癌宁诱导入胃腺癌细胞SGC-7901凋亡的形态学变化及末端标记

目的:探索癌宁对人胃癌细胞的诱导凋亡作用。方法:采用体外细胞培养技术,通过形态学、分子生物学方法,对中药复方癌宁和顺铂诱导胃癌细胞凋亡进行了深入研究。结果:经癌宁及顺铂处理后的细胞出现凋亡形态学改变;癌宁在1 g/L浓度对细胞的凋亡诱导率是46.36％,与25 mg/L顺铂对细胞的凋亡诱导率49.12％间无显著差异(P>0.05),两者均与空白对照组有显著差异(P<0.01)。结论:癌宁及顺铂对人胃癌细胞具有诱导凋亡作用,中药复方癌宁可望成为一种有前途的新的癌细胞凋亡诱导剂。     

双苓扶正抗癌制剂对SGC-7901细胞凋亡及其相关基因表达的影响

目的:研究双苓扶正抗癌制剂对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其凋亡相关基因表达的影响。方法:应用体外培养方法和流式细胞技术,检测双苓扶正抗癌制剂对人胃癌SGC-7901细胞的细胞凋亡率及其凋亡相关基因bax、bcl-2的阳性蛋白标记率。结果:双苓扶正抗癌制剂80~320μg/ml可诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡,同时可促进凋亡诱导基因bax和下调凋亡抑制基因bcl-2的表达。结论:双苓扶正抗癌制剂的抗肿瘤作用机制之一可能与其影响bax基因及bcl-2基因的表达而诱导癌细胞凋亡有关。     

癌宁对人胃腺癌细胞SGC-7901形态学的改变及蛋白合成的抑制

目的:探索癌宁对人胃癌细胞的抑制作用。方法:采用形态学、MTT法,对中药复方癌宁和顺铂抑制胃癌细胞的增殖进行深入研究。结果:经癌宁及顺铂处理后的细胞出现凋亡形态学改变;癌宁在1g/L浓度对胃癌细胞的抑制率是51％,与25mg/L顺铂对胃癌细胞的抑制率53％间无显著差异(P>0.05),两者均与空白对照组有显著差异(P<0.01)。结论:癌宁及顺铂对人胃癌细胞的增殖活性具有抑制作用,中药复方癌宁可望成为一种有前途的抗癌新药。     

丹参酮Ⅰ对人胃癌MGC-803细胞抗肿瘤作用机理研究

目的:利用实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术来研究丹参酮Ⅰ对人胃癌MGC-803细胞中cmcy、p53、bcl-2、bax基因表达的影响,初步阐明丹参酮Ⅰ抑制胃癌细胞生长的作用机理。方法:将人胃癌细胞MGC-803接种于6孔板中培养24h,利用试剂盒提取细胞总RNA,通过逆转录方式获得稳定的DNA,采用RT-PCR法来检测丹参酮Ⅰ对细胞cmcy、p53、bcl-2、bax基因的差异性表达情况。结果:丹参酮Ⅰ显著下调了cmyc、bcl-2的基因表达,显著上调了p53、bax基因表达。结论:丹参酮Ⅰ通过下调cmyc、bcl-2以及上调p53bax基因表达,促进细胞凋亡,抑制人胃癌MGC-803肿瘤细胞的生长。     

鲜壁虎冻干粉诱导C6胶质瘤细胞凋亡的血清药理学研究

目的探讨鲜壁虎冻干粉对C6胶质瘤细胞凋亡的影响。方法将30只小鼠随机分为3组,分别给予顺铂腹腔注射,口服鲜壁虎冻干粉及口服等量蒸馏水。20天后,取小鼠血清体外处理C6胶质瘤细胞。通过形态学分析、流式细胞仪及TUNEL法,观察细胞凋亡情况;S—P免疫组化法检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax的表达水平。结果形态学变化、流式细胞仪分析和TUNEL法结果均证实含鲜壁虎血清在体外可诱导C6胶质瘤细胞凋亡;鲜壁虎组与空白对照组比较,细胞内的bcl-2基因表达无明显变化,bax基因表达升高。结论含鲜壁虎血清能够诱导细胞凋亡,其机制可能与上调bax基因有关。     

