放射控导的wt-p53蛋白正反馈基因环路对肺腺癌细胞周期、凋亡及放射敏感性的影响

目的研究体外环境放射控导的wt-p53蛋白正反馈基因环路对肺腺癌细胞细胞周期、凋亡率及放射敏感性的影响。方法采用直线加速器8MV-X线,400MU/min、4Gy、源皮距100cm的照射条件照射治疗组pE6R4-p53-EGFP/H1299转染细胞和对照组H1299(p53-/-)、pE6-p53-EGFP/H1299和pR4-p53-EGFP/H1299转染细胞,12h后收集各组细胞,流式细胞仪分析该环路在放射线诱导下对肺腺癌细胞周期和细胞凋亡率的影响;绘制细胞放射剂量-存活曲线,计算平均致死剂量(Do)值及放射增敏比(sensitive enhancement ratio,SER)。结果4Gy8MV-X线照射治疗组和对照组细胞后12h,治疗组细胞在照射后(75.13±1.42)%发生明显G0/G1期阻滞;照射后各组细胞凋亡率均高于照射前,照射后治疗组细胞凋亡率为(23.73±0.21)%,分别是对照组H1299(p53-/-)细胞[(4.17±0.12)%]、pE6-p53-EGFP/H1299细胞[(15.67±0.32)%]、pR4-p53-EGFP/H1299细胞[(9.23±0.15)%]的5.6...     

FHIT和p53基因在非小细胞肺癌中的表达

目的研究脆性组氨酸三联体（FHIT）基因与p53基因在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其作用。方法病理确诊的NSCLC标本113例,免疫组化法检测FHIT和p53基因的蛋白表达,以癌旁正常组织作为对照。结果113例NSCLC中,66例（58％）FHIT蛋白表达降低,35例（31％）p53蛋白表达增多,均以鳞癌和吸烟患者多见（P〈0．01）。结论FHIT基因缺失与p53基因异常,可能在NSCLC的发生和发展中起重要作用。     

FHIT和p53基因在非小细胞肺癌中的表达

目的研究脆性组氨酸三联体(FHIT)基因与p53基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其作用.方法病理确诊的NSCLC标本113例,免疫组化法检测FHIT和p53基因的蛋白表达,以癌旁正常组织作为对照.结果113例NSCLC中,66例(58%)FHIT蛋白表达降低,35例(31%)p53蛋白表达增多,均以鳞癌和吸烟患者多见(P＜0.01).结论FHIT基因缺失与p53基因异常,可能在NSCLC的发生和发展中起重要作用.     

中央型肺癌与周围型肺癌抑癌基因P53表达,细胞增殖动力学研究

为探讨中央型肺癌与周围型癌分子病理学基础和细胞增殖动力学特征,用免疫组化的方法及流式细胞术（ＦＣＭ）分析比较了４２例外科手术切除非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）病人肿瘤组织抑癌基因Ｐ５３表达,Ｓ期细胞比例（ＳＰＦ）,ＤＮＡ指数与病人临床病理学参数的关系,发现：中央型肺癌Ｐ５３过度表达阳性率较周围型明显增高,ＳＰＦ,ＤＮＡ指数也比周围型肺癌明显高,结果提示：中央型肺癌与周围型肺癌早期的分子病理学发病机制可     

p53在非小细胞肺癌中表达的研究现状

p53基因是人类肿瘤中突变率最高的抑癌基因。通过对p53基因的结构、生物学活性及其相关因子在非小细胞肺癌中表达和p53的多种功能的研究,如调节转录、稳定基因组、抑制细胞周期进展、促进凋亡、抑制血管形成等,表明p53对基因治疗有很大的帮助。这种治疗是从肿瘤发病机制的角度进行的,为肿瘤治疗提供了一种全新的方式,因而在肿瘤的防治中有重大意义。     

p14ARF基因功能性恢复对人肺癌细胞放射敏感性的影响

目的 了解专职调控细胞周期的ｐ１４ＡＲＦ蛋白功能恢复或增强能否影响体外肺癌细胞的放射敏感程度。方法 选择了４株具有不同基因背景的肺癌细胞系,为综们引入人野生型ｐ１４ＡＲＦ基因。用ＲＴ－ＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎ蛋白印迹和免疫组化检测外源性、ｐ１４ＡＲＦ人主使ＲＮＡ及蛋白表达,并筛选出阳性克隆,以母细胞系和转染空载体的阴性细胞为对照,分析转染ｐ１４ＡＲＦ的细胞在周期分布、放射存活分数及放射诱导的凋亡比例     

