氧化低密度脂蛋白功能性上调入脐带静脉内皮细胞的生长调节致癌基因a

探讨趋化因子生长调节致癌基因a(GROa）在低密度脂蛋白诱导动脉粥样硬化过程中的作用。采用人脐带静脐内皮细胞和单核细胞系细胞--U937细胞。结果显示,内皮细胞暴露于氧化低密度脂蛋白后显著上调GROa mRNA;氧化低密度脂蛋白时间、浓度依赖性地上调内皮细胞表面GROa的蛋白表达,但溶液中的GROa蛋白并没有显著改变。内皮细胞表面GROa蛋白上调增加了单核细胞粘附到内皮细胞,且GROa抗体抑制此粘附过程。提示氧化低密度脂蛋白功能性上调入脐带静脉内皮细胞GROa的表达。     

Klotho激活自噬对氧化低密度脂蛋白介导的人冠状动脉内皮细胞衰老的影响

目的探讨Klotho激活自噬对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)介导的人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)衰老的影响。方法体外培养HCAEC,并将细胞分为对照组与ox-LDL处理组,Klotho (400 pmol/L)预处理2 h,以不同浓度(0、25、50、75、100 μg/ml)及不同时间(0、24、48、72、96 h)的ox-LDL继续处理细胞。CCK-8法检测HCAEC活力,SA-β-GAL染色检测衰老细胞,免疫荧光检测胞内P53及P16蛋白表达情况,Western blotting检测P53、P16、LC3及P62蛋白的表达。分别采用Klotho(400 pmol/L)、雷帕霉素(5 μmol/L)、氯喹(2 μmol/L)在正常培养条件下预处理HCAEC 2 h,再给予ox-LDL(75 μg/ml)处理并继续培养72 h。CCK-8法检测HCAEC活力,SA-β-GAL染色检测衰老细胞,转染腺病毒GFP-LC3检测细胞自噬情况,Western blotting检测P53、P16、LC3及P62蛋白的表达。结果 CCK-8法检测结果显示,Klotho减少了ox-LDL对细胞...     

颈动脉粥样斑块患者血清氧化低密度脂蛋白与C反应蛋白的相关性研究

目的探讨颈动脉粥样斑块患者血清氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)与C反应蛋白的相关性。方法观察80例高血压患者,根据是否有斑块形成将其分为斑块组46例,无斑块组34例。检测这些患者的血清三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、氧化低密度脂蛋白和C反应蛋白水平。结果斑块组ox-LDL显著高于无斑块组(P<0.01)且斑块组患者ox-LDL与CRP呈正相关(r=0.357,P=0.001)。结论 ox-LDL是形成动脉粥样斑块和斑块活动的较有意义的临床血清学指标。     

舒洛地特对氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及其机制研究

目的 研究舒洛地特(SDX)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用及其机制.方法 CCK-8法确定ox-LDL干预HUVEC剂量及SDX药物浓度,活性氧(ROS)检测试剂盒验证SDX对HUVEC的保护作用.实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、小凹蛋白(caveolin)-1 mRNA表达,免疫印迹试验检测eNOS、caveolin-1蛋白表达.Transwell试验检测HUVEC迁移能力,免疫印迹试验检测抗磷酸化eNOS(p-eNOS)蛋白表达.结果 100 μg/ml ox-LDL刺激下,HUVEC细胞活力显著下降(P＜0.01),加入0.125 LRU/ml SDX后细胞活力明显改善(P＜0.01),ROS产生降低(P＜0.01).SDX可下调ox-LDL损伤HUVEC后caveolin-1 mRNA和蛋白表达(P＜0.05),上调eNOS mRNA和蛋白、p-eNOS蛋白表达(P＜0.05),明显改善受损HUVEC迁移能力(P＜0.01).结论 SDX通过调控caveolin-1/eNOS信号通路改善受损HUVEC细胞迁移能力,从而保护内皮细胞.     

