银杏叶提取物对大鼠急性脊髓损伤后神经功能恢复的作用及其机制

目的:观察银杏叶提取物(EGb)对大鼠实验性脊髓损伤后组织结构及运动功能恢复的作用,探讨其对急性脊髓损伤的作用机制。方法:120只SD雄性大鼠,随机分为假手术组(A组)、损伤对照组(B组)、甲基强的松龙(MP)治疗组(C组)和EGb治疗组(D组),每组30只。B、C、D组用Allen′s法以50g·cm致伤大鼠T9脊髓制作损伤模型,B组为单纯脊髓损伤,不给药;C组为脊髓损伤后30min内,由腹腔注入MP30mg/kg;D组为术后至处死前每天腹腔给予EGb17.5mg/kg;A组只打开T9椎板,不打击脊髓,不给药。术后24h、3d、5d、7d、14d对大鼠进行脊髓运动功能(BBB)评分。于术后24h、3d、5d、7d、14d处死动物(n=6),取T9节段脊髓,切片苏木素-伊红(HE)染色观察脊髓大体组织结构变化,用免疫组织化学方法检测B细胞淋巴瘤/白血病基因-2(Bcl-2)和B细胞淋巴瘤/白血病基因伴随蛋白x(Bax)在脊髓前角运动神经元中的表达变化情况。结果:各时间点B、C、D组大鼠脊髓运动功能(BBB)评分均显著低于A组(P<0.01),伤后7d、14d时C、D组评分显著高于B组(P<0.05),各时间点C组与D组评分比较无统计学意义(P>0.05)。HE染色C组和D组大鼠脊髓损伤区较B组坏死程度轻、形成囊腔少,A组正常;1周后D组较C组片状出血灶少,神经细胞肿胀不明显。各时间点B、C、D组大鼠损伤脊髓前角运动神经元中Bcl-2阳性细胞数均显著高于A组(P<0.01),C、D组显著高于B组(P<0.01),7d、14d时D组显著高于C组(P<0.05);各时间点B、C、D组大鼠损伤脊髓前角运动神经元中Bax阳性细胞数均显著高于A组(P<0.01),C、D组显著低于B组(P<0.01),7d、14d时D组显著低于C组(P<0.01)。结论:EGb可能通过抑制Bax表达、提高Bcl-2表达,抑制脊髓损伤后神经元凋亡,在运动功能恢复、损伤脊髓组织保护上发挥其有益作用,1周后EGb仍能抑制脊髓损害后的继发性损伤。     

神经营养素3对大鼠急性脊髓损伤后Fas表达的影响

[目的]探讨神经营养素3（NT-3）对脊髓损伤保护作用的分子机制。[方法]105只SD大鼠随机分成3组：对照组（生理盐水组），实验组（NT-3组），假手术组。用改良Allen＇s WD法以30gcm致伤SD大鼠制作大鼠全瘫模型，经蛛网膜下腔导管于术后即刻、4、8、12、24h、3、7d注入NT-320μl（含NT-3200ng），对照组在相同时间点给予等容积生理盐水，假手术组只打开椎板后蛛网膜下腔置管，不致伤，不给药。采用免疫组织化学方法检测Fas蛋白在脊髓神经元的表达变化情况。[结果]假手术组中Fas蛋白弱阳性表达，对照组中Fas蛋白4h即出现强阳性表达，24h达高峰，实验组与对照组相比Fas蛋白表达明显减少（P〈0．01）。[结论]NT-3能通过抑制Fas蛋白的表达抑制脊髓损伤后神经元凋亡，从而保护损伤的脊髓组织，这可能是NT-3对脊髓损伤具有保护作用的机制之一。     

神经营养素-3与脊髓损伤

脊髓损伤严重地威胁人类生命和健康，它使患者丧失工作能力，生活质量下降，甚至生活不能自理，造成了巨大的人力和经济损失。尽管经历了近100年的探索研究，脊髓损伤的疗效仍未取得突破性的进展，随着研究的深入，近年来人们发现神经营养素是轴突再生不可缺少的物质成份，能减轻脊髓继发性损伤，并能明显促进轴突生长，本文主要对神经营养素家族的重要成员：神经营养素-3在脊髓损伤中的研究进展进行综述：     