反左金丸水提物对人胃癌细胞SGC-7901凋亡及bcl-2、bax基因表达的影响

目的:观察反左金丸水提物(waterextractsofRetro-zuojinPill,WERZP)对人胃癌细胞(SGC-7901)生长的抑制和凋亡诱导效果,及其对bcl-2和bax表达的影响。方法:采用MTT比色法观察不同浓度的WERZP对SGC-7901的生长抑制情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Hoechst33258染色观察细胞形态学变化以及Westernblot方法检测WERZP对人胃癌细胞SGC-7901中bcl-2、bax蛋白表达的影响。结果:WERZP作用SGC-7901细胞24h后,细胞存活率显著降低(P<0.05),且与时间、剂量呈依赖关系。流式细胞仪PI单染亚二倍体峰分析,0.1,0.5,1,5和10mg·mL^-1WERZP作用SGC-7901细胞24h,细胞凋亡率分别为(4.02±1.33),(36.10±0.23),(55.91±0.95),(56.50±1.55)和(60.27±3.58)%,其中(0.5～10)mg.mL^-1组与对照组(2.66±1.33)%比较差异均有统计学意义(P<0.01)。Hochest染色结果显示细胞出现核固缩状和颗粒状荧光等典型的凋亡学特征。WERZP可降低SGC-7901细胞bcl-2基因表达和增加bax基因表达。结论:WERZP对SGC-7901生长有明显的抑制作用并可诱导SGC-7901的凋亡,bcl-2基因表达降低和bax基因表达增加可能是其凋亡机制之一。     

宁血益肾颗粒对肾小球系膜细胞凋亡及bax和bcl-2表达的影响

目的 :探讨宁血益肾颗粒对肾小球系膜细胞凋亡及凋亡相关基因bax、bcl- 2表达的影响 ,以阐明其治疗系膜增生性肾病有效的作用机制 ,为临床利用该药治疗以系膜增生为核心病理环节的多种肾脏疾病提供实验理论依据。方法 :采用肾小球系膜细胞培养方法进行体外研究 ,用不同剂量的宁血益肾颗粒刺激 4～ 6代系膜细胞 16小时 ,MTT法测定系膜细胞增殖指数 ;TUNEL法定量观察凋亡细胞 ;流式细胞术检测凋亡相关基因bax、bcl- 2的表达。结果 :加入宁血益肾颗粒 16小时后 ,系膜细胞出现了典型的凋亡征象 ,诸如细胞内深棕色颗粒形成、核固缩、碎裂等 ;凋亡率显著高于对照组 (P <0 .0 1) ;同时血尿停各组bax、bcl- 2表达亦明显高于对照组 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 )。观察其对凋亡、凋亡相关基因的影响 ,为中医治疗以系膜增生为主要病理改变的多种肾脏疾病 (原发性系膜增生性肾病、紫癜性肾炎、IgA肾病、狼疮性肾病等 )提供新的实验依据。结论 :宁血益肾颗粒可能通过调控bax和bcl- 2基因表达诱导系膜细胞凋亡 ,促进肾小球增殖性病变消散。     

构树总黄酮诱导HepG2细胞凋亡及其机理研究

目的:探讨构树总黄酮诱导HepG2细胞凋亡的机理。方法:采用流式细胞术观察构树总黄酮对HepG2细胞周期、细胞内活性氧(ROS)水平的影响,用qRT-PCR测定c-Myc,p53,bax,bcl-2和caspase-3基因mRNA表达水平的变化。结果:构树总黄酮剂量依赖性抑制HepG2细胞增殖。62.5μg/ml的构树总黄酮作用24 h,显著抑制HepG2细胞增殖,增加凋亡细胞比例,并将HepG2细胞阻滞于G1期;100μg/ml的构树总黄酮作用24 h,显著上调HepG2细胞p53、bax、caspase-3的mRNA水平,显著下调cMyc、bcl-2的mRNA水平;200μg/ml的构树总黄酮作用HepG2细胞6 h,显著增加细胞内ROS含量。结论:构树总黄酮能调节HepG2细胞c-Myc、p53、bax、bcl-2和caspase-3基因表达,并通过氧化应激,诱导HepG2细胞进入线粒体凋亡途径。     

大蒜素对人喉癌Hep-2细胞周期与细胞凋亡的影响

目的研究大蒜素对人喉癌Hep-2细胞周期与细胞凋亡的影响。方法实验分为空白对照组、大蒜素25μg/m L组、大蒜素50μg/m L组、大蒜素100μg/m L组和顺铂40μg/m L组,取对数生长期人喉癌Hep-2细胞,每组分别给予相应干预24 h后,采用MTT法测定细胞增殖抑制率,通过流式细胞术检测细胞周期、观察细胞凋亡状况并计算凋亡率,RTPCR法检测bcl-2 mRNA和bax mRNA表达并计算bax/bcl-2表达比值,Western blotting法检测Caspase-3蛋白表达情况。结果与空白对照组比较,大蒜素50μg/m L组、大蒜素100μg/m L组和顺铂40μg/m L组人喉癌Hep-2细胞增殖抑制率显著升高,细胞周期G0/G1期显著增长、G2/M期显著缩短,细胞凋亡率显著升高,bcl-2 mRNA表达显著下调而bax mRNA显著上调,bax/bcl-2表达比值显著升高,Caspase-3蛋白表达显著上调,差异均有统计学意义(P均<0.05)。大蒜素100μg/m L组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Caspase-3蛋白表达量均显著高于顺铂40μg/m L组(P均<0.05)。结论大蒜素具有阻滞人喉癌Hep-2细胞周期进程和促进其凋亡的作用,机制可能与其能够调节凋亡相关基因和蛋白表达有关。     

