抗菌治疗对兔颊VX-2鳞癌感染性微环境中树突状细胞的影响

目的:探索抗菌治疗对兔颊VX-2鳞癌感染性微环境中树突状细胞(dendritic cells,DCs)成熟及功能的影响.方法:瘤粒植入形成兔颊VX-2鳞癌后,附加机械创伤及高糖饮食获得该鳞癌的炎症模型,再分为3组(n=6),A组:颊癌炎症模型使用抗生素治疗3d;B组:颊癌炎症模型以生理盐水代替抗生素对照;C组:单纯颊癌不做处理.3d后收集各组肿瘤标本,制成匀浆,取上清液与正常兔外周血单核细胞共培养,流式细胞仪检测DCs表面分子HLA-DR、CD83、CD86的表达,混合淋巴细胞反应检测DCs刺激T细胞增殖的能力.结果:HLA-DR、CD83、CD86阳性率及刺激指数(stimulate index,SI)由高到低均分别为:C组＞A组＞B组(P＜0.05).结论:抗菌治疗有助于感染兔颊VX-2鳞癌微环境中树突状细胞的成熟及功能恢复.     

阿司匹林对兔颊VX-2鳞状细胞癌炎症微环境中树突细胞的影响

目的探索阿司匹林及炎症对兔颊VX-2鳞状细胞癌上清液中树突细胞（DC）成熟及功能的影响。方法通过瘤粒植入术及机械创伤+高糖饮食的方法,建立兔颊VX-2鳞状细胞癌及其炎症模型,将模型兔分为3组。实验组：制造颊癌及炎症后使用阿司匹林灌胃治疗3 d;对照组：制造颊癌及炎症后以生理盐水灌胃作为对照;空白组：不制造炎症的单纯肿瘤兔组。3 d后收集各组肿瘤标本,制成匀浆,取上清液与正常兔外周血单核细胞共培养以使其向DC分化,采用流式细胞仪检测DC表面分子CD83、CD86、人类白细胞DR抗原（HLA-DR）的表达,混合淋巴细胞反应检测DC刺激T细胞增殖的能力。结果实验组和对照组中CD83、CD86、HLA-DR阳性率均低于空白组（P<0.05）,而实验组和对照组间的差异无统计学意义（P>0.05）;同样,实验组和对照组刺激T细胞增殖的能力弱于空白组（P<0.05）,而两组间刺激T细胞增殖的能力无明显差异（P>0.05）。结论炎症可抑制DC表面分子CD83、CD86、HLA-DR的表达和功能发挥,短期、小剂量服用阿司匹林对兔颊VX-2鳞状细胞癌炎症微环境中DC的表型改善和功能发挥无明显作用。     

口腔颊粘膜癌组织中CD1a~＋的树突状细胞的免疫组化分析

目的通过免疫组化技术分析树突状细胞（dendritic cell,DC）在口腔颊粘膜鳞状细胞癌（oralsquamous cell carcinoma,OSCC）中的表达,探讨其在肿瘤组织中的功能状态。方法随机选取22例临床收集的未经任何其他非手术治疗的颊粘膜OSCC患者标本,以10例正常口腔粘膜（normal mucosa,NM）和10例口腔非特异性炎症上皮（inflammatory mucosa,IM）为对照,采用CD1a单抗通过免疫组化技术标记上皮组织中的DCs,结果进行统计学分析。结果 NM组中有3例未见CD1a＋DC表达,OSCC组及IM组中各有1例未见CD1a＋DC表达,OSCC组与NM组、OSCC组与IM组之间CD1a＋DC的计数均有显著性差异（P〈0.05）;肿瘤不同病理分级中,癌旁组织（ESCC）中CD1a＋DC的数量在OSCCⅠ级与Ⅱ级间有显著性差异（P〈0.05）;ESCC中CD1a＋DC在有或无淋巴结转移中的差别有显著意义（P〈0.05）。结论 ESCC中CD1a＋DC与肿瘤分级呈显著负相关,与颊癌的预后相关。     

口腔癌患者外周血树突状细胞的体外培养及表型分析

目的：研究口腔癌患者外周血单核细胞来源的树突状细胞（dendritic cell，DC）形态、表型，与正常人进行比较并分析其临床意义。方法：15例口腔癌患者（实验组）及正常人（对照组）外周血单核细胞经GMCSF，IL4及TNF-α诱导培养，获取成熟树突状细胞，光镜和电镜观察细胞形态，流式细胞仪检测细胞表型CD1a、CD83、CD80、CD86和HLA-DR的表达变化。结果：培养7d后，2组均诱导出典型形态和表型的树突状细胞，实验组CD83、CD1a的表达率较对照组低，差异有统计学意义（均P〈0．001），但CD86、CD80、HLADR表达率2组差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论：口腔鳞癌患者外周血单核细胞来源的DC经细胞因子诱导培养，能扩增出较大量高纯度并保持功能活性的成熟DC，为进一步开展以DC为基础的生物治疗和研究打下了基础。     

