常表现以及成像的最佳序列及参数。方法：应用飞利浦Intera1．5T超导型磁共振扫描仪,分别采用PDW／SPAIR／D,T2W_3D_FFE及3D_WATSc序列对6只实验兔的膝关节行磁共振成像,观察不同序列关节软骨的信号特点,比较各序列的软骨信噪比（signal to noiseration,SNR）及软骨／软骨下骨对比噪声比CNR（contrast to noiseratio,CNR）。结果：兔膝关节软骨在三个序列中均表现为单层均匀的中等或高信号带;PDW／SPAIR／D、T2W_3D—FFE及3D—WATSc各序列的软骨SNR差异无显著性（P=3．840）,而软骨／软骨下骨CNR差异有显著性（P=0．045）;3D—WATSc序列的软骨／软骨下骨CNR高于PDW／SPAIR／D序列及T2W_3D—FFE序列（P〈0．05）,而PDW／SPAIR／D序列和T2W_3D—FFE序列间的软骨／软骨下骨CNR差异无显著性（P〉0．05）。结论：高场强磁共振下,兔膝关节软骨表现为单层均一信号,三维扰相梯度回波结合水激励技术即3D_WATSc序列,可能是观察实验兔关节软骨的最佳成像序列。