MMP-9对脑出血损伤实验研究

目的观察大鼠脑出血(ICH)后基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白动态表达及其与血肿周围脑组织含水量的关系。方法将雌雄各半的Wistar大鼠170只随机分为3组:正常对照组、假手术组、ICH组。每组均观察手术后6h、12h、24h、48h、72h、120h、7d、15d八个时间点,测定血肿周围脑组织含水量、MMP-9蛋白表达。结果ICH后MMP-9蛋白表达在24h~48h达高峰,与对照组相比,差异有统计学意义,与血肿周围脑组织含水量呈正相关(r=0.949,P<0.01)。结论大鼠ICH后MMP-9蛋白的表达是ICH后脑水肿形成主要因素。     

AQP9在脑出血大鼠脑组织中的表达变化

目的 研究大鼠脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)后水通道蛋白9(aquaporin 9,AQP9)在脑组织中的表达变化,初步探讨AQP9在脑出血脑组织病理变化中的作用.方法 采用定量胶原酶注入大鼠尾状核建立脑出血模型,运用HE染色、免疫组化、免疫荧光双标、RT-PCR等方法 榆测脑出血大鼠脑组织AQP9表达的变化.结果 HE染色显示,脑出血面积随着时间的延长而逐渐增大,24 h达到峰值,24 h后无明显变化.RT-PCR结果 显示,除ICH 1 h外,ICH早期,AQP9 mRNA含量较假手术组降低,于6 h降至最低;24 h及以后各时段明显增高,于48 h达到峰值,7 d仍明显高于对照.免疫组化和免疫荧光双标显示,AQP9在脑内表达部位随时段变化而变化,其中,ICH后48 h,AQP9强表达于脑室周围器官和渗透压感受器.结论 ICH早期AQP9表达降低可延迟细胞内水肿的形成,而ICH后期AQP9表达上调,可能与水电解质平衡调节和能量代谢调节有关.     

大鼠脑出血后MMP-9的表达与脑含水量变化的关系

目的:探讨大鼠脑出血(ICH)后基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达和脑含水量变化的关系.方法:采用未抗凝新鲜自体股动脉血注入大鼠尾状核建立脑出血动物模型.湿重-干重法测定脑含水量的变化.结果:MMP-9在ICH后6 h开始表达,24～48h最明显(P＜0.01),6 d仍有较低水平表达.脑组织含水量ICH后6 h开始增加,24～72 h达高峰(P＜0.01),6 d基本恢复正常水平.结论:MMP-9可能参与急性期脑水肿的形成.     

大鼠脑出血后MMP-2和MMP-9的动态表达及七叶皂苷钠对其表达的影响

目的观察大鼠脑出血（ICH）后基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、MMP-9蛋白动态表达及其与血肿周围脑组织含水量的关系,以及观察七叶皂苷钠对MMP-2、MMP-9表达的影响。方法Wistar大鼠250只随机分为4组：正常对照组10只、假手术组80只、ICH组80只和七叶皂苷钠治疗组80只,于制模后6、12、24、48、72、120h、7d和15d 8个时间点,测定各组血肿周围脑组织含水量、MMP-2和MMP-9的蛋白表达。结果治疗组神经功能缺失较ICH组明显改善（P〈0.05）;6-120h治疗组血肿周围脑组织含水量较ICH组明显减少（P〈0.05）;ICH后MMP-2蛋白表达在6h达到高峰,12h时下降,与正常对照组相比,MMP-2蛋白表达具有统计学意义（P〈0.01）;治疗组MMP-2蛋白表达在各时间点较ICH组明显减少（P〈0.01）;ICH后MMP-9蛋白表达在6h开始上升,24-48达高峰,72h时下降,与正常对照相比,具有统计学意义（P〈0.01）,其表达水平与血肿周围脑组织含水量呈正相关（r=0.949,P〈0.05）;治疗组MMP-9蛋白表达在各时间点ICH组明显减少（P〈0.01）。结论大鼠ICH后MMP-2、MMP-9蛋白的表达是ICH后早、中期脑水肿形成主要因素,七叶皂苷钠能降低MMP-2、MMP-9蛋白表达和脑组织含水量,对ICH具有保护作用。     