非小细胞肺癌靶向基因研究新进展

<正>30年来,我国肺癌死亡率增长465%,肺癌在全部因癌症死亡患者中占22.7%,其中85%是非小细胞肺癌,肺癌已成为我国因癌症死亡患者的第一杀手,严重威胁人民群众的生命健康。随着分子生物学的发展,基因改变的检测及相应靶向药物的研发使得肺癌的治疗水平得到极大提高。基因检测继以靶向药物治疗标志着肺癌进入个体化治疗的时代,大大延长了肺癌患者的生存期。近年来基因检测日益常规化,本文以EGFR和ALK为例     

p16基因甲基化在非小细胞肺癌的表达研究

目的：探讨p16基因甲基化在人非小细胞肺癌组织中的表达情况。方法：应用甲基化特异性PCR法（MS-PCR）检测45例非小细胞肺癌组织,21例肺良性疾病组织中p16基因甲基化的表达情况。结果：肺良性疾病中p16基因甲基化阳性率为14．3％,低于癌组织中的57．8％,差异有统计学意义（P=0．001）;p16基因甲基化与非小细胞肺癌细胞分化程度及淋巴结转移情况有明显的相关性（P〈0．05）。结论：p16基因甲基化的表达情况与非小细胞肺癌的发生、发展有关。     

非小细胞肺癌组织中cFLIP和P53蛋白的表达

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织中cFLIP、P53蛋白的表达及意义。方法采用免疫组化方法检测56例NSCLC组织和16例肺良性病变中cFLIP、P53蛋白表达情况，分析二者在肺癌组织学分型、分化程度、临床分期和淋巴结转移方面表达差异及其相关性。结果56例NSCLC标本中cFLIP和P53阳性表达率分别是58．9％（33／56）、62．5％（35／56），肺良性病变组织标本中阳性率分剐是18．75％（3／16）和0％。cFLIP和P53在Ⅰ、Ⅱ期、无淋巴结转移组中的表达分别低于Ⅲ、Ⅳ期和淋巴结转移组，而在病理组织学分型和不同分化组间无统计学意义。cFLIP和P53在肺癌组织中的表达呈正相关（r=0．328，P〈0．05）。结论cFLIP和P53可以作为肺癌预后的评价指标，P53对cFLIP的表达可能有调控作用。     

ALK融合基因阳性的非小细胞肺癌靶向治疗进展

肺癌是目前世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,其中80%以上为非小细胞肺癌,由于起病隐匿且缺乏特异性症状,多数患者诊断时已是晚期,放化疗及分子靶向治疗成为其主要的治疗手段。EML4-ALK融合基因是非小细胞肺癌的治疗靶点之一,它是通过细胞外配体结合区与胞内的酪氨酸激酶区结合,导致酪氨酸激酶激活并表达,从而获得致癌作用。ALK融合基因阳性肺癌占非小细胞肺癌总体的3%~5%,对ALK酪氨酸激酶抑制剂治疗有效。克唑替尼作为第一个用于治疗晚期ALK重排肺癌的药物,耐受良好,与传统化疗相比受益更大,提高客观缓解率,且改善患者的生活质量。二三代药物包括赛瑞替尼、艾乐替尼、布格替尼和劳拉替尼也取得可观的临床获益,与一代药物相比更具优势。随之而来的问题是ALK酪氨酸激酶抑制剂的耐药,包括固有耐药和获得性耐药,目前最常见的耐药机制是ALK基因的二次突变,L1196M突变和G1202R突变分别是克唑替尼和二代ALK抑制剂最常见的耐药突变。目前针对耐药发生后,首选的治疗措施是下一代ALK抑制剂,其他还包括与热休克蛋白90抑制剂或培美曲塞的联合治疗。充分了解耐药机制将有助于耐药后的个体化治疗。本文叙述了ALK阳性晚期非小细胞肺癌靶向治疗的关键临床试验,以及有关耐药诊治的相关进展。      

