IL-12对结构优化的HBV核心抗原DNA疫苗诱导免疫应答的影响

目的 探讨IL-12对一种结构优化的HBV核心抗原(HBcAg)DNA疫苗免疫效果的影响。方法 将小鼠IL-12基因插入结构优化的DKA疫苗pST-HBc，构成pST-HBc/IL12，将pST-HBc／IL12转染COS7细胞，ELISA检测培养上清中的HBcAg和小鼠IL-12。分别将pST-HBc／IL12和pST-HBc肌肉注射接种BALB／c小鼠，检测小鼠的体液和细胞免疫应答。结果 ELISA检测到培养上清液中的HBcAg和小鼠IL-12，pST-HBc／IL12诱导的抗-HBc总IgG阳转率和抗体水平不及pST-HBc，但其诱导的脾细胞增殖反应和细胞毒性T淋巴细胞反应均强于pST-HBc。结论 IL-12可进一步增强这种HBcAgDNA疫苗诱导的细胞免疫应答。     

治疗性HBV DNA疫苗的研究进展

乙型肝炎病毒（HBV）的持续感染可引起肝脏疾患，甚至肝硬化和原发性肝细胞癌。近年来，HBV DNA疫苗在治疗慢性HBV携带者和慢性乙型肝炎方面越来越引起人们的重视。本文主要就治疗性HBV DNA疫苗的构成、治疗慢性乙型肝炎的依据及其研究进展进行综述。     

DNA疫苗免疫原性的研究策略

DNA疫苗既能诱导体液免疫又能诱导细胞免疫，是近年来疫苗研究的热点领域，被称为疫苗史上的第三次革命。但DNA疫苗诱导特异性免疫应答的水平不高，限制了它的广泛应用。本对提高DNA疫苗免疫原性的几种策略进行综述。     

HBV与HCV融合DNA疫苗的构建及其体液免疫应答

目的 构建含乙型肝炎病毒（HBV）表面抗原基因（S区基因）与丙型肝炎病毒（HCV）核心抗原基因（C区基因）的嵌合真核表达载体,观察preS1和preS2基因对HBV表面抗原及HCV核心抗原体液免疫的影响。方法 用PCR方法,分别扩增HBV S区基因和HCV C区基因。将S区基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1,酶切鉴定后,大量提取质粒并免疫Balb/c小鼠,用ELISA法检测抗HBs和抗HCV抗体。结果 成功地扩增出目的基因片段,克隆后酶切鉴定结果正确,序列分析与文献报告相一致。免疫后检测到抗HBs和抗HCV抗体。preS1与preS2基因对构建的融合DNA疫苗的体液免疫应答有一定的抑制作用。抗HBs抗体的产生低于只含S基因的真核表达载体;preS1基因对抗HCV抗体的产生具有抑制作用,而preS2无影响。结论 不同长度的HBV S区基因可影响抗HBs和抗HCV抗体的产生。     

DNA疫苗免疫原性的研究策略

DNA疫苗既能诱导体液免疫又能诱导细胞免疫,是近年来疫苗研究的热点领域,被称为疫苗史上的第三次革命.但DNA疫苗诱导特异性免疫应答的水平不高,限制了它的广泛应用.本文对提高DNA疫苗免疫原性的几种策略进行综述.     

共表达HIV-1与IL-6核酸疫苗质粒诱导小鼠免疫原性的研究

目前我国ＡＩＤＳ的流行已进入快速增长期 ,因此应用现代生物技术研制新型ＡＩＤＳ疫苗 ,改进早期开发疫苗的缺陷 ,提高其质量是当前的迫切任务。本研究利用分子生物学方法在真核表达载体基础上构建ＨＩＶ结构基因与细胞因子ＩＬ 6基因共表达重组质粒作为核酸疫苗 ,进行小鼠免疫试验 ,探讨核酸疫苗对机体细胞免疫反应能力及细胞因子ＩＬ 6作为免疫佐剂的效果。构建表达中国流行株ＨＩＶ 1Ｂ亚型ｇｐ12 0基因的核酸疫苗质粒ｐＧＰ及共表达中国流行株ＨＩＶ 1Ｂ亚型ｇｐ12 0基因与ＩＬ 6基因的核酸疫苗质粒ｐＧＰＩＬ 6 ,检测其在哺乳动物细胞…     