氯胺酮预处理对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后脑水肿和水通道蛋白4表达的影响

目的 观察氯胺酮缺血前预给药对大鼠短暂性脑缺血/再灌注损伤后神经缺失症状、脑水肿及Aquaporin 4(AQP4)表达的影响.方法 62只健康雄性Sprague-Dawley大鼠,体重220～250 g,随机分为假手术组(Sham组,n=18只)、生理盐水组(Vehicle组,n=22只)和氯胺酮预处理组(Ketamine组,n=22只).Vehicle组、Ketamine组大鼠采用线栓法阻塞大鼠右侧大脑中动脉,90 min后拔出栓线实现再灌注,建立局灶性脑缺血/再灌注模型.Ketamine组、Vehicle组分别于缺血前30min静脉持续输注(1mg·kg-1·min-1)5%氯胺酮及0.9%生理盐水,30 min后实施缺血再灌注损伤.Sham组手术操作同前,但线栓未阻塞大脑中动脉.再灌注24 h大鼠进行神经缺失症状评分,后断头取脑,采用干湿重法测定缺血侧脑半球的水肿度,Western-blot检测缺血周边区脑组织AQP4表达.结果 Vehicle组、Ketamine组大鼠脑缺血/再灌注损伤后神经功能缺失症状明显,缺血侧脑半球干湿重比值较Sham组明显增加(P<0.01);与Vehicle组相比,Ketamine组缺血侧脑半球干湿重比值无明显减小(P>0.05).与Sham组相比,Vehicle组、Ketamine组大鼠脑缺血/再灌注损伤后缺血周边区AQP4表达明显上调(P<0.01);与Vehicle组相比,Ketamine组AQP4表达无明显下调(P>0.05).结论 大鼠脑缺血/再灌注损伤后神经功能缺失症状及脑水肿明显,缺血周边区脑组织AQP4表达上调;氯胺酮缺血前预处理未能明显改善神经缺失症状及脑水肿,对缺血周边区脑组织AQP4的表达无影响.     

粒细胞集落刺激因子对大鼠脑出血后脑水肿及MMP-9的影响

目的探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对大鼠脑出血(ICH)后脑水肿的影响及可能机制。方法健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、治疗组,断尾取自体血法制备大鼠ICH模型,治疗组于造模1小时后腹腔注射重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)60μg/kg。3组大鼠于术后6、12、24、48、72h和7d处死,干湿重法测定脑组织含水量,免疫组化染色观察MMP-9的动态表达。结果模型组脑组织含水量明显高于假手术组(P<0.05),在造模后48、72h最明显,且与6、12、24h和7d相比差异显著(P<0.05);治疗组脑组织含水量明显低于模型组(P<0.05)。模型组脑组织MMP-9的表达明显高于假手术组(P<0.05);治疗组各时间点MMP-9的表达低于模型组(P<0.05)。结论 G-CSF可减轻ICH后脑水肿程度,其机制可能与G-CSF抑制MMP-9表达密切相关。     

G-CSF对大鼠脑出血后脑水肿及基质金属蛋白酶-9的影响

目的:探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对大鼠脑出血(ICH)后脑水肿的影响及可能机制。方法:健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、治疗组。断尾取自体血法制备大鼠ICH模型,治疗组于造模1h后腹腔注射重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)60μg/kg。3组大鼠于术后6h、12h、24h、48h、72h、7d处死,干湿重法测定脑组织含水量、免疫组化染色观察MMP-9的动态表达。结果:模型组脑组织含水量明显高于假手术组(P<0.05),在造模后48h、72h最明显,且与6h、12h、24h、7d相比差异显著(P<0.05);治疗组脑组织含水量明显低于模型组(P<0.05)。模型组脑组织MMP-9的表达明显高于假手术组(P<0.05);治疗组各时间点MMP-9的表达低于模型组(P<0.05)。结论:G-CSF可减轻ICH后脑水肿程度,其机制可能与G-CSF抑制MMP-9表达密切相关。     

地塞米松对脑出血大鼠脑AQP4影响的研究

目的通过建立大鼠自体血脑出血(ICH)模型,观察地塞米松对水孔蛋白4(AQP4)表达的影响及血脑屏障(BBB)的通透性与AQP4表达的关系。方法建立自体血ICH模型后,大鼠随机分为脑出血模型对照组(ICH组)和脑出血加地塞米松干预组(DEX组),观察脑出血后12h、1d、3d、5d、7d各点大鼠BBB通透性及AQP4的表达。结果ICH组大鼠BBB通透性从12h开始明显增加,1d达高峰(20.350±1.294),灶周AQP4的蛋白及其mRNA光密度值均至第3天达到高峰(0.806±0.113,1.112±0.072),BBB通透性的变化与AQP4蛋白及其mRNA的变化成正相关(r=0.898和r=0.847,P<0.01)。脑出血12h后DEX组BBB通透性和AQP4的表达均较ICH组降低。结论地塞米松可以保护脑出血大鼠BBB,并降低AQP4的表达,并且BBB通透性与AQP4及其mRNA成正相关。     

