牙周膜肌成纤维细胞的体外培养及其标志物的表达时效

目的：探讨人牙周膜肌成纤维细胞（MFB）体外培养及其标志物表达的时效性。方法???体外培养人牙周膜成纤维细胞（hPDLF）,72?h内以5μg?L-1终质量浓度的转化生长因子（TGF）-β1诱导hPDLF向MFB转化,免疫细胞化学和免疫组织化学染色检测MFB标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达情况。分别进行12、24、48、72、96和120?h的MFB观察,采用流式细胞术观察MFB长时间培养的细胞活性,采用免疫细胞化学观察MFB长时间培养后的α-SMA表达情况。结果??经TGF-β1诱导后α-SMA呈阳性;诱导至120?h,α-SMA仍呈阳性,72?h内其表达稳定。结论5μg?L-1终质量浓度的TGF-β1成功诱导人牙周膜细胞向MFB转化。MFB体外培养具有时效性,培养0~72?h,其状态稳定。     

碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜成纤维细胞整合素β1亚单位mRNA表达的影响

目的研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人牙周膜成纤维细胞整合素β1亚单位mRNA表达的影响,探讨bFGF在牙周组织再生中的意义。方法体外培养人牙周膜成纤维细胞,分别用质量浓度0.1、1.0、10.0 ng·mL-1的bFGF刺激细胞,培养24、48、72 h,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测牙周膜成纤维细胞内整合素β1亚单位mRNA表达的变化。结果bFGF可促进人牙周膜成纤维细胞内整合素β1亚单位mRNA的合成,在培养24、48、72 h时,1.0 ng·mL-1组整合素β1亚单位表达均明显高于对照组;培养72 h时各实验组整合素β1亚单位表达均明显高于培养24、48 h时。结论bFGF通过提高整合素β1亚单位mRNA的表达,促进牙周膜成纤维细胞的黏附,在牙周组织修复再生中起作用。     

白细胞介素-1β对人牙周膜成纤维细胞中MCP-1表达影响的研究

目的:探讨白细胞介素-1β(IL-1β)对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达水平的影响。方法:体外分离培养的人牙周膜成纤维细胞随机分为实验组和对照组,实验组细胞以不同浓度IL-1β(1、5、10、25 ng/mL)作用24 h;对照组细胞则不加IL-1β作用。分别采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测人牙周膜成纤维细胞中MCP-1 mRNA的表达;采用免疫荧光技术观察MCP-1的表达情况;采用Western blot方法检测其蛋白表达变化。结果:对照组hPDLFs中可见微弱的MCP-1表达;实验组hPDLFs经IL-1β刺激后,MCP-1在mRNA和蛋白水平表达都增强,这种调节作用在10 ng/mL IL-1β的作用浓度时最明显(P<0.05)。结论:在IL-1β介导环境下,hPDLFs中MCP-1的表达增高,而MCP-1表达增高可能是引起外周血单核细胞向局部炎症牙周组织募集的机制之一。     

Ⅰ型跨膜蛋白α亚型缺失突变体对人牙周膜成纤维细胞周期的影响

目的 研究内质网信号通路Ⅰ型跨膜蛋白α亚型（IRE1α）缺失突变体对人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）细胞周期的影响。方法 在成功构建人IRE1α基因全长重组质粒的基础上,采用重叠聚合酶链反应构建其两个主要功能域Kinase和Rnase的缺失突变体（pD-Kinase、pD-Rnase）;然后分别染入hPDLFs细胞,Western blot检测重组基因表达情况,流式细胞仪（FCM）检测转染后hPDLFs细胞的细胞周期变化。结果 酶切及测序结果证实构建的IRE1α缺失突变体重组质粒构建成功;Western blot分析结果显示,3种重组基因均能正确表达;FCM结果分析显示：与衣霉素（TM）组相比,IRE1α实验组hPDLFs细胞S期比例增加而G1期减少（P<0.05）;D-Rnase突变体组hPDLFs细胞S期比例减少而G1期增加（P<0.05）;D-Kinase突变体组对hPDLFS细胞的增殖和各周期分布影响则无显著差异（P>0.05）。结论 在内质网应激状态下,IRE1α可促进hPDLFs细胞从G1期进入S期,D-Rnase突变体导致hPDLFs细胞生长阻滞于G1期,而D-Kinase则对hPDLFS细胞周期分布无明显影响。     