两种结核DNA疫苗的免疫原性和保护效力

ＭＰＴ6 4和ＥＳＡＴ6都是结核分支杆菌复合群主要的分泌性蛋白 ,也是其重要的Ｔ细胞抗原 ,ＥＳＡＴ6编码基因在ＢＣＧ菌株中缺失〔1〕,而ＭＰＴ6 4编码基因在某些ＢＣＧ菌株中也缺失〔2〕。因此 ,本研究将结核分支杆菌ＭＰＴ6 4和ＥＳＡＴ6ＤＮＡ疫苗免疫小鼠后 ,观察小鼠的体液和细胞免疫应答 ,并通过脏器的菌落计数评价这两种ＤＮＡ疫苗的保护效力 ,以筛选有效的结核病ＤＮＡ疫苗。材料与方法质粒ＤＮＡ的提取和纯化 :采用Ｑｉａｇｅｎ公司生产的质粒纯化试剂盒大量制备及纯化ＤＮＡ免疫用的质粒 ,溶于生理盐水中 ,置 2 0℃贮存备用。通…     

改善HIV—1DNA疫苗免疫原性的方法

1　 HIV-1 DNA疫苗的特点自 1 981年首次发现艾滋病以来 ,艾滋病病毒 ( HIV)的感染在全世界迅速广泛流行。到2 0 0 0年底 ,我国在 HIV感染人数已达 60万。由于药物的昂贵和耐药株的产生影响艾滋病的治疗。科学家认为预防 HIV传播的最佳措施是研制和应用安全而有效的预防性疫苗 ,而且认为研制有效的 HIV疫苗是可行的。目前科研人员研究了多种类型疫苗 ,其中最引人关注的是基因疫苗。HIV-DNA疫苗之所以受到科学家的关注 ,是因为 :基因疫苗与传统疫苗、基因工程疫苗相比 ,有以下优点 :1直接接种 DNA疫苗 ,生产成本低。 2接种基因疫…     

单纯疱疹病毒DNA疫苗的免疫原性和保护效力

单纯疱疹病毒(HSV)感染可分为原发性感染和复发性感染，在临床上表现为多种症候群，如生殖器感染、口面感染、皮肤感染、中枢神经系统感染和新生儿感染等。HSV-1主要引起非生殖器感染，而HSV-2则引起生殖器感染。由HSV-2感染造成的公共卫生问题促使人们对能预防或控制HSV-2感染的疫苗进行研究。     

重组BCG疫苗和结核杆菌HSP65 DNA疫苗免疫原性的比较研究

目的　研究重组BCG(recombinantBCG ,rBCG)疫苗和人结核杆菌热休克蛋白 (heatshockprotein ,HSP) 6 5DNA疫苗对小鼠免疫应答的影响 ,评价两种疫苗的免疫原性。方法　用rBCG疫苗和HSP6 5DNA疫苗免疫BALB/c小鼠 ,免疫 8周时 ,采血、取腹腔巨噬细胞和脾脏进行实验。以NO释放量检测巨噬细胞吞噬活性 ,以淋巴细胞刺激指数 (SI)反映细胞增殖能力 ,以ELISA试剂盒检测血清及脾淋巴细胞培养上清的IL 2和IFN γ的含量。结果　rBCG疫苗以 10 6CFU/鼠的剂量经皮下免疫小鼠后 ,其脾淋巴细胞的增殖能力明显高于对照组 ,BCG组和HSP6 5DNA疫苗组 (P <0 .0 5 ) ;腹腔巨噬细胞一氧化氮 (NO)的含量和血清IL 2的含量明显高于对照组 (P <0 .0 1) ;血清IFN γ的含量明显高于HSP6 5DNA疫苗组 (P <0 .0 5 ) ;其余测定参数均有升高趋势 ,但差异无显著性 (P >0 .0 5 )。而HSP6 5DNA疫苗以 5 0 μg/鼠的剂量经肌注免疫小鼠后 ,其血清IL 2的含量明显高于对照组 (P <0 .0 1) ;血清IFN γ的含量明显低于rBCG组 (P <0 .0 5 ) ;其余测定参数与其他各组相比差异均无显著性(P >0 .0 5 )。结论　本实验结果显示 ,rBCG疫苗具有良好的免疫原性 ,能明显增强BALB/c小鼠的免疫应答反应。HSP6 5DNA疫苗亦能刺激机体的免疫应答 ,但其反应强度似乎不     