兔VX-2舌鳞癌移植瘤模型的建立及生物学特性观察

目的：建立可供实验研究的稳定的兔VX2舌鳞癌移植瘤模型,观察其主要生物学特性。方法：制备VX2肿瘤荷瘤种兔后,将荷瘤种兔新鲜鳞癌组织块移植于24只新西兰大白兔的舌侧缘中1/3黏膜下,制成兔VX2舌鳞癌移植瘤模型。荷瘤动物随机分为2组,第1组（n=6）不同时期分批处死,进行大体观察、组织病理及电镜检查;第2组（n=14）作为对照组,观察荷瘤动物的自然生存期。结果：成瘤率为83.3%（20/24）;移植瘤的组织学特征与移植于兔其他部位的VX2肿瘤基本一致,在舌体内浸润性生长并向周围侵袭、扩散,符合中分化鳞状细胞癌的特征。结论：成功建立了兔VX2舌鳞癌移植瘤模型。该模型成瘤率高,潜伏期短,生长迅速,生物学特性稳定,易于复制,接近人舌鳞癌的临床特征,较客观地反映了舌癌的生物学行为,为舌鳞癌的研究提供了较理想的大型动物模型。     

口腔鳞癌中树突状细胞的免疫组化分析

目的　通过分析口腔鳞癌中浸润性树突状细胞的特征性表型,以探讨其在肿瘤微环境中的功能状态。方法　选择未经任何非手术治疗的初发口腔鳞癌患者标本34例作为实验组,30例口腔正常粘膜组织作为对照组。通过免疫组化技术标记组织中树突状细胞(DC)的CD1a,HLA-DR和CD83抗原,观察两种组织中的DC表达3种抗原的状况,结果进行统计学分析。结果　所有病例均未见明显CD83+DC,但均有CD1a+DC,其在口腔鳞癌组织中的浸润程度低于正常口腔粘膜组织,差异有显著性(P<0·05)。在口腔鳞癌组中有27例癌实质内的DC表达HLA- DR抗原,其HLA-DR的阳性表达率为79·41%。结论　口腔鳞癌组织中的DC,其浸润程度下降并存在功能成熟障碍。     

Fas抗原在颊粘膜鳞癌中的表达及意义

为探讨Ｆａｓ抗原在颊粘膜鳞癌中的表达分布特点及其相关生物学意义,采用免疫组织化学方法,分别对５例正常颊粘膜、３４例颊粘膜鳞癌进行染色,观察Ｆａｓ抗原表达分布情况。结果发现,颊粘膜上皮生发层中Ｆａｓ抗原间断性弱表达,其它层细胞广泛表达;Ｆａｓ抗原表达与颊炽膜鳞癌的分化程度有关（Ｐ＜０．０１）,高分化颊癌中,Ｆａｓ抗原连续强阳性表达于癌细胞膜,低分化颊癌则呈间断性表达。由此提示,Ｆａｓ抗原不仅与颊粘膜上皮细胞的自然分化成熟衰老有关,而且还可能在颊粘膜鳞癌发生发展过程中参与分化与去分化的调节。     

颊粘膜上皮癌前和癌变中细胞凋亡的分析

应用原位末端标记（ＩＳＥＬ）方法检测口腔颊部粘膜在正常、炎症、异常增生及鳞癌状态下的细胞凋亡情况。结果表明：细胞凋亡在正常和炎症上皮中处于一种较稳定和低的程度。异常增生中的凋亡细胞数量最多,其次为鳞癌,二者的细胞凋亡较正常和炎症组明显增多。结果表明雕亡在颊粘膜癌前病变和癌变中发挥着重要作用,与颊癌的发生发展密切相关。     