体外培养碱性成纤维细胞因子对人牙周膜成纤维细胞生物学特性的影响

目的：探讨体外培养过程中,碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）生物学特性的影响。方法：体外分离培养人牙周膜成纤维细胞并鉴定,加入不同浓度bFGF（1ng／ml、10ng／ml、50ng／ml、100ng／ml）培养,MTT方法检测细胞增殖情况;并对细胞进行矿化诱导,检测细胞的碱性磷酸酶活性。结果：hPDLFs呈星形或长梭形,免疫组化波丝蛋白阳性,角蛋白阴性,证实该细胞来源可靠。bFGF在一定浓度范围内,与细胞增殖成正比,而在本实验培养条件下（10％FBS）bFGF最大效应浓度为10ng／ml。矿化诱导条件下,碱性磷酸酶活性明显增加,在联合应用bFGF的情况下,100ng／ml组碱性磷酸酶活性明显高于其他组。结论：不同浓度bFGF对人牙周膜成纤维细胞生物学行为的影响不同,在一定浓度条件下,低浓度bFGF促进人牙周膜成纤维细胞的增殖,而高浓度bFGF作用于人牙周膜成纤维细胞可能更易于分化。     

碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜成纤维细胞整合素β1亚单位mRNA表达的影响

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人牙周膜成纤维细胞整合素β1亚单位mRNA表达的影响,探讨bFGF在牙周组织再生中的意义.方法 体外培养人牙周膜成纤维细胞,分别用质量浓度0.1、1.0、10.0ng·mL-1的bFGF刺激细胞,培养24、48、72 h,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测牙周膜成纤维细胞内整合素β1亚单位mRNA表达的变化.结果 bFGF可促进入牙周膜成纤维细胞内整合素β1亚单位mRNA的合成,在培养24、48、72 h时,1.0 ng·mL-1组整合素β1亚单位表达均明显高于对照组;培养72 h时各实验组整合素β1亚单位表达均明显高于培养24、48 h时..结论 bFGF通过提高整合素β1亚单位mRNA的表达,促进牙周膜成纤维细胞的黏附,在牙周组织修复再生中起作用.     

沉默Foxp3对牙周膜成纤维细胞在炎症环境下炎症因子的表达及增殖和迁移的影响

目的 探究炎症环境下Foxp3基因对人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）炎症因子表达及细胞增殖、迁移的影响,探索Foxp3基因在牙周炎发生发展中的作用。方法 使用小干扰RNA (siRNA)沉默hPDLFs的Foxp3基因,通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫印迹（Western blotting）实验验证Foxp3沉默效率,筛选Foxp3基因沉默效果最佳的siRNA。使用牙龈卟啉单胞菌（P. gingivalis）来源脂多糖（LPS）模拟体外炎症环境,CCK-8检测炎症环境下沉默Foxp3对hPDLFs增殖的影响;划痕实验及transwell细胞迁移实验检测炎症环境下沉默Foxp3对hPDLFs迁移的影响;RT-PCR、Western blotting实验检测炎症环境下hPDLFs炎症因子白细胞介素（IL）-6、IL-8的表达。结果 siRNA转染后,RT-PCR、Western blotting检测显示,Foxp3-si3组Foxp3的mRNA和蛋白表达均显著降低（mRNA表达,t=21.03,P<0.000 1;蛋白表达,t=12.8,P<0.001）。在炎症环...     

静压力大小对人牙周膜成纤维细胞Ⅰ型胶原表达影响的研究

目的研究不同大小静压力对人牙周膜成纤维细胞Ⅰ型胶原表达的影响。方法采用第4代人牙周膜成纤维细胞（human periodontal ligament fibroblasts,HPDLFs）,对照组不加力,实验组用静压力加载装置分别施加15 kPa、30 kPa、45 kPa的持续性静压力,加力时间为1 h。加力后立即收集样本,用免疫细胞化学染色技术检测细胞内Ⅰ型胶原蛋白的表达情况,用彩色病理图像分析仪分析各组细胞的阳性表达。结果与对照组比较,15 kPa压力下,实验组Ⅰ型胶原蛋白表达显著增多（t=5.806,P〈0.05）;30 kPa压力下Ⅰ型胶原蛋白表达有所下降但仍高于对照组（t=4.933,P〈0.05）;45 kPa压力下Ⅰ型胶原蛋白表达较对照组明显减少（t=5.654,P〈0.05）。结论适当大小的静压力能促进人牙周膜成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达,但静压力过强则会抑制其表达。     