吡格列酮对大鼠脑出血后AQP4表达的影响

目的探讨吡格列酮对大鼠脑出血后脑组织水通道蛋白4(AQP4)表达的影响。方法将40只成年雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、脑出血组、吡格列酮组。应用自体血尾状核定位注射方法建立大鼠自体血脑出血模型,分别采用免疫组化及半定量逆转录聚合酶链反应方法,检测脑组织AQP4蛋白及mRNA的表达。结果脑出血组AQP4蛋白的表达较假手术组明显升高(F=222.03,q=29.15,P<0.05),而吡格列酮组AQP4蛋白的表达较脑出血组明显降低(q=9.21,P<0.05)。脑出血组AQP4mRNA含量较假手术组明显增高(F=327.22,q=33.13,P<0.05);吡格列酮组AQP4mRNA含量与脑出血组比较明显降低(q=3.98,P<0.05)。结论吡格列酮能够抑制脑出血后血肿周围脑组织AQP4的表达,从而减轻脑水肿。     

β-DG对脑内水通道蛋白4极性表达变化的影响

目的:观察脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)后大鼠脑组织中β-肌营养不良聚糖(β-dystroglycan,β-DG)的表达变化,以探讨其对水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)极性表达变化的的影响。方法:健康雄性SD大鼠68只,随机分为假手术对照组(sham组)、ICH后1、3 d和7 d共4组,采用自体血注入法建立大鼠ICH动物模型,HE染色和透射电镜检测组织结构病理变化,免疫印迹检测血肿周围组织中β-DG蛋白的表达变化,免疫荧光双标记检测AQP4与β-DG的共表达变化。每个时间点用于透射电镜检测、免疫印迹和组织切片的大鼠数量分别为5、6只和6只。结果:ICH后1 d血肿周围组织结构破坏最为明显,可见毛细血管内皮细胞肿胀及血管周围间隙增宽等改变。ICH后1、3、7 d的血肿周围组织中,β-DG蛋白含量分别为(0.251±0.038)、(0.396±0.069)、(0.398±0.086),与sham组(0.610±0.121)比较,均明显降低,且差值均具有统计学意义(P=0.000)。与sham组中AQP4与β-DG严格的共表达不同,ICH后脑组织中,伴随着AQP4极性表达缺失,β-DG的表达明显降低。结论:β-DG表达下调可能促进了ICH后脑组织中AQP4的极性表达缺失。     

尼美舒利对大鼠脑出血后脑水肿及基质金属蛋白酶2的影响

目的探讨尼美舒利对脑出血（ICH）后脑组织炎症损害的保护作用。方法 150只SD大鼠随机分为尼美舒利治疗组、ICH组和假手术组,每组50只。术后每组分5个时间点（各10只）。立体定向自体血注入尾状核建立ICH模型;观察各组各时点血肿周围脑组织环氧化酶2（COX-2）和基质金属蛋白酶2（MMP-2）动态表达,测定血肿周边及脑组织含水量。结果 ICH组各时点COX-2和MMP-2蛋白表达明显高于假手术组,ICH组各时点含水量与COX-2和MMP-2蛋白表达呈正相关,COX-2蛋白表达与MMP-2蛋白表达呈正相关。尼美舒利组治疗COX-2、MMP-2蛋白表达低于ICH组,各时间点脑组织含水量低于ICH组。结论尼美舒利能抑制COX-2蛋白表达,同时直接或间接影响MMP-2蛋白表达,减轻脑水肿,抗炎治疗可能是治疗脑出血后脑水肿的一个新途径。     

亚低温对实验性大鼠脑出血后血肿周围组织MMP-2/9表达的影响

目的:研究亚低温对脑出血后MMP-2/9表达及脑水肿的影响,探讨亚低温对出血性脑水肿的作用机制。方法:以立体定向技术在大鼠尾状核注射自体血制作脑出血模型;用冰块降温及白炽灯照射加温的方法调节体温;应用免疫组化方法检测脑组织MMP-2/9表达。结果:脑出血模型大鼠血肿周围MMP-2/9的表达水平明显高于假手术组(均P<0.01);各个时间点亚低温组大鼠病灶侧血肿周围MMP-2/9的表达水平均明显低于常温对照组(P<0.05～0.01)。结论;亚低温能明显减轻脑出血后MMP-2/9的表达,亚低温可能通过抑制MMP-2/9的表达而减轻脑水肿。     