IL-12和IL-18基因免疫对HBcAg核酸疫苗诱导小鼠(H-2d)特异性免疫应答的影响

目的：观察IL-12和IL-18基因免疫对HBcAg核酸疫苗诱导小鼠（H-2d）特异性体液免疫和细胞免疫应答的影响.方法：用肌肉注射法将HBV核心区DNA疫苗、IL-12质粒和IL-18 质粒接种BALB/c小鼠;ELISA法检测小鼠血清抗-HBc（IgG）及IgG亚类（IgG1、IgG2a）;LDH释放法检测小鼠脾细胞HBcAg特异性CTL活性.结果：免疫6周后,HBcAg DNA疫苗联合IL-12质粒、IL-18质粒和IL-12＋IL-18质粒组小鼠的血清抗HBc终点滴度均明显高于单纯注射HBcAg DNA疫苗组小鼠（P＜0.05）,抗HBc IgG亚类以IgG2a占优.DNA疫苗免疫的各组小鼠,HBcAg特异性细胞毒性T淋巴细胞杀伤率均高于对照组（P组）,其中C＋IL-18组和C＋IL-12＋IL-18组中CTL值明显高于C组,尤以C＋IL-12＋IL-18组中的CTL杀伤率最高.结论：IL-12和IL-18基因与HBcAg DNA疫苗联合免疫,不仅能增强HBcAg特异性体液免疫应答,而且能增强HBcAg特异性CTL的杀伤活性.     

Expansion of restricted cellular immune responses to HIV-1 envelope by vaccination: IL-7 and IL-12 differentially augment cellular proliferative responses to HIV-1

The failure of immune effector mechanisms to control HIV-1 infection has important consequences for the human host. In a randomized cohort of HIV-infected patients, there was striking in vitro restriction of the proliferative response to HIV-1 envelope protein (Env), gp160; only 34% of patients recognized Env. Therapeutic vaccination with recombinant gp160 or gp120 (rgp160, rgp120) reversed the restriction in vitro, with Env recognition rising to 81%. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from HIV-infected vaccine recipients, placebo recipients, and seronegative volunteers were cultured with exogenous IL-7 or IL-12 and either tetanus toxoid (TT) or gp160. IL-7 significantly augmented proliferative responses to TT and gp160, whereas IL-12 only affected proliferation to gp160. IL-7, but not IL-12, increased the number of HIV-infected placebo recipients who recognized rgp160. IL-12 had its greatest effect in the induction of rgp160-specific responses from seronegative individuals. The data suggest that these two cytokines have differential activity in the relief of restricted cellular immunity to Env; the predominant effect of IL-7 is in individuals who have been primed by exposure to antigen, while the effect of IL-12 is most evident in seronegative, unprimed individuals. Modification of restricted proliferative responses to Env by vaccination or cytokines in vitro suggests that strategies incorporating IL-7 or IL-12 as adjuvants may selectively boost cellular reactivity to HIV-1.     

IL-12、IL-18基因对HIV-1外膜蛋白基因疫苗诱导的免疫应答的影响

目的 研究IL-12、IL-18基因对HIV-1外膜蛋白基因疫苗诱导免疫应答的影响，以探求HIV-1核酸疫苗的新策略。方法 pVAX1GP120联合IL-12、IL-18基因或者pVAX1GP120单独免疫BALB／c小鼠，采用ELISA检测免疫小鼠的特异性抗体和IFN-γ水平，以NIT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细脯增殖，用乳酸脱氢酶（LDH）试验检测小鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞（CIL）的应答。结果 与pVAX1GP120免疫组比较，pVAX1GP120联合IL-12、IL-18基因免疫组小鼠血清的抗HIV-1 gp120抗体滴度升高，IFN-γ升高，小鼠的脾淋巴细胞增殖实验刺激指数（SI）以及特异性CTL活性均高，差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论 IL-12、IL-18基因联合HIV-1核酸疫苗免疫小鼠，有可能增强特异性TH1细胞和CTL反应，IL-12、IL-18基因对体液免疫可能有抑制作用。因此，IL-12、IL-18基因对于治疗性HIV-1核酸疫苗可能是具有较好应用前景的免疫佐剂。     