青蒿素对氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞损伤的作用及机制

目的 探讨青蒿素(ART)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤的作用及其潜在的分子机制.方法 分别用0、50、100、150、200 mg/ml的ox-LDL及0、1、5、10、20 mmol/L的ART处理对数生长期的人脐静脉内皮细胞EA.hy926,采用MTT法检测细胞活性.为检测ART对细胞的...     

运动对载脂蛋白E基因敲除鼠oxldl及其内皮受体lox-1表达的影响

目的:观察氧化低密度脂蛋白(oxldl)及其受体血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(lox-1)在运动影响动脉粥样硬化形成中的变化。方法:对8周龄ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠饲以"西方饮食"饲料建立动脉粥样硬化模型,随机分为ApoE-/-安静组和ApoE-/-运动组。C57BL/6J小鼠为同源对照鼠,分为正常安静组和正常运动组。每组15只。运动小鼠进行12周中等强度跑台运动(10米/分×30分钟/天～13米/分×60分钟/天,每周5天)。采用ELISA及免疫组化方法检测血oxldl、lox-1的表达。结果:和正常安静组相比,ApoE-/-小鼠oxldl显著升高(P<0.01);ApoE-/-运动组oxldl较ApoE-/-安静组降低(P<0.05)。正常安静组和正常运动组血oxldl无显著性差异。正常安静组主动脉lox-1弱表达,ApoE-/-安静组病变内皮层、斑块中可见明显的棕黄色颗粒、棕黄色弧线,ApoE-/-运动组表达较ApoE-/-安静组明显减弱。经图像分析,正常安静组、正常运动组主动脉弓lox-1阳性表达面积和阳性面积百分比组间比较均无显著差异。和正常安静组相比,ApoE-/-安静组阳性表达面积显著增大(P<0.01)。ApoE-/-运动组阳性表达面积显著低于ApoE-/-安静组(P<0.01)。结论:12周有氧运动可下调ApoE-/-小鼠血oxldl水平,显著降低其受体lox-1表达。     

人血管内皮细胞生长抑制素的基因克隆及表达

肿瘤的生长与血管生成之间的关系正越来越受到关注，一些可以抑制血管生成的物质被证明可有效地抑制肿瘤的生长。血管内皮细胞生长抑制素（ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ，ＥＳ）就是新近被发现的一种可以通过抑制新生血管内皮细胞生长而有效并特异地抑制肿瘤生长的蛋白因子。它与...     

靶向载基因及穿膜肽超声造影剂转染缺氧人脐静脉内皮细胞的研究

目的 探讨P-选择素靶向载基因及穿膜肽超声造影剂的制备及转染缺氧损伤型人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的可行性.方法 采用机械振荡法及碳二亚胺法制备P-选择素靶向载绿色荧光蛋白基因及穿膜肽超声造影剂,检测其形态分布、浓度、粒径,采用激光共聚焦显微镜观察基因和穿膜肽的分布,用荧光分光光度法计算基因及穿膜肽的包封率.体外培养HUVEC,用过氧化氢处理制备HUVEC缺氧模型,并分为靶向和非靶向载基因及穿膜肽造影剂组进行转染实验.用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达情况,流式细胞仪检测转染率,并用SPSS 17.0统计软件进行t检验及直线相关分析.结果 制备的P-选择素靶向载基因及穿膜肽超声造影剂平均粒径约(2.15±0.36) μm,计数为(1.58±0.23) ×107个/ml.激光共聚焦显微镜下观察到基因和穿膜肽均匀分布在造影剂壁上,基因和穿膜肽的包封率分别为28％[y=0.932x -0.09(r =0.993,P＜0.05)]和25％ [y =5.875x -0.81(r =0.987,P＜0.05)].转染24 h后,荧光显微镜下观察到靶向和非靶向载基因及穿膜肽造影剂组均有绿色荧光蛋白的表达,流式细胞仪检测靶向组和非靶向组平均转染率分别约为( 18.74±0.47)％和(15.34±0.22)％(t=10.923,P＜0.001).结论 P-选择素靶向载基因及穿膜肽超声造影剂能够转染缺氧损伤的HUVEC,这为靶向基因投递提供了新的思路.     