机械应力对人牙周膜成纤维细胞整合素β1mRNA表达的调节

目的观察机械力刺激对人牙周膜成纤维细胞整合素β1 mRNA表达的影响。方法用Forcel四点弯曲加载装置通过对体外培养的人牙周膜成纤维细胞分别施加不同动态张、压应力（强度为1 000、2 000、4 000 μstrain，加力时间为0、0.5、1、4、8、12 h），采用实时荧光定量PCR法研究机械力对人牙周膜成纤维细胞整合素β1 mRNA表达的影响。结果施加动态的张、压应力后，人牙周膜成纤维细胞整合素β1 mRNA表达量下调，这种下调变化与所施加应力的性质、大小和作用持续时间相关。人牙周膜成纤维细胞整合素β1对张、压应力刺激的感应不完全一致，机械力刺激越强，整合素β1表达越明显。结论动态张、压应力刺激在本实验提供的微应力范围内可以促进目的基因mRNA表达改变，不同的机械力对细胞整合素β1效应不同。     

槟榔碱对人牙周膜成纤维细胞凋亡的影响

目的 研究槟榔碱(Arecoline)对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibro-blast,hPDLFs)中凋亡及相关蛋白p-JNK、p-p53、Bcl-2表达的影响.方法 采用组织块培养法培养原代hPDLFs,并传代纯化后用于实验.采用浓度为0μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL的槟榔碱处理牙周膜成纤维细胞12 h,通过MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白免疫印记法检测槟榔碱对hPDLFs中p-JNK、p-p53、Bcl-2表达的情况.结果 槟榔碱作用于hPDLFs后,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡率随着药物浓度增加而增加,p-JNK、p-p53蛋白表达逐渐增强,Bcl-2蛋白表达逐渐降低,呈现浓度依赖性.结论 提示槟榔碱可通过激活JNK和p53的磷酸化水平导致hPDLFs的凋亡,对牙周组织的再生有抑制作用.     

正畸应力作用下牙龈肌成纤维细胞表达的初步研究

目的 初步探讨正畸应力加载后牙龈肌成纤维细胞的表达情况。方法 选取8例正畸应力加载后需要拔除牙牙龈组织,以应力加载前拔除牙牙龈组织为对照,进行α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原免疫组织化学染色。然后进行测量和统计分析。结果 正畸应力加载前牙龈组织内Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原免疫组化染色阳性,α-SMA除血管上皮外,其余为阴性表达。正畸应力加载后,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达明显上升,差异有统计学意义（P<0.05）;α-SMA在牙龈组织内出现阳性表达,与加力前差异有统计学意义（P<0.05）。结论 正畸应力加载后,牙龈组织内肌成纤维细胞出现表达,其可能在正畸牙术后复发中发挥一定作用。     

正畸应力作用下牙龈肌成纤维细胞表达的初步研究

目的 初步探讨正畸应力加载后牙龈肌成纤维细胞的表达情况。方法 选取8例正畸应力加载后需要拔除牙牙龈组织,以应力加载前拔除牙牙龈组织为对照,进行α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原免疫组织化学染色。然后进行测量和统计分析。结果 正畸应力加载前牙龈组织内Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原免疫组化染色阳性,α-SMA除血管上皮外,其余为阴性表达。正畸应力加载后,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达明显上升,差异有统计学意义（P<0.05）;α-SMA在牙龈组织内出现阳性表达,与加力前差异有统计学意义（P<0.05）。结论 正畸应力加载后,牙龈组织内肌成纤维细胞出现表达,其可能在正畸牙术后复发中发挥一定作用。     

糖基化终产物对人牙周膜细胞增殖和NF-κB mRNA表达的影响

目的:研究比较在体外高糖、糖基化终产物(advanced glycation end of products,AGEs)刺激环境下对人牙周膜细胞(hPDLFs)增殖能力和NF-κB mRNA表达的影响。方法:选取因正畸治疗而拔除的前磨牙体外分离培养人牙周膜细胞,根据不同的刺激环境分为阴性对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(25 mmol/L葡萄糖)、AGEs组(100μg/mL AGEs)3组。培养12、24、36 h,3个时间点,使用Real Time PCR检测各组NF-κBmRNA的表达差异情况;流式细胞仪检测培养hPDLFs 36 h时细胞增殖差异情况。结果:在培养12、24、36 h,高糖组和AGEs组NF-κB mRNA的表达均高于阴性对照组(P<0.05),其中AGEs组最高,与高糖组相比,24、36 h时均有统计学差异(P<0.05);培养36 h AGEs组hPDLFs增殖能力明显低于阴性对照组和高糖组(P<0.05);高糖组与阴性对照组相比无统计学差异(P>0.05)。结论:AGEs能够显著的抑制hPDLFs增殖,并上调NF-κB的表达呈时间依赖性。     

机械压应力条件下人牙周膜成纤维细胞炎症因子表达变化初探

目的 探讨在一定机械压应力条件下人牙周膜成纤维细胞常见炎症相关细胞因子的表达谱变化,初步明确机械压应力对牙周膜成纤维细胞炎症相关细胞因子表达的影响.方法 取健康恒前磨牙牙根中1/3牙周膜组织,采用组织块法培养人牙周膜成纤维细胞,分为加压组(200 Pa持续加压)与未加压组培养24 h后,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及实时定量PCR法检测白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、肿瘤坏死因子(TNF)-α、TNF-β、干扰素(interferon,IFN)-γ的mRNA表达量并与管家基因磷酸甘油醛脱氢酶进行对比.加压组与未加压组培养48 h后通过微球流式多因子方法检测上述细胞因子蛋白水平的表达量.结果 加压组人牙周膜成纤维细胞培养24 h后细胞中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、TNF-β及IFN-γ mRNA相对表达量(分别为0.3633±0.0874、0.4200±0.0285、0.1697±0.0284、0.0983±0.0131、0.2840±0.0676及3.1067±0.2857)显著高于未加压组(分别为0.1173±0.0176、0.1691±0.0174、0.0117±0.0021、0.0243±0.0050、0.0000±0.0000及0.1433±0.0125),P＜0.05;加压组人牙周膜成纤维细胞培养48 h后细胞培养上清液中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、TNF-β及IFN-γ的蛋白表达量[分别为(18.21±1.01)、(1634.11±472.41)、(1461.47±50.53)、(20.71±2.52)、(884.11±118.86)以及(1461.47±333.37)ng/L也显著高于未加压组[分别为(5.32±4.97)、(373.56±155.92)、(679.11±141.42)、(4.32±0.73)、(3.56±0.92)及(204.11±35.36)ng/L],P＜0.05;IL-2、IL-4、IL-5、IL-10及IL-12的mRNA相对表达量及蛋白表达在两组中差异无统计学意义(P＞0.05).结论 人牙周膜成纤维细胞在持续机械压应力作用下可显著上调IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、TNF-β、IFN-γ等炎症相关细胞因子mRNA及蛋白水平的表达,从而进一步影响局部牙周组织微环境.

Abstract：

Objective To investigate the changes of inflammation-related cytokine expression profiles in human periodontal ligament fibroblasts (hPDLF) under mechanical stress. Methods The periodontal ligament attached to the mid-third part of the fresh root of young premolars extracted for orthodontic treatment was scalped and removed hPDLFs were cultured by the method of digesting by Ⅰ -type collagenase combined with tissue adhering, and then isolated and purified by cells passages. hPDLFs were then divided into two groups, group with mechanical force and group without mechanical force and then cultured for 24 h. Employing cytokine-microarray analysis to assess, in a comprehensive manner compared to the hPDLFs culture system without a static force. The quantity of different cytokine-related genes in hPDLFs was analyzed by means of quantitative with the special primers of up-and down-regulated genes. The mRNA of inflammation-related cytokines was examined by real-time PCR, and the expression of the cytokines in hPDLFs detected by cytokine flowcytomix assay. Results The relative expression of interleukin (IL)-1β,IL-6, IL-8, tumor necrosis factor(TNF)-α, TNF-β and interferon(IFN)-γ mRNA in the hPDLFs with 24 h persistent-pressure (0. 3633 ± 0. 0874, 0. 4200 ± 0. 0285, 0. 1697 ± 0. 0284, 0. 0983 ± 0. 0131, 0. 2840 ±0. 0676 and 3. 1067 ±0. 2857) was significantly higher than the group without mechanical force(0. 1173 ±0.0176, 0. 1691 ± 0.0174, 0.0117 :± 0.0021, 0.0243 ± 0.0050, 0.0000 ± 0.0000 and 0.1433 ±0. 0125) ,P ＜0. 05. The cell culture supernatant cytokines expression of IL-1 β, IL-6, IL-8, TNF-α, TNF-βand IFN-γ after 48 h cultured [(18.21 ± 1.01), (1634. 11 ± 472. 41), (1461.47 ± 50. 53), (20. 71 ±2. 52), (884. 11 ± 118. 86) and (1461.47 ± 333.37) ng/L]was significantly higher than the group without mechanical force [(5. 32 ± 4. 97), (373.56 ± 155.92), (679. 11 ± 141.42), (4. 32 ± 0. 73), (3.56 ±0.92)and(204. 11 ±35.36) ng/L],P ＜0.05. The relative mRNA and protein expression of IL-2, IL-4,IL-5, IL-10 and IL-12 showed no significant difference between the both groups. Conclusions Persistent static mechanical force could regulate the expression of some inflammation-related cytokines. These upregulated cytokines may be invloved in remodeling of hPDLFs, bone resorption and periodontal microenvironment.     

肥胖伴牙周感染小鼠体内B-1a细胞的表达初探

目的:分析肥胖伴牙周感染小鼠体内B-1a细胞的表达变化.方法:建立饮食诱导型肥胖伴实验性牙周感染的小鼠模型,通过免疫组化和蛋白质印迹的方法检测小鼠颌骨和脾脏中CD5、抗Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)抗体、IL-10的蛋白表达量;实时定量PCR检测小鼠颌骨中CD5、抗Col-Ⅰ抗体、IL-10 的mRNA表达量.结果:牙周炎组颌骨中的CD5、IL-10、抗Col-Ⅰ抗体的蛋白和mRNA表达量均显著高于对照组(P<0.001);肥胖组脾脏中的CD5、IL-10、抗Col-Ⅰ抗体的蛋白表达量显著高于标准组(P<0.05);标准伴牙周真性结扎组脾脏中抗Col-Ⅰ抗体的表达量显著高于标准伴牙周假性结扎组(P<0.05).结论:B-1a细胞在肥胖与牙周炎的炎症早期被激活并存在一定的病理意义,这两种炎症状态并没有在病理机制上出现交叉影响.     

微丝对牵张应变诱导的人牙周膜成纤维细胞中环氧合酶-2表达的影响

目的 探讨微丝的聚合在人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）正畸力信号传导中的作用。方法 将培养的hPDLFs接种于膜式细胞牵张应变施加装置上,随机分为对照组、单纯加力组、加力+细胞松弛素组。对照组牵张应变量为0;单纯加力组和加力+细胞松弛素组设定细胞静态牵张应变量为18%,加载时间分别为8 h、16 h和24 h。加力+细胞松弛素组在施加牵张应变量前加入5 μg/mL的细胞松弛素B来破坏微丝的聚集作用。用免疫组织化学法检测细胞中环氧合酶-2（COX-2）的表达,测定灰度值并进行统计学处理。结果 单纯加力组在18%牵张应变量作用下,COX-2表达随着加载时间的增加而增强;加力+细胞松弛素组在18%牵张应变量作用下,COX-2的表达明显降低,且各加载时间组间表达无差别。结论 微丝的聚合介导了hPDLFs中正畸力信号传导,破坏微丝的聚合作用将阻碍力学信号的传导,从而降低COX-2的表达。     

人牙周膜成纤维细胞来源外泌体对大鼠延期牙再植术后牙根吸收的调控作用

目的: 探讨健康的人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）来源外泌体对大鼠延期牙再植术后牙根吸收的作用及其可能机制。方法: 分离提取hPDLFs来源的外泌体并鉴定。选择30只6周龄雄性SD大鼠,随机分为对照组和外泌体组,建立上颌第一磨牙延期牙再植术模型,牙脱位30 min后植回牙槽窝。对照组牙周膜局部注射40 μL汉克斯平衡盐溶液（HBSS）,实验组牙周膜局部注射40 μL含外泌体的HBSS。术后1、2、4周收样,苏木精-伊红（H-E）染色观察牙根表面吸收陷窝,抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色观察破骨细胞数量,免疫组织化学染色观察牙周膜内骨保护素（OPG）的表达。采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学处理。结果: 鉴定表明提取的细胞外囊泡为外泌体。与对照组相比,hPDLFs来源的外泌体减少了延期牙再植术后牙根吸收陷窝的数量,降低TRAP阳性破骨细胞的表达（P<0.05）,促进牙周膜内OPG的表达（P<0.05）。结论: 延期牙再植术后,hPDLFs来源的外泌体减少了破骨细胞的数量,促进牙周膜内OPG表达,减少了再植术后的牙根吸收。     

釉基质衍生物对脂多糖作用下牙周膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的研究釉基质衍生物（enamel matrix derivatives,EMD）对牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,Pg-LPS）作用下的人牙周膜成纤维细胞（human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs）增殖和凋亡的影响。方法从正畸治疗需拔除的前磨牙中,分离培养人hPDLFs,传至第4代;实验组培养液中分别加入100μ/mLEMD、10μg／,mL Pg-LPS或者100μ/mL EMD＋10 μg／mL Pg-LPS,对照组不加入刺激物;以四甲基偶氮唑盐[3-（4,5-dimethy1-2-thiazolyl）-2,5-diphenyl．2H-tetrazoliumbromide,MTT]法检测hPDLFs的增殖,采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法分析细胞凋亡。结果原代hPDLFs生长良好,加入刺激后第3天时,第4代hPDLFs的Mrrr值由高至低分别是：EMD组、对照组、EMD＋LPS组、LPS组。刺激48h后,LPS组凋亡率（12．10％±2．80％）大于EMD＋LPS组（8．07％±2．04％）、EMD组（3．68％±1．73％）和对照组（3．87％±1．27％）（P〈0．05）。结论EMD能减弱Pg-LPS对hPDLFs增殖的影响,并且降低Pg-LPS所导致的hPDLFs凋亡,可能是其促进牙周组织再生的重要机制。     

白细胞介素22对人牙周膜成纤维细胞核因子κB受体活化因子配体、骨保护素表达的影响

目的探讨白细胞介素22（IL-22）对人牙周膜成纤维细胞（hPDLF）表达核因子κB受体活化因子配体（RANKL）、骨保护素（OPG）的影响;并进一步研究IL-22是否与牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Pg-LPS）具有协同刺激作用。 方法酶消化法结合组织块法原代培养hPDLF,免疫细胞化学染色法鉴定其来源;取第3~ 5代细胞给予不同浓度（0、5、10、25、50、100 ng/mL）IL-22刺激,培养24、48、72 h采用细胞计数试剂盒（CCK-8）进行细胞毒性实验;采用5、10、25 ng/mL IL-22作用于hPDLF 72 h,实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测RANKL、OPG mRNA的表达;随后选择最佳刺激浓度10 ng/mL IL-22,与1 μg/mL Pg-LPS分别或协同刺激hPDLF 72 h,实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测RANKL、OPG mRNA和蛋白水平的表达。采用单因素方差分析对数据进行统计分析。 结果50、100 ng/mL IL-22刺激hPDLF后,细胞活力明显下降（F_{24 h}= 15.17,F_{48 h}= 76.37,F_{72 h}= 24.409,P<0.05）;5、10、25 ng/mL IL-22均可上调hPDLF RANKL mRNA表达（F= 32.88,P<0.05）,但是对OPG mRNA表达无明显影响（F= 0.719,P= 0.555）;10 ng/mL组和25 ng/mL组上调RANKL mRNA表达较5 ng/mL组显著（P<0.05）;1 μg/mL Pg-LPS亦可显著上调hPDLF RANKL mRNA和蛋白水平的表达;而10 ng/mL IL-22与1 μg/mL Pg-LPS协同作用下RANKL mRNA和蛋白表达可进一步显著上调（F_mRNA= 36.67,F_蛋白= 41.24,P<0.05）,但是对OPG的表达无明显影响（F_mRNA= 0.652,P= 0.593;F_蛋白= 1.271,P= 0.313）。 结论IL-22可通过影响hPDLF表达RANKL/OPG参与牙周炎骨破坏,并且与Pg-LPS具有协同作用。