神经营养素3对大鼠脊髓损伤后运动功能恢复的影响

目的 探讨神经营养素3(neurotrophin-3,NT-3)对大鼠急性脊髓损伤的治疗作用.方法 实验于2005-01/06在解放军第三军医大学中心实验室完成.选择60只健康SD大鼠,随机分为3组:对照组(生理盐水组),实验组(NT-3组),假手术组(n=5);用改良Allen's法以30gcm致伤SD大鼠制作大鼠T8全瘫模型,实验组经蛛网膜下腔导管于术后即刻,4h,8h,12h,24h,3d,7d注入NT-320μl(含NT-3 200ng),对照组在相同时间点给予等量生理盐水,假手术组只打开椎板后蛛网膜下腔置管,不致伤,不给药.各组动物分别于术后24h,3d,7d、14d行BBB评分和MEP检查.结果 60只大鼠全部进入结果分析,①实验组在24h、3d、7d、14d较对照组BBB评分分值提高[0.22±0.43/0.70±0.48(P＜0.05);3.2 2.39/8.01 2.05;9.30 1.49/14.32 2.11;12.80±0.92/18.40±1.08(P＜0.01)],②实验组MEP的N1波潜伏期在24h、3d、7d、14d均较对照组明显缩短[80.90±7.49/49.9±2.44(P＜0.01);54.05±8.52/40.55±4.72(P＜0.05);43.10±1.53/33.65±2.78(P＜0.01);38.45±3.98/22.25±2.84(P＜0.01)].结论 神经营养素3能明显促进脊髓损伤后运动功能的恢复,对大鼠脊髓损伤有明显治疗作用.     

大鼠脊髓腹侧左迫损伤后神经营养素及受体表达的变化规律

目的：探讨脊髓损伤后脊髓功能恢复的分子生物学基础。方法：在制作脊髓腹侧压迫损伤的基础上,应用免疫组织化学的方法观察几种神经营养素及其受体表达的变化规律。结果：脊髓腹侧压迫损伤后BDNF,GNDF,NT3,NGF以及TrkA,TrkB,TrkC在伤后3h表达开始增加,伤后72h达到高峰,在伤后2周内其表达维持在相对较高的水平,且以BDNF及TrkB表达最明显。结论：脊髓损伤后这些内源性神经营养素及其受体的大量表达对受损伤脊髓的功能恢复起重要作用。同时也反映了受试动物的脊髓功能受损较重的特点。     

神经营养素3对大鼠急性脊髓损伤后血中一氧化氮合成酶的影响

[目的]探讨NT-3（神经营养素3）对脊髓损伤保护作用的机制。[方法]105只SD大鼠随机分为3组：对照组（生理盐水组），实验组（NT-3组）和假手术组，每组35只，各分为7个时相点，每个时相点5只大鼠。采用Allen’s法以30gem力致伤大鼠Ts脊髓，经蛛网膜下腔导管分别于术后0、4、8、12、24h、3、7d各注入NT-3溶液200ng与生理盐水组和假手术组对照，于术后4、8、12、24h、3、7、14d自右心室取血用比色法测定血清中的一氧化氮合成酶活性。[结果]大鼠脊髓损伤后一氧化氮合成酶（NOS）升高，术后12h达高峰，实验组NOS水平及升幅明显低于对照组。[结论]NT-3能有效抑制NOS在脊髓损伤后的活性，从而减少了NO的生成，这可能是促进大鼠脊髓损伤后运动功能恢复的作用机制之一。     

大鼠脊髓损伤后神经营养素及受体表达的变化

目的:观察神经营养素及受体在脊髓损伤后的表达变化。方法:SD大鼠30只,设正常组、假伤组、脊髓损伤组。Allen's法复制5g×10cm脊髓损伤模型。用免疫组化和免疫电镜方法观察各组神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经营养素-3(NT-3)及其受体TrkA,TrkB,TrkC表达的变化。结果:正常大鼠脊髓神经营养素及其受体表达较少,损伤后表达明显增加。NGF和BDNF伤后1～7d持续高表达,NT-3、TrkA、TrkB和TrkC伤后1～3d表达较高,与正常组和假伤组相比,差异有显著性意义。结论:神经营养素及受体在急性脊髓损伤中表达增加,起保护性作用。     

神经营养素-3基因修饰嗅鞘细胞移植对急性脊髓损伤作用的实验研究

目的：观察神经营养素-3（NT-3）基因转染嗅鞘细胞（OEG）移植对急性大鼠脊髓损伤的作用。方法：将自行构建的质粒DEGFP-NT3应用脂质体介导的方法导人体外培养的嗅鞘细胞，并移植入急性脊髓损伤大鼠体内．连续观察12周．与接受单纯OEG、空白质粒转染OEG移植的脊髓损伤大鼠进行比较。结果：移植转染DEGFP-NT3后的OEG能在体内长期存活，表达NT-3基因，与对照组比较能更好地促进脊髓损伤区轴突的再生和后肢功能的恢复。结论：OEG是脊髓损伤基因治疗较好的受体细胞。转染NT-3基因的OEG移植后可以在体内较长时间存活．能明显促进急性脊髓损伤神经纤维的再生和功能恢复，为基因修饰嗅鞘细胞在脊髓损伤治疗中的应用提供了实验和理论依据。     