α粒子诱导人支气管上皮细胞转化相关基因的分离与克隆

目的探索α粒子照射诱导人支气管上皮细胞转化的相关基因,并加以克隆。方法采用了ｍＲＮＡ差异显示技术,通过辐射诱发转化细胞与同代未经照射细胞的对比,找出差异ｃＤＮＡ片段。结果克隆出２ｇｓ３,５ｇｓ１,５ｇｓ２,２ｇｄ１,６ｇｄ１５个差异片段,测序,经文献检索发现除５ｇｓ１外均为新序列,已登录到ＥＭＢＬ库中。结论发现了细胞转化早期的新序列的４个ｃＤＮＡ片段,生物学特性与功能有待研究。     

HIF-1α基因沉默对人肺癌放射敏感性及移植瘤生长的影响

目的 探讨HIF-1α基因沉默对A549肺癌细胞放射敏感性及裸鼠移植瘤生长的影响。方法 采用克隆形成实验,评价A549/HIF-1α(-)细胞及A549细胞对X射线的敏感性。将A549/HIF-1α(-)细胞及A549细胞接种于BALB/C雄性裸小鼠,观察肿瘤生长情况。免疫组织化学法检测肿瘤内HIF-1α蛋白的表达及瘤内微血管密度。结果 HIF-1α基因沉默在常氧条件下放射增敏比 (SER) 为1.06,乏氧条件下为1.65。A549/HIF-1α(-)组移植瘤体积明显小于A549组,A549/HIF-1α(-)组肿瘤细胞HIF-1α蛋白表达显著下降, A549组肿瘤微血管密度为19.83±4.09,而A549/HIF-1α(-)组为11.61±3.04(F=15.57,P<0.05)。结论 HIF-1α基因沉默可以逆转乏氧诱导的A549肺癌细胞对X射线敏感性的降低,并延缓裸鼠移植瘤的生长,使HIF-1α蛋白表达下降和血管生成减少。     

早期生长反应基因-1与急性胰腺炎大鼠肝损害的关系

目的:通过观察早期生长反应基因-1在大鼠不同程度AP及AP发病后不同时间肝组织的表达,及检测血清炎性细胞因子与肝实质酶水平,研究早期生长反应基因-1与AP肝脏损害的关系。方法:先将24只雄性Wistar大鼠随机均分为4组,即A、B、C、D组,分别于胆总管内逆行注入生理盐水或不同浓度牛磺胆酸钠溶液,3h后处死动物,留取血清、肝脏组织。另将30只雄性Wistar大鼠随机均分为5组,即E、F、G、H、I组,5%牛磺胆酸钠溶液胆管内逆行注射,分别于注射后1h、3h、6h、12h、24h处死动物,同上留取标本。检测血清AST、LDH、TNF-α、IL-1β水平,并对肝组织进行EGR-1免疫组化染色。结果:(1)A、B、C、D4组动物炎性细胞因子TNF-α、IL-1β,肝实质酶AST及LDH水平均随着牛磺胆酸钠浓度的升高而逐渐上升;(2)肝组织EGR-1免疫组化染色显示,在不同程度AP组,EGR-1表达量随AP病情程度加重而逐渐增加,并与反映AP病情指标如肝实质酶、炎性细胞因子水平均呈显著正相关,且表达部位也有所不同。EGR-1在AP发病后不同时间肝组织的表达,具有极明显的细胞种类与部位的差异。结论:EGR-1可能与AP时伴发的肝脏损害有关,其机制可能与其介导炎性细胞因子生成有关。     