程序性死亡分子1及其配体在口腔鳞状细胞癌患者外周血中的表达及临床意义

目的 检测口腔鳞状细胞癌患者外周血中程序性死亡分子1（PD-1）及其配体（PD-L1）的表达水平,探讨其生物学及临床意义。方法 选取82例口腔鳞状细胞癌患者（口腔鳞癌组）和25例健康对照者（对照组）为研究对象,收集研究对象的外周血,采用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞表面PD-1、PD-L1的表达及T淋巴细胞亚群计数,采用酶联免疫吸附方法检测血清中可溶性PD-1（sPD-1）和可溶性PD-L1（sPD-L1）的表达水平。采用SPSS 17.0软件对数据进行检验和相关性分析。结果 口腔鳞癌组外周血CD8+ T淋巴细胞百分数明显高于对照组（P<0.05）,而CD3+、CD4+T淋巴细胞百分数及CD4+/CD8+T亚群百分数比值均低于对照组（P<0.05）。口腔鳞癌组外周血CD4+、CD8+ T淋巴细胞表面PD-1、PD-L1的阳性表达率均高于对照组（P<0.01）。口腔鳞癌组血清sPD-L1水平高于对照组（P<0.05）,而sPD-1水平二者差异无统计学意义（P>0.05）。sPD-L1的表达与临床分期、肿瘤分化程度及淋巴结转移状态相关（P<0.05）,与性别、年龄、肿瘤部位及大小无关。结论 口腔鳞状细胞癌患者外周血T淋巴细胞亚群存在不同程度的免疫功能抑制,CD4+和CD8+ T淋巴细胞表面PD-1及PD-L1表达显著升高。异常升高的sPD-L1可能与口腔鳞状细胞癌的发生发展有关。     

TLRs与NLRs协同促进树突状细胞的成熟

目的:研究TLRs与NLRs协同促进树突状细胞成熟的效应。方法:TLRs的配体与NLRs的配体刺激小鼠DC2.4细胞24 h后用流式细胞仪检测细胞表面标记CD40、CD83、CD86、CD80与MHC-Ⅱ分子的表达。结果:单一TLRs或NLRs的配体可促进DCs表面标记分子表达的升高,并且2种配体的同时刺激可使以上标记分子的表达高于单一配体刺激。结论:TLRs与NLRs可协同促进DCs的成熟。     

Avastin联合抗原致敏的DC-CTL细胞体外抑制口腔鳞癌细胞生长的实验研究

目的:研究贝伐单抗(Bevacizumab,Avastin)与口腔鳞癌抗原致敏的树突状细胞(Dendritic Cell,DC)诱导的细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic t Lymphocyte,CTL)联合应用,体外研究其对口腔鳞癌细胞生长的抑制作用。方法:CAL27、SCC4肿瘤细胞系的培养,检测VEGF分泌水平;培养人外周血单核细胞来源的树突状细胞(DC);冻融法制备SCC4口腔鳞癌细胞可溶性抗原并致敏DC,检测DC表面标志物变化,刺激同种异体T细胞增殖的能力及IL-12分泌水平;将同源人T淋巴细胞与之共同培养诱导出抗原特异性的CTL细胞,Avastin联合CTL对SCC4细胞进行体外杀伤实验。结果:SCC4较CAL27分泌更高水平的VEGF;经肿瘤抗原致敏后的DC,其表面标志CD83、CD80、CD86、CD40及功能相关分子IL-12表达上调,CD1a的表达下调,可显著刺激异体T淋巴细胞增殖,具有统计学差异;Avastin联合CTL对SCC4的杀伤率达56.1%,显著高于对照组(P<0.05)。结论:Avastin联合DC致敏的CTL能显著抑制口腔癌细胞的生长。     

CyclinD1和P73在口腔粘膜鳞状细胞癌化疗前后的表达及临床意义

目的研究CyclinD1和P73在口腔粘膜鳞状细胞癌中应用奥铂联合替加氟化疗前后的表达及临床意义。方法选取30例口腔粘膜鳞状细胞癌患者的癌组织为实验组,10例口腔粘膜良性肿瘤患者的正常黏膜为对照组。将癌组织和正常粘膜组织分为三组,即A组(化疗前)、B组(化疗后)和C组(正常粘膜)。应用免疫组织化学SP法和流式细胞术,检测CyclinD1和P73在各组中的表达。结果①免疫组化:CyclinD1在化疗前口腔粘膜鳞状细胞癌中阳性率为91.29±3.10%,化疗后为71.78±4.46%,正常黏膜组织阳性率为51.32±2.29%;P73在化疗前口腔粘膜鳞状细胞癌中阳性率为88.97±4.2%,化疗后为72.14±11.6%,正常黏膜组织阳性率为53.49±5.01%。②流式细胞术:CyclinD1在化疗前口腔粘膜鳞状细胞癌中的表达为1.89±0.10,化疗后为1.35±0.15,正常口腔粘膜细胞为1.0±0.04。各组之间比较有显著性差异(P<0.01)。P73在化疗前为1.75±0.18,化疗后为1.29±0.15,正常粘膜细胞为0.99±0.04。各组之间比较有显著性差异(P<0.01)。结论 CyclinD1和P73可能是口腔黏膜癌变的早期事件,可作为癌变监测和临床疗效观察的辅助指标。     