放射诱导HSV-TK基因在肺癌细胞中靶向、高效性表达的研究

目的 构建放射诱导的同步放大基因电路,通过基因电路调控HSV-TK基因在肺癌细胞中靶向、高效性表达,以提高放射-基因治疗的有效性和靶向性.方法 利用分子克隆的方法将HSV-TK基因插入到同步放大基因电路载体的下游,并采用脂质体介导重组载体和对照载体转染肺癌细胞A549;G418筛选阳性克隆,转染细胞给予2Gy X线照射后,检测照射前后不同时相点细胞内TK表达情况,及不同浓度前药GCV对转染重组载体和对照载体的肺癌细胞的生长抑制率.结果 照射后转染同步放大重组载体的细胞内TK的表达明显强于对照组,且随时间的推移而逐渐增强,以照射后16h最为明显.同一浓度的GCV对转染同步放大载体的A549细胞的抑制率明显高于对照组和未转染组,IC50也明显低于对照组和未转染组.结论 同步放大基因电路明显增强了靶细胞内HSV-TK基因的表达,进一步完善了放射-基因治疗这一新的肿瘤治疗模式.     

非小细胞肺癌阳性胸水 BRAF V600E基因突变的研究

目的：分析BRAFV600E基因突变在非小细胞肺癌阳性胸水中的表达情况。方法将胸水内查见肺腺癌细胞的病例24例其阳性胸水离心沉渣制作细胞块。分离细胞块样品 DNA ,使用扩增突变系统（ARMS ）方法进行 PCR 扩增,检测BRAFV600E基因突变情况。结果检测成功率为100％,突变检出率为8％,检出突变2例,男性及女性各1例,FAM 信号Ct值分别为18.7及17.8,STD的 FAM 信号Ct值为18。结论可以应用非小细胞肺癌阳性胸水代替肺癌肿瘤组织检测BRA FV600E基因突变,对指导晚期非小细胞肺癌病人靶向药物治疗具有重要指导意义。     

非小细胞肺癌p16基因突变与表达的研究

pl6蛋白最初是从各种肿瘤病毒转化的细胞中鉴定出的一种CDK4相关蛋白l’］。p］6基因被发现后,已有一些文献『‘－’］对其在肺癌中出现的基因缺失和突变进行了报道,但关于原发性肺癌中p16基因的突变和表达与患者的病理及临床资料相结合的研究目前还少见报道。本文采用?..     

非小细胞肺癌组织中端粒酶活性和P53表达及其意义

目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织中端酶活性表达和P53蛋白表达的意义。方法 采用PCR-ELISA检测端粒酶活性,S-P检测P53蛋白表达。结果 癌组织中端粒酶活性表达与P53蛋白表达明显高于正常组织,且端粒酶活性高低,P53蛋白表达均与细胞分化程度、淋巴结转移密切相关。结论 测定NSCLC组织中端粒酶活性表达,P53蛋白表达对探讨NSCLC发生、发展有重要价值。     

KRT 19 基因多态性对化疗联合靶向治疗NSCLC 疗效的影响

目的 探讨细胞角蛋白19 片段（KRT 19）基因多态性与化疗联合靶向治疗非小细胞肺癌（NSCLC） 疗效的相关性。方法 对146 例接受化疗联合靶向治疗的晚期NSCLC 患者进行临床疗效评价,采用PCRRFLF 分析KRT 19（-99G>C）基因,分析不同基因型与化疗联合靶向治疗疗效的相关性。结果 KRT 19 （-99G>C）中GG 基因型患者与GC+CC 基因型患者的化疗联合靶向治疗的有效率比较,差异有统计学意 义（P <0.05）;携带C 基因型者对化疗联合靶向治疗的敏感性是T 基因型的1.897 倍[Ol ^ R=1.897（95%CI ： 1.103,3.647）P =0.001] ;KRT 19（-99G>C）等位基因C 携带者（GC+CC）的MST 短于GG 基因型携带者 （P <0.05）。Cox 模型分析显示,KRT 19（-99G>C）变异等位基因C 是影响晚期NSCLC 预后的独立危险因素, 其变异等位基因C 携带者（GC+CC）的OR 是GG 基因型携带者的2.014 倍（P <0.05）。结论 KRT 19（-99G>C） 位点基因多态性是影响晚期NSCLC 患者化疗联合靶向治疗预后的独立危险因素,且与化疗联合靶向治疗敏 感性相关。     