p54nrb基因沉默对人脐静脉内皮细胞迁移及体外血管生成的影响

目的 观察p54nrb基因沉默对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移及体外血管生成的影响,探讨p54nrb基因在血管新生中作用.方法 用含有靶向人p54nrb基因shRNA的慢病毒感染HUVEC 24h后,用嘌呤霉素进行筛选,Western blotting检测HUVEC中p54nrb蛋白的表达,确定p54nrb基因沉默效率,建立稳定的p54nrb基因沉默的HUVEC细胞系.CCK-8法检测p54nrb基因沉默对HUVEC细胞增殖的影响;划痕实验和Transwell迁移实验检测p54nrb基因沉默对HUVEC细胞迁移的影响;体外血管生成实验检测p54nrb基因沉默对HUVEC体外血管生成能力的影响.结果 Western blotting结果显示,p54nrb基因沉默的HUVEC细胞中p54nrb蛋白表达显著减少,表明建立了稳定的p54nrb基因沉默的HUVEC细胞系.CCK-8实验结果显示,p54nrb基因沉默轻度地促进了HUVEC细胞增殖;划痕实验和Transwell迁移实验结果显示,p54nrb基因沉默后HUVEC细胞迁移能力明显下降;体外血管生成实验结果显示,p54nrb基因沉默明显抑制了HUVEC的体外血管生成能力.结论 p54nrb具有促进HUVEC细胞迁移及体外血管生成的作用,可能是一个新的参与血管生成的调控蛋白.     

瑞舒伐他汀对载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉粥样硬化及LOX-1、NF-κBp65表达的影响

目的探讨3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A(HMG-Co A)还原酶抑制剂瑞舒伐他汀对载脂蛋白E(Apo E)基因缺陷小鼠动脉粥样硬化及主动脉凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)、核因子-κB p65(NF-κB p65)表达的影响。方法 20只6周龄雄性Apo E基因缺陷小鼠随机分为高脂模型组(n=10)、瑞舒伐他汀药物干预组(n=10),高脂饮食喂养13周;10只6周龄C57BL/6J(野生型,W T)雄性小鼠作为正常对照组,正常饮食喂养13周。13周后,摘眼球取血测定血浆总胆固醇(TCH)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)的水平。处死小鼠取主动脉,行HE染色;采用Western blotting和RT-PCR检测定量分析主动脉组织LOX-1、NF-κB p65表达变化。结果与高脂模型组比较,瑞舒伐他汀药物干预组血清中TCH、TG、LDL-C水平明显降低(P<0.05)。HE染色结果显示,与正常对照组相比,高脂模型组主动脉粥样硬化病变程度明显加重,瑞舒伐他汀药物干预组主动脉粥样硬化病变程度减轻。与正常对照组相比,高脂模型组主动脉LOX-1、NF-κB p65蛋白和m RNA的表达均明显增加(P<0.05),瑞舒伐他汀药物干预组LOX-1、NF-κB p65蛋白和m RNA的表达均减少(P<0.05)。结论瑞舒伐他汀可明显降低血脂,减轻Apo E基因缺陷小鼠主动脉组织粥样硬化病变程度,其抗动脉粥样硬化作用可能与下调LOX-1、NF-κB p65的表达有关。     

表达人干扰素α-2b基因重组乳杆菌的鉴定及其抗病毒活性的动态研究

目的:进一步鉴定表达人干扰素α-2b的重组乳杆茵DM8909/pSC111AE-IFN-α-2b,考察重组茵的培养条件及其表达产物动态的抗病毒活性.方法:在LRS培养基培养重组菌株DM8909/pSC111AE-IFN-α-2b并诱导表达,用Western印迹鉴定培养上清中的表达产物,对重组菌株在LRS培养基中的不同时间的D600、pH值、活菌数、表达产物抗病毒活性进行动态观察.结果:Western印迹鉴定证实了重组茵上清中的IFN-α-2b.重组菌培养18 h后pH值由6.5开始下降,56 h后降至3.5;细菌于培养21 h进入对数期,32 h进入稳定期;培养24～32 h上清中干扰素抗病毒活性为4.08×105U/ml.结论:重组乳杆菌DM8909/pSC111AE-IFN-α-2b可表达IFN-α-2b于培养上清,培养24～32 h上清中干扰素含量最高,可用于预防及治疗病毒感染的进一步研究.