化疗前后Caspase-3和P73在颊粘膜鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的研究Caspase-3和P73在颊粘膜鳞状细胞癌中应用奥铂联合替加氟化疗前后的表达及临床意义。方法选取30例颊粘膜鳞状细胞癌患者的癌组织为实验组,10例颊粘膜良性肿瘤患者的正常黏膜为对照组。将癌组织和正常粘膜组织分为三组,即A组(化疗前)、B组(化疗后)和C组(正常粘膜)。应用免疫组织化学SP法和流式细胞术,检测Caspase-3和P73在各组中的表达。结果①免疫组化:Caspase-3在化疗前颊粘膜鳞状细胞癌中阳性率为69.65±2.75%,化疗后为83.96±3.37%,正常黏膜组织阳性率为98.53±1.08%;P73在化疗前颊粘膜鳞状细胞癌中阳性率为89.57±4.0%,化疗后为71.19±12.3%,正常黏膜组织阳性率为54.85±4.43%。②流式细胞术:Caspase-3在化疗前颊粘膜鳞状细胞癌中的表达为0.715±0.063,化疗后为0.880±0.038,正常口腔粘膜细胞为1.000±0.091。各组之间比较有显著性差异(P<0.05)。P73在化疗前为1.310±0.065,化疗后为1.134±0.037,正常粘膜细胞为1.000±0.091。各组之间比较有显著性差异(P<0.05)。结论 Caspase-3和P73可能是颊黏膜癌变的早期事件,可作为癌变监测和临床疗效观察的辅助指标。     

Expression of adhesion and activation molecules in human buccal epithelial cell lines and normal human buccal epithelium in situ

An in vitro culture system may be used to analyse interactions between T cells and epithelium. We have analysed two human buccal squamous epithelial cell lines: SqCC/Y1, derived from a buccal carcinoma, and SVpgC2a, an SV-transformed healthy buccal squamous epithelium. Under serum-free culture conditions, the cell lines resemble normal buccal squamous epithelium in situ in their expression of MHC class I, CD29 (beta1 integrin), CD40, CD44, CD54 (ICAM-1), CD58 (LFA-3), CD95 (Fas), and E-cadherin. Furthermore, when the SVpgC2a cell line was treated with T-cell derived cytokines, upregulation of CD40 expression was observed when the cells were treated with IL-4, whereas IFN-gamma caused upregulation in expression of CD40, CD54 and MHC class II. These buccal squamous epithelial cell lines, therefore, provide a good tool for analysing interactions between epithelium and T cells in vitro.     

Cytomorphometric analysis of squames obtained from normal oral mucosa and lesions of oral leukoplakia and squamous cell carcinoma

Ramaesh T, Mendis BRRN, Ratnatunga N, Thattil RQ: Cytomorphometric analysis of squames obtained from normal oral mucosa and lesions of oral leukoplakia and squamous cell carcinoma. J Oral Pathol Med 1998; 27: 83–6. © Munksgaard, 1998.
Cell and nuclear diameters (CD and ND) were measured in squames obtained from normal buccal mucosa and lesions of oral leukoplakia and squamous carcinoma (SCC) also from buccal mucosa. The study groups consisted of Group 1: normal buccal mucosa ( n = 40); Group 2: lesions with no epithelial dysplasia ( n = 58); Group 3: lesions with epithelial dysplasia ( n = 27); and Group 4: SCC lesions ( n = 51). The mean CD and ND values were: Group 1: 51.78 (± 0.11) and 8.36 (± 0.49); Group 2: 45.73 (± 0.16) and 8.31(± 0.68); Group 3: 41.32 (± 0.13) and 9.04 (± 0.46); Group 4: 38.58 (± 0.11) and 10.10 (± 0.56) urn, respectively. Correlation between the ND and CD was positive for Group 1 ( r = 0.78, P < 0.05) and Group 2 ( r = 0.33, P < 0.05). There were no significant correlations in Groups 3 and 4. ANOVA showed significant differences ( P < 0.05) for CD between all four groups. Except between Groups 1 and 2, the ND was significantly different ( P < 0.05) between all groups. The results indicate that ND and CD could possibly be sensitive parameters in the diagnosis of oral premalignant and malignant lesions.