芒果苷诱导白血病K562细胞凋亡机制的研究

目的研究芒果苷诱导慢粒白血病细胞系K562细胞凋亡的机制。方法采用RT-PCR检测芒果苷(25~200μmol/L)处理(24、48、72、96h)后K562细胞中bcl-2 mRNA、bax mRNA、survivin mRNA基因表达变化;采用Western blotting方法检测K562细胞BCR/ABL融合蛋白质P210水平。结果芒果苷作用K562细胞后,P210蛋白质水平下调,并呈时间及剂量依赖性,bax基因表达显著上调,bcl-2基因表达轻度下调,survivin mRNA基因表达下调。结论芒果苷诱导K562细胞凋亡的机制可能是通过下调BCR/ABL融合蛋白质P210、bcl-2和sur-vivin mRNA基因表达及上调bax基因表达来实现的。     

增免抑瘤合剂合并化疗对卵巢癌大鼠bcl-2、bax基因表达的影响

目的从卵巢癌大鼠bcl-2、bax凋亡相关基因表达的变化,探讨增免抑瘤合剂辅助治疗卵巢癌的作用机制。方法采用DMBA诱发的原发性卵巢癌大鼠模型,随机分为化疗组(DDP化疗)、合并组(化疗结合增免抑瘤合剂灌胃)、中药组(增免抑瘤合剂灌胃)和模型组(生理盐水灌胃)。共治疗2周,比较各组大鼠bcl-2、bax表达及bcl-2/bax变化。结果治疗各组的bcl-2,bcl-2/bax均较模型组下降,差异显著(P<0.01),其中合并组下降最明显,与中药组及化疗组相比,也具有统计学意义(P<0.01)。合并组的bax表达较其余各组明显提高(P<0.01)。本研究凋亡指数曲线与bax曲线趋于一致性,显示增免抑瘤合剂辅助化疗能促进细胞凋亡。合并组平均凋亡指数最高(33.53%),模型组最低(13.35%),各组间具统计学意义(P<0.01)。结论增免抑瘤合剂合并化疗能下调卵巢癌bcl-2表达,提升bax表达,从而下调bcl-2/bax比值,激活卵巢癌细胞的凋亡途径,这可能是其抗癌增效的作用机制之一。     

臭牡丹总黄酮抑制小鼠Lewis肺癌实体瘤及其与p53、bcl-2、bax表达相关性研究

目的:探讨臭牡丹总黄酮对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用及其与p53、bcl-2、bax基因表达的相关性。方法:取近交系雄性C57BL/6小鼠50只,造模,将造模成功的Lewis肺癌小鼠40只随机分成模型组,顺铂组,臭牡丹总黄酮高、低剂量组;另取10只无瘤小鼠作为空白对照组。腹腔注射给药,模型组给予生理盐水0.01 m L/g,连续14 d;顺铂组给予顺铂0.4mg/kg连续5 d;臭牡丹高、低剂量组分别予臭牡丹总黄酮提取物0.6 g/kg、0.3 g/(kg·d),连续14 d。给药结束后次日处死小鼠,称取瘤重,计算肿瘤抑制率,采用Real-time PCR法检测p53、bcl-2及bax mRNA的表达水平。结果:1)对瘤重影响:4组瘤重结果如下(±s):模型组(4.70+1.29)g、顺铂组(2.24+0.68)g、总黄酮高剂量组(3.26±1.06)g、总黄酮低剂量组(3.99±1.31)g;其中顺铂组、总黄酮高剂量组瘤重低于模型组(P0.05),并且该2组瘤重无统计学意义(P0.05)。2)肿瘤抑制率:顺铂组:53.4%;臭牡丹总黄酮高剂量组:30.6%,臭牡丹总黄酮低剂量组:15.1%。3)对基因表达影响:臭牡丹总黄酮高、低剂量组皆能上调p53和bax mRNA表达(高剂量组P0.01,低剂量组P0.05);顺铂组能下调bcl-2(P0.05)及上调bax mRNA表达(P0.01)。结论:臭牡丹总黄酮能够改善Lewis肺癌小鼠生存状况,能有效抑制肿瘤生长;并且其抑制肿瘤生长的分子机制可能与上调p53和bax mRNA的表达以诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