脂多糖和金黄色葡萄球菌对IL-23、IL-12表达的调控

目的：检测脂多糖（LPS）和金黄色葡萄球菌（SAC）对人外周血单个核细胞（PBMC）IL-23和IL-12各亚基表达的调节作用并探索其作用机制。方法：用LPS和SAC直接刺激人PBMC，或用CD14抗体或p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）抑制剂Mastoparan预处理PBMC后再予LPS和SAC刺激，半定量RT-PCR方法检测IL-23p19、IL-12p35和IL-12p40亚基的基因表达变化。结果：人PBMC组成性表达p19和p35，不表达p40。LPS和SAC可上调各亚基的表达。LPS诱导的IL-23和IL-12各亚基表达均需通过CDl4；CDl4仅部分参与SAC诱导的IL-12p40和p35表达上调，而与p19上调无关。LPS和SAC诱导的IL-23和IL-12各亚基表达均需要p38MAPK通路。结论：LPS和SAC刺激下IL-23和IL-12亚基表达及信号传导通路既有相似之处又有不同点，为单独或同时调控这两种因子的表达提供线索。     

IL-12基因转染的人树突状细胞加强细胞免疫反应的体外研究

目的:探讨IL-12基因转染的树突状细胞(DCs)能否体外加强细胞免疫反应.方法:脂质体转染(经过Flt-3L、SCF、GM-CSF刺激)增殖周期中的DCs前体细胞.加入GM-CSF、IL-4和TNF-α扩增转染细胞.在流式细胞仪上分析细胞表型及IL-12的表达.成熟DCs装载上分别能与HLA-I 类和HLA-II类分子结合的多肽,观察IL-12基因转染DCs对特异性Th细胞发育及特异性CTL诱导和功能的影响.结果:IL-12基因转染细胞在上述细胞因子作用下发育成为能有效表达IL-12并具有典型形态学与表型特征的DCs.在装载上CD4+T细胞表位HBcAg50-69后,能诱导这些细胞发育成为IFN-γ产生型的Th1细胞.HLA-A201亚型DCs在其同时装载CD4+T和CD8+T细胞相应的表位后,IL-12 基因转染DCs所诱导产生的自身淋巴细胞的CTL效应增强.结论:IL-12基因转染的DCs能增强对Th1细胞的刺激和CTL效应的诱导能力,提示它在肿瘤疫苗发展中的潜力.     

体内电穿孔对报告基因表达和HIV GagDNA疫苗诱导的免疫反应的影响

目的 研究体内电穿孔递送途径在小鼠模型中对于报告基因表达水平及HIV Gag DNA疫苗所诱导的免疫反应的影响。方法 构建荧光素酶（1uciferase）表达质粒p1．0-1ue，将其通过直接肌肉注射、肌注后以双针电极进行电穿孔、肌注后以钳式电极进行电穿孔等3种不同方法注射小鼠，72h后取注射部位的肌肉测定luciferase的表达情况。同时构建携带密码子优化的HIV-1 B′／C重组亚型CN54株gag基因的DNA疫苗质粒p1．0-gag，在10μg、100μg两个剂量水平上通过以上3种不同的方法免疫BALB／c雌性小鼠，ELISA方法检测Gag特异的抗体反应，ELISPOF方法和细胞内因子染色（intracellular cytokine staining，ICS）技术检测细胞免疫应答。结果 通过体内电穿孔可以使luciferase在小鼠肌肉中的表达水平显著提高，最大提高幅度达到66倍。Gag DNA疫苗免疫结果显示，电穿孔可以显著提高Gag特异的体液免疫应答，其中使用双针电极的效果要显著好于钳式电极，前者所诱导的抗体滴度比不使用电穿孔组提高可达28倍。但体内电穿孔对于Gag特异的细胞免疫应答并没有显著影响。结论 体内电穿孔（尤其是使用双针电极）可以大幅度提高报告基因在体内的表达水平和DNA疫苗诱导的抗原特异性体液免疫应答。     

IL-17作为分子佐剂增强HIV DNA疫苗细胞免疫应答的研究

目的 为了进一步增强HIV DNA疫苗的免疫反应,本研究将IL-17作为HIV DNA疫苗的分子佐剂免疫小鼠,旨在探讨IL-17对HIVDNA疫苗诱导体液和细胞免疫应答的影响.方法 将小鼠IL-17构建到真核表达载体,与HW-1膜蛋白DNA疫苗pGX-Env联合免疫BALB/c小鼠;分别在第0、2周进行免疫,在第4周检测T淋巴细胞增殖指数、抗-Env IgG、细胞因子表达水平和体内细胞毒性T淋巴细胞杀伤作用(CTL)等免疫学指标.结果 IL-17能够增强HIV DNA疫苗的特定免疫反应.与单注射疫苗组相比,IL-17作为佐剂组的T细胞增殖、抗体水平和CD4~+T细胞分泌IFN-γ、IL-4和IL-17的表达均无明显增强,但对CD8~+T细胞分泌IFN-γ的表达和体内CTL的效果影响明显(P<0.05).结论 IL-17作为分子佐剂不足以影响Th细胞分化,然而却能够增强特异性CD8~+T细胞中IFN-γ的表达,尤其是增强体内CTL反应.此结果为增强艾滋病DNA疫苗CD8~+T细胞活性和用于艾滋病的治疗提供了一个新的思路.     