硝普钠与尼莫地平治疗大鼠脑出血损伤的疗效及与凝血酶受体-1表达的相关研究

的探讨硝普钠与尼莫地平治疗大鼠脑出血（ICH）,降低大鼠脑血肿及脑出血后神经元损伤的疗效及与凝血酶受体-1（PAR1）表达的相关性。方法用30 只雄性Wista 大鼠（200～220 g）复制脑出血ICH 模型,并随机分为3 组（每组10 只）,分别是假手术组、脑出血组和联合治疗组。大鼠于ICH手术成功后48 h处死,收集大鼠脑组织备用。采用TUNEL法检测细胞凋亡的发生;干燥法检测大鼠脑组织水含量;采用免疫组织化学法和蛋白质印迹法Western blot检测PAR1 蛋白的表达。结果与假手术组比较,脑出血组和联合治疗组中凋亡细胞数和脑组织水含量增多（均p=0.000）,而联合治疗组中凋亡细胞数和脑组织水含量低于脑出血组（均p=0.000）;与假手术组PAR1 蛋白含量（0.673±0.121）比较,脑出血组PAR1 蛋白含量（2.187±0.233）和联合治疗组PAR1 蛋白含量（1.434±0.168）上升,差异有统计学意义（p =0.000）,与脑出血组比较,联合治疗组PAR1 蛋白含量下降,差异有统计学意义（p =0.000）;Western blot结果与免疫组织化学结果一致。结论硝普钠与尼莫地平通过对PAR1 的调控治疗大鼠脑出血损伤,具有神经保护作用。     

安宫牛黄丸对大鼠脑出血后MMP-9表达的影响

目的探讨安宫牛黄丸对大鼠脑出血（Intracerebral Hemorrhage,ICH）后脑组织基质金属蛋白酶-9（Matrix metalloproteinase-9,MMP-9）表达的影响。方法将sD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、脑出血组、安宫牛黄丸治疗组,每组5只大鼠。采用自体股动脉血注入尾状核建立大鼠脑出血模型,观察48h时点各组大鼠血脑屏障通透性变化,RT．PCR分析安宫牛黄丸对脑出血后MMP-9mRNA表达的影响,WesternBlot分析安宫牛黄丸对脑出血后MMP-9蛋白表达的影响。结果大鼠实验性脑出血后48hMMP-9阳性细胞数及伊文思蓝渗出量增多,MMP-9mRNA及MMP-9蛋白表达增加;安宫牛黄丸处理后,MMP-9阳性细胞数减少（P〈0．01）,伊文思蓝渗出量降低（P〈0．01）,MMP-9mRNA及MMP-9蛋白表达下降。结论脑出血后MMP-9表达与血脑屏障通透性密切相关,安宫牛黄丸能够有效抑制大鼠脑出血后MMP-9表达,减轻脑水肿。     

安脑平冲汤对大鼠脑出血后脑水肿及MMP-2/9蛋白表达的影响

目的观察安脑平冲汤对大鼠脑出血后脑组织含水量和MMP-2/9蛋白表达的影响。方法以Ⅳ型胶原酶注射法建立大鼠脑出血模型,观察正常组及假手术组、模型组、治疗组术后12 h、24 h、48 h、72 h、120 h大鼠脑组织含水量及MMP-2/9蛋白的表达水平。结果 (1)脑组织含水量:模型组术后各时点均高于假手术组(P<0.05),而治疗组各时点均低于模型组(P<0.05)。(2)MMP-2/9水平:模型组术后各时点较假手术组均升高(P<0.01);而治疗组与模型组比较,MMP-2蛋白表达在24～120h时点降低(P<0.05),12 h时点差异不明显(P>0.05);MMP-9蛋白表达在24 h、48h、120 h时点降低(P<0.05),12h和72h时差异不明显(P>0.05)。结论安脑平冲汤可以在一定程度上减少MMP-2/9蛋白的表达,减轻脑出血后脑水肿。     