右旋柠烯对不同类型人胃癌细胞的生长抑制作用

目的：探讨右旋柠烯(D-limonene)对不同类型人胃癌细胞的生长抑制作用及其机制。方法：以D-limonene作用于SGC-7901、BGC-823及AGS三种不同类型人胃癌细胞，采用噻唑蓝(MTT)比色法、流式细胞仪及电镜检测细胞生长抑制率、凋亡率以及形态学改变，免疫细胞化学法检测p53、bax和bcl-2基因表达。结果：D-limonene处理后的细胞生长抑制率与凋亡率均增加，与药物浓度呈正相关。细胞呈现核固缩、染色质边集、凋亡小体形成等典型凋亡表现。经D-limonene处理后SGC-7901、BGC-823细胞株p53、bax蛋白表达明显增加，bcl-2蛋白表达降低。AGS细胞株bax蛋白表达明显增加，bcl-2蛋白表达降低。结论：D-limonene对人胃癌细胞的抑制作用主要是通过诱导细胞凋亡，不同类型的细胞株作用途径可能不同。升提p53与bax及降低bcl-2的蛋白表达为其诱发冒癌细胞．凋亡的机制之一。     

癌宁诱导体外人胃腺癌细胞SGC—7901凋亡及细胞周期分析

目的：探讨中药复方－－癌宁诱导人胃腺癌细胞凋亡的作用。方法：采用DNA电泳和流式细胞术,对中药复方－－癌宁诱导人胃腺癌细胞凋亡进行了研究。结果：经癌宁处理后的人胃腺癌细胞出现DNA梯状图谱,流式细胞术检测其凋亡是分数高达43．5％,而对照组既无DNA梯状图谱,又无凋亡峰。细胞周期分析表明,经癌宁处理后,细胞的增殖指数为33．7％,无细胞周期特异性。结论：癌宁在体外对人胃腺癌细胞具有诱导凋亡作用。     

中药何首乌饮对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白bcl-2,bax表达的影响

目的通过测定不同剂量的中药何首乌饮含药血清作用后的大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达及caspase-3活性,探讨何首乌饮对卵巢自身功能的影响。方法制备排卵前卵巢模型,收集颗粒细胞分别与雌性SD幼鼠空白血清及含不同剂量何首乌饮的药物血清在体外共同培养,Western blotting检测GC内凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达情况;分光光度法检测颗粒细胞内caspase-3活性。结果何首乌饮含药血清可上调颗粒细胞bcl-2蛋白表达,下调bax蛋白表达,中、高剂量组何首乌饮含药血清与对照组比较,可明显上调bcl-2蛋白表达(P均<0.01),中、高剂量组何首乌饮含药血清与对照组比较,明显下调bax蛋白表达(P均<0.01)。何首乌饮含药血清可下调颗粒细胞caspase-3活性,中、高剂量何首乌饮含药血清组与对照组比较有显著性差异(P均<0.01)。结论何首乌饮增加GC内凋亡抑制蛋白bcl-2表达及减少凋亡促进蛋白bax表达的作用,可能是其抑制GC凋亡,防止卵泡闭锁的作用途径之一;同时何首乌饮可能是在凋亡的较早阶段,通过阻断caspase-3的级联裂解即可开始起效,而发挥凋亡抑制作用。     

大蒜素逆转人乳腺癌MCF-7细胞顺铂耐药性的研究

[目的]探索大蒜素对人乳腺癌MCF-7细胞顺铂耐药性的逆转作用及调控机制.[方法]以对数生长期人乳腺癌耐顺铂MCF-7/DDP细胞为受试细胞,设空白对照组(DMSO)、大蒜素(20μg/mL)单药组、顺铂(6μg/mL)单药组、联合组(大蒜素20μg/mL+顺铂6μg/mL).药物干预48 h后,噻唑蓝(MTT)染色法...     

骨刺消巴布剂对兔膝关节骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响

目的观察骨刺消巴布剂对兔膝关节骨性关节炎软骨细胞凋亡和凋亡调控基因bcl-2、bax的影响,并探讨其作用机理。方法选用健康日本大耳白兔40只,随机分为骨刺消巴布剂组、奇正消痛贴组、空白对照组、正常组。Videman固定法进行改良制备兔膝关节骨性关节炎模型,骨刺消巴布剂组、奇正消痛贴组外敷相应药物,空白对照组、正常组不做任何处理,给药5周后处死动物,TUNEL法检测软骨细胞凋亡,免疫组化法检测关节软骨中bcl-2、bax的水平。结果骨刺消巴布剂组、奇正消痛贴组细胞凋亡率明显低于空白对照组（P〈0.05）;bcl-2在骨刺消巴布剂组、奇正消痛贴组中的表达高于空白对照组（P〈0.05）,bax的表达低于空白对照组（P〈0.05）,骨刺消巴布剂组与奇正消痛贴组比较差异无统计学意义。结论骨刺消巴布剂可能是通过上调bcl-2的表达、下调bax的表达来抑制兔膝关节骨性关节炎软骨细胞的过度凋亡,这可能是该药治疗骨性关节炎的机制之一。