白介素-12及白介素-23对胃癌组织中CD4^＋记忆T细胞的影响

目的:探讨胃癌组织中IL-12、IL-23对CD4+记忆T细胞(CD4+Tm)的影响.方法:ELISA检测TNM不同期胃癌组织匀浆中IL-12、IL-23含量;不连续密度梯度离心法分离胃癌组织中的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL),流式细胞仪检测TIL中CD4+ Tm及其亚群TEM和TCM在不同期胃癌组织中的分布状况.结果:TNM-Ⅰ、Ⅱ期胃癌组织中IL-12含量差别不明显,但均显著高于TNM-Ⅲ、TNM-Ⅳ期;TNM-Ⅰ期胃癌组织中IL-23的含量高于TNM-Ⅱ、TNM-Ⅲ、TNM-Ⅳ期.胃癌TIL中CD4+ Tm及TEM比例随TNM分期增加逐渐降低,而TCM比例逐渐升高.结论:胃癌组织中IL-12、IL-23含量的变化与胃癌TNM分期有关,且影响胃癌TIL中CD4+记忆T细胞及其亚群TCM和TEM的分布.     

Ovarian follicular concentration of IL-12, IL-15, IL-18 and p40 subunit of IL-12 and IL-23

BACKGROUND: The aim of the study was to determine the presence of interleukin (IL)-12, IL-15, IL-18 and p40 subunit of IL-12/IL-23 in follicular fluid from spontaneous cycles and the relation between the concentration of selected cytokines and IVF-embryo transfer outcome. METHODS: IVF-embryo transfer and enzyme immunoassay (EIA) (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA and MBL, Nagoya, Japan) were used. RESULTS: Follicular fluid of women included in the IVF-embryo transfer procedure contained common p40 subunit of IL-12/IL-23 (median 70.1 pg/ml), IL-15 (median 1.3 pg/ml) and IL-18 (median 38.2 pg/ml). There was a significant negative correlation between follicular fluid concentrations of IL-15 and IL-18 (R=-0.392, P=0.003). Significantly higher concentrations of common p40 subunit of IL-12/IL-23 (median 79.8 pg/ml) were found in the follicular fluid taken from follicles containing oocytes, when compared with those without an oocyte (median 44.5 pg/ml, P=0.006). Patients who achieved clinical pregnancy had significantly decreased concentration of IL-15 (median 0.8 pg/ml) compared with patients without successful IVF-embryo transfer outcome (median 1.4 pg/ml, P=0.047). CONCLUSION: Follicular fluid collected from spontaneous cycles contains detectable levels of p40 subunit of IL-12/IL-23, IL-15 and IL-18. Increased concentrations of p40 subunit of IL-12/IL-23 in follicles containing oocytes suggest an important role of this cytokine in reproduction. Possible negative value of IL-15 as a predictor of IVF-embryo transfer success remains to be determined.     

IL-12和IL-18在实验性自身免疫性神经炎中的协同作用机制

目的:研究IL-12和IL-18分别在实验性自身免疫性神经炎(EAN)中的调节机制以及IL-12与IL-18的协同作用.方法:建立P0180-199特异性T细胞系.分别用IL-12或IL-18或者IL-12和IL-18进行体外干预,将不同处理组的T细胞回输到正常的大鼠体内,建立过继免疫的EAN动物模型.应用国际分级标准和临床评分对发病鼠进行临床评定;通过免疫组化检测不同组EAN鼠坐骨神经淋巴细胞浸润;ELISA法检测相关细胞因子的变化.结果:①在IL-12和IL-18共同干预的条件下,特异性T细胞TNF-α和IFN-γ的产生均增加;②与IL-12或IL-18组相比,IL-12 IL-18组大鼠临床发病明显加重,发病时间提前;③在坐骨神经标本中,与对照组相比,IL-12 IL-18组CD4 淋巴细胞浸润数量较多,而IL-12和IL-18组CD4 淋巴细胞浸润较少.结论:经IL-12和IL-18体外干预的P0180-199特异性T淋巴细胞,通过过继免疫给正常大鼠后,诱导出严重的EAN动物模型,表现出协同增强作用.