VEGF基因修饰人骨髓间充质干细胞对脑出血大鼠早期脑水肿的影响

  目的  探究血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）基因修饰的人骨髓间充质干细胞（human bone marrow mesenchymal stem cells, hBMSCs）对脑出血大鼠早期脑水肿的影响。  方法  体外培养hBMSCs和经体外构建的 VEGF 基因慢病毒载体稳定转染的hBMSCs（hBMSCs/VEGF）细胞。采用尾状核注射Ⅰ型胶原酶和肝素方式,制备脑出血动物模型。术后2 h对大鼠进行改良神经功能缺损（mNSS）评分,鉴定造模是否成功。将SD大鼠随机分为假手术组（仅进针不注射造模剂）、脑出血模型组、生理盐水组、hBMSCs组和hBMSCs/VEGF组。造模后第3天,hBMSCs组和hBMSCs/VEGF组大鼠分别按分组右侧尾壳核内注射细胞悬液（2×106个细胞/kg体质量）进行细胞移植,生理盐水组相同部位注射等量生理盐水,假手术组、模型组大鼠不进行干预。干预后3 d、7 d分别进行mNSS评分,处死大鼠,分离脑右侧尾壳核区脑组织标本,干湿重法检测脑组织标本含水量,HE染色观察脑组织标本病理改变,免疫荧光和Western blot检测VEGF、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase, MMP-9）和水通道蛋白-4（aquaporin 4, AQP-4）表达。  结果  造模术后2 h,与假手术组大鼠比较,各组大鼠mNSS评分增高,均>8分,提示造模成功;在干预后3 d、7 d,模型组和NS组mNSS评分,脑组织含水量,MMP-9、AQP-4、VEGF蛋白表达高于假手术组（P<0.05）,干预后相同时间点,hBMSCs组上述指标较NS组和模型组减少（P<0.001）,hBMSCs/VEGF组上述指标高于hBMSCs组（P<0.05）;光镜下模型组和NS组大鼠脑组织出现明显出血灶和梗死灶,结构紊乱疏松,水肿改变明显,hBMSCs组出血灶和梗死灶减小,而hBMSCs/VEGF组相较hBMSCs组,脑组织结构疏松,呈空泡状,神经元出现多数核固缩等凋亡改变。  结论  hBMSCs移植可改善脑出血大鼠神经功能缺损,减轻脑水肿,但hBMSCs经VEGF基因修饰后移植将增加血管通透性,加重脑出血大鼠的早期脑水肿。     

原花青素对脑出血后脑水肿及继发性脑损伤炎症的作用研究

目的 探讨原花青素对脑出血后脑水肿及继发性脑损伤炎症的作用.方法 48只C57BL6小鼠分为4组:Sham+生理盐水组,Sham+原花青素(100 mg/kg)组,ICH+生理盐水组,ICH+原花青素(100mg/kg)组.采用Bederson法检测术后小鼠神经功能评分,干湿比重法检测小鼠脑组织含水量,苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠脑组织细胞形态改变,Western blot法观察小鼠脑组织胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及离子钙结合蛋白受体1 (Iba1)的表达,TUNEL及Western blot法观察小鼠脑组织细胞凋亡情况.结果 12 h后与ICH+生理盐水组相比,ICH+原花青素组的神经功能障碍症状评分明显降低(P＜0.05),脑组织含水量明显降低(P＜0.05).HE染色结果显示,原花青素能减少脑出血小鼠神经细胞病变数量,降低脑组织出血量.Western blot结果显示,原花青素能促进脑出血组织B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达,降低Bcl-2相关X蛋白、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3、GFAP和Iba-1的表达量.TUNEL结果显示,原花青素能抑制脑出血小鼠脑组织神经细胞的凋亡.结论 原花青素可能通过降低GFAP和Iba-1的表达抑制神经毒性物质的产生,防治脑出血后继发性脑损伤.     

阿托伐他汀对脑出血大鼠脑组织病理变化及血浆MMP-9水平的影响

目的：探讨不同剂量阿托伐他汀对大鼠脑出血（ICH）后脑组织水肿、神经细胞凋亡、血浆基质金属蛋白酶-9（MMP-9）水平的影响．方法：采用胶原酶注入法建立大鼠ICH模型，干湿重法测定各组脑组织含水量、电镜观察脑组织超微结构变化、ELISA法检测血浆MMP-9的水平．结果：阿托伐他汀可明显减少大鼠ICH后脑组织含水量，阻断神经元细胞凋亡，降低血浆MMP-9水平．血浆MMP-9水平与其脑组织含水量之间呈正的直线相关关系．结论：阿托伐他汀能明显减轻大鼠ICH后脑水肿，降低MMP-9引发的脑损伤，保护大脑神经元细胞．