非小细胞肺癌EGFR基因突变与放射敏感性的相关性

目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)基因突变与非小细胞肺癌(NSCLC)放射敏感性的相关性及可能机制.方法 选取EGFR基因突变的NSCLC细胞株PC-9、H1975和EGFR野生型NSCLC细胞株A549.克隆成型实验检测放射敏感性,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,Western blot检测凋亡蛋白和修复蛋白表达.结果 PC-9、H1975细胞放射敏感性明显高于A549细胞,4Gy照射下克隆存活率分别为10.0％、5.5％和44.3％;4 Gy照射后48 h PC-9和H1975细胞凋亡率显著高于A549细胞,分别为18.300％、17.533％和11.733％.A549细胞发生G0/G1期阻滞显著高于PC-9、H1975细胞,4Gy照射后48 h G0/G1期细胞分别为74.480％、70.293％和57.016％.A549细胞在4Gy照射后促凋亡蛋白Bax表达缺失,凋亡蛋白Caspase-3、抗凋亡蛋白Bcl-2、修复蛋白DNA-PKcs在24 h仍有表达.而PC-9、H1975细胞在4Gy照射后Bax、Caspase-3表达增多,Bcl-2不表达,DNA-PKcs表达减少.结论 EGFR 19外显子缺失突变细胞PC-9和21外显子点突变细胞H1975,相对EGFR野生型细胞A549对放射线敏感,其机制与细胞周期G0/G1期阻滞、Bax表达增多、DNA-PKcs、Bcl-2表达降低有关.     

组织因子表达在非小细胞肺癌转移中的意义

目的探讨组织因子(TF)表达在非小细胞肺癌转移中的意义。方法利用HE染色对75例非小细胞肺癌患者的石蜡标本进行肺癌原发灶及是否有淋巴转移行病理确认;应用免疫组化SABC法检测所有肺癌组织标本中TF的表达。结果 75例非小细胞肺癌TF阳性表达49例,阳性率为65.3%;在48例发生淋巴结转移的患者中,40例肺癌原发灶TF表达为阳性(包括19例强阳性),阳性率为83.3%;27例未发生淋巴结转移的患者中,9例肺癌原发灶TF表达为阳性(包括2例强阳性),阳性率为33.3%。结论伴有淋巴转移的非小细胞肺癌原发灶高水平表达TF,TF与肿瘤的转移密切相关。     

非小细胞肺癌Survivin基因表达与细胞增殖的相关性研究

目的 探讨非小细胞肺癌Survivin基因表达与细胞增殖的相互关系。方法 应用免疫组织化学方法检测了76例非小细胞肺癌组织、12例癌旁组织和12例肺良性病变组织中Survivin基因和核增殖相关抗原Ki-67的表达水平，并分析两者的相互关系。结果 非小细胞肺癌患者Survivin基因和Ki-67的蛋白表达水平分别为80、26％(61／76)和69、74％(53／76)，极明显高于对照组(P＜0．01)。两者间的表达呈明显的正相关(r=0．42，P＜0．01)。结论 不同性质的肺病变组织Survivin基因的表达水平不同，可以用作非小细胞肺癌临床诊断的可靠指标和基因治疗的目的基因。Survivin基因的过度表达与非小细胞肺癌的细胞增殖活性明显相关，Survivin基因可能具有促进肺癌细胞增殖的活性。     

联合RASSF1A与FHIT基因甲基化检测在非小细胞肺癌诊断中的应用

目的 探讨RASSF1A与FHIT基因甲基化联合检测对预测诊断非小细胞肺癌(NSCLC)的价值。方法 收集滨州医学院附属医院胸外科行手术治疗并经过WHO病理组织学标准确诊的NSCLC患者30例作为病例组,另获取同期健康体检者30例作为对照组。于术前或体检时获取入组者血液标本,提取DNA后通过实时荧光定量甲基化特异PCR(MSP)法检测RASSF1A与FHIT基因甲基化率,将年龄、性别、病理组织学类型及临床分期等指标对甲基化的影响进行分析,并对两类基因甲基化联合检测对诊断NSCLC的敏感性、特异性等进行分析。结果 NSCLC患者RASSF1A基因甲基化率为66.67%(20/30),FHIT基因甲基化率为60%(18/30)。各临床病理特征与患者RASSF1A和FHIT基因甲基化均不存在明显的相关性(P＞0.05 )。RASSF1A和FHIT基因甲基化均为NSCLC发病的独立危险因素。联合检测RASSF1A和FHIT基因甲基化能够明显提高诊断的敏感性及特异性,而阳性、阴性预测值不存在差异。结论 RASSF1A和FHIT基因甲基化联合检测可显著提升NSCLC的诊断水平,但对于早期诊断并无明显优势。