脊髓损伤后凋亡调控基因Bcl-2、Bax的表达及意义

目的：观察探讨大白鼠脊髓损伤后细胞凋亡及调控基因Bcl-2、Bax的表达及意义。方法：28只SD大鼠随机分为7组，Allen’s法致伤脊髓，于术后4、8、24、48、72、168h采集脊髓标本，1组作为对照组，分别行HE染色、TUNEL染色和免疫组化技术检测Bcl-2、Bax的表达。结果：TUNEL染色显示有神经元和胶质细胞凋亡。Bcl-2在术后4h开始出现阳性表达，24h达高峰。Bax术后4h出现阳性表达，8h时达高峰。结论：脊髓损伤后存在神经元和胶质细胞的凋亡，Bcl-2、Bax基因对调控细胞凋亡可能具有重要作用。     

甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤后环氧化酶-2表达的影响

目的：观察甲基强的松龙（MP）对正常及损伤脊髓组织中环氧化酶-2（COX-2）表达的影响。方法：216只Sprague-Dawlev大鼠．随机分为正常大鼠生理盐水处理组、正常大鼠MP处理组、生理盐水预处理脊髓损伤组、MP预处理脊髓损伤组、生理盐水治疗脊髓损伤组、MP治疗脊髓损伤组6组，每组又分为处理后2h、4h、8h、16h、24h、48h6个时间点；采用改良Allen’s打击法制作脊髓损伤动物模型，应用免疫组织化学染色的方法观察脊髓中COX-2蛋白表达的变化。结果：正常脊髓MP处理组16h后COX-2免疫组化染色程度明显降低，48h后仅灰质后角内有个别较小直径神经元显示微弱阳性染色；脊髓损伤后MP治疗组4h开始出现COX-2染色程度增高，并在损伤后48h达到最强程度的染色。但染色程度比生理盐水治疗组最强染色程度弱；MP预处理脊髓损伤组8h开始出现COX-2免疫组化染色程度的增高，并一直持续到损伤后48h，损伤后48h组染色程度比生理盐水预处理组最强染色程度弱、比脊髓损伤后MP治疗组染色程度弱。结论：MP能显著抑制正常和损伤脊髓组织中COX-2蛋白的表达，延迟其在损伤脊髓中的表达高峰时间，但不影响COX-2表达在空间上的分布。MP预处理比MP治疗能更显著地抑制损伤脊髓组织中COX-2蛋白的表达。     

大鼠脊髓损伤后骨形态发生蛋白2表达变化的规律及意义

目的:观察大鼠脊髓损伤后损伤脊髓组织中骨形态发生蛋白2(BMP2)表达变化的时间及空间分布规律,探讨抑制BMP2增加的最佳时间及部位。方法:成年SD大鼠40只,随机分为5组:假手术组,损伤后1d组、3d组、7d组、14d组,每组8只。将大鼠麻醉后以T10棘突为中心,打开椎板,暴露脊髓,各损伤组使用NYU impactor打击器制作大鼠脊髓损伤模型,假手术组不做打击处理。分别于造模前后对各组大鼠进行运动功能BBB评分,于预定时间点处死动物,取损伤段(假手术组取相应节段)脊髓组织行HE染色和免疫组化染色,观察脊髓组织学改变并进行阳性细胞计数,采用方差分析进行组间比较。结果:造模前各组大鼠的BBB评分均为21分;造模后假手术组大鼠BBB评分高于各损伤组,且差异有显著性(P<0.01),各损伤组之间两两比较评分均无显著性差异(P>0.05)。HE染色假手术组大鼠脊髓组织结构清晰,层次规整,条理性强,灰质中可见较多的神经元,白质中可见大量纤维性星形胶质细胞;损伤组大鼠损伤处脊髓组织结构紊乱,层次感消失,可见弥散的血细胞,早期增多较晚期明显,脊髓灰质与白质中都可见因大量组织细胞溶解而遗留的组织空洞。各组脊髓灰、白质中均有BMP2表达,假手术组灰质中平均阳性细胞数为1.53±0.38个/HP,白质中为0.77±0.14个/HP;损伤后1d组灰质中为13.70±4.81个/HP,白质中为7.23±3.14个/HP;损伤后3d组灰质中为9.37±3.61个/HP,白质中为5.63±2.23个/HP;损伤后7d组灰质中为6.17±1.81个/HP,白质中为4.17±1.24个/HP;损伤后14d组灰质中为4.36±1.60个/HP,白质中为1.87±1.13个/HP;损伤各组BMP2平均阳性细胞数与假手术组相比较均有明显差异(P<0.01),各组灰质区BMP2平均阳性细胞数的增加均较白质区更为显著(P<0.01)。结论:脊髓损伤后损伤脊髓组织中BMP2的表达增加,损伤后1d最高,主要集中在损伤区灰质区。针对BMP2进行特异性抑制最好在损伤后第一天的脊髓灰质区实施。     

神经营养因子-3修饰的神经干细胞移植大鼠受损脊髓后的存活及分化

目的 观察增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的神经营养因子(NT)-3修饰的胚胎脊髓来源的神经干细胞(NSCs)移植入受损脊髓后的存活及分化.方法 将体外构建的EGFP标记NT-3修饰的NSCs(NT-3-NSCs)移植入SD在胸9水平脊髓半切的大鼠(10只),通过免疫组织化学方法检测移植细胞的存活、分化及NT-3的表达,并与未进行NT-3修饰的NSCs移植组(NSCs)(10只)进行比较.结果 NT-3-NSCs组移植细胞存活数(304±40)比NSCs组(258±41)更多(P>0.05).NT-3-NSCs组中NT-3阳性细胞的比例(74.2±14.1)%明显高于NSCs组(22.9±11.1)%(P<0.01);NT-3-NSCs组中少突胶质细胞分化率(53.8±12.4)%明显高于NSCs组(39.7±13.7)%(P<0.05).结论 NT-3修饰能促进NSCs在受损脊髓内存活、表达NT-3及分化为少突胶质细胞,有助于NSCs移植对脊髓损伤(SCI)的治疗效果.     

不同时间点减压对环扎法所致损伤脊髓Bcl-2、Bax蛋白的表达及意义

目的:探讨不同时间点减压环扎法所致损伤脊髓中神经细胞凋亡及Bax、Bcl-2的表达及其意义。方法:成年SD大鼠84只,随机分为4组:A组,仅行椎板减压及硬脊膜囊周长测量;采用环扎法建立大鼠脊髓损伤模型,B组于环扎术后8h行脊髓减压;C组于环扎术后72h行脊髓减压;D组环扎术后不行脊髓减压。各组分别于术后1d、7d、14d、21d取材,所得脊髓标本行HE染色、Tunel染色及免疫组化法检测Bax、Bcl-2阳性细胞数等情况,并采用BBB评分评价大鼠后肢神经功能变化。结果:Bax染色:B组和C组术后1d开始阳性细胞数增加,7d时达高峰,14d时仍较明显,21d降低;D组术后阳性细胞数持续升高。Bcl-2染色:B组和C组术后阳性细胞数持续升高;D组术后1d阳性细胞数最多,之后持续降低。Tunel染色:B、C及D组术后1d开始出现凋亡细胞,7d时达高峰,以后逐渐减少,21d时仍可见。Bcl-2/Bax值与Tunel阳性细胞数关系:B组和C组二者存在负相关;D组二者呈正相关。BBB评分:A组术后1周后肢运动功能恢复正常;B组和C组术后逐渐升高(P<0.05);D组术后1天开始逐渐降低,7天时最低,然后逐渐升高。结论:环扎法可以建立稳定的大鼠脊髓损伤模型;早期减压能减少继发性脊髓损伤细胞凋亡,有利于神经功能恢复。     

脊髓腹侧压迫损伤后MP、Iloprost和Riluzole对Bcl—2表达的影响

目的：观察脊髓腹侧迫损伤后Bcl-2表达的动态变化及神经保护剂对Bcl-2表达的影响。方法：大鼠胸脊髓腹侧压迫损伤后,将受试运动分别用甲基强的松龙（MP）、Iloprost,Riluzole及以上三种药物合用联合治疗。应用免疫组织化学及原位杂交方法检测治疗组及损伤组中Bcl-2的表达。结果：脊髓伤后1h Bcl-2蛋白增加,伤后3h达高峰,伤后2周表达接近于正常水平。Bcl-2 mRNA的表达也有相似的变化过程。。MP、Iloprost和Riluzole能增加Bcl-2蛋白表达,但对Bcl-2 mRNA的表达增加不明显。结论：作用方式不同的几种神经保护剂均能增加脊髓损伤组织中的Bcl-2蛋白的表达。     

长链非编码RNA-XIST对脊髓损伤大鼠神经元凋亡影响及其机制的实验研究

目的:探讨长链非编码核糖核酸-X染色体失活基因(lncRNA-XIST)对脊髓损伤大鼠神经元凋亡过程的影响及其作用机制。方法:将成年SD大鼠(北京中国科学院实验动物中心提供)随机分为假手术组、脊髓损伤组、观察组,假手术组接受椎板切除术,脊髓损伤组和观察组椎板切除后使用脊髓打击器损伤脊髓。假手术组和脊髓损伤组脊